Lab 3 Micrometría

UNIVERSIDAD DE SUCRE
FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD

PROGRAMA MEDICINA
BIOESTRUCTURAS I

LABORATORIO 3. MICROMETRA: MEDICION DE OBJETOS VISTOS EN EL
MICROSCOPIO.

INTRODUCCIN

Mediante el anlisis de las caractersticas morfolgicas y morfomtricas de las entidades microscpicas se
han determinado los diferentes niveles de organizacin de la materia viva, se ha caracterizado a las
principales lneas celulares y se ha logrado estudiar y describir los diferentes organelos que conforman las
clulas. Inicialmente, estas descripciones fueron realizadas al comparar caractersticas de tamao y forma,
pero posteriormente se hicieron evaluaciones de sus propiedades fisiolgicas. Estos descubrimientos no
hubiesen sido posibles sin la ayuda de herramientas pticas que permitirn superar los lmites de la visin
humana hasta alcanzar el grado de magnificacin requerido, por lo que se destaca el importante papel que
ha tenido el microscopio en el desarrollo de las ciencias biomdicas.
Gracias a este instrumento, la observacin de las clulas y los microorganismos han permitido acumular
mucha informacin bsica en histologa, parasitologa y microbiologa, que ha servido como referencia en
medicina para diferenciar y diagnosticar grupos de clulas anormales o entidades parasitarias.
Adicionalmente, estos hallazgos han permitido determinar las vas de entrada e interaccin de los
microorganismos con el hospedero y han facilitado el diseo de nuevas herramientas de manipulacin,
exploracin e intervencin en microciruga.
Con base en lo anterior, es importante que el Estudiante de Medicina adquiera los conocimientos bsicos y
las habilidades empleadas rutinariamente en el proceso de anlisis morfomtrico de entidades
microscpicas. En este sentido, la presente prctica representa un ejercicio acadmico que le permitir
relacionarse con los instrumentos empleados en microscopa para realizar micro mediciones y sus
potenciales aplicaciones.

OBJETIVOS

1. Entender algunos conceptos bsicos tales como: poder de resolucin, poder de aumento, campo
visual con relacin al aumento de los oculares.
2. Adquirir destreza manual y matemtica para calcular la longitud de algunas estructuras.
3. Analizar el sentido o posicin de la imagen observada en el microscopio respecto a la posicin
del objeto que se observa.
4. Demostrar que el rea de campo visual vara de acuerdo al aumento del objetivo que se est
utilizando.

MATERIALES
Microscopios compuestos
Porta y cubreobjetos *
Papel impreso con letras simtricas y asimtricas (ej. A, R, F, M y O) *
Papel milimetrado *
Tijeras *
Extendidos de sangre perifrica.

Los materiales sealados con asterisco deben ser trados por el estudiante *.

PROCEDIMIENTO

1. Anlisis de la imagen que se forma al observar en un microscopio.

- Del papel impreso con letras seleccione por ejemplo la letra A ms pequea que encuentre,
colquela en un portaobjetos limpio y agrguele una gota de agua, esto se llama montaje hmedo.
Espere a que el papel se moje totalmente.

- Mantenga el cubre-objeto en un ngulo de 45 respecto al porta-objeto. Djelo caer suavemente
sobre la muestra de tal manera que el agua se distribuya uniformemente. Una ligera presin sobre
el cubre-objeto eliminar las burbujas de aire que pudieran haber quedado (ver figura 1).

Figura 1. Montaje hmedo de letra.

- Coloque la lmina preparada sobre la platina para que la letra quede en posicin de lectura y
sujtela con las pinzas de ajuste. Mueva el porta-objeto de tal modo que la letra quede en el centro
del orificio de la platina.

- Enfoque con menor aumento. Teniendo en cuenta el sentido en que Usted coloc la letra para ser
observada, describa como se ve la imagen a travs del microscopio. Haga un esquema de lo
observado.

- Mueva hacia delante el porta-objeto, Que parece sucederle a la letra?

- Mueva el porta-objeto hacia la derecha. En qu direccin se desplaza la imagen?

Qu puede deducir acerca de la posicin relativa y del movimiento de los objetos cuando stos se ven
a travs del microscopio compuesto?

2. Relacin entre el poder de aumento y tamao del dimetro del campo visual de un
Microscopio.

- Recorte un pedazo de papel milimetrado de 1cm
2
y colquelo sobre un porta-objeto. Agregue una
gota de agua y luego ubique el cubre-objeto.

- Enfoque con el objetivo de menor aumento (4X) y examine las marcas milimtricas, con base en
stas determine el dimetro del campo visual. (Ver Figura 2).

Figura 2. Dimetro del campo visual

Cunto mide el dimetro del campo visual observado con menor aumento?

a. En milmetros --------------------
b. En micras--------------------------
c. En nanmetros-------------------
d. En ngstrom----------------------

- Considere que el rea de la superficie del campo visual es igual a r
2
, donde = 3.1416 y r = 1/2d.
Calcule el rea de esta superficie para el objetivo de menor aumento.

- Enfoque con el objetivo de aumento intermedio (10X) y repita el procedimiento anterior y calcule
el dimetro de la superficie del campo visual. Cmo vara el rea del campo visual cuando se
pasa de un objetivo de menor aumento a enfocar con otro de aumento mayor?

Teniendo en cuenta que el dimetro del campo visual es inversamente proporcional al poder de
aumento utilizado, se puede determinar el dimetro correspondiente a un objetivo de mayor aumento
mediante la frmula:

1

1
=
2

2
donde,

A1= Poder de amplificacin de menor aumento.
A2= Poder de amplificacin de mayor aumento.
D1= Dimetro del campo visual de menor aumento.
D2= Dimetro del campo visual de mayor aumento.

- Calcule el dimetro y el rea del campo visual para el objetivo de mayor aumento de su
microscopio. Compare este valor con los anteriores y saque sus conclusiones.

NOTA Mediciones Micromtricas: en biologa celular, parasitologa, microbiologa y otras reas del
conocimiento, las estimaciones del tamao de los microorganismos resultan fundamentales. Para este
propsito, se han diseado microreglillas de objeto y de ocular que permiten estimar la longitud
mediantes equivalencias entre sus divisiones, esta forma de mediciones requiere una calibracin previa
del la reglilla que se coloca en el ocular y slo se hace una sola vez.

3. Aplicacin prctica de la micrometra en la estimacin del tamao de glbulos rojos en
extendidos de sangre perifrica.

- Ubique la placa del extendido de sangre perifrica en la platina y ajuste la imagen con los mando
de enfoque hasta que logren observar las clulas sanguneas.

- Utilice los mandos de desplazamiento para localizar una regin del extendido donde los glbulos
rojos hayan quedado lo suficientemente separados, tome nota de esta ubicacin a travs de las
escalas de localizacin que se encuentran en el eje X e Y de la platina.

- Estime el dimetro y rea de los eritrocitos observados, a travs de la metodologa antes descrita.
Repita el procedimiento anterior con cinco clulas y aumentos diferentes, para construir una tabla
con esta informacin. Compare sus estimaciones con las que se podran realizar si se aplica la
ecuacin antes mencionada. Existe alguna diferencia estadstica entre las mediciones estimadas
y las calculadas?

Cuestionario

1. Si se utiliza un microscopio con un ocular 10X y objetivo de 20X para observar un objeto
Cuntas veces se aumenta la imagen de ste, del mismo modo calcule el valor s se observa con
un ocular de 6X y un objetivo de 40X?

2. Exprese en , m, el equivalente a 0.025 mm.

3. El dimetro del campo visual de un microscopio de 1500 cuando se observa con un ocular de
10x y un objetivo de 10X. Cul ser el dimetro del campo visual s se observa con un objetivo
de 43x y el mismo ocular?

4. Consulte y describa paso las etapas que tienen lugar en la parte ptica del microscopio durante
el proceso de formacin de la imagen, y que tipos de lentes intervienen en ella?

5. Cmo vara el dimetro del campo visual respecto al poder de aumento del objetivo?, explique.

6. Consulte diferentes aplicaciones prcticas de la micrometra a las ciencias biomdicas.

7. Considere que la imagen del cabello que aparece a continuacin fue tomada usando el ocular de
10 y objetivo de 100x. Utilice las proporciones calculadas en sus experimentos, para determinar
el dimetro aproximado del cabello, y la longitud promedio del largo y ancho de las escamas.

8. Suponga que ha visitado una zona geogrfica donde la malaria es endmica y que presenta un
cuadro febril compatible con esta enfermedad. El mdico formula un anlisis de gota gruesa para
confirmar la presencia del parsito causante de esta enfermedad, pero para su sorpresa durante
un anlisis no se detect la presencia del patgeno y posteriormente mediante tcnicas
inmunolgicas se determin que padeca dengue.

En el proceso de bsqueda del parsito se observ que un nmero importante de glbulos rojos
presentaban lo que parecera ser una deformacin morfolgica que le confera un aspecto
alargado y parecido a una media luna. Utilice las herramientas que usted ha aprendido en
micrometra para responder lo siguiente: Cmo procedera usted para confirmar que la
morfologa y morfomtria de estas clulas es realmente anormal?, Cul es el tamao o dimetro
normal de esta lnea celular? Es posible que se pueda tratar de una anemia de clulas
falciformes?, en que consiste esta enfermedad, cual es la causa y cmo se diagnostica?

Tomado y modificado del manual del centro de Laboratorios Universidad de Sucre
Erwin Camacho B.
Bilogo con nfasis en Biotecnologa.
Investigaciones Biomdicas.
Universidad de Sucre.
Colombia.

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