ACCION DE JASMONATOS EN LA DEFENSA DE PLANTAS A HERBIVOROS

Paola Becerra. I.A. Estudiante Maestra en Ciencias agrarias Universidad nacional de Colombia Mayo, 2011

Contenido
1. 2.

3. 4. 5. 6. 7. 8.

9. 10.

INTRODUCCIN RESPUESTA DE DEFENSA EN PLANTAS: LOCALES Y SISTMICAS OXILIPINAS BIOSINTESIS Y REGULACION DE JASMONATOS CONJUGADOS , MEJA Y AC. JASMONICO RESPUESTAS A HERIDA EFECTOS EN LOS HERBIVOROS INTERACCIONES REGULADORAS ENTRE JA Y OTRAS HORMONAS TRANSDUCCION Y MUTANTES CONCLUSIONES

1. INTRODUCCIN
JASMONATOS Intervienen en mltiples procesos fisiolgicos de las plantas Maduracin de los frutos Formacin de tricomas Tuberizacin en papa Desarrollo floral Senescencia Reguladores de morfognesis de hojas y races en soja Establecimiento de micorrizas arbusculares SEAL DE DEFENSA A HERVIVOROS Y PATOGENOS

INTRODUCCIN
Las plantas estn continuamente expuestas agentes y situaciones de estrs potenciales. Han desarrollado mecanismos de defensa muy eficaces El establecimiento de la enfermedad suele ser ms la excepcin que la norma

INTRODUCCIN
Insectos y patgenos son factores de estrs que afectan en gran medida al rendimiento de los cultivos Este hecho ha determinado que las respuestas de las plantas a la infeccin por patgenos o a la herida causada por insectos o herbvoros hayan sido estudiadas en detalle, as como la funcin reguladora de jasmonatos (JAs) y salicilatos (SAs) en la defensa y desarrollo de las plantas. Estos dos grupos hormonales coregulan junto con etileno (Et), cido abcsico (ABA) y especies reactivas de oxigeno (ROS) las respuestas de defensa de las plantas. Aunque tradicionalmente JAs y SAs han sido considerados como paradigmas de reguladores antagonistas en la activacin de defensa, cada vez hay ms datos que sustentan las interacciones sinergsticas existentes entre ellos

2. RESPUESTA DE DEFENSA EN PLANTAS: LOCALES Y SISTMICAS

Barreras fsicas Pasiva Barreras qumicas Defensa LAR Resistencia Local Adquirida SAR Resistencia Sistmica Adquirida ISR Resistencia Sistmica Inducida RH
Respuesta Hipersensible muerte celular :zonas necrticas FITOALEXINAS Seal o mensaje que media la activacin de reacciones defensivas , en tejidos alejados de la zona afectada ACIDO SALICLICO y PR Cepas no patognicas y heridas causadas por herbvoros JASMONATOS Y ETILENO

Composicin y estructura de la cutcula, tricomas, estomas, pared celular

Activa

La respuesta defensiva de las plantas incluye un sistema de sealizacin, produccin de enzimas implicadas en la biosntesis de compuestos antimicrobianos (lignina, fitoalexinas, etc.) y acumulacin de protenas que frenan la expansin del patgeno (glucanasas, quitinasas).

ACIDO SALICILICO Y SAR

El cido saliclico es la primera molcula a la que se atribuy un papel importante en la intermediacin de la transduccin de la seal patognica. El incremento en los niveles endgenos de SA y de sus conjugados en plantas infectadas, coincide con la activacin de genes que codifican para protenas PR (Relacionadas con Patognesis) y con el establecimiento de la resistencia en la planta La aplicacin exgena de SA activa la expresin de genes PR y hace a la planta ms resistente a cualquier ataque patognico

La ruta del isocorismato es esencialmente cloroplstica y la ruta de la fenilalanina implica a cloroplastos y peroxisomas. El corismato, por accin de la enzima isocorismato sintasa 1 (ICS1), se isomeriza hasta isocorismato, posteriormente pasa a piruvato y SA por la actividad de una piruvato liasa (PLI)

SAR
Un requerimiento esencial para la SAR es que la primera infeccin por un patgeno cause una lesin necrtica. La necrosis inducida puede ser el resultado de la muerte celular programada despus del reconocimiento del patgeno en una interaccin incompatible donde se produjo una respuesta hipersensitiva (RH) o de la muerte celular causada por la accin del patgeno en una interaccin compatible. La secuencia de eventos que permiten la respuesta sistmica comienza localmente en las clulas adyacentes a la respuesta hipersensible se observa el engrosamiento de las paredes celulares por incorporacin de protenas estructurales o lignina y la induccin de la sntesis de fitoalexinas .

3. OXILIPINAS
Grupo de compuestos biolgicamente activos con diversidad estructural que se generan por la accin coordinada de lipasas, lipoxigenasas, y un grupo de citocromos P450 que se especializan en el metabolismo de los hidroperoxi cidos grasos. La oxidacin y degradacin controlada de cidos grasos insaturados de 18 carbonos de longitud de cadena Octadecanoides = oxilipinas. La investigacin sobre oxilipinas se ha centrado principalmente en la biosntesis de la molcula de sealizacin de las plantas de cido jasmnico, y su papel en la regulacin de los procesos de desarrollo y la defensa. La familia de los jasmonatos incluye el acido Jasmonico JA y su metil ester MetilJasmonato (MeJa)

Biosntesis de oxilipinas en respuesta al estrs ambiental y las seales de desarrollo. Biosntesis de diferentes oxilipinas a travs de una va que implica la liberacin mediada por lipasa de cidos grasos poliinsaturados (PUFA) de los lpidos de membrana la adicin de lipoxigenasa-catalizada del oxgeno molecular de PUFAs, y el metabolismo posterior de los cidos grasos resultantes hidroperoxi acidos grasos (AF) por varios sistemas enzimticos.

4. BIOSINTESIS Y REGULACION DE JASMONATOS

El cido jasmnico (JA) es una molcula de naturaleza lipdica (oxilipina) que regula una gran variedad de procesos relacionados con el desarrollo en la planta Juega un papel fundamental en la sealizacin de la respuesta a herida o ataque por Insectos El contenido endgeno de JAs vara dependiendo del tejido y tipo celular, estadio de desarrollo de la planta y de los diferentes estmulos externos

BIOSINTESIS JASMONATOS

Los JAs se sintetizan a partir de la ruta de los octadecanoides Esta ruta implica varios compartimentos subcelulares y consta de un elevado nmero de pasos La biosntesis de JA comienza con la liberacin del cido -linolnico ( LA) desde las membranas del cloroplasto por la accin de fosfolipasas (PL) cloroplsticas. En tomate y tabaco, la PL A2 aumenta su actividad en respuesta a herida o a infeccin vrica respectivamente

BIOSINTESIS DE JASMONATOS
Arabidopsis, la sntesis de JA puede ocurrir tambin a travs de la ruta de los hexadecanoides, comenzando con cidos grasos hexadecatrienoicos (16C) que aumenta su nivel en respuesta a herida Las 13-lipooxigenasas (13-LOX) cloroplasticas producen la oxidacion del LA (cido linolnico) generando el acido 13-(S)-hidroperoxido linolenico

BIOSINTESIS JASMONATOS

BIOSINTESIS DE JASMONATOS
El cis-(+)-OPDA, en forma libre o esterificada, es liberado desde el cloroplasto y transferido al peroxisoma a travs del transportador de tipo ABC (ATP-binding-cassette) dependiente de ATP El mutante cts1 presenta una reduccin parcial de JA en respuesta a la herida, sugiriendo un transporte adicional del cis-(+)-OPDA o su ester con coenzima A (CoA) por transporte pasivo Dentro del peroxisoma, se produce la reduccin del cis-(+)OPDA al correspondiente cido 3-oxo-2(2(Z)-pentenil)ciclopentano-1-octanoico (OPC:8) por la enzima OPDA reductasa (OPR). Se han caracterizado enzimas OPR en varias especies vegetales

BIOSINTESIS DE JASMONATOS
Aunque en plantas existen muchas familias de LOX (lipooxigenasa) que dan lugar a una gran variedad de oxilipinas, en Arabidopsis, LOX2 es la unica enzima descrita cuya deficiencia produce una menor acumulacion de JA en respuesta a la herida El gen AOS (xido de aleno sintasa) es de copia nica en Arabidopsis y representa un paso limitante en la biosntesis de JA. La deficiencia en este gen disminuye la acumulacin de JA en respuesta a la herida y su expresin aumenta en respuesta a JA y herida en muchas especies de plantas

5. CONJUGADOS , MEJA Y AC. JASMONICO

Una vez sintetizado, el JA es liberado al citoplasma donde puede ser modificado por glicosilacin, metilacin y aminoacilacin. Muchos de los compuestos generados presentan actividad biolgica Existen evidencias de que el metil jasmonato (MeJA), el conjugado del JA con isoleucina y el precursor de JA, OPDA, son biolgicamente activos. Tambin son activos otros productos derivados de los cidos grasos.

CONJUGADOS , MEJA Y AC. JASMONICO

MeJA: molcula de alta volatilidad, presenta la actividad biolgica del cido libre y puede difundir a partes distales de la planta a travs del floema y xilema o por transporte areo cis-jasmonato (cis-jasm) es un producto voltil implicado en defensa cido tubernico o 12-hidroxijasmonato (12-OH-JA) se ha relacionado recientemente con la supresin de las respuestas dependientes de JA Conjugacin del JA con aminocidos, principalmente isoleucina (Ile), por la enzima JA-amido sintetasa JASMONATE RESISTANT 1 (JAR1) es activa y da lugar a derivados con actividad similar al JA o MeJA, y se relaciona tambin con la defensa de las plantas

6. RESPUESTAS A HERIDA
Desde los aos 90 se conocen la funciones reguladoras de los JAs en las respuestas a herida mecnica o causada por insectos o herbvoros y frente a patgenos. Despus de producirse una herida en la planta, se activa localmente la biosntesis de prosistemina que a su vez estimula la sntesis de un pptido de 18 aminocidos, la sistemina. La acumulacin de sistemina activa la sntesis de enzimas implicados en la ruta biosinttica del JA, tales como la AOC (Allene oxide cyclase), producindose un aumento local en los niveles de JA

RESPUESTAS A HERIDA
La herida causada por insectos origina una cascada de sealizacin molecular Produccin de compuestos implicados en la disuasin del insecto  Reparacin del dao  Activacin de resistencia


Este hecho implica la existencia de complejas redes de sealizacin molecular que son capaces de generar, transportar e interpretar las seales producidas por la interaccin planta-insecto

RESPUESTAS A HERIDA
La ruta de sealizacin de JA tiene una funcin esencial en la activacin de las respuestas de defensa frente a herida mecnica o causada por insectos o herbvoros Se da la percepcin de seales primarias en los tejidos daados, la activacin de canales inicos en la membrana plasmtica y la fosforilacin reversible de protenas. Como consecuencia, se originan respuestas de tipo fisiolgico, cambios en el metabolismo secundario y se genera una segunda ola de seales dirigidas a activar y propagar las respuestas de defensa La respuesta a herida mediada por JA desencadena una respuesta defensiva por parte de la planta que puede ser indirecta (emisiones de compuestos voltiles) y directa (acumulacin de protenas de defensa y compuestos de bajo peso molecular)

RESPUESTAS A HERIDA
Interacciones entre las dos principales cascadas de seales. PR-1, protenas relacionadas a la patognesis-tipo 1. PIN, gen pin. (inhibidores de proteasas )

1. Las hojas heridos de tomate sintetizan prosistemina (200aa) 2. Prosystemin procesada proteolticamente para producir sistemina (18aa), la primera (y nica hasta ahora) hormona polipeptdica descubierto en las Plantas 3. Sistemina es liberada de las clulas daadas en el apoplasto. 4. Sistemina se transporta fuera de la hoja herida va floema. 5. En las clulas diana, sistemina puede unirse a un sitio en la membrana plasmtica e iniciar la sntesis de cido jasmnico que tiene efectos de gran alcance. 6. cido jasmnico finalmente activa la expresin de los genes que codifican para inhibidores de proteasa (PIN)

SISTEMINA
La sistemina se deriva de la regin C-terminal de una protena precursora de 200 aminocidos llamada prosistemina. Polipptido de 18 aminocidos del tomate, induce la expresin sistmica de cerca de 20 genes de defensa en respuesta a herbivora, metil jasmonato (MeJA) y dao mecnico. La sistemina activa la expresin de los genes PI que codifican inhibidores de proteinasas (PI)

RESPUESTAS A HERIDA
Adems de la sistemina, otros compuestos y el propio JA, por un mecanismo de retroalimentacin positiva, aumentan la sntesis de JA y la expresin de genes dependientes de esta hormona en respuesta a herida Entre estos compuestos, los oligogalacturnidos (OGAs) derivados de las paredes celulares, el perxido de hidrgeno (H2O2) y el Ca2+ actan conjuntamente activando la expresin de genes PI (Inhibidores de proteinasas) (Estudios en Solanaceas) Por el contrario, el SA y el xido ntrico (NO) reprimen la expresin de estos genes en respuesta a herida

RESPUESTAS A HERIDA

Arabidopsis
reprimida a nivel local por la accin de Et

Solanaceas
ABA, Et, H2O2 y OGAs Inducen la sntesis de JA y la expresin de genes dependientes de JA

permanece totalmente activa a nivel sistmico

La regulacin de la va dependiente de JA en respuesta a la herida es diferente en Arabidopsis y en solanceas.

Solanum lycopersicum
La herida activa a nivel local el procesamiento de la sistemina desde su precursor (prosistemina) que se localiza en clulas del parnquima floemtico Posteriormente, se une al receptor SR160 localizado en la membrana plasmtica. La percepcin de la sistemina en la membrana activa la ruta de los octadecanoides por una sealizacin que implica la despolarizacin de la membrana, activacin de MAP quinasas y aumento en los niveles de Ca2+ citoslico El LA cido linolnico es liberado de las membranas cloroplsticas junto con un aumento de la expresin de los genes de biosntesis dando lugar a la produccin de JA en la zona daada, principalmente asociada a tejido vascular

Arabidopsis sp
No est presente la sistemina Existencia de un pptido similar que interviene en la sealizacin por herida y forma parte de la respuesta inmune innata (AtPep1-6) Los primeros pasos de la herida en Arabidopsis tras la percepcin de las seales primarias, implican la liberacin de OGAs desde las paredes celulares activando una ruta de sealizacin que no est mediada por JA y que es responsable de la activacin gnica preferentemente en las zonas prximas a la herida

En Lycopersicum esculentum Mill. sistemina el principio se transcribe como una prohormona de 200 residuos de aminocidos. En las hojas de Tabaco Nicotiana tabacum L. identificado un propptido de 165 residuos con dos dominios de 18 residuos de cada uno (Sistema I y Sistema II) que mantienen la misma funcin que sistemina en tomate

7. EFECTOS EN LOS HERBVOROS

El JA acta como una seal sistmica que activa la expresin de genes que codifican inhibidores de proteasas (PINs), as como la acumulacin de compuestos en las hojas, teniendo ambos efectos negativos en el desarrollo de herbvoros. Como consecuencia, la planta queda inmunizada frente a subsiguientes ataques de insectos. PINs =PI Entre las protenas de defensa que se acumulan en tomate se han encontrado PINs que degradan enzimas digestivos en el tracto intestinal de insectos. Adems de los PINs, en tomate se inducen por ataque de insectos otras protenas tales como aminopeptidasas de leucina, deaminasas de treonina (TD) y arginasas), que poseen tambin dicha actividad proteoltica

7. EFECTOS EN LOS HERBVOROS

Al bloquear la sntesis de proteasas intestinales (enzimas que rompen los enlaces peptdicos de las protenas) , frenan el crecimiento y provocan la muerte por ayuno. Los inhibidores de proteasas bloquean las proteasas de serina, cistena y aspartato, as como a las metalocarboxipeptidasas Algunos insectos recurren a estrategias diversas para eludir la defensa vegetal: incrementan su actividad proteoltica, inducen enzimas proteolticas insensibles a los inhibidores de proteasas o expresan proteasas que degradan especficamente a los inhibidores de proteasas producidos por las plantas y para las cuales no tiene inhibidores. Como resultado de la coevolucin, los insectos herbvoros se han adaptado a las defensas de las plantas. Muchos insectos se hallan dotados para detoxificar metabolitos secundarios; para ello, se sirven de monooxigenasas citocromo P450 y glutatin S-transferasas. Otros insectos secuestran las defensas qumicas de las plantas

8. INTERACCIONES REGULADORAS ENTRE JA Y OTRAS HORMONAS

En este sentido, se han descrito interacciones tanto positivas como negativas en complejas redes de sealizacin activadas por JA, Et, SA, ABA y NO (xido ntrico) conducentes a respuestas de defensa coordinadas
El SA y el xido ntrico (NO) reprimen la expresin de estos genes en respuesta a herida

INTERACCIONES REGULADORAS ENTRE JA Y OTRAS HORMONAS

ISR (resistencia sistmica inducida) est regulado por JA y ET. Aunque no depende del SA, s que requiere la accin de NPR1***, implicado en la activacin de los genes PR caractersticos de la ruta del SA Se ha descrito que la acumulacin de ABA y la percepcin de esta hormona es necesaria para la activacin de la expresin de los genes PI en respuesta a herida, siendo la acumulacin de ABA previa a la de JA

INTERACCIONES REGULADORAS ENTRE JA Y OTRAS HORMONAS

Enfermedades, daos por insectos, y las respuestas del sistema de secado al estrs son, respectivamente, cido (SA), cido jasmnico (JA), el cido abscsico (ABA) funcionar, pero estas seales son mutuamente control inhibitorio***. Las plantas son necesarias para fortalecer la seal de acuerdo a las circunstancias del momento, para dar cabida a la tensin con eficacia.

INTERACCIONES REGULADORAS ENTRE JA Y OTRAS HORMONAS

La emisin de etileno por tejidos vegetales daados permite la activacin sistmica de genes defensivos en tejidos sanos distantes de la zona daada o de plantas alejadas que podran estar expuestas al mismo agente invasor o herbvoro. Los niveles elevados de salicilato inhiben la sntesis de cido jasmnico y la capacidad de la planta para responder a las seales provenientes de una herida***. Pero el cido jasmnico bloquea la capacidad del cido saliclico para producir protenas inducidas por patgenos.

9. TRANSDUCCION Y MUTANTES
Los mutantes en la ruta de biosntesis y de sealizacin del JA, han sido una herramienta muy valiosa para determinar las propiedades sealizadotas del JA y de sus compuestos relacionados, en Arabidopsis thaliana Los anlisis realizados con el mutante opr3, que no acumula JA pero si su precursor, el OPDA (cido 12-oxo-fitodienoico ), revelaron que la expresin de ciertos genes de respuesta a herida dependa exclusivamente de OPDA Entre los estudios con mutantes de Arabidopsis afectados en la biosntesis, en la percepcin o en el modo de accin del JA, cabra destacar el hallazgo de coi1 (CORONATINE INSENSITIVE 1 (COI1) El mutante coi1 es totalmente insensible a JA y jar1(JASMONATE RESISTANT 1 (JAR1) ) COI1 codifica una protena cuya secuencia parece indicar que podra funcionar promoviendo la degradacin de un regulador negativo de la transduccin de la seal del JA

JAZ: JASMONATE ZIM-DOMAIN

familia de represores transcripcionales

MYC2: Factor de transcripcin COI1: CORONATINE INSENSITIVE

1 (COI1)

JAR1 (JASMONATE RESISTANT 1 SCF (SKP-culin-F-box) complejo

ubiquitin E3 ligasa de tipo SKPculina-F-box (SCF)

TRANSDUCCION Y MUTANTES
la sealizacin de JA entre COI1 y los genes de respuesta, interviene una familia de represores transcripcionales llamados JASMONATE ZIM-DOMAIN (JAZ). Con niveles bajos de JA, la protenas JAZ reprimen la expresin de los genes de respuesta temprana a JA por interaccin directa con los FT (Factor de transcripcin). Las protenas JAZ parecen estar implicadas en la defensa contra insectos y activan su expresin en respuesta a JA y herida Niveles altos de JA promueven la unin de las protenas JAZ con el complejo SCFCOI1, siendo ubiquitinadas para degradacin por el complejo proteosoma 26 S y permitiendo por tanto, la derepresin de los genes de respuesta a JAs *

TRANSDUCCION Y MUTANTES
El nico FT descrito hasta ahora que interacciona con la familia JAZ, concretamente con JAZ3 y JAZ1, es MYC2. MYC2 es un FT de tipo bHLH (basic helix-loop-helix) ampliamente caracterizado en la sealizacin por JA El mutante jasmonate insensitive1(jai1)/jin1 deficiente en MYC2, presenta un fenotipo de insensibilidad a JA ms dbil que COI1 ya que MYC2 no interviene en todas las respuestas dependientes de JA MYC2 tambin regula las respuestas a sequa dependientes de ABA

TRANSDUCCION Y MUTANTES
En las respuestas frente a patgenos necrotrofos y herida, ERF1 (ETHYLENE RESPONSE FACTOR ) y MYC2 actan como integrantes de la interaccin entre ambas hormonas, regulando de forma diferencial y opuesta la activacin de genes pertenecientes a las dos ramas de sealizacin mediada por JA. De esta forma, MYC2 activa la expresin de genes de respuesta a herida pero previene la induccin de genes de respuesta a patgenos necrotrofos y, por el contrario, ERF1 regula en modo opuesto a estos dos grupos de genes El mutante mpk4 (MAP quinasa- MAP: Mitogen-activated protein )expresa constitutivamente la respuesta SAR, presenta una mayor resistencia a patgenos biotrofos virulentos y no puede activar la defensa mediada por JA y Et y por tanto, presenta una mayor susceptibilidad a patgenos necrotrofos

CIDO GENTSICO (GA)

La comparacin entre los extractos fenlicos de plantas control y plantas infectadas puso en evidencia la gran acumulacin de un compuesto, diferente al SA, identificado por 1HNMR (Proton Nuclear Magnetice Resonance) como cido gentsico (GA). Todos estos resultados sugeran que el GA podra actuar como una molcula sealizadora, complementaria al SA, en la activacin de las defensas en tomate. Zacars (2008) observo que el GA tambin se induce como consecuencia de infecciones no necrotizantes, en otras especies vegetales, como Gynura aurantiaca y Cucumis sativus, aunque, a diferencia de lo que ocurre en tomate, en estos casos, la acumulacin de GA va acompaada de una considerable acumulacin de SA El hecho de que el GA induzca protenas defensivas distintas del SA, junto con su poder antifngico muy eficaz en plantas, sugiere que el GA podra actuar como una seal adicional al SA, en la activacin de las defensas, en infecciones no necrotizantes.

10. CONCLUSIONES
JA Juega un papel fundamental en la sealizacin de la respuesta a herida o ataque por Insectos Existen evidencias de que el metil jasmonato (MeJA), el conjugado del JA con isoleucina y el precursor de JA, OPDA, son biolgicamente activos. La acumulacin de sistemina es fundamental en la respuesta a herida y por tanto en el aumento en los niveles de JA genes PI que codifican inhibidores de proteinasas (PI) son la defensa contra herbivoros

10. CONCLUSIONES
El JA acta como una seal sistmica que activa la expresin de genes que codifican inhibidores de proteasas (PINs = PI) Por el contrario, el SA y el xido ntrico (NO) reprimen la expresin de genes en respuesta a herida La acumulacin de ABA y la percepcin de esta hormona es necesaria para la activacin de la expresin de los genes PI en respuesta a herida, siendo la acumulacin de ABA previa a la de JA La emisin de etileno permite la activacin sistmica de genes defensivos en tejidos sanos distantes de la zona daada. ISR: Resistencia Sistmica Inducida. Cepas no patognicas y heridas causadas por herbvoros JASMONATOS Y ETILENO SAR: Resistencia Sistmica Adquirida. Seal o mensaje que media la activacin de reacciones defensivas de patgenos. ACIDO SALICLICO y PR (Protenas Relacionadas con patognesis)

GRACIAS

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