Laboratorio de Microbiología

PRÁCTICA NO.6
ANALISIS MICROBIOLOGICO DE HECES ( COPROCULTIVO)
OBJETIVO. morfología microscópica de las Enterobacterias es
muy similar entre ellas y no permitiría una
El alumno manejará los procesos diferenciación entre ellas.
microbiológicos para la realización de coprocultivos. C). Cultivo: Se deposita la muestra con un
Comprenderá los momentos en los cuales debe como asa sobre un medio sólido y se procede por estría
médico recurrir a ésta técnica. Identificará y múltiple, se incuba a 37oC por 24 a 48 horas
diferenciará las bacterias patógenas de la flora normal
del tracto gastrointestinal. D). Medios de cultivo: Agar sangre, Agar
desoxicolato, EMB, Mac Conkey, SS, etc.
.
FUNDAMENTO TEÓRICO. La técnica de coprocultivo que aquí se
describe es un procedimiento de rutina para aislar
El tracto gastrointestinal contiene una flora Salmonella, Shigella, y cepas comensales y patógenas
normal muy diversa, pero pertenecen a una sola de Escherichia coli.(en ésta práctica no analizaremos
familia de bacterias, las Enterobacterias. crecimiento de Yersinia enterocolítica .
A). Recolección de la muestra: Para Para aislar Staphylococcus aureus es recomendable
enfermedades gastrointestinales es preferible el añadir una placa de agar sal y manitol, y para aislar
examen de heces frescas o también un raspado del Candida albicans otra de agar Sabouraud.
ano con hisopo. La muestra debe ser refrigerada si no
se va a cultivar enseguida. E). Flora normal y patógena.
B). Examen directo: No es muy
recomendable antes del cultivo, debido a que la

FLORA NORMAL FLORA PATÓGENA

Bacteroides fragilis. Salmonella typhi
Lactobacilus spp.( anaerobios). Salmonella spp.
Clostridium perfringens Shigella spp.
Peptostreptococcus spp. Escherichia coli (enterotoxina).
Proteus spp. Klebsiella spp.
Candida spp. Yersinia enterocolítica.
Pseudomona spp. Vibrio cholerae.

CASO CLINICO ___________________________________________

Paciente de 35 años de edad, sexo masculino, ___________________________________________
serología positiva para VIH conocida desde 4 años ___________________________________________
antes, el motivo de la consulta fue por fiebre y ______
repercusión general. Ingresó al hospital relatando una
historia de 1 mes de evolución caracterizada por 2.- ¿Cómo se manifiesta clínicamente la salmonelosis
anorexia, decaimiento, pérdida progresiva de peso, no tifoidea?
sensación febril, diarreas líquidas intermitentes, sin ___________________________________________
sangre ni moco, no acompañadas de dolor abdominal. ___________________________________________
Al realizar tinción de Gram encontramos bacilos ___________________________________________
gram negativos y el crecimiento del coprocultivo en ___________________________________________
agar SS fue positivo presentando colonias circulares __________________
de coloración negra.
3.- ¿Tiene algo que ver para la salmonelosis no
PREGUNTAS EXPLORATORIAS: tifoidea el echo de que el paciente tenga VIH?

1.- ¿Cuáles son los microorganismos que ___________________________________________

selectivamente crecen en el agar SS? ___________________________________________
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___________________________________________ ___________________________________________
___________________________________________ __________________
___________________________________________

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4.- Investiga ¿cómo se manifiesta la gastroenteritis ___________________________________________

aguda en un paciente? ___________________________________________
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MATERIAL.
RECIPIENTE ESTERIL DE BOCA ANCHA ( O HISOPO ESTERIL CON MEDIO DE TRANSPORTE)
Cajas Petri con Agar Sangre.
Cajas Petri con Agar Salmonella-Shigella (SS).
Cajas Petri con Agar MacConkey.
Tubos de ensaye con rosca conteniendo un hisopo estéril.
Mecheros Meker.
Mechero Bunsen.
Asa de Nicromo.
Equipo de Tinción de Gram.
Portaobjetos.

Material Biológico.
Muestra de materia fecal.

TÉCNICA.

1. Método para el aislamiento de

microorganismos en material fecal. EXAMENES DE LOS CULTIVOS.

A). Toma con el asa estéril un poco de Agar MacConkey:

materia fecal y depositarla cerca de la orilla de cada Características: Es un medio
una de las placas. moderadamente selectivo. Las sales biliares y
(Agar sangre, , MacConkey, SS)
B). Proceder al aislamiento por el método de el cristal violeta inhiben a la mayoría de las
estría cruzada (múltiple). bacterias Gram-positivas y a algúnas Gram-
C). Incubar a 37oC por 24 a 48 horas. negativas. La fermentación de lactosa hace
D). Interpretar los resultados , anotando las virar el indicador a rojo.
características morfológicas de cada colonia diferente
que haya crecido.
Aspecto de las colonias: Los
E). Hacer un frotis de cada colonia diferente, fermentadores típicos de lactosa ( E. coli,
y teñirlo con Gram. Klebsiella y Enterobacter ) dan colonias rosas
o rojas rodeadas de un halo de sales biliares
OBSERVACIONES: precipitadas. Las fermentadoras débiles o
 Las muestras para coprocultivo deberían lentas de lactosa (Citrobacter, Serratia)
tomarse antes de administrar antibióticos y
preferentemente antes de tomar pueden dar colonias incoloras a las 24 hrs. Y
antidiarreicos. rosadas a las 48 hrs. Proteus, Salmonella,
 Indicar siempre el juicio diagnóstico de Shigella y Yersinia, dan colonias incoloras.
presunción y si el paciente es menor de un Enterococcus forma pequeñas colonias.
año.
 Solicitar las investigaciones especiales,
especialmente para (S.aureus). Agar Salmonella –Shigella (SS):
 En el caso de búsqueda de portadores de Característsicas: Es un medio
Salmonella, se deberá fundamentar selectivo para Salmonella y Shigella. La alta
adecuadamente el pedido y se necesitan 3 concentración de sales biliares y citrato
muestras negativas para asegurarse que el
paciente no es portador.
inhibe todas las bacterias Gram- positivas y
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muchas Gram- negativas, incluidos los entéricos Gram Negativos permite la

coliformes. La fermetación de lactosa hace diferenciación de bacterias fermentadoras de
virar el rojo neutro a rojo. El SH2 formado a lactosa de las no fermentadoras. Este medio
partir del tiosulfato da un precipitado negro al permite diferenciar Salmonella y otros
reaccionar con hierro. organismos lactosa negativos de organismos
Aspecto de las colonias. Los coliformes. Las colonias de Salmonella y
fermentadores de lactosa están bastante Shigella son traslúcidas, de color ámbar o
inhibidos y dan colonias rojas. Las colonias incoloras.
de Salmonella aparecen sin inhibir, Los coliformes que utilizan lactosa y/o
transparentes con el centro negro. Las sacarosa producen colonias de color azul o
especies de Shigella son mas o menos negro con centros oscuros y brillo metálico.
inhibidas y dan colonias transparentes sin Otros coliformes como Enterobacter
centro negro. Las colonias de Proteus son presentan colonias mucosas de color rosa.
similares a las de Salmonella. Las cepas de Enterococcus faecales son
parcialmete inhibidas.
Agar EMB (eosina y azul de metileno):
Características: Es un medio
selectivo, utilizado para aislar bacilos

RESULTADOS.

1. Morfología macro y microscópica de bacterias aisladas de materia fecal.

Mac Conkey SS
CARACTERÍSTICA RESULTADO CARACTARÍSTICA RESULTADO
TAMAÑO TAMAÑO
FORMA FORMA
ELEVACIÓN ELEVACIÓN
MARGEN MARGEN
COLOR COLOR
SUPERFICIE SUPERFICIE
DENSIDAD DENSIDAD
CONSISTENCIA CONSISTENCIA
OLOR OLOR
PIGMENTACIÓN PIGMENTACIÓN

EMB
CARACTERÍSTICA RESULTADO
TAMAÑO
FORMA
ELEVACIÓN
MARGEN
COLOR
SUPERFICIE
DENSIDAD
CONSISTENCIA
OLOR
PIGMENTACIÓN

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Escriba el diagnóstico presuntivo de la muestra analizada.

___________________________________________________________________________________

SIGNIFICADO CLINICO . La presencia abundante de Candida

albicans, Staphilocuccus aureus y
Los medios menos selectivos com o Pseudomona aeruginosa en la materia fecal,
Mac Conkey permiten apreciar la se considera patógena si al paciente se le ha
composición de la microbiota normal aerobia suministrado antibióticos previo. Estos
facultativa. En un sujeto sano debe medicamentos alteran la flora habitual
predominar E. coli, con pequeños porcentajes cambiando el ambiente, de manera tal que los
de otras enterobacterias: Klebsiella, microorganismos que normalmente eran
Enterobacter y Proteus. En Mac Conkey inocuos; se tornan patógenos.
suelen detectarse también enterococos ( como La mayoría de las diarreas son
pequeñas colonias incoloras). Si se busca transitorias (1-30 días), se han reportado
Salmonella y no se detectó en el primer casos de síntomas persistentes hasta de 10
cultivo, se sembrarán nuevas placas. meses, la etiología del agente detectado en
En el caso de Salmonella es necesaria dichos casos ha sido la Shigella flexneri
la confirmación serológica, y si se sospecha
de una gastroenteritis por E. coli debe
determinarse si se ha aislado una cepa
patógena, mediante serología u otras técnicas.
___________________________________________
____________________________________
3. ¿Qué medios de cultivo se utilizarían si
desearamos aislar Yersinia enterocolítica?
CUESTIONARIO. ________________________________________
________________________________________
1. Explique ¿por qué razón no podemos descartar ________________________________________
que un paciente sea portador de Salmonella si en ________________________________________
el primer cultivo obtuvimos un resultado ________________________________________
negativo para éste microorganismo? ________________________________________
___________________________________________ ________________________________________
___________________________________________ ________________________________________
___________________________________________ ________________________________________
___________________________________________ ____________________
___________________________________________ 4. ¿Por qué es tan difícil el aislamiento de Yersinia
___________________________________________ sp?
___________________________________________ ___________________________________________
___________________________________________ ___________________________________________
____________________________________ ___________________________________________
2. ¿Por qué es necesario refrigerar las muestras de ___________________________________________
heces fecales si van ha ser tratadas ___________________________________________
posteriormente? ___________________________________________
___________________________________________ ___________________________________________
___________________________________________ ___________________________________________
___________________________________________ ____________________________________
___________________________________________ 5. ¿Por qué se debe tomar la muestra antes de la
___________________________________________ administración de antibióticos?
___________________________________________ ___________________________________________
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___________________________________________ EVIDENCIAS SI NO
___________________________________________ 1.- Formato completo
___________________________________________ 2.- Práctica realizada
___________________________________________
3.-Resultados de la
___________________________________________
___________________________________________ práctica completos
____________________________________ 4.-Material y equipo limpio
5.- Revisión bibliográfica

OBSERVACIONES Y CONCLUSIONES.
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INSTRUCCIONES: Marque con una paloma para

indicar que el alumno realizó la actividad y con
una X que no la realizó.

Participación individual
Nombre A B C D E

A) Al realizar la práctica toma en cuenta las

medidas de seguridad.

B) Demuestra habilidad y destreza al manejar el

material de laboratorio.

C) Al preguntarle sobre el tema, fundamenta

correctamente su respuesta.

D) Coopera con el resto del equipo para que

todos realicen su práctica.

E) Al término de la práctica elimina o conserva

adecuadamente su material y la muestra.

Evaluación del trabajo en equipo

EQUIPO SI NO
Planificamos el trabajo
Distribuimos bien las
actividades
El resultado fue el
esperado

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