Tesis Nugget de Molleja de Pollo
Tesis Nugget de Molleja de Pollo
Tesis Nugget de Molleja de Pollo
PROYECTO DE INVESTIGACIÓN
T E S I S
QUE PARA OBTENER EL TITULO DE
INGENIERO BIOQUÍMICO
P R E S E N T A:
ASESOR:
M. en C. MARICELA QUIROZ BRAVO
ÍNDICE GENERAL
CAPITULO I ____________________________________________________________________ 1
1. INTRODUCCIÓN ______________________________________________________________ 1
CAPITULO II____________________________________________________________________ 7
I
Nugget a base de carne de molleja de pollo
3. METODOLOGÍA _____________________________________________________________ 49
CAPITULO IV __________________________________________________________________ 59
II
Nugget a base de carne de molleja de pollo
CAPITULO V ___________________________________________________________________ 63
CAPITULO VI __________________________________________________________________ 80
6. CONCLUSIONES _____________________________________________________________ 80
7. BIBLIOGRAFÍA ______________________________________________________________ 83
8. ANEXOS _____________________________________________________________________ 87
III
Nugget a base de carne de molleja de pollo
ÍNDICE DE CUADROS
IV
Nugget a base de carne de molleja de pollo
ÍNDICE DE FIGURAS
Figura 1. Gallina Doméstica. ............................................................................................. 7
Figura 2. Tendencia de la Producción Nacional de Pollo. ................................................ 13
Figura 3. Países fuente de importaciones de carne de pollo. ............................................ 15
Figura 4. Tendencia de consumo Per-Cápita Nacional. .................................................... 16
Figura 5. Producción mundial de carne de pollo. ............................................................. 17
Figura 6. Consumo Per-Cápita Mundial. .......................................................................... 18
Figura 7. Estómago de la gallina abierto por su cara dorsal. ...........................................19
Figura 8. Contracción Muscular. ....................................................................................... 23
Figura 9. Mejorana (Majorana hortensis). ........................................................................ 32
Figura 10. Pimentón (Capsicum annum L). ....................................................................... 34
Figura 11. Pimienta Blanca (Piper L). .............................................................................. 35
Figura 12. Ajo (Allium sativum). ........................................................................................ 36
Figura 13. Queso Panela. .................................................................................................. 38
Figura 14. Caseinato de Sodio. .......................................................................................... 40
Figura 15. Ascorbato de Sodio. .........................................................................................41
Figura 16. Sal Común (Cloruro de Sodio). ........................................................................ 44
Figura 17. Sal Cura. ........................................................................................................... 45
Figura 18. Fosfatos. ........................................................................................................... 47
Figura 19. Hielo. ................................................................................................................ 48
Figura 20. Método Convergente para Mezclas. ................................................................5050
Figura 21. Método Convergente para Mezclas. Proporciones en Mezcla Obtenidas. …...64
Figura 22. Diagrama de flujo del proceso de elaboración de Nuggets a base de carne de
Molleja de Pollo. .................................................................................................... 71
Figura 23. Evaluación Sensorial, escala hedónica. ..........................................................73
Figura 24. Distribución sesgada hacia la izquierda. Datos del Análisis Sensorial..........72
V
Nugget a base de carne de molleja de pollo
VI
Nugget a base de carne de molleja de pollo
AGRADECIMIENTOS
Este trabajo se lo dedico a mi sacro-santa madre, sin quien nada de esto hubiera sido logrado.
Gracias por haberme dado todo para poder ser quien soy hoy, tus herramientas han sido muy
útiles y sin tu carácter nunca me hubiera aferrado a mis ideas y planes. Esta tesis es un
resultado meramente tuyo por haberme criado estos 23 años y ten por seguro que en un futuro
tendrás más.
Un agradecimiento a mi hermano Ticelius por ser tan difícil, todos estos años has probado mi
templanza, sin la cual no tendría esa pizca de paciencia que me ayudó con este trabajo. Espero
ver el tuyo algún día también.
Quiero que sepas papá que sin tu tutela no hubiera podido recorrer el camino que elegí. Es por
ti por quien soy el hombre que soy ahora. Muchas Gracias por la disciplina.
A Oscar y Mariana, les debo mucho, son mi segunda familia, jamás hubiera esperado que
alguien ajeno a mí me acogiera con tanta sinceridad en su hogar. Por los buenos ratos y por
apoyarme. A sus padres, Sr. Oscar y Sra. Maru por ser excelentes personas y a veces tratarme
como a un hijo, no existen palabras para expresar mi gratitud.
Primos y Primas! Por fin me di un tiempo para pasar más tiempo con ustedes y ha estado de
pokis! Porque en estos tiempos existen pocas personas que pueden decir que tienen más de 10
hermanos, soy muy afortunado. Haydee, Paola, Mariana, Georgina, Jared (venas!), Miguel,
Iván, Rubén, Gerardo, Hugo, Las Pokianchis (Fernanda y Jessica), Ana Ruth, Paty, Kokis,
Pepe, Karla y Erick, LOS QUIERO MUCHO!! Seguiré aprendiendo de ustedes todos los días.
A mis sobrinos Samar, Danae, Santi, Emi y el futuro pollito, es gratificante poder aprender de
unos niños tan alegres, espero no ser solo un buen ejemplo para ustedes sino uno que quieran
rebasar, siempre en el aspecto de la satisfacción personal. Aquellas personas que se volvieron
parte de esta ya de por si numerosa familia, gracias por estar sino conmigo, si con aquellas
personas que quiero mucho, Dr. Juan, Erick, Nayeli, Kikin, Raúl y Jael también.
Muchas gracias a la Matriarca, mi abuela Irene por mantener a la familia unida durante estos
difíciles años, eres la autora de una obra maestra, variedad y sincronía esplendidas.
A mis tíos, Miguel, Estela, Rosa, Samuel, Concha, Jorge, Martha y Lupita, por ser como otras
madres y padres, un ejemplo a no seguir y una fuente de diversión para los primos, gracias por
aguantarnos.
Dedico este trabajo también a mi abuela Margarita pues siendo tu primer nieto creo empiezas
bien en ese aspecto. Y lo que es aún más importante eres una fuente de inspiración y alegría;
una suerte haber podido convivir juntos esa temporada fue sin duda una de las más
productivas de mi vida y te convertiste en una persona que admiro y respeto mucho.
VII
Nugget a base de carne de molleja de pollo
A mis tíos Regino, Luisa, Carlos y Marina, por dedicarme sus consejos y recomendaciones, su
tiempo y cariño, no hay duda, esas eternas palabras fueron confirmadas, la familia siempre
estará allí primero, los quiero mucho. A mis primos Carlos, Roberto, José, Marina y el
pequeño Santiago, a pesar del poco tiempo convivido sé que cuento con ustedes y pues estoy
seguro que ustedes también realizarán un trabajo similar a este, espero poder ser de ayuda
cuando lo requieran.
A mi amiga Jessy sin quien no hubiera podido dedicarme a realizar este trabajo, este también
es un logro tuyo, pero en un nivel personal que envidio, pues tener tanta fe en mí ha sido
halagador y fuente de coraje para lograr este labor académico. Eres una excelente persona.
A mis amigos Lalo, Jaime y Raquel, por marcar una gran parte de mí y ser personas objetivas.
Gracias por los consejos, el apoyo y sobre todo las críticas, que a pesar de ser fuertes en
ocasiones nunca mal intencionadas.
A Nallely, quien me ha ayudado durante todos estos años y quien ha tenido una influencia
sobre mí, gracias a mostrarme una vida más tranquila. A Aarón, por los buenos recuerdos y
por apoyarme cuando fue necesario.
A la Maestra Mary y al Maestro Mendoza, por haberme permitido trabajar con ellos,
regalarme un trocito de su vida y sobre todo por su amistad. Los quiero y admiro mucho.
Quisiera agradecer también al tipo que perdió su iPod, ese pequeño dispositivo me ha hecho
muy feliz, gracias.
VIII
Nugget a base de carne de molleja de pollo
Esta tesis representa para mí, el trabajo que mi hermana hubiera realizado si hubiera tenido la
oportunidad de terminar su carrera, pues estoy seguro que habría decidido escribir una tesis.
IX
Nugget a base de carne de molleja de pollo
CAPITULO I
1. INTRODUCCIÓN
Es conocido que los antiguos pobladores de México gozaban de una buena salud,
que las enfermedades eran muy pocas. En la actualidad se sabe que el sistema
inmune del ser humano necesita nutrientes en cantidades particulares de cada
función, estos nutrientes son absorbidos de los alimentos. Debido a esto no es más
que de una equilibrada alimentación de donde se obtendrá el bienestar personal.
Con el paso del tiempo se han perdido costumbres, entre ellas las alimentarías. Las
vísceras fueron parte fundamental de la alimentación de muchos pueblos del mundo,
y en los últimos años cuando se ha satanizado tantos alimentos por moda como por
ignorancia; hoy en día aún son muy poco consumidas, a pesar de ser carne muy
barata y de muy alto valor nutricional, pero debido a su naturaleza son las menos
apreciadas. Se destinan a mascotas u otros animales y se ha generalizado este uso
hacia otras vísceras. Por su origen son fácilmente corrompibles, lo que hace que su
conservación sea más difícil y más cuidadosa. Las vísceras, al contrario de las
carnes, no maduran, se descomponen. Hoy en día se busca el aprovechamiento
integral de la mayoría de los animales, sobre todo, los que son sacrificados en los
rastros de Tipo Inspección Sanitaria (TIS) y Tipo Inspección Federal (TIF).
Una de las razones del bajo consumo, es el contenido de colesterol y debido a esto,
no es sano consumirlas; lo que es una realidad, es que también se necesita consumir
colesterol, pues es importante para la producción de hormonas en el ser humano, por
ejemplo la testosterona en el hombre. Otra razón es que debido a su origen, se
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
asocia su apariencia inicial con el sabor, que provoca en muchas personas asco por
estos alimentos. Sumando lo anterior a la mala manipulación y falta de cuidado, las
vísceras representan una importante fuente de transmisión de algunas enfermedades
para los sectores más vulnerables de la población. Y todo esto ocurre a pesar de que
en la cultura europea se utilizan para realizar los más exquisitos platillos, como
ensalada “landaise”, mollejas con tomate y mollejas salteadas.
2
Nugget a base de carne de molleja de pollo
1.1 ANTECEDENTES
En el 2006, Chan y García elaboraron croquetas con una mezcla de carne de pollo y
avestruz, en esta investigación lograron producir una emulsión cárnica con un tipo de
carne no convencional, como lo es la de avestruz. Proponiendo así una alternativa e
incluyendo un tipo de carne que tiene poca proyección en nuestro país, siendo un
factor importante, el precio que la croqueta presentó por la inclusión de la carne de
avestruz; el cual hacía de la croqueta un producto no rentable.
3
Nugget a base de carne de molleja de pollo
las verduras y la fibra, que el contenido de lípidos fue menor que en el nugget sin
verduras y sin fibra y que la adición de estos ingredientes dan una variedad al sabor
tradicional del nugget de pollo, que logro tener buena aceptación en la evaluación
sensorial.
4
Nugget a base de carne de molleja de pollo
1.2 JUSTIFICACIÓN
Las vísceras hoy en día aún son muy poco consumidas, debido a factores muy
diversos, sin embargo este tipo de carne es muy barata, es por esto que se pretende
hacer un uso de este tipo de carne, que además de ser barata, tiene la característica
de poseer una gran cantidad de nutrientes de alto valor biológico; dado lo anterior y
que hoy en día se procura el aprovechamiento integral de la mayoría de los
animales, se busca proporcionar una nueva alternativa de comida rápida para el
consumidor.
Debido a los cambios en la alimentación y al ritmo de vida actual las personas han
recurrido a consumir comida rápida (fast-food), que ha provocado un desequilibrio
energético en los consumidores, además de un deficiente consumo de nutrientes
esenciales. Comida rápida no significa necesariamente comida no sana, una
frecuencia adecuada y un consumo medido, pueden lograr que una comida rápida
sea una alimentación balanceada.
Por otro lado la carne de pollo, es además de deliciosa, sana, pues esta presenta en
su composición nutrimental, grandes cantidades de proteínas y bajo contenido en
grasas. Este tipo de carne se caracteriza por ser más digerible, versátil y sobre todo
económica, convirtiéndose de esta manera en una de las carnes más adaptables y
aceptables, tanto económica como saludablemente a cualquier tipo de dieta.
De acuerdo a lo anterior, se pretende procesar, la carne de las partes del pollo, que
no son aprovechadas, transformándolas en productos atractivos para el consumidor.
5
Nugget a base de carne de molleja de pollo
1.3 OBJETIVOS
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
CAPITULO II
2. DESARROLLO DE LA INVESTIGACIÓN
El gallo doméstico parece ser oriundo del sur de Asia y derivar de las gallináceas de
selva, hace unos 6000 años existían ejemplares ya domesticados. Las gallinas se
dividen en diversas clases, de las cuales las clases más difundidas son: las
americanas y las mediterráneas, la gallina doméstica ha sido objeto de una constante
evolución, lograda por medio de cruces estudiados, los cuales tienen por objeto
obtener mejores variedades tanto para la producción cárnica como para la de huevo
(Misersky, 1968).
Las aves de engorda pueden clasificarse según sus características físicas en tres
tipos A, B y C, cuyas definiciones se encuentran en el Cuadro 1.
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
Revestimiento
Conformación Piel
Muscular
Prácticamente exenta
Totalmente carnoso,
Normal, sin de cañones, pelos,
pecho largo y ancho,
deformaciones, desgarraduras,
A esternón no destacado,
admisible una ligera cortes, contusiones y
caja adiposa ligera y de
cobertura del esternón. de zonas
distribución uniforme.
pigmentadas.
Carnoso, esternón
Casi normal, sin
ligeramente saliente, Pocos defectos de
deformidades
capa adiposa suficiente presentación y
B fundamentales,
para impedir la consecuentes al
admisible una ligera
transparencia intensa de desplumado.
curvatura del esternón
la carne
Muchos defectos de
presentación y
Otras aves sanas que
Carnoso en grado consecutivos al
no respondan a las
C suficiente, el esternón desplumado, con tal
características de las
puede destacarse. que no excluyan al
clases A y B.
aptitud para el
consumo.
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
Especificación Límite
pH 5.5 - 6.4
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
ciudades, lo cual trae como consecuencia un nuevo tipo de demanda. Sin embargo,
estas mejoras en técnicas no se tradujeron en una mejora de la calidad
microbiológica de la carne. Más bien, lejos de ser favorables desde el punto de vista
higiénico, contribuyeron a aumentar aún más la carga microbiana de las canales de
ave, ya de por sí importante al tratarse de animales que no se desuellan. En efecto,
el hacinamiento (aglomeración) de los animales en los sistemas intensivos de cría y
la implantación de grandes plantas de sacrificio y procesado, facilitan la difusión de
los microorganismos, especialmente de bacterias enteropatógenas, de unos
animales a otros y de unas canales a las siguientes, lo que influye negativamente en
la calidad microbiológica final de la carne de ave (Bremner and Johnston, 1996). Por
tanto, la meta del sector avícola debería ser asegurar la calidad de los productos,
especialmente la calidad microbiológica (Capita, 1999).
Cabe destacar que, microbiológicamente hablando, el músculo del animal “in vivo” es
totalmente estéril, mientras que la carne comercial puede llegar a tener una
concentración microbiana total en torno a un millón de bacterias por centímetro
cuadrado o gramo (Rodríguez, 2003). Por tanto, el conseguir una mejor calidad
microbiana de la carne de pollo, dependerá de la correcta implantación de Buenas
Prácticas de Fabricación y Sistemas de Análisis de Peligros y Puntos Críticos de
Control (APPCC), a lo largo de toda la cadena de producción.
2.1.1.1 Sacrificio
Dado que los procesadores de carne tratan de obtener la menor pérdida de sangre al
momento del sacrificio, se aplica un aturdimiento eléctrico antes de cortar los vasos
sanguíneos del cuello. De esta manera se ayuda a controlar las manchas oscuras
sobre la superficie del producto en piezas empanzadas y rebozadas, sin embargo el
aturdimiento ocasiona un aumento en la presión sanguínea y por ende se podrían
presentar hemorragias en el músculo graso y tejido conectivo. El tiempo de sangrado
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
es de 30, 60, 90 ó 120 segundos y este tiempo depende del procesamiento posterior
al que se someterá el producto y su efecto en la preparación del mismo.
11
Nugget a base de carne de molleja de pollo
Los métodos automáticos para el deshueso han enfrentado éxitos limitados debido al
exceso de perdida en el rendimiento y apariencia del producto. Por muchas razones
las propiedades funcionales de la carne deshuesada mecánicamente, son diferentes
de las carnes cortadas manualmente. La capacidad soluble en agua, estabilidad de
emulsión y capacidad de emulsificación, a veces son alteradas por el tamaño de
partículas y los aumentos temporales de temperatura durante la operación; los
cambios de temperatura son muy importantes, ya que una alta temperatura durante
la operación de deshuesado mecánico puede disminuir la capacidad de retención de
agua o emulsificar grasa. Por otro lado, el alto pH de la médula puede aumentar la
capacidad soluble en agua (Contreras, 1993).
Año Toneladas
1994 1,383,216
1995 1,512,000
1996 1,478,349
1997 1,492,937
1998 1,586,841
1999 1,784,320
2000 1,935,966
2001 2,066,510
12
Nugget a base de carne de molleja de pollo
2002 2,156,514
2003 2,289,891
2004 2,389,715
2005 2,498,300
2006 2,591,764
2007 2,682,775
2008* 2,763,258
Del año 1994 al año 2005 el consumo de insumos agrícolas ha crecido a un ritmo
anual de 3.9% y cabe destacar que la avicultura es la principal industria
transformadora de proteína vegetal en proteína animal. La producción de pollo en
México, durante este período ha aumentado a un ritmo de crecimiento anual del
5.5%, que se ilustra en la Figura 2.
3,000,000
2,500,000
Toneladas
2,000,000
1,500,000
1,000,000
500,000
0
Año
13
Nugget a base de carne de molleja de pollo
Para el 2008 la avicultura generó 1,072,000 empleos, de los cuales 178,000 son
directos y 892,000 indirectos, cabe destacar que el 60 % de los empleos los genera
la rama avícola de pollo, el 38% la de huevo y solo un 2% la de pavo. México cuenta
con una parvada de más de 130 millones de gallinas ponedoras, 243 millones de
pollos al ciclo y 865 mil pavos por ciclo (SAGARPA, 2008).
2.2.2 Importaciones
En México las importaciones de carne de ave de 1994 a 2005 crecieron a una tasa
promedio anual de 7% pasando de 239 mil toneladas en 1994 a 503 mil en 2005. En
la Figura 3 se muestran los principales países, fuente de importación, que son
Estados Unidos y Chile con el 84% y 15%, respectivamente, incluyéndose en el 1%
restante a Canadá, Hungría, Francia y España, entre otros (UNA, 2009).
14
Nugget a base de carne de molleja de pollo
1%
14%
Estados Unidos
85%
Chile
Resto
15
Nugget a base de carne de molleja de pollo
30
25
25.03
24.22
23.4
22.66
21.6
20
20.95
19.86
Kilogramos
18.66
17.01
16.9
15 16.35
16.19
15.83
10
2003
1994
1995
1996
1997
1998
1999
2000
2001
2002
2004
2005
2006*
Año
Para el 2007 se produjeron 51,299 miles de toneladas, de las cuales los principales
países productores son Estados Unidos, China y Brasil, seguidos de Emiratos
16
Nugget a base de carne de molleja de pollo
India Rusia
México 4% 3% EUA
5% 31%
UE
16%
Brasil
China
20%
21%
17
Nugget a base de carne de molleja de pollo
120
100
Kilogramos
80
60
40
20
0
2.3 MOLLEJA
2.3.1 Definición
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
Componente Contenido en mg
Potasio 240
Hierro 3
Fósforo 105
Sodio 65
Calcio 10
Niacina 4.5
20
Nugget a base de carne de molleja de pollo
Debe proceder de animales jóvenes que hayan alcanzado la madurez, aptos para
consumo humano, sacrificados en establecimientos que cumplan con los requisitos
sanitarios, de preferencia en rastros TIF (Tipo Inspección Federal). Debe cumplir con
las normas sanitarias establecidas. El empaque debe estar íntegro y que garantice la
conservación del producto. Verificar en la recepción la limpieza e integridad de las
piezas, sin materiales extraños o residuos de materia fecal, peso, tamaño,
presentación, debe estar libre de manchas o coloraciones extrañas, olores y sabores
desagradables (la evisceración inadecuada provoca la contaminación del producto).
2.4 CARNE
La carne se define como aquellos tejidos animales que pueden emplearse como
alimento. Casi todas las especies pueden utilizarse como carne, la mayoría que es
consumida por el hombre procede de los animales domesticados y de los animales
acuáticos (Forrest, 1979).
21
Nugget a base de carne de molleja de pollo
22
Nugget a base de carne de molleja de pollo
La cantidad de mioglobina presente en cada especie varía con la edad, sexo y otros
factores, en el Cuadro 5 se presentan los colores más característicos de las
especies más consumidas.
23
Nugget a base de carne de molleja de pollo
Los productos cárnicos procesados se definen como aquellos en los que se han
modificado las propiedades de la carne fresca mediante el empleo de una o más
técnicas, tales como: picado o trituración, adición de condimentos, modificación del
color, tratamiento térmico, etc. Existen centenares de los productos cárnicos
procesados, cada uno de los cuales presenta sus propias características; aunque
24
Nugget a base de carne de molleja de pollo
Los productos picados implican una reducción de tamaño de la carne cruda, como es
el caso de los nuggets, de forma tal que el producto final está formado por pequeñas
porciones de carne, por cubos o por rebanadas. La mayoría de los productos picados
se incluyen entre los embutidos (Forrest, 1979).
2.4.1.1 Embutidos
Los embutidos son alimentos elaborados con una mezcla de carne picada que se
sazona o se cura y la que se le adiciona especias y grasa animal. Se fabrican con el
fin de ganar consistencia, conservar la forma y ser sometidos a posteriores
tratamientos; están contenidos en tripas naturales o artificiales. Además de las
carnes de vacuno mayor y vacuno menor, pueden llevar carne de cerdo, cordero y
cabra, así como grasa, y dependiendo de las distintas clases de embutidos, pueden
llevar despojos, vísceras, sangre y otros aditivos corrientes que cumplan con los
requisitos legales (Weiling H., 1973).
25
Nugget a base de carne de molleja de pollo
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
2.4.2 Emulsiones
2.4.2.1 Generalidades
Una emulsión es un sistema de dos fases formado por una dispersión bastante
grosera de un líquido en otro líquido inmiscible. Normalmente el agua y el aceite no
son miscibles, pero si se mezclan en presencia de un emulsificante pueden formar
una mezcla estable denominada suspensión coloidal. Las fases de la emulsión se
denominan continua y discontinua o dispersa.
Aunque la definición clásica de una emulsión requiere que los dos líquidos se
dispersen en estado coloidal, la estructura y propiedades físicas de las pastas
empleadas en la fabricación de salchichas son tan parecidas a las de las emulsiones
verdaderas, que los fabricantes se refieren a ellas con la denominación de
emulsiones cárnicas (Price J.F.,1970).
Para que las emulsiones formadas sean estables, es absolutamente necesario que
las proteínas se encuentren disueltas o solubilizadas. Esto se consigue de dos
maneras:
1) Tratando las carnes magras con salmuera diluida para solubilizar las proteínas
miofibrilares, principalmente la miosina y la actina
2) Por la acción de corte de las cuchillas de una máquina cortadora.
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
Durante la cocción funde toda la grasa que no había fundido por el calor generado en
la máquina cortadora, aunque los glóbulos de grasa permanecen individualizados por
la membrana proteica. Después de la cocción, la membrana delimitante de los
glóbulos de grasa se altera profundamente y la proteína, presente en la fase continua
de la emulsión, coagula formando densas masas de forma irregular.
Los principales emulsionantes de las emulsiones cárnicas son las proteínas solubles
en soluciones salinas, miosina y actina, que combinadas, forman actomiosina. Las
proteínas solubles en agua, de procedencia sarcoplásmica en su mayor parte, y las
proteínas insolubles del tejido conectivo, apenas tienen capacidad para emulsionar la
grasa. Se ha comprobado, sin embargo, que en presencia de la sal, las proteínas
hidrosolubles poseen cierta capacidad para emulsionar la grasa. La solubilidad de las
proteínas solubles en soluciones salinas depende considerablemente del pH y de la
fuerza iónica (Torres E.,1997).
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
Por esta razón se han desarrollado nuevos métodos tecnológicos con objeto de
mejorar la trabazón de la carne fría. Esto indujo al empleo de numerosas sustancias
auxiliares para la obtención de la pasta en las cutters.
Para disponer de una óptima proteína muscular soluble, deben cumplirse los tres
requisitos siguientes:
1. El picado de la carne.
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
El producto final del triturado en la máquina cutter es una masa que en su forma y
aspecto externo se asemeja mucho a una emulsión. En el picado intenso de la carne
aumenta todavía más la superficie total de las partículas de grasa. La consecuencia
de esto es que se debe disponer de más cantidad de proteína soluble para poder
formar una película protéica en torno a los glóbulos grasos. Precisamente el triturado
del tejido graso es muy importante, si bien es más importante todavía la
solubilización de la proteína cárnica. Como sucede siempre en este proceso
tecnológico, es decisiva al final la presencia de proteína lo más soluble posible. En el
triturado hay que evitar toda desnaturalización y coagulación. Las temperaturas
óptimas para el triturado en máquina cutter oscilan entre +14 y +16°C (Gerhardt,
1980).
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
Entre todas las SAOPC conocidas, es la sal común la sustancia empleada desde
hace más tiempo y la más eficaz. Propiedades semejantes a las de la sal común sólo
las poseen aquellas sustancias capaces de aumentar la fuerza iónica de las pasta.
Aumentado la fuerza iónica, se consigue extraer y solubilizar mayor cantidad de
proteína muscular a partir de las células. Además de la sal común, cuya cantidad
viene limitada en la elaboración de pasta para embutidos escaldados por razones de
sabor, sirven en especial las sales de los ácidos orgánicos comestibles.
31
Nugget a base de carne de molleja de pollo
2.5.1 Especias
Contiene 0.5-0.9% de aceite etéreo, aunque su primer corte puede llegar al 3%. Es
muy apreciada para la elaboración de embutidos cocidos y por eso también se la
designa por “especia del embutido”. También se la incorpora con buenos resultados
a varias preparaciones culinarias. Su aceite etéreo contiene hasta un 40% de
terpenos, como terpineno, pineno, sabineno y terpineol. En la planta se encuentran
hasta un 10% de taninos.
32
Nugget a base de carne de molleja de pollo
33
Nugget a base de carne de molleja de pollo
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
Liliácea originaria del sur de Asia, del Oriente próximo, de Egipto y del norte de
África, se halla también difundida por el centro y sur de Europa, así como por
América, especialmente por México.
Todo el bulbo tiene aplicación en especiería y está formado por bulbillo, también
denominados dientes. Una piel blanca, a veces verde o rosa, envuelve todo el bulbo.
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
Si bien es cierto que hay variedades de ajos con poco azúcar, lo corriente es que
estos bulbos dispongan de una cantidad relativamente elevada. Contienen también
las vitaminas A, B1, B2 y amida del ácido nicotínico.
Absorbe otros sabores fácilmente, y se reviste a veces con una pasta de ajo y chile.
Es de consistencia sólida, suave aroma, sabor ligeramente salado y tiene un alto
contenido en agua. Puede ser elaborado también con leche de cabra o borrega. Es
uno de los quesos frescos más bajos en calorías. También conocido como queso de
canasta debido a las marcas que se le forman ya que es moldeado en canastas.
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
38
Nugget a base de carne de molleja de pollo
La habilidad de una proteína para formar y estabilizar emulsiones está muy ligada a
su estructura y conformación molecular. En la leche, dos tipos de proteínas co-
existen: las caseínas y las proteínas séricas. Las caseínas se encuentran en forma
de micelas en la leche fresca (Fox, 2001). Dichas micelas son agregados
supramoleculares, que consisten de un muy alto número de moléculas de caseína
individuales unidas vía puentes de fosfato de calcio coloidal. A través de la cadena
productiva, el grado nativo delas proteínas lácteas cambia y su conformación
molecular variará dependiendo de las condiciones del proceso mismo, por ello, es
común esperar cambios (en ocasiones drásticos) en sus propiedades emulsificantes
(Vega, 2006).
Cabe anotar que el uso de proteína láctica, no contribuye en ninguna de sus formas
a la formación de la estructura molecular de las pastas cárnicas. Los problemas de
sabor, como son sabor a lácteo, y una disminución del aroma puede ser debido a
una dosificación demasiado elevada de caseinato; aunque la cantidad de dosificación
de caseinato no debe ser mayor al 2% respecto a la cantidad de carne y grasa,
debería ser suficiente agregar un 1.0 a 1.5% para lograr el efecto tecnológico
requerido (Wirth, 1992).
39
Nugget a base de carne de molleja de pollo
La sal sódica del ácido ascórbico, ilustrado en la Figura 15, es un isómero sintético
de la vitamina C (que sólo posee 1/20 de la actividad de dicha vitamina). En la
actualidad se utiliza como uno de los principales antioxidantes en productos cárnicos.
No existe un límite para la ingesta diaria, dado lo anterior no se conoce de algún
efecto secundario provocado por el consumo de productos cárnicos que poseen en
su estructura ascorbato de sodio.
40
Nugget a base de carne de molleja de pollo
41
Nugget a base de carne de molleja de pollo
Por motivos de sabor. Pese a los muchos trabajos realizados, hasta ahora no se ha
conseguido encontrar un sustituto de la sal o suplir ésta con una mezcla de
sustancias. La sal confiere al alimento un sabor característico, perceptible clara e
inconfundiblemente en la boca. El sabor salado puede transformarse en amargo
cuando, además del sodio, están presentes otros cationes como el magnesio. Por
término medio, el hombre ingiere diariamente unos 10 gramos de sal, de los cuales 1
ó 2 gramos son componentes naturales de los alimentos ingeridos. El resto es
añadido a las raciones en forma de “sal”.
Para influir sobre el valor aw. La sal permite fijar grandes cantidades de agua en los
tejidos, calculándose una proporción del 1:100. Esto quiere decir que 1 gramo de sal
es capaz de fijar 100 gramos de agua. Esta fuerza de fijación preserva a nuestro
cuerpo, así como a los productos cárnicos, de sufrir grandes pérdidas de agua. La
pérdida de sal que se produce en el hombre durante la sudoración debe
compensarse volviendo a ingerir sal, con objeto de retener en el organismo la
cantidad necesaria el líquido.
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
Se atribuye la acción de la sal a la presencia del ion cloro en su molécula. El ion cloro
reacciona con la proteína muscular y origina un producto que se diferencia en
muchos aspectos de la proteína originaria. Si bien el valor del pH permanece igual, el
punto isoeléctrico disminuye por una sobrecarga de la proteína muscular. Por punto
isoeléctrico se entiende el valor de pH en el cual exhibe la molécula el mismo número
de cargas positivas y negativas, con lo cual desarrolla el mínimo grado de actividad.
El descenso del punto isoeléctrico puede compensarse con un aumento del valor de
pH. La disminución del punto isoeléctrico es sinónimo de una mejor y mayor
solubilidad de la proteína. El efecto de la sal común es según esto puramente
electroestático. Con valores iniciales de pH superiores al punto isoeléctrico, la adición
de cloruro de sodio aumenta por consiguiente la capacidad fijadora de agua. Si el pH
se halla debajo del punto isoeléctrico, la agregación de cloruro de sodio disminuye la
capacidad fijadora de agua (Gerhardt, 1980).
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
La sal curante con nitrito, en la Figura 17, contiene del 0.5 al 0.6% de nitrito de
sodio. Se sabe desde muchos años que los nitritos alcalinos puros (nitritos de sodio y
de potasio) son muy venenosos, y que incluso resultan tóxicos en dosis
relativamente bajas. Con objeto de evitar sobredosis erróneas en la fabricación de
productos cárnicos. Como los nitritos puros sanen igual que la sal, es muy grande el
peligro de confundir ambos productos. La mezcla de sal común y nitrito existente en
el mercado se conoce con el nombre de “sal curante con nitrito” y es un medio
enrojecedor permitido por la ley. Con esto se excluye la posibilidad de que el
organismo reciba cifras excesivamente elevadas de sal. Debido a ser ambas
sustancias diferentes en su densidad y tamaño de las partículas, el depósito
prolongado y descuidado de la sal curante con nitrito puede dar lugar a una cierta
separación. Es recomendable guardar la sal curante con nitrito en ambiente seco.
Para evitar la separación de los componentes, se han descrito en la literatura
especializada diversos métodos de separación, algunos incluso patentados (aditivos
e ingredientes como coadyuvantes de la cutter, emulgentes y estabilizadores de
productos cárnicos) (Gerhardt, 1980).
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
2.5.2.6 Fosfatos
Los difosfatos pertenecen al grupo de las sales que, como el ATP, son capaces de
disociar la actomiosina, es decir, de transformar la proteína fibrilar muscular en una
forma de fácil extracción. Como consecuencia, se crea en buena parte el estado de
la carne recién sacrificada. Desdoblando el complejo de la actomiosina es más fácil
introducir y fijar agua en los mayores espacios intermedios creados (imbibición). El
proceso de la imbibición y el proceso de solución de ambos componentes disociados
es importante para la fijación de agua y grasa.
45
Nugget a base de carne de molleja de pollo
Entre todos los aditivos posibles, los fosfatos, que se muestran en la Figura 18, se
han manifestado como extraordinariamente eficaces en la fabricación de embutidos
escaldados en lo referente a fijación de agua. Dado el empiricismo en el uso de los
fosfatos en un principio y que no se haya podido demostrar su incompatibilidad
sanitaria, se generalizó su empleo de manera desmedida. Sin embargo, no se ha
demostrado que los fosfatos muy condensados y ricos en energía sean inocuos; el
desdoblamiento de estos compuestos lleva consigo una liberación de la energía
acumulada, cuyos efectos en el organismo humano se desconocen; por esta razón
los fosfatos de elevada condensación han sido excluidos de la autorización.
Para los alimentos sólo están permitidos los fosfatos condensados en forma de
cadena, entre los que se hallan los difosfatos. Las sales sódicas de los diversos
difosfatos exhiben una amplia zona de pH, entre 3.8 y 10.7. Hasta ahora no se
conoce ninguna efectividad tecnológica de los metafosfatos anillados (Gerhardt,
1980).
46
Nugget a base de carne de molleja de pollo
El agua pura, de sabor neutro, tiene pH 7.0 cifra que es más alta si se trata de agua
alcalina y más baja si es ácida. Estas dos últimas clases de agua tienen propiedades
destructivas, desarrollando una acción claramente agresiva. El carácter ácido
obedece al ácido carbónico disuelto, el cual puede eliminarse por procedimientos
químicos o mecánicos. Las sales de calcio y magnesio naturalmente presentes en el
agua determinan la dureza de ésta; cuanto mayor es la tasa presente de dichas
sales, más dura es el agua, cuanto menor, más blanda. El agua dura tiene una
menor tensión superficial, lo que supone un obstáculo en la preparación de
emulsiones, las cuales pueden deshacerse. En tales casos es aconsejable rebajar la
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
dureza del agua; para ello existen múltiples procedimientos, como el intercambio
iónico y la adición de fosfatos.
El agua destinada a los alimentos debe tener olor limpio, sin matices mohosos,
químicos, térreos, etc.; tampoco exhibirá enturbiamientos ni colores extraños. El
agua es el alimento más importante, sin que pueda ser sustituida por ningún otro; de
aquí que la pureza de la misma sea la importante y fundamental de las premisas.
48
Nugget a base de carne de molleja de pollo
CAPITULO III
3. METODOLOGÍA
Una vez definido el tema a desarrollar y los objetivos por alcanzar, se procedió a
buscar la información necesaria para formar el contexto teórico de la investigación.
Al igual que con cualquier otra meta se establecieron las tareas a realizar y los
procedimientos necesarios para alcanzar el producto visualizado.
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
50
Nugget a base de carne de molleja de pollo
3.3.1 Equipo
51
Nugget a base de carne de molleja de pollo
Mini cutter
Moulinex, Material del Vaso: Plástico,
Robot de procesador de alimentos, 3
$900.00
cocina Velocidades, volumen: 2 l,
Modelo: Potencia de 500 W.
Ovatio 2 Press
Capacidad 710 l, Medidas
Congelador
exteriores 188*75*89 cm.,
Horizontal
Temperatura de operación $15000.00
Torrey modelo
18°C a -21°C, Voltaje 115 V,
CH-25
Compresor 1/4 pesado.
Capacidad 2 l, Medidas
Freidora 24,50*23*26 cm., Potencia
Taurus 1700 W. Freidora totalmente $840.00
Omega desmontable con cuerpo y
cubeta de acero inoxidable.
3.3.2 Utensilios
Tajo de madera.
3.3.3 Materiales
52
Nugget a base de carne de molleja de pollo
53
Nugget a base de carne de molleja de pollo
Regulador del pH de la
Corrosivo, astringente,
carne y de la temperatura
Fosfatos saponificante de grasas.
de cocimiento. Retiene
Da sabor amargo.
humedad.
Produce un color muy
Antioxidante (muy intenso o muy poco color
Ascorbato de sodio
reductor). si no se agrega en la
cantidad adecuada.
Fuente de proteína animal. Confiere olor y sabor
Caseinato de sodio
Emulsionante. lácteo.
En exceso produce un
Ajo Sabor y aroma olor fuerte y
desagradable.
Saborizante y
En exceso vuelve
Pimienta Blanca aromatizante acre y
incomestible el producto.
picante.
Confiere sabor
Mejorana Saborizante desagradable cuando se
agrega en exceso.
Vuelve el producto
Pimentón Saborizante picante si se adiciona
una cantidad excesiva.
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
56
Nugget a base de carne de molleja de pollo
Son valoraciones subjetivas realizadas por degustación, son realizadas por grupos
de personas representativos o por grupos especialmente entrenados, se realizan
mediante la dictaminación de las características que presenta el alimento, las
cuales son: apariencia (forma, color), sabor (aroma, gusto), textura (resistencia,
consistencia a la masticación), crujido (ruidos producidos por la masticación). En el
Cuadro 11 se muestran las especificaciones de la prueba realizada.
Para realizar la evaluación sensorial se realizó una prueba afectiva del método
organoléptico, para medir el nivel de agrado mediante una escala hedónica
formada por 7 puntos (Pedrero, 1996).
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
Evaluación Sensorial
Nombre:___________________________________________ Fecha:_________
Edad:_______
Nugget de Pollo
Instrucciones: Pruebe la muestra, tomando un poco de agua antes de la
degustación, evalué las características en el orden presentado y marque con un X
el renglón que corresponda a su evaluación.
Olor Color Sabor
Me gusta mucho ____ ____ ____
Me gusta moderadamente ____ ____ ____
Me gusta poco ____ ____ ____
Ni me gusta ni me disgusta ____ ____ ____
Me disgusta poco ____ ____ ____
Me disgusta moderadamente ____ ____ ____
Me disgusta mucho ____ ____ ____
Comentarios: _____________________________________________________.
Fuente: Pedrero, 1996.
58
Nugget a base de carne de molleja de pollo
CAPITULO IV
La molleja se sometió a una limpieza rigurosa, pues al ser una víscera es vendida
con muchas impurezas. Primero se elimina todo aquello que no forme parte de la
molleja, como piedras, tierra, heces, pasto, etc., en seguida se enjuaga al chorro
de agua potable, después se elimina aquel tejido que no forme parte de la molleja
como tal, esto cuando se vende la molleja con esófago. Una vez obtenida la
molleja, se procede a eliminar el tejido conjuntivo que se encuentra justo en los
59
Nugget a base de carne de molleja de pollo
4.2 FORMULACIÓN
60
Nugget a base de carne de molleja de pollo
Debido al intenso sabor y regusto que deja la carne de molleja se optó por agregar
un atenuador de sabor al producto, se decidió adicionar queso panela por tener un
sabor suave.
61
Nugget a base de carne de molleja de pollo
colocan en una superficie absorbente para retirar el exceso de aceite, paso que
dura aproximadamente 5 minutos, además sirve para enfriamiento; se procede al
envasado al vacío en bolsas de polietileno. Para finalmente ser almacenados en
condiciones de congelación.
62
Nugget a base de carne de molleja de pollo
CAPITULO V
5. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
63
Nugget a base de carne de molleja de pollo
Una de las principales dudas al inicio de este trabajo, era si la carne de molleja de
pollo podría formar una pasta cárnica. Para poder obtener una pasta cárnica con
características propias de una emulsión cárnica, se planteó utilizar carne de
pechuga de pollo y molleja.
Se probaron mezclas a partir del 80% de pechuga de pollo hasta el 50% variando
la proporción un 10% entre mezcla y mezcla. Llegando a una composición de la
64
Nugget a base de carne de molleja de pollo
5.3 RENDIMIENTOS
Del total de pechuga de pollo adquirida, se sumaron todos los lotes elaborados, y
se obtuvo un total de 2.400 Kg. (Entradas), se separaron los huesos, 0.450Kg., se
eliminó la grasa y el tejido conectivo (Mermas), 0.150 Kg. Quedando entonces un
total de 1.800 Kg. de carne magra (Salidas).
65
Nugget a base de carne de molleja de pollo
Después se lavó con agua para proceder a recortar el tejido conectivo que une a
la molleja en sus dobleces, resultando en 2.040 Kg. Las mollejas acondicionadas
hasta este punto (2.580 Kg.), se desinfectaron y se efectuó, posteriormente la
etapa de cocción (ebullición a una temperatura de 93°C, durante 15 minutos), al
término de esta etapa se somete a un enfriamiento a temperatura ambiente, para
después realizar el pesado y poder conocer el rendimiento, se obtuvieron 2.250
Kg. (Salidas), esto quiere decir que se eliminaron 0.330 Kg. de agua y compuestos
de la molleja (proteínas, lípidos, carbohidratos, entre otros).
Molleja Pechuga
Peso (Kg.) % Peso (Kg.) %
Materia Extraña 0.600 9.52 -------- --------
Hueso -------- -------- 0.450 18.75
Mermas 1.080 17.14 0.150 6.25
Tejido conectivo 2.040 32.39 -------- --------
Otros 0.330 5.24 -------- --------
Carne 2.250 35.71 1.800 75
Total 6.300 100 2.400 100
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
Por otro lado la carne de molleja tiene un precio de $23.00 m.n. por kilogramo, de
donde se obtienen apenas un 35.71% de carne utilizable, cotizándose el kilogramo
de carne de molleja en $61.32 m.n.
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
70
Nugget a base de carne de molleja de pollo
Recepción de la
molleja fresca
Eliminación de
sustancias extrañas
Recepción de la
Lavado
pechuga fresca
Limpiado de la Lavado
molleja
Lavado y Deshuesado
Desinfección
Cocción Desinfección
Homogeneización Reducción de
Tamaño del Queso
Moldeado y
Empanizado
Freído
Envasado y
Almacenamiento
Figura 22. Diagrama de Flujo del Proceso de Elaboración de Nuggets a base de carne
de molleja de pollo
71
Nugget a base de carne de molleja de pollo
El primer atributo calificado fue Color, con resultados de 39.06% para la categoría
“me gusta mucho” y 42.18% para “me gusta moderadamente”. El siguiente atributo
fue el Olor, que fue calificado en un 45.31% para “me gusta mucho” y 40.62% para
“me gusta moderadamente”. Finalmente para el Sabor se obtuvo un 54.68% para
“me gusta mucho” y 37.5% para “me gusta moderadamente”.
72
Nugget a base de carne de molleja de pollo
60
50
40
% 30
20
10
0
Color Olor Sabor
De manera global se tiene una aceptación del 93% del producto. Todo esto sin
olvidar que al realizar la evaluación del nugget lleva implícito atributos como: la
textura, consistencia y sonido al masticar.
Mientras que los valores de rechazo como “me disgusta moderadamente” y “me
disgusta mucho” fueron calificadas en menos ocasiones, mientras que la
indiferencia resultó ligeramente menor, en comparación con el mínimo rechazo,
denominado “me disgusta poco”.
73
Nugget a base de carne de molleja de pollo
Se analizaron los valores de cada atributo: color, olor y sabor; para conocer la
varianza de los valores obtenidos, que nos da una idea de la confiabilidad de los
datos. Calculando el coeficiente de variación, que es la desviación estándar
dividida entre la media aritmética, se puede establecer la diferencia entre cada
evaluación y tener la certeza que los resultados obtenidos NO presentan una
diferencia significativa y por lo tanto son confiables.
Así mismo se sumaron los valores de cada juez, obteniendo la mínima calificación
con un valor de 12 y la máxima de 21; que es el valor máximo posible.
Recordemos que son tres atributos evaluados y cada uno puede alcanzar un valor
de 7, como puntuación máxima.
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18
16
14
Frecuencia 12
10
8
6
4
2
0
12 14 15 16 17 18 19 20 21
Valores Obtenidos de la suma de los atributos
Figura 24. Distribución sesgada hacia la izquierda. Datos del Análisis Sensorial.
También se calculó una desviación estándar global del análisis sensorial de 1.934
y una media aritmética de 18.68. Para el color se obtuvo una desviación estándar
de 1.012 con una media aritmética de 6.07, para el olor de 0.950 una media
aritmética de 6.21, para el sabor de 0.865 con una media aritmética de 6.39. Estos
datos se muestran congregados en el Cuadro 15.
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Nugget Comercial
Parámetro Nugget
Granja del Sol Maggi McDonald’s
Humedad 57.99 % --- --- ---
Proteínas 9.40 % 14.62 % 9.90 % 13.89 %
Lípidos 21.00 % 14.62 % 10.9 % 15.74 %
Cenizas 2.10 % --- --- ---
Carbohidratos 9.00 % 15.38 % 26.6 % 18.52 %
Total 99.49 % --- --- ---
Contenido Energético 225.53 Kcal 251.54 Kcal 244 Kcal 268.52 Kcal
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El producto cumple con los límites establecidos por la Norma Oficial Mexicana,
siendo esta la principal referencia de la higiene aplicada en la elaboración de los
nuggets. Se tiene la certeza, por lo tanto, que el producto es inocuo para su
consumo, las condiciones de elaboración son higiénicas, el crecimiento microbiano
posible, no acortaría notablemente la vida de anaquel del nugget y lo más
importante no afectaría la salud del consumidor.
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
CAPITULO VI
6. CONCLUSIONES
Con los resultados del análisis microbiológico se puede asegurar que las medidas
de higiene establecidas para la elaboración de este producto, garantizan la
inocuidad del mismo, lo cual demuestra que la adaptación del proceso de
elaboración a la infraestructura de la planta piloto fue adecuada.
A pesar de utilizar una víscera como materia prima se obtiene un precio por
kilogramo de producto de $87.43 m.n. lo cual es, obviamente, un costo muy
elevado.
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Con los datos obtenidos del proceso de elaboración a nivel piloto, se puede
realizar el escalamiento para producción del nugget a mayor escala.
82
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7. BIBLIOGRAFÍA
Bremner, A. and Johnston, M., 1996. Poultry meat hygiene and inspection.
University Press, Cambridge, England.
Capita, R., Alonso, C., García, M.T., Moreno, B. y García Fernandez, C., 1999. El
pollo como alimento. Alimentación. Equipos y Tecnología. Año XVIII. Nº7.
Setiembre.
Chan, D. E., García, J. O., 2006. Elaboración de croquetas a partir de una mezcla
de carne de pollo y avestruz. E.N.C.B.-I.P.N., Desarrollo Tecnológico, México D.F.
83
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84
Nugget a base de carne de molleja de pollo
Fox, P.F., 2001. Milk proteins as food ingredients. International Journal of Dairy
Technology. UK, Switzerland, New Zealand, USA, Australia, Scotland, Brazil,
Ireland.
Kosikowiski, F., 1977. Cheese and fermented milk foods. Second edition. Ed.
Edwards Brothers. Michigan, USA.
85
Nugget a base de carne de molleja de pollo
Zavala, J., Estevez, G., 2007. Embutido de carne de conejo tipo jamón cocido.
Adicionado de chile. Tesis. E.N.C.B.-I.P.N., México D.F.
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
8. ANEXOS
NMX-F-089-S-1978
DETERMINACIÓN DE EXTRACTO ETÉREO (MÉTODO SOXHLET) EN ALIMENTOS.
FOODSTUFF-DETERMINATION OF ETHER EXTRACT (SOXHLET).
Introducción
El método Soxhlet utiliza un sistema de extracción cíclica de los componentes solubles en éter que
se encuentran en el alimento.
1. Objetivo y campo de aplicación
Esta Norma Mexicana establece el procedimiento para la determinación de ácidos grasos (extracto
etéreo) por el método de Soxhlet en todos los alimentos sólidos, excepto los productos lácteos.
2. Reactivos y materiales
· Eter etílico anhidro
· Material común de laboratorio.
3. Aparatos e instrumentos
· Extractor Soxhlet.
· Cartucho de extracción de tamaño adecuado para el extractor
· Parrilla eléctrica de placa con termostato.
· Estufa (100 – 110°C) con termostato y termómetro.
· Balanza analítica con sensibilidad de 0.1 mg.
4. Procedimiento
Transferir 2.0 g de muestra finamente dividida en el cartucho o dedal; cubrir con una porción de
algodón.
Colocar el cartucho dentro del extractor Soxhlet. En la parte inferior ajustar un matraz con cuerpos
de ebullición (llevados previamente a peso constante por calentamiento a 100 –110°C). Colocar el
refrigerante.
Añadir éter por el extremo superior del refrigerante en cantidad suficiente para tener 2 ó 3
descargas del extractor (alrededor de 80 ml).
Hacer circular el agua por el refrigerante y calentar hasta que se obtenga una frecuencia de unas 2
gotas por segundo.
Efectuar la extracción durante 4 a 6 horas. Suspender el calentamiento, quitar el extractor del
matraz y dejar caer una gota de éter del extractor a un papel o vidrio de reloj, si al evaporarse el
éter se observa una mancha de grasa, ajustar el Soxhlet de nuevo al matraz y continuar la
extracción.
Evaporar suavemente el éter del matraz y secar a 100°C hasta peso constante.
5. Cálculos
P - p x 100
Porciento de Extracto Etéreo = M
Donde:
P = Masa en gramos del matraz con grasa.
p = Masa en gramos del matraz sin grasa.
M = Masa en gramos de la muestra.
APÉNDICE A
A.1 Observaciones
A.1.1 Precaución: El éter es extremadamente inflamable. Se pueden formar peróxidos inestables
cuando se almacenan mucho tiempo o se expone a la luz del sol.
Puede reaccionar con explosión cuando está en contacto con el óxido de cloro, litio o con agentes
fuertemente oxidantes. Por ello es recomendable el empleo de extractores efectivos de vapores y
evitar la electricidad estática.
A.1.2 Se puede emplear papel filtro en lugar del cartucho de extracción.
6. Reporte de prueba
En el reporte de esta determinación se debe indicar el tiempo de extracción.
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
NMX-F-068-S-1980
ALIMENTOS. DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS. FOODS.
DETERMINATION OF PROTEINS.
1. Objetivo y campo de aplicación
Esta Norma Mexicana establece el procedimiento para determinar proteínas en productos
alimenticios.
2. Referencia
Esta Norma se complementa con la siguiente Norma Mexicana vigente:
NMX-BB-014. Utensilios de vidrio usados en laboratorio - Clasificación y tamaños nominales.
(Clasificación y tamaños nominales para utensilios de vidrio usados en el laboratorio).
3. Fundamento
Este método se basa en la descomposición de los compuestos de nitrógeno orgánico por ebullición
con ácido sulfúrico. El hidrógeno y el carbón de la materia orgánica se oxidan para formar agua y
bióxido de carbono. El ácido sulfúrico se transforma en SO2, el cual reduce el material nitrogenado
a sulfato de amonio.
El amoniaco se libera después de la adición de hidróxido de sodio y se destila recibiéndose en una
disolución al 2% de ácido bórico. Se titula el nitrógeno amoniacal con una disolución valorada de
ácido, cuya normalidad depende de la cantidad de nitrógeno que contenga la muestra. En este
método de Kjeldahl-Gunning se usa el sulfato de cobre como catalizador y el sulfato de sodio para
aumentar la temperatura de la mezcla y acelerar la digestión.
4. Materiales y reactivos
4.1 Materiales
· El equipo de vidrio empleado debe cumplir con los requisitos que establece la NMX-BB-014.
3
· Matraces Kjeldahl de 500 y/o 800 cm
· Material común de laboratorio
4.2 Reactivos
Los reactivos que se mencionan a continuación, deben ser grado analítico, cuando se indique
agua, debe entenderse agua destilada.
· Ácido sulfúrico concentrado
· Sulfato de cobre pentahidratado
· Zinc granulado
3
· Hidróxido de sodio: Disolver con 500 cm de agua 500 g de hidróxido de sodio.
· Sulfato de sodio anhidro
· Ácido bórico al 2%
· Solución de ácido clorhídrico 0.1 N
3 3
· Indicador Shiro Tashiro: Disolver 0.2 g de rojo de metilo en 60 cm de alcohol y aforar a 100 cm
3
con agua. Disolver 0.2 g de azul de metileno y aforarlos a 100 cm con agua. Mezclar 2 partes de
rojo de metilo y una de azul de metileno.
5. Aparatos e instrumentos
· Digestor y destilador Kjeldahl
· Balanza analítica con ± 0.1 mg de sensibilidad
6. Procedimiento
6.1 Determinar la masa, en la balanza analítica, de aproximadamente un gramo de muestra y
pasarla cuantitativamente a un matraz Kjeldahl, añadirle 2 g de sulfato de cobre, 10 g de sulfato de
3
sodio anhidro, 25 cm de ácido sulfúrico y unas perlas de vidrio.
6.2 Colocar el matraz en el digestor y calentar cuidadosamente a baja temperatura hasta que todo
el material esté carbonizado, aumentar gradualmente la temperatura hasta que la disolución esté
completamente clara y dejar por 30 minutos más a esa temperatura.
3
6.3 Enfriar y añadir de 400 a 450 cm de agua para disolver completamente la muestra, agregar 3 ó
3
4 gránulos de zinc, un poco de parafina cuando sea necesario y 50 cm de hidróxido de sodio 1:1.
6.4 Inmediatamente conectar el matraz a un sistema de destilación, el cual previamente se le ha
3 3
colocado en la salida del refrigerante un matraz Erlenmeyer de 500 cm que contenga 50 cm de
ácido bórico y unas gotas del reactivo Shiro Tashiro como indicador.
6.5 Destilar hasta que haya pasado todo el amoniaco, que unas gotas de destilado no den
3
alcalinidad con el papel tornasol, aproximadamente 300 cm .
NOTA: Las primeras gotas de destilado deben hacer virar el color del indicador de violeta a verde.
88
Nugget a base de carne de molleja de pollo
6.6 Retirar el matraz recibidor y titular el destilado con ácido clorhídrico 0.1 N.
7. Expresión de resultados
El Nitrógeno presente en la muestra, expresado en por ciento se calcula mediante la siguiente
fórmula:
En donde:
V = Volumen de ácido clorhídrico empleado en la titulación, en cm3
N = Normalidad del ácido clorhídrico.
m = Masa de la muestra en g.
0.014 = Miliequivalente del nitrógeno.
El por ciento de proteínas se obtiene multiplicando el por ciento de nitrógeno obtenido por el factor
correspondiente (Véase A.2).
Apéndice a
A.1 El contenido de nitrógeno en diferentes proteínas es aproximadamente de 16% por lo que
multiplicando el por ciento de nitrógeno obtenido por el factor 6.25 se obtiene la cantidad de
proteínas presentes en el alimento. Sin embargo, en algunos productos, la relación nitrógeno-
proteínas varía en forma transcendente por lo que es necesario utilizar los factores que en ese
caso se señalen: Pan y trigo, Arroz, Germen de trigo, Maíz, Soya, Cereales y pastas, Leche
8. Bibliografía
NMX-Z-013 Guía para la redacción, estructuración y presentación de las Normas Mexicanas.
Técnicas para el análisis fisicoquímico de alimentos. Dirección General de Investigación en Salud
Pública. Secretaria de Salubridad y Asistencia 1976. Fecha de aprobación y publicación: Agosto 4,
1980. Esta Norma cancela a la: NMX-F- 068-1977.
89
Nugget a base de carne de molleja de pollo
NOM-116-SSA1-1994
DETERMINACIÓN DE HUMEDAD EN ALIMENTOS POR TRATAMIENTO TÉRMICO.
MÉTODO POR ARENA O GASA.
Introducción
La determinación de humedad en los alimentos es de suma importancia, ya que un elevado
contenido de ésta influye en la velocidad de multiplicación de los microorganismos, provocando su
descomposición y por lo tanto la pérdida de la calidad sanitaria.
1 Objetivo y Campo de Aplicacion
1.1 Esta Norma Oficial Mexicana establece el procedimiento para determinar la humedad por
tratamiento térmico con el método por arena o gasa y es aplicable a alimentos en general, con
excepción de aquellos en los que se requiera una metodología específica.
1.2 Esta Norma Oficial Mexicana es de observancia obligatoria en el territorio nacional para las
personas físicas o morales que requieran efectuar este método en productos nacionales o de
importación, para fines oficiales.
2 Fundamento
Este método se basa en que al añadir arena o gasa, se incrementa la superficie de contacto y la
circulación del aire en la muestra, favoreciéndose así la evaporación durante el tratamiento térmico.
3 Definiciones
Para fines de esta Norma se entiende por:
3.1 Humedad es la pérdida en peso por evaporación que sufre el producto al someterlo a las
condiciones prescritas, expresada en por ciento.
3.2 Precisión es una medida del grado de reproducibilidad o repetibilidad del método analítico
bajo las condiciones normales de operación.
3.3 Producto heterogéneo es aquel cuya consistencia o diferentes fases hacen que la
distribución de sus componentes no sea homogénea, tales como sopas de lata, frijoles refritos,
moles, etc.
3.4 Repetibilidad es la precisión de un método analítico, expresado como la concordancia
obtenida entre determinaciones independientes realizadas por un solo analista, usando los mismos
datos y técnicas.
4 Símbolos y Abreviaturas
Cuando en esta Norma se haga referencia a los siguientes símbolos y abreviaturas se entiende
por:
g gramo
mg miligramo
mm milímetro
ºC grados Celsius
% por ciento
» aproximado
etc. etcétera
/ por
5 REACTIVOS Y MATERIALES
5.1 Reactivos
Los reactivos que a continuación se mencionan deben ser grado analítico, cuando se indique
agua, debe entenderse agua destilada.
Sílica gel con indicador de humedad.
Arena de mar purificada con ácido y calcinada (tamaño de partícula, 0,1 a 0,3 mm) o gasa.
Agua.
5.2 Materiales
Desecadores con placa.
Cápsulas de níquel, aluminio o vidrio de 20 mm de altura y 50 mm de diámetro, con tapa de 52
mm de diámetro por 6 mm de altura y base cóncava o plana según se requiera.
Varillas de vidrio de 4 mm de diámetro.
Pinzas para crisol.
Material común de laboratorio.
6 Aparatos e Instrumentos
90
Nugget a base de carne de molleja de pollo
Los aparatos que a continuación se indican deben estar calibrados y ser ajustados antes de su
operación:
Baño maría, o bien, placa calefactora eléctrica termostatizada.
Balanza analítica con ± 0,1 mg de sensibilidad.
Estufa con termostato para mantener una temperatura de 100 ± 2 °C.
7 Preparación de la Muestra
7.1 Preparación de las cápsulas. Para cada muestra preparar dos cápsulas y las tapas
respectivas con las siguientes características:
Cápsulas de níquel, aluminio o vidrio, con 30 g de arena como máximo, o gasa recortada al
tamaño del fondo de la cápsula y una varilla de vidrio de longitud apropiada para reposar
oblicuamente en la cápsula sin que se impida el tapado de ésta. Secar previamente las cápsulas
entreabiertas (con arena o gasa, varilla y tapas), durante un mínimo de 2 horas a 100 ± 2°C,
taparlas e introducir en un desecador y dejar enfriar a temperatura ambiente y pesar con precisión
de 0,1 mg (masa M1)
7.2 Preparación de la muestra
Justo antes de tomar la muestra, homogeneizarla bien, si es necesario, colocar el envase
original en baño maría a 40ºC para poner en suspensión los componentes que hayan podido
separarse. (Por ejemplo grasa y fibras).
8 Procedimiento
8.1 Colocar en la cápsula preparada una cantidad de producto inferior a 10 g, volver a tapar la
cápsula y pesar con precisión de 0,1 mg (masa M2).
Para que se cumpla el grado de precisión, se recomienda utilizar una cantidad de muestra
superior a 1 g y en los productos heterogéneos utilizar de 3 a 5 veces más de la cantidad mínima
propuesta.
8.2 Después de pesar, mezclar bien la muestra con arena o colocarla sobre la gasa. Si es
necesario, añadir unos centímetros cúbicos de agua destilada, lo cual facilita una mezcla uniforme.
8.3 Si la muestra lo requiere, evaporar a sequedad, sin tapa, por medio de un baño maría o
placa calefactora a un máximo de 100°C. Durante la evaporación, el contenido de la cápsula debe
removerse de vez en cuando al principio y más a menudo al final. Evitar las pérdidas de sustancia
y arena.
8.4 Introducir en la estufa las cápsulas con la muestra previamente evaporada, colocar las
tapas de manera que al final del tiempo de secado puedan taparse rápidamente, cerrar la estufa y
secar durante 4 horas a 100° ± 2°C. Abrir la estufa, tapar las cápsulas y colocarlas en los
desecadores, dejar enfriar hasta temperatura ambiente y pesar inmediatamente con precisión de
0,1 mg (masa M3).
9 Expresión de Resultados
9.1 Método de cálculo.
El contenido de humedad en la muestra se calcula con la siguiente fórmula expresada en por
ciento:
M2 - M3
Humedad en %=--------------- x 100
M2 - M1
En donde:
M1 = Peso de la cápsula con arena o gasa (g)
M2 = Peso de la cápsula con arena o gasa más muestra húmeda (g)
M3 = Peso de la cápsula con arena o gasa más muestra seca (g)
Nota: Indicar el valor medio de la determinación por duplicado con un decimal.
9.2 Grado de precisión
Repetibilidad: no debe exceder de 0,1 g por 100 g de muestra.
Si el producto es homogéneo y la diferencia excede 0,1 g/100 g, debe repetirse la
determinación. Sin embargo para ciertas materias heterogéneas las diferencias admisibles pueden
alcanzar de 0,3 a 0,5 g/100 g.
10 Informe de la Prueba
Informar: humedad en %.
11 Concordancia con Normas Internacionales
Esta Norma no tiene concordancia con normas internacionales.
91
Nugget a base de carne de molleja de pollo
NMX-F-066-S-1978.
DETERMINACIÓN DE CENIZAS EN ALIMENTOS.
FOODSTUFF DETERMINATION OF ASHES.
1. Objetivo
Esta Norma Mexicana establece el procedimiento para la determinación de cenizas.
2. Campo de Aplicación
Este método es aplicable a todas las muestras de alimentos sólidos. Para las muestras
líquidas determinar primero los sólidos totales y sobre este material aplicar la técnica
descrita.
3. Materiales
· Crisol de porcelana.
· Pinzas para crisol.
· Desecador.
4. Aparatos e Instrumentos
· Parrilla eléctrica con regulador de temperatura.
· Mufla.
· Balanza analítica con sensibilidad de 0.1 mg.
5. Procedimiento
En un crisol a masa constante, poner de 3 a 5 g de muestra por analizar; colocar el crisol
con muestra en una parrilla y quemar lentamente el material hasta que ya no desprenda
humos, evitando que se proyecte fuera del crisol.
Llevar el crisol a una mufla y efectuar la calcinación completa.
Dejar enfriar en la mufla, transferirlo al desecador para su completo enfriamiento y
determinar la masa del crisol con cenizas.
6. Cálculos
Calcular el porcentaje de cenizas con la siguiente formula:
(P - p) x 100
% cenizas = -------------------
M
En donde:
P = Masa del crisol con las cenizas en gramos.
p = Masa de crisol vacío en gramos.
M = Masa de la muestra en gramos.
6.1 Reporte de prueba
En el reporte de prueba de esta determinación se debe indicar la temperatura y tiempo
de calcinación.
7. BIBLIOGRAFÍA
Técnicas para el análisis fisicoquímico de alimentación de la Dirección General de
Investigación en Salud Pública y Dirección de Control de Alimentos y Bebidas de la
Secretaría de Salubridad y Asistencia.
Fecha de aprobación y publicación: Noviembre 3, 1978. Esta Norma cancela a la:
NMX-F-066-1964
92
Nugget a base de carne de molleja de pollo
93
Nugget a base de carne de molleja de pollo
El medio de cultivo anterior es el de uso más generalizado. Para algunos alimentos en particular se
requerirá de un medio de cultivo especial que se debe indicar al describir la técnica para ese
alimento.
5.2 Materiales
Todo el material que tenga contacto con las muestras o los microorganismos debe estar estéril.
Se requiere, los materiales mencionados en la NOM-110-SSA1-1994, Preparación y Dilución de
Muestras de Alimentos para su Análisis Microbiológico.
6. Aparatos e instrumentos
Se requiere, además de los mencionados en la NOM-110-SSA1-1994, Preparación y Dilución de
Muestras de Alimentos para su Análisis Microbiológico, los siguientes:
Incubadora con termostato que evite variaciones mayores de ± 1,0ºC, provista con termómetro
calibrado.
Contador de colonias de campo obscuro, con luz adecuada, placa de cristal cuadrículada y lente
amplificador.
Registrador mecánico o electrónico.
Microscopio óptico.
Baño de agua con o sin circulación mecánica, provista con termómetro calibrado con divisiones de
hasta 1,0 øC y que mantenga la temperatura a 45 ± 1,0 øC.
7. Preparación de la muestra
Para la preparación de la muestra seguir la NOM-110-SSA1-1994, Preparación y Dilución de
Muestras de Alimentos para su Análisis Microbiológico.
8. Procedimiento
8.1 Distribuir las cajas estériles en la mesa de trabajo de manera que la inoculación; la adición de
medio de cultivo y homogenización, se puedan realizar cómoda y libremente. Marcar las cajas en
sus tapas con los datos pertinentes previamente a su inoculación y correr por duplicado.
8.2 Después de inocular las diluciones de las muestras preparadas según la NOM-110-SSA1-1994,
Preparación y Dilución de Muestras de Alimentos para su Análisis Microbiológico, en las cajas
Petri, agregar de 12 a 15 ml del medio preparado, mezclarlo mediante 6 movimientos de derecha a
izquierda, 6 en el sentido de las manecillas del reloj, 6 en sentido contrario y 6 de atrás a adelante,
sobre una superficie lisa y horizontal hasta lograr una completa incorporación del inóculo en el
medio; cuidar que el medio no moje la cubierta de las cajas. Dejar solidificar.
8.3 Incluir una caja sin inóculo por cada lote de medio y diluyente preparado como testigo de
esterilidad.
8.4 El tiempo transcurrido desde el momento en que la muestra se incorpora al diluyente hasta que
finalmente se adiciona el medio de cultivo a las cajas, no debe exceder de 20 minutos.
8.5 Incubar las cajas en posición invertida (la tapa hacia abajo) por el tiempo y la temperatura que
se requieran, según el tipo de alimento y microorganismo de que se trate, véase el cuadro 1.
CUADRO 1
Grupo Bacteriano Temperatura Tiempo de Incubación
Termofílicos aerobios 55 ± 2ºC 48 ± 2 h
Mesofílicos aerobios* 35 ± 2ºC 48 ± 2 h
Psicrotróficos 20 ± 2ºC 3 - 5 días
Psicrofílicos 5 ± 2ºC 7 - 10 días
8.6 En la lectura seleccionar aquellas placas donde aparezcan entre 25 a 250 UFC, para disminuir
el error en la cuenta.
8.7 Contar todas las colonias desarrolladas en las placas seleccionadas (excepto las de mohos y
levaduras), incluyendo las colonias puntiformes. Hacer uso del microscopio para resolver los casos
en los que no se pueden distinguir las colonias de las pequeñas partículas de alimento.
9. Expresión de resultados
94
Nugget a base de carne de molleja de pollo
95
Nugget a base de carne de molleja de pollo
colonias, contar ambas placas incluyendo la que está fuera del intervalo para determinar la cuenta
en placa, véase el cuadro 2, ejemplo 7.
10.1.6 Placas corridas por duplicado, una placa de cada dilución dentro del intervalo de 25 a 250
colonias.- Cuando una placa dentro de diferentes diluciones contiene el número de colonias
especificadas en el intervalo, contar el número de colonias de las cuatro placas para calcular la
cuenta en placa, véase el cuadro 2, ejemplo 8.
9.1.7 Placas corridas por duplicado, ambas placas de una dilución dentro del intervalo de 25 a 250
y sólo una de la otra dilución dentro del mismo. Contar las cuatro cajas incluyendo aquélla con
menos de 25 o más de 250 colonias, para calcular la cuenta en placa, véase el cuadro 2, ejemplo
9.
9.1.8 Después de contabilizar las colonias en las placas seleccionadas, multiplicar por la inversa de
la dilución para obtener el número de UFC por mililitro o gramo de la muestra. Redondear la cifra
obtenida en la cuenta de manera que sólo aparezcan dos dígitos significativos al inicio de esta
cifra. Para redondear, elevar el segundo dígito al número inmediato superior cuando el tercer dígito
de la derecha sea cinco o mayor (por ejemplo: 128 redondear a 130). Si el tercer dígito es cuatro o
menos, reemplazar el tercer dígito con cero y el segundo dígito mantenerlo igual (Por ejemplo:
2417 a 2400):
10. Informe de la prueba
Reportar como: Unidades formadoras de colonias,___ UFC/g o ml, de bacterias aerobias en placa
en agar triptona extracto de levadura o agar para cuenta estándar, incubadas ________ horas a
_______ ºC.
CUADRO 2
Cálculo de los valores de la cuenta en placa
(Ensayos por duplicado)
Ejemplo Colonias contadas UFC/g o ml
número 1: 100 1: 1000 1: 10000
96
Nugget a base de carne de molleja de pollo
NOM-111-SSA1-1994
MÉTODO PARA LA CUENTA DE MOHOS Y LEVADURAS EN ALIMENTOS.
1. Objetivo y campo de aplicación
1.1 Esta Norma Oficial Mexicana establece el método general para determinar el número de mohos
y levaduras viables presentes en productos destinados al consumo humano por medio de la cuenta
en placa a 25 ± 1°C.
1.2 Esta Norma Oficial Mexicana es de observancia obligatoria en el Territorio Nacional para las
personas físicas o morales que requieran efectuar este método en productos nacionales o de
importación, para fines oficiales.
2. Fundamento
El método se basa en inocular una cantidad conocida de muestra de prueba en un medio selectivo
específico, acidificado a un pH 3,5 e incubado a una temperatura de 25 ± 1°C, dando como
resultado el crecimiento de colonias características para este tipo de microorganismos.
3. Símbolos y abreviaturas
Cuando en esta Norma se haga referencia a los siguientes símbolos y abreviaturas se entiende
por:
mm milímetro
µm micrómetro
g gramo
ml mililitro
pH potencial de hidrógeno
N normal
°C grado Celsius
% por ciento
UFC unidades formadoras de colonias
l litro
h hora
4. Reactivos y materiales
4.1 Reactivos
Los reactivos que a continuación se mencionan deben ser de grado analítico y cuando se indique
agua debe entenderse como agua destilada.
4.1.1 Medios de cultivo.
Agar papa - dextrosa, comercialmente disponible en forma deshidratada.
Preparación del medio de cultivo.
Seguir instrucciones del fabricante y después de esterilizar, enfriar en baño de agua a 45 ± 1°C,
acidificar a un pH de 3,5 ± 0,1 con ácido tartárico estéril al 10% (aproximadamente 1,4 ml de ácido
tartárico por 100 ml de medio). Después de adicionar la solución, mezclar y medir el pH con
potenciómetro. Dejar solidificar una porción del medio. Hacer esto en cada lote de medio
preparado.
A fin de preservar las propiedades gelificantes del medio, no calentar después de agregar el ácido
tartárico.
4.1.2 Soluciones.
4.1.2.1 Solución reguladora de fosfatos (solución concentrada)
FORMULA
INGREDIENTES CANTIDADES
Fosfato de potasio monobásico 34,0 g
Agua 1,0 l
Preparación:
Disolver el fosfato en 500 ml de agua y ajustar el pH a 7,2 con hidróxido de sodio 1 N.
Llevar a 1,0 l de agua.
Esterilizar a 121°C durante 15 minutos. Conservar en refrigeración (solución concentrada).
Tomar 1,25 ml de la solución concentrada y llevar a 1,0 l con agua (solución de trabajo).
Distribuir en porciones de 99, 90 y 9 ml según se requiera.
Esterilizar a 121 ± 1°C durante 15 minutos.
4.1.2.2 Solución estéril de ácido tartárico al 10%
FORMULA
97
Nugget a base de carne de molleja de pollo
INGREDIENTES CANTIDADES
Acido tartárico 10,0 g
Agua destilada 100,0 ml
Preparación:
Disolver el ácido en el agua y esterilizar a 121 ± 1,0 °C por 15 minutos o por filtración a través de
membrana de 0,45 µm.
4.2 Materiales.
Pipetas bacteriológicas para distribuir 10 y 1 ml (o si es necesario de 1 ml y 2 ml), con tapón de
algodón. Pueden utilizarse pipetas graduadas en volúmenes iguales a una décima de su volumen
total.
Cajas Petri.
Frascos de vidrio de 250 ml con tapón de rosca.
Tubos de 16 x 150 mm con tapón de rosca.
Utensilios esterilizables para la obtención de muestras: cuchillos, pinzas, tijeras, cucharas,
espátulas, etc.
Todo el material e instrumentos que tengan contacto con las muestras bajo estudio, deben
esterilizarse mediante:
Horno, durante 2 h de 170 a 175°C o por 1h a 180°C o autoclave, durante 15 minutos como
mínimo a 121 ± 1,0°C.
5. Aparatos e instrumentos
Horno para esterilizar que alcance una temperatura mínima de 170°C.
Incubadora con termostato que pueda ser mantenido a 25 ± 1,0°C provista con termómetro
calibrado.
Autoclave que alcance una temperatura mínima de 121 ± 1,0°C.
Baño de agua con control de temperatura y circulación mecánica, provista con termómetro
calibrado con divisiones de 0,1°C y que mantenga la temperatura a 45 ± 1,0°C.
Contador de colonias de campo oscuro, con luz adecuada, placa de cristal cuadriculada y lente
amplificador.
Registrador mecánico o electrónico.
Microscopio óptico.
Potenciómetro con una escala mínima de 0,1 unidades de pH a 25 °C.
6. Preparación de la muestra
La preparación de la muestra debe ser de acuerdo a lo establecido en la NOM-110-SSA1-1994.
Preparación y Dilución de Muestras de Alimentos para su Análisis Microbiológico.
7. Procedimiento
7.1 Colocar por duplicado en cajas Petri 1 ml de la muestra líquida directa o de la dilución primaria,
utilizando para tal propósito una pipeta estéril.
7.2 Repetir el procedimiento tantas veces como diluciones decimales se requiera sembrar,
utilizando una pipeta estéril diferente para cada dilución.
7.3 Verter de 15 a 20 ml de agar papa dextrosa acidificado, fundido y mantenido a 45 ± 1 °C en un
baño de agua. El tiempo transcurrido entre la preparación de la dilución primaria y el momento en
que es vertido el medio de cultivo, no debe exceder de 20 minutos.
7.4 Mezclar cuidadosamente el medio con seis movimientos de derecha a izquierda, seis en el
sentido de las manecillas del reloj, seis en el sentido contrario y seis de atrás para adelante, sobre
una superficie lisa. Permitir que la mezcla se solidifique dejando las cajas Petri reposar sobre una
superficie horizontal fría.
7.5 Preparar una caja control con 15 ml de medio, para verificar la esterilidad.
7.6 Invertir las cajas y colocarlas en la incubadora a 25 ± 1°C.
7.7 Contar las colonias de cada placa después de 3, 4 y 5 días de incubación. Después de 5 días,
seleccionar aquellas placas que contengan entre 10 y 150 colonias. Si alguna parte de la caja
muestra crecimiento extendido de mohos o si es difícil contar colonias bien aisladas, considerar los
conteos de 4 días de incubación y aún de 3 días. En este caso, informar el periodo de incubación
de 3 o 4 días en los resultados del análisis.
7.8 Si es necesario, cuando la morfología colonial no sea suficiente, examinar microscópicamente
para distinguir las colonias de levaduras y mohos de las bacterias.
8. Expresión de resultados
98
Nugget a base de carne de molleja de pollo
99
Nugget a base de carne de molleja de pollo
NOM-115-SSA1-1994
NORMA OFICIAL MEXICANA, BIENES Y SERVICIOS. MÉTODO PARA LA
DETERMINACIÓN DE STAPHYLOCOCCUS AUREUS EN ALIMENTOS.
100
Nugget a base de carne de molleja de pollo
Todos los instrumentos que se utilicen para trabajar la muestra deben esterilizarse mediante horno,
durante 2 h de 170-175ºC o como alternativa en autoclave durante 15 min como mínimo a 121ºC
±1.
Cuchillos, pinzas, tijeras, cucharas, espátulas y separador de huevo.
Tubos de cultivo de 16 mm x 150 mm o frascos de 125 a 250 ml de capacidad.
Tubos de cultivo de 10 mm x 75 mm.
Cajas Petri de 90 a 100 mm de diámetro.
Pipetas bacteriológicas de 1 ml y 10 ml de capacidad graduadas en 0,1 ml y 1 ml respectivamente
y diámetro de 2 a 3 mm.
Pipetas Pasteur.
Probetas.
Varillas de vidrio de 3,5 mm de diámetro aproximadamente y 20 cm de largo dobladas en ángulo
recto.
Matraz Erlenmeyer con perlas de vidrio
Cámara húmeda: consiste en una caja Petri en la cual se coloca una varilla de vidrio en forma de
"V" rodeada de algodón humedecido con agua.
7. Aparatos
Horno para esterilizar que alcance 180°C.
Autoclave con termómetro.
Baño de agua con regulador de temperatura de 35 ± 0,5ºC.
Baño de agua con regulador de temperatura de 45 ± 0,5ºC.
Balanza con capacidad no mayor de 2,500 g y sensibilidad de 0,1 g.
Incubadora a 35 ± 1ºC.
8. Preparación de la muestra
La preparación de la muestra se debe realizar de acuerdo a lo establecido en la NOM-110-SSA1-
1994 "Preparación y Dilución de Muestras de Alimentos para su Análisis Microbiológico".
9. Procedimiento
9.1 Utilizando diferentes pipetas de 1 ml para cada dilución, depositar 0,1 ml sobre la superficie de
las placas de agar Baird-Parker.
9.2 Distribuir el inóculo sobre la superficie del agar con varillas estériles de vidrio en ángulo recto,
utilizando una para cada dilución.
9.3 Mantener las placas en su posición hasta que el inóculo sea absorbido por el agar.
9.4 Invertir las placas e incubar de 45 a 48 h a 35ºC.
9.5 Seleccionar las placas que tengan entre 15 y 150 colonias típicas de Staphylococcus aureus; si
no es posible, seleccionar las placas de las diluciones más altas no obstante tengan más de 150
colonias.
9.6 Cuando las placas tengan menos de 15 colonias típicas también pueden ser utilizadas y al
informe se debe agregar la nota de "valor estimado".
9.7 Las colonias típicas son negras, circulares, brillantes, convexas, lisas, de diámetro de 1 a 2 mm
y muestran una zona opaca y un halo claro alrededor de la colonia.
9.8 Seleccionar las colonias de acuerdo con el siguiente cuadro para realizar las pruebas de
coagulasa y termonucleasa:
Cuadro
Numero de colonias número de colonias
Sospechosas en placa por probar
Menos de 50 3
51 a 100 5
101 a 150 o más 7
101
Nugget a base de carne de molleja de pollo
9.9 Seleccionar el número de colonias y sembrar cada una en tubos con 0,5 ml de caldo de
infusión cerebro-corazón.
9.10 Incubar a 35ºC durante 24 h.
9.11 Inocular en la misma forma cepas conocidas de Staphylococcus aureus y Staphylococcus
epidermidis como testigos positivo y negativo.
9.12 Después del periodo de incubación pasar con una pipeta de 1 ml, 0,3 ml de cada cultivo a otro
tubo de 10 mm x 75 mm y conservarlo para la prueba de termonucleasa. El resto del cultivo se usa
para la prueba de coagulasa.
9.13 Prueba de coagulasa
9.13.1 Agregar a los 0,2 ml del cultivo anterior, 0,2 ml de plasma de conejo diluido volumen a
volumen con solución salina estéril.
9.13.2 Incubar en baño de agua de 35 a 37ºC y observar durante 6 h a intervalos de 1 h; si no hay
formación de coágulo, observar a las 24 h. Considerar positiva la prueba si hay formación de
coágulo.
Para comprobar la coagulabilidad del plasma de conejo se añade una gota de cloruro de calcio al
5% a 0,5 ml de plasma reconstituido empleado, formándose un coágulo en 10-15 seg.
9.14 Prueba de termonucleasa
9.14.1 Calentar durante 15 min, 0,3 ml de cultivo en caldo de infusión cerebro-corazón en baño de
agua hirviendo.
9.14.2 Pasar una gota de cada cultivo por medio de una pipeta Pasteur a un orificio del medio,
incluye testigo.
9.14.3 Incubar a 35ºC en cámara húmeda de 4 a 24 h.
9.14.4 La aparición de un halo color rosa extendido de por lo menos 1 mm alrededor de la
perforación se califica como positiva.
10. Cálculo y expresión de resultados
10.1 Cálculo
Hacer el cálculo del contenido de microorganismos en el producto tomando en cuenta el número de
colonias totales, el número de colonias confirmadas, la dilución y el volumen inoculado (0,1 ml).
Ejemplo 1:
Si la caja tiene 80 colonias en la dilución 1:1000
Se toman 5 colonias para la prueba, de éstas dan 4 positivas, el cálculo es:
80 x 4 = 64 x 1000 x 10 = 640 000
Ejemplo 2:
Si la caja tiene 14 colonias en la dilución 1:10
Se toman 3 colonias para la prueba, de éstas dan 2 positivas, el cálculo es:
14 x 2 = 9,3 x 10 x 10 = 930
10.2 Expresión de los resultados:
Según ejemplo 1:
Informar como Staphylococcus aureus 640 000 UFC/g
Según ejemplo 2:
Informar como Staphylococcus aureus 930 UFC/g valor estimado
Si las pruebas confirmativas resultan negativas en todas las colonias probadas, informar como:
0 UFC/g en muestras directas
-10 UFC/g en muestras de dilución 1:10
-100 UFC/g en muestras de dilución 1:100
En la práctica los resultados pueden variar, esto dependerá del técnico que trabaje el método y
el grado de confiabilidad del mismo, que en el 95% de los casos es de ± 16% a ± 52%.
102
Nugget a base de carne de molleja de pollo
NOM-114-SSA1-1994
NORMA OFICIAL MEXICANA, BIENES Y SERVICIOS. METODO PARA LA
DETERMINACION DE SALMONELLA EN ALIMENTOS
0. Introducción
Los miembros del género Salmonella han sido muy estudiados como patógenos cuando se
encuentran presentes en los alimentos. El control de este microorganismo, tanto por parte de las
autoridades sanitarias, como en las plantas procesadoras de alimentos, depende en cierta medida
del método analítico utilizado para su detección.
Este microorganismo fue inicialmente identificado en muestras clínicas y los métodos empleados
para estos casos se adaptaron posteriormente para su detección en alimentos. Las modificaciones
a los métodos consideraron dos aspectos principales, el primero es el debilitamiento o daño a las
células bacterianas presentes en un alimento, debido al proceso a que está sujeto (por ejemplo:
tratamiento térmico, secado, etc.) y segundo, la variabilidad inherente a la naturaleza del producto
bajo estudio.
Para diversos alimentos existen diferentes protocolos para el aislamiento de Salmonella, todos
ellos son esencialmente similares en principio y emplean las etapas de preenriquecimiento,
enriquecimiento selectivo, aislamiento en medios de cultivo selectivos y diferenciales, identificación
bioquímica y confirmación serológica de los microorganismos.
1. Objetivo y campo de aplicación
1.1 Esta Norma Oficial Mexicana establece un método general para la determinación de
Salmonella en alimentos.
1.2 Esta Norma Oficial Mexicana es de observancia obligatoria en el territorio nacional para las
personas físicas y morales que requieran efectuar este método en productos nacionales y de
importación para fines oficiales.
2. Fundamento
La presente técnica para la detección de Salmonella en alimentos, describe un esquema general
que consiste de 5 pasos básicos:
2.1 Preenriquecimiento, es el paso donde la muestra es enriquecida en un medio nutritivo no
selectivo, que permite restaurar las células de Salmonella dañadas a una condición fisiológica
estable.
2.2 Enriquecimiento selectivo, empleado con el propósito de incrementar las poblaciones de
Salmonella e inhibir otros organismos presentes en la muestra.
2.3 Selección en medios sólidos, en este paso se utilizan medios selectivos que restringen el
crecimiento de otros géneros diferentes a Salmonella y permite el reconocimiento visual de
colonias sospechosas.
2.4 Identificación bioquímica, este paso permite la identificación genérica de los cultivos de
Salmonella y la eliminación de cultivos sospechosos falsos.
2.5 Serotipificación, es una técnica serológica que permite la identificación específica de un cultivo.
3. Referencias
Esta norma se complementa con la siguiente Norma Oficial Mexicana:
NOM-109-SSA1-1994 Procedimiento para la toma, manejo y transporte de muestras de alimentos
para su análisis microbiológico.
4. Definiciones
Para fines de esta norma se entiende por:
4.1 Detección de Salmonella: determinación de la presencia o ausencia de estos microorganismos
en una masa determinada de producto, cuando las pruebas se llevan a cabo de acuerdo con esta
norma.
4.2 Salmonella: microorganismo patógeno perteneciente al grupo de Enterobacterias. Bacilo gram
negativo, aerobio, no esporulado que forman colonias típicas en medios selectivos sólidos y que
presentan además las características bioquímicas y serológicas descritas cuando los
procedimientos se efectúan de acuerdo con esta norma.
5. Reactivos y materiales
En caso de disponerse de fórmulas comerciales deshidratadas, se deben seguir las instrucciones
impresas en la etiqueta respectiva para su preparación.
103
Nugget a base de carne de molleja de pollo
Las sustancias químicas usadas para preparar los medios de cultivo y los reactivos deben ser
grado analítico.
5.1 Reactivos
5.1.1 Medios de pre-enriquecimiento
5.1.1.1 Agua de peptona tamponada
6. Equipo
Horno para esterilizar que alcance los 180ºC
Incubadora con termostato para evitar variaciones mayores de ± 0,1ºC y termómetro
Autoclave con termómetro o manómetro, probado con termómetro de máximas
Baño maría con termostato y termómetro
Balanza granataria con sensibilidad de 0,1 g
Licuadora de una o dos velocidades controladas por un reóstato, con vasos esterilizables (vidrio o
aluminio)
Mecheros Bunsen o Fisher
Potenciómetro
7. Procedimiento
7.1 Preparación de los alimentos para el aislamiento de Salmonella
Los siguientes métodos se basan en el análisis de 25 g de la muestra analítica en una proporción
de
1:9 de muestra/caldo. Esta cantidad puede variarse siempre que se mantenga la misma
proporción. Se recomienda una muestra de 25 g o más.
7.1.1 Procedimiento general para la preparación de muestras
Pesar asépticamente 25 g de la muestra en un vaso estéril de licuadora o en bolsa estéril para
trabajar en homogeneizador peristáltico (stomacher). Adicionar 225 ml del medio de
preenriquecimiento estéril (generalmente caldo lactosado, a menos que se indique otro) y licuar si
es necesario durante un min.
Transferir asépticamente la mezcla homogeneizada a un recipiente estéril de boca ancha con
tapón de rosca y dejar reposar por 60 min a temperatura ambiente con la tapa bien enroscada.
Mezclar bien determinar el pH aproximado con papel pH. Ajustar, si es necesario, a un pH 6,8 ±
0,2 con hidróxido de sodio 1N o ácido clorhídrico 1N estériles. Mezclar y cubrir el recipiente
enroscando suavemente la tapa.
Incubar 24 ± 2 h a 35ºC. Continuar como se indica en 8.2.1.
7.1.2. Productos procesados térmicamente y productos secos. Se sigue el procedimiento señalado
en 8.1.1 hasta la homogeneización. Si la muestra es en polvo o molida, el licuado puede omitirse.
Después de reposar, mezclar bien y ajustar el pH como se indica en el procedimiento general. Para
emulsionar las grasas, agregar los detergentes en las mismas proporciones y con las mismas
recomendaciones que para el coco. La cantidad de los mismos dependerá en gran medida de la
composición del alimento. Los detergentes no serán necesarios en los productos glandulares en
polvo. Incubar las muestras como se indica en 8.1.1.
7.1.2.1 Carnes, sustitutos de carnes, derivados cárnicos, sustancias de origen animal, productos
glandulares y harinas (pescado, carne y hueso).
7.1.2.2 Productos procesados térmicamente y productos secos. Se sigue el procedimiento
señalado en 7.1.1 hasta la homogeneización. Si la muestra es en polvo o molida, el licuado puede
omitirse.
Después de reposar, mezclar bien y ajustar el pH como se indica en el procedimiento general. Para
emulsionar las grasas, agregar los detergentes en las mismas proporciones y con las mismas
recomendaciones que para el coco. La cantidad de los mismos dependerá en gran medida de la
composición del alimento. Los detergentes no serán necesarios en los productos glandulares en
polvo.
Incubar las muestras como se indica en 7.1.1.
7.2 Aislamiento de Salmonella
7.2.1 Cerrar firmemente el tapón de rosca de los matraces con los cultivos de preenriquecimiento y
agitar suavemente, transferir respectivamente 1 ml de la mezcla a un tubo que contenga 10 ml de
caldo tetrationato y a otro con 10 ml de caldo selenito cistina. Como alternativa, en sustitución del
caldo tetrationato puede emplearse el medio Vassiliadis-Rappaport.
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
105
Nugget a base de carne de molleja de pollo
control de medio para comparar el vire púrpura de las reacciones positivas con el color del medio
original. Incubar 24 ± 2 h a 35ºC.
7.3.6.2 Prueba de ureasa (rápida). Tomar dos asadas de crecimiento del cultivo presumiblemente
positivo de cada tubo de medio TSI e inocular tubos de caldo urea (rápida). Incubar 2 h a 37 ±
0,5ºC en baño de agua.
Descartar todos los cultivos que den ureasa positiva. Retener los cultivos que den la prueba
negativa (sin cambio de color del medio).
7.4 Identificación serológica
7.4.1 Ensayo de los antígenos somáticos de Salmonella (Antisuero polivalente O)
7.4.1.1 Colocar con una asa dos gotas separadas de solución salina estéril sobre un portaobjetos o
en dos secciones de una placa para aglutinación. Suspender en cada una de las gotas, una
porción del cultivo desarrollado en TSI.
7.4.1.2 Agregar a una de ellas una gota del antisuero polivalente somático (O) y mezclar con el
canto del asa o empleando aplicadores de madera.
7.4.1.3 Agitar inclinando la lámina hacia atrás y hacia adelante durante aproximadamente un min.
Observar bajo buena iluminación sobre un fondo oscuro.
7.4.1.4 Considerar cualquier grado de aglutinación como positiva.
La prueba positiva resulta cuando se presenta aglutinación en la gota con el cultivo y el antisuero y
no aglutinación en la gota que contiene el cultivo y la solución salina.
Si se observa aglutinación en ambas gotas, la prueba no es definitiva y se debe continuar con las
pruebas bioquímicas complementarias.
7.4.2 Cuando la aglutinación es positiva con el suero polivalente O, puede determinarse el
subgrupo empleando antisueros para los diferentes subgrupos (los grupos B, C, D y E, suelen ser
los más frecuentes).
7.4.2.1 Si la aglutinación con el antisuero O es negativa, utilizar antisuero Vi y efectuar la prueba.
Si hay aglutinación con Vi calentar el cultivo a ebullición y repetir la aglutinación con el antisuero
polivalente O.
7.4.2.2 Si no se cuenta con los sueros grupo específico, solicitar la tipificación de la cepa al
Laboratorio de Enterobacterias del Centro Nacional de Diagnóstico y Referencia de la Secretaría
de Salud o al Laboratorio Nacional de Salud Pública.
7.4.3 Si se requiere, practicar el ensayo de los antígenos flagelares de Salmonella (Antisuero
polivalente H).
7.4.3.1 Inocular el crecimiento del tubo de TSI en agar infusión de cerebro corazón e incubar de 4 a
6 h a 35ºC hasta que se observe crecimiento (para ensayo en el mismo día), o bien, en caldo soya
tripticaseina e incubar por 24 ± 2 h a 35ºC (para ensayo al día siguiente). Adicionar 2,5 ml de
solución salina formalizada a 5 ml del cultivo en caldo o al cultivo en agar cerebro corazón (BHI).
7.4.3.2 Colocar 0,5 ml del antisuero polivalente flagelar (H) preparado en un tubo para serología
(13 x 100 mm aproximadamente). Adicionar 0,5 ml del cultivo formalizado. Preparar un control de
solución salina mezclando 0,5 ml de solución salina formalizada con 0,5 ml del antígeno
formalizado. Incubar las mezclas en baño de agua a 48-50ºC. Observar a intervalos de 15 min por
espacio de una h. Una prueba positiva es cuando se observa aglutinación en la mezcla de prueba
pero no en el control. Debe interpretarse como negativa una prueba en la que ninguna de las
mezclas muestre aglutinación. Cuando ambas mezclas se aglutinan, se considera la prueba
inespecífica.
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
NOM-112-SSA1-1994
NORMA OFICIAL MEXICANA BIENES Y SERVICIOS. DETERMINACIÓN DE
BACTERIAS COLIFORMES. TÉCNICA DEL NÚMERO MÁS PROBABLE.
1. Objetivo y campo de aplicación
1.1 Esta Norma Oficial Mexicana establece el método microbiológico para estimar el número de
coliformes presentes en productos alimenticios, por medio del cálculo del número más probable
(NMP) después de la incubación a 35 °C de la muestra diluida en un medio líquido.
Este procedimiento puede aplicarse a agua potable, agua purificada, hielo y alimentos procesados
térmicamente, así como a muestras destinadas a evaluar la eficiencia de prácticas sanitarias en la
industria alimentaria. Este procedimiento debe seleccionarse cuando la densidad esperada es
como mínimo de una bacteria en 10 ml de producto líquido o una bacteria por gramo de alimento
sólido.
Cuando la densidad bacteriana sea menor que la aquí citada y si la naturaleza del alimento lo
permite, utilizar el método de filtrado en membrana. Si la densidad microbiana se espera sea mayor
a 100 por mililitro o gramo de muestra, ampliar el intervalo de diluciones o utilizar el método en
placa.
1.2 Esta Norma Oficial Mexicana es de observancia obligatoria en el territorio nacional para las
personas físicas o morales que requieran efectuar este método en productos nacionales o de
importación, para fines oficiales.
2. Fundamento
El método se basa en que las bacterias coliformes, fermentan la lactosa incubadas a 35 ± 1°C
durante 24 a 48 horas, resultando una producción de ácidos y gas el cual se manifiesta en las
campanas de fermentación.
3. Definiciones
Para fines de esta norma se entiende por:
Coliformes, bacilos Gram negativos, no esporulados, aerobios o anaerobios facultativos, que a 35
°C fermentan la lactosa con la producción de gas bajo las condiciones especificadas en esta
norma.
4. Reactivos y materiales
Los reactivos que a continuación se mencionan deben ser grado analítico. Cuando se indique agua
debe entenderse como agua destilada con pH cercano a la neutralidad.
4.1 Reactivos
4.1.1 Soluciones diluyentes
4.1.1.1 Solución reguladora de fosfatos (solución concentrada)
5. Aparatos e instrumentos
Horno para esterilizar que alcance una temperatura mínima de 170 °C.
Incubadora con termostato que evite variaciones mayores de ± 1,0 °C, provista con termómetro
calibrado.
Termómetro de máximas y mínimas.
Autoclave que alcance una temperatura mínima de 121 ± 1,0 °C.
Potenciómetro con una escala mínima de 0,1 unidades de pH a 25 °C.
6. Preparación de la muestra
Las muestras deben prepararse y diluirse, siempre que sea posible, de acuerdo a la NOM-110
SSA1-1994.
Preparación y Dilución de Muestras de Alimentos para su Análisis Microbiológico.
7. Procedimiento
7.1 Para agua potable y hielo
7.1.1 Prueba presuntiva
7.1.1.1 Inoculación. Agitar la muestra. Transferir volúmenes de 10 ml de muestra a cada uno de 5
tubos con 20 ml de caldo lactosado de mayor concentración y 1,0 ml y 0,1 ml de muestra a cada
107
Nugget a base de carne de molleja de pollo
uno de los tubos de las series de 5 respectivamente con 10 ml de caldo lactosado de concentración
sencilla o caldo lauril sulfato triptosa con púrpura de
bromocresol. (Ver punto 6.1.2)
7.1.1.2 Incubación. Incubar los tubos a 35 °C. Examinar a las 24 ± 2 h y observar si hay formación
de gas o la formación de gas no se observa en este tiempo, incubar por 48 ± 2 h.
7.1.2 Prueba confirmativa
De cada tubo que muestre formación de gas, tomar una azada y sembrar en un número igual de
tubos con medio de confirmación, caldo lactosa lauril bilis verde brillante. Incubar a 35 ± 0,5 °C por
24 ± 2 horas o si la formación de gas no se observa en este tiempo, incubar por 48 ± 2 horas.
En esta Norma Oficial Mexicana, para el análisis de agua potable, agua purificada así como hielo,
se emplea la serie de 5 tubos inoculados, 5 tubos con 10 ml, 5 tubos con 1 ml y 5 tubos con 0,1 ml,
véase el cuadro 4.
7.2 Para alimentos.
Preparar suficiente número de diluciones para asegurar que todos los tubos correspondientes a la
última dilución rindan un resultado negativo.
7.2.1 Prueba presuntiva
7.2.1.1 Inoculación. Tomar tres tubos de medio de enriquecimiento de mayor concentración. Usar
una pipeta estéril para tranferir a cada tubo 10 ml de la muestra si es líquida o 10 ml de la dilución
primaria inicial, en el caso de otros productos.
7.2.1.1.1 Tomar tres tubos de concentración sencilla del medio selectivo de enriquecimiento. Usar
una pipeta estéril para transferir a cada uno de estos tubos 1 ml de la muestra si es líquida o 1 ml
de la dilución primaria en el caso de otros productos.
7.2.1.1.2 Para las diluciones subsecuentes, continuar como se indica en el párrafo anterior, usando
una pipeta diferente para cada dilución. Mezclar suavemente el inóculo con el medio.
7.2.1.2 Incubación. Incubar los tubos a 35 ± 0,5 °C por 24 ± 2 horas y observar si hay formación de
gas, en caso contrario prolongar la incubación hasta 48 ± 2 horas.
7.2.2 Prueba confirmativa
De cada tubo que muestre formación de gas, tomar una azada y sembrar en un número igual de
tubos con medio de confirmación. Incubar a 35 ± 0,5 °C por 24 ± 2 horas o si la formación de gas
no se observa en este tiempo, prolongar la incubación por 48 ± 2 horas.
En esta Norma Oficial Mexicana se considera una combinación de tres tubos por cada dilución
de la serie. Para algunos productos y siempre que se requiera una mayor precisión en los
resultados, será necesario inocular una serie de cinco o diez tubos.
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
NOM-031-SSA1-1993
PRODUCTOS DE LA PESCA. MOLUSCOS BIVALVOS FRESCOS-REFRIGERADOS
Y CONGELADOS. ESPECIFICACIONES SANITARIAS. APÉNDICE NORMATIVO A
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
Cloruro de sodio 5 g
Citrato férrico amoniacal 0,5 g
Tiosulfato de sodio 0,5 g
Rojo de fenol 0,025 g
Agar 15,0 g
Agua destilada 1 000 ml
Suspender los ingredientes y hervir hasta disolución del agar. Distribuir en tubos de tapón de
rosca. Esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 121ºC. Dejar solidificar los tubos inclinados.
Ajustar el pH de 7,4 ± 0,2.
Agar Arginina Glucosa Inclinado (AGS)
FORMULA
Peptona 5 g
Extracto de levadura 3 g
Triptona 10 g
Cloruro de sodio 20 g
Glucosa 1 g
L-Arginina(hidrocloruro) 5 g
Citrato férrico amónico 0,5 g
Tiosulfato de sodio 0,3 g
Púrpura de bromocresol 0,2 g
Agar 13,5 g
Agua destilada 1 000 ml
Suspender los ingredientes en agua destilada, hervir hasta disolución del agar, y distribuir en
cantidades de 5 ml a tubos de 13 x 100 mm. Ajustar el pH de 6,8 a 7,0. Esterilizar en autoclave de
10 a 12 minutos a 121ºC. Deje solidificar el medio inclinado.
Agar Triple Azúcar y Hierro (TSI)
FORMULA
Polipeptona 20 g
Cloruro de sodio 5 g
Lactosa 10 g
Sacarosa 10 g
Glucosa 1 g
Sulfato ferroso amónico 0,2 g
Tiosulfato de sodio 0,2 g
Rojo de fenol 0,025 g
Agar 13 g
Agua destilada 1 000 ml
Disolver los ingredientes en agua destilada. Mezclar bien y calentar a ebullición, agitando
ocasionalmente hasta completa disolución. Enfriar a 60ºC y ajuste el pH de 7,3 ± 0,1.
Agar de Hierro y Lisina (LIA)
FORMULA
Peptona o gelisato 5,0 g
Extracto de levadura 3,0 g
Glucosa 1,0 g
L-Lisina 10,0 g
Citrato férrico amónico 0,5 g
Tiosulfato de sodio 0,04 g
Púrpura de bromocresol 0,02 g
Agar 15,0 g
Agua destilada 1 000 g
Disolver los ingredientes en el agua destilada y mezclar bien; calentar hasta ebullición con
agitación frecuente hasta conseguir la disolución completa. Esterilizar en autoclave 12 minutos a
121ºC. Enfriar de 50-60ºC y ajustar el pH de 6,7 ± 0,1. Distribuir en volúmenes de 3 ml en tubos de
13 x 100 mm. Los tubos se enfrian en posición inclinada, de tal modo que se obtengan columnas
de medio de 3 cm y una parte inclinada de 2 cm.
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
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Nugget a base de carne de molleja de pollo
en T1N3. La mayoría de las especies vibrio spp, incluyen algunos V. cholerae No. 01, crecerán en
T1N3 únicamente de la familia vibrionaceae crece solamente en T1N3.
Una alternativa consiste en usar agar gelatina (GA) y agar gelatina con 3% de NaCl (GS) para
determinar la tolerancia de los cultivos puros a la sal. Dividir las placas en ocho sectores, inocular
una línea recta en el centro de un sector de las placas, tanto de GA como de GS con cada cultivo
puro. Incubar durante 18 a 24 horas de 35-37ºC. El V. cholerae y el V. mimicus crecerán. El vibrio
spp halofílico crecerá en ambas placas, porque ellos no requieren de sal. Sólo en la placa con GS.
Para leer la reacción de la gelatinasa sostener la placa sobre una superficie negra, observará un
halo opaco alrededor de la colonia de los microorganismos gelatinasa positivos.
c.- Caldo glucosa de Hugh-Leifson.
Inocular colonias individuales en tubos duplicados con caldo de glucosa de Hugh-Leifson.
Recubrir un tubo con una capa de aceite mineral estéril o vapor líquido (50% de petrolato y 50% de
parafina) unos dos centímetros de grueso. Incubar ambos tubos durante 18 a 24 horas de 35-37ºC.
Las especies de Vibrio spp utilizan la glucosa tanto para la oxidación como para la fermentación.
Las especies de pseudomonas, que comúnmente se aíslan del pescado y los mariscos con
métodos de enriquecimiento que se usan para las especies de vibrio, utilizan la glucosa sólo para
la oxidación.
d.- Prueba de oxidasa.
Realizar la prueba de oxidasa con cultivos puros de agar soya tripticasa (2% de NaCl) u otro
medio que no contenga carbohidratos fermentables. Un método fácil consiste en colocar un círculo
de papel filtro en una caja de Petri y humedecerlo con algunas gotas de reactivo de oxidasa. Con
un palito aplicador de madera, un mondadientes o una asa de platino estéril, sacar un poco de
cultivo de la placa y tocar el papel humedecido, si hay microorganismos oxidasa positivos, el papel
se tornará púrpura oscura o azul en pocos segundos. Las especies patógenas de vibrio son
oxidasa positivas (excepto el V. metschnnikovii).
3. Identificación y confirmación de V.chloreae 01, V.cholerae NO 01 y V. mimicus.
a.- Leer los resultados de las prueba bioquímicas de TSI, KIA, AGS, T1N0 y T1N3 o GA y GS, y
caldo glucosa de Hugh-Leifson.
b.- Hacer una tinción de Gram a un cultivo de 18 a 24 horas en caldo o agar.
Nota: Los cultivos puros que se someterán a las demás pruebas serológicas y bioquímicas para
el V. cholerae son sacarosa positivos (amarillo) en agar TCBS y sacarosa negativos (verdes) en el
caso de V. mimicus o son celobiosa negativos (verde-púrpura) en agar mCPC, crecen en caldo
T1N0 o en placas con GA; presentan reacciones características en TSI, KIA y AGS. Son gelatina y
oxidasa positivos, son bacilos curvos gram negativos y producen ácido a partir de la glucosa, tanto
en la oxidación como en la fermentación, en el caldo de cultivo de Hugh-Leifson.
c.- Pruebas bioquímicas.
Las reacciones bioquímicas para identificación de V. cholerae y otras especies bacterianas
afines figuran en el cuadro anexo. La fórmula para todos los medios bioquímicos deberá contener
por lo menos un 2% de NaCl. En vez de medios convencionales se pueden usar tiras AP120E, con
2% de NaCl como diluyente. Para el V. cholerae se puede usar solución salina fisiológica (0,85%
de NaCl) como diluyente.
d.- Prueba serológica de aglutinación.
Usar antisuero de diagnóstico del grupo 01 y del subgrupo Inaba (factores AC) y Ogawa
(Factores AB) para el antígeno del serotipo 01. Usar cultivos de 16 a 24 horas producidos en TSA.
Incluir cultivos positivos y negativos, y los controles salinos para cada antisuero usado. Seguir las
instrucciones del antisuero. Como es posible que los antígenos de los antisueros estén
relacionados entre sí, hay que realizar pruebas bioquímicas para confirmar que el cultivo puro sea
de V. cholerae 01 o No. 01.
Nota: Anticuerpos monoclonales están disponibles, pero el anti-B y anti-C reaccionan
opuestamente con bacterias de otras especies. Uso de anticuerpos policlonales y/o monoclonales
será para el antígeno del complejo 01
1.- Los cultivos que aglutinan con el antisuero del grupo 01, pero no en solución salina
fisiológica simple, son de V. cholerae del grupo 01 si las reacciones bioquímicas confirman que el
cultivo puro es de V. cholerae. Los cultivos que se aglutinan con este antisuero para grupos
específicos pueden ser clasificados según el subtipo con anticuerpos Inaba y Ogawa.
115
Nugget a base de carne de molleja de pollo
- Los cultivos que aglutinan con el suero polivalente (grupo 01) y con los antisueros Inaba y
Ogawa, tienen los 3 factores (A, B y C) y son del serotipo Hikojima.
- Los cultivos que aglutinan con el antisuero polivalente, pero no aglutinan con antisueros Inaba
y Ogawa, no se pueden tipificar con estos antisueros.
2.- Los cultivos de V. cholerae cuya identidad se haya confirmado con métodos bioquímicos y
que no aglutinen con el antisuero del grupo 01 son V. cholerae 0:1. El suero para la clasificación de
V. cholerae No 0:1 según el tipo se puede obtener de R.J. Siebeling.
3.- Los cultivos que se aglutinan en el antisuero del grupo 01 y en solución salina, no se pueden
clasificar según el tipo. Sin embargo, si se usa un medio más rico, como en TSA o agar infusión
cerebro corazón (BHI), se puede eliminar esta autoaglutinación.
e. Características mínimas para la identificación de V. cholerae.
Las características que permiten suponer la presencia de V. cholerae como mínimo son las
siguientes:
1.- Morfología.
Bacilo o bacilo encorvado, esporogénico y gram negativo.
2.- Aspecto en TSI.
Estría ácido, picadura ácido, gas negativo y H2S negativo.
3.- Prueba de Hugh-Leifson.
Fermentación de la glucosa y oxidación positiva.
4.- Citocromo-oxidasa positivo.
5.- Prueba de la dihidrolasa arginina: negativo.
6.- Prueba de la lisinadescarboxilasa: positivo.
7.- Prueba de VP: Positivo El Tor, negativo Clásico y V. mimicus.
8.- Crecimiento a 42ºC: positivo.
9.- Prueba de halofilia con NaCl.
0%: positivo, 3%: positivo, 6%: usualmente negativo. Algunas cepas de V. cholerae NO 01 se
desarrollan a 0% de NaCl.
10.- Fermentación de la sacarosa: positivo para V. cholerae (negativo para V. mimicus).
11.- Prueba de ONPG: positivo.
12.- Fermentación de la arabinosa: negativo.
13.- 0/129 sensitiva: sensible para 10 y 150 µg 0/129
REACCIONES DE ALGUNOS Vibrio EN AGAR KIA, TSI Y AGS.
Microorganismos KIA, TSI, AGS
Estría Picadura Estría Picadura Estría Picadura
V.cholerae K A A(K)* A K a
V.mimicus K A K(A)* A K A
V.parahe-molyticus K A K A K A
V.algino lyticus K A A A K A
V.vulnificus K o A A K(A)* A K A
V.hidrophyla K o A A K o A A K K
V.shigelloides K o A A K o A A N N
* = Raramente
K = Alcalino
A = Acido
a = Ligeramente ácido
N = Neutro
Ninguna de las especies de vibrio enumeradas produce sulfuro de hidrógeno en medios KIA,
TSI o AGS, ni una cantidad perceptible de gas a partir de glucosa en medios KIA, TSI o AGS.
Algunas especies de Aeromonas pueden producir gas a partir de glucosa en estos medios.
116