Anexo A: Mtodos de extraccin de RNA

Anexo A.1: Extraccin de RNA total con Trizol

(Invitrogen)
Anexo A.1.1 Extraccin:
1. Pulverizar 100mg de material vegetal con Nitrgeno lquido.
2. Homogenizar el material vegetal con 1ml de Trizol (Invitrogen) e incubar a
temperatura ambiente durante 5min.
3. Centrifugar durante 15min a 12000rpm a 4C y transferir la fase acuosa a un tubo
de reaccin nuevo.
4. Adicionar 0.2ml de cloroformo, agitar vigorosamente a incubar a temperatura
ambiente durante 3min.
5. Repetir paso 3.

Anexo A.1.2 Precipitacin de RNA:

1. Adicionar 0.5ml de isopropanol e incubar overnight a 4C.
2. Centrifugar durante 15min a 12000rpm a 4C y eliminar el sobrenadante.
3. Adicionar 1ml de etanol absoluto, agitar vigorosamente y centrifugar durante 5min
a 7500rpm a 4C, eliminar el sobrenadante.
4. Adicionar 1ml de etanol 70%, agitar vigorosamente y centrifugar durante 5min a
7500rpm a 4C, eliminar el sobrenadante.

120

Deteccin y cuantificacin del Potato yellow vein virus (PYVV) en aislamientos

de diferentes rganos de Solanum tuberosum Grupo Phureja

5. Dejar secar el pellet de RNA y resuspender en 30l de agua DEPC.

6. Incubar durante 10min a 65C.
7. Almacenar los extractos a -20C hasta su procesamiento.

Anexo A.2: Extraccin de RNA total con CTAB (Lpez et

al., 2006)
Anexo A.2.1 Composicin de buffers:
-

Buffer de maceracin CTAB (Esterilizar por autoclavado)

2% CTAB
100mMTris-HCl, pH 8.0
20mM EDTA, pH 8.0
1.4M NaCl
1% Na2SO3
2% PVP-40

Buffer TE-SDS (Esterilizar por autoclavado)

10mM Tris-HCl, pH 8.0
1mM EDTA, pH 8.0
1% (p/v) SDS

Anexo A.2.2 Extraccin:

1.

Pulverizar 150mg de material vegetal con Nitrgeno lquido.

2. Homogenizar el material vegetal con 1.5ml de buffer de maceracin CTAB e

incubar durante 10min a 65C.
3. Adicionar un volumen igual de cloroformo:isoamilalcohol (24:1 v/v) y centrifugar
durante 15min a 12000rpm a 4C. Transferir la fase acuosa a un tubo de reaccin
nuevo.

Anexo A. Mtodos de extraccin de RNA

121

Anexo A.2.3 Precipitacin:

1. Adicionar un volumen igual de LiCl 4M e incubar overnight a 4C.
2. Centrifugar durante 30min a 12000rpm a 4C y eliminar el sobrenadante.
3. Resuspender el pellet en 1ml de buffer TE-SDS.
4. Adicionar 100l NaCl 5M y 300l de isopropanol e incubar durante 30min a -20C.
5. Centrifugar durante 10min a 12000rpm a 4C y eliminar el sobrenadante.
6. Lavar el pellet fue lavado con 1ml de etanol absoluto, agitar vigorosamente,
centrifugar durante 5min a 7500rpm a 4C y eliminar el sobrenadante.
7. Adicionar 1ml de etanol 70%, agitar vigorosamente, centrifugar durante 5min a
7500rpm a 4C y eliminar el sobrenadante.
8. Dejar secar el pellet y resuspender con 30l de agua tratada con DEPC.
9. Almacenar los extractos a -20C hasta su procesamiento.

Anexo A.3: Extraccin de dsRNA con

fenol:cloroformo/Sephadex (Guzmn et al., 2006)
Anexo A.3.1 Composicin de buffers:
-

Buffer de extraccin (Esterilizar por autoclavado)

0.1M Tris-HCl, pH 8.0

2% SDS
2mM EDTA, pH 8.0
-

Buffer TE 1X (Se autoclava)

10mM Tris-HCl pH 8.0
1mM EDTA pH 8.0

Sephadex (Se esteriliza por autoclavado y se lava dos veces dejando decantar el
sephadex, removiendo la fase acuosa y reemplazndola por el mismo volumen
con buffer TE 1X. Se almacena a 4C hasta su uso).

122

Deteccin y cuantificacin del Potato yellow vein virus (PYVV) en aislamientos

de diferentes rganos de Solanum tuberosum Grupo Phureja
5% Sephadex G-50
Preparacin en Buffer TE 1X

Anexo A.3.2 Extraccin:

1. Se pulveriz 100mg de material vegetal.
2. Se homogeniz el material vegetal con 500l de buffer de extraccin, 500l de
fenol (saturado en Tris pH 8.0) y 500l de cloroformo, se agit fuertemente y se
incub durante 5min a 70C, llevar al hielo.
3. Se centrifug durante 5min a 12000rpm a 4C y se transfiri la fase acuosa a un
tubo de reaccin nuevo.

Anexo A.3.3 Purificacin con columnas de Sephadex:

1. Preparar las columnas plsticas colocando un tapn de algodn estril en la
punta.
2. Llenar las columnas con Sephadex teniendo cuidado de no hacer burbujas y se
centrifuga durante 4min a 900rpm (Este proceso se repite hasta que la columna
alcanza un volumen de 1ml).
3. Lavar las columnas dos veces con 150l de buffer TE 1X centrifugando entre
cada lavado (durante 4min a 900rpm).
4. Colocar tubos autosostenibles de 1.5ml (tubo colector) en la base de las
columnas de sephadex, y estos dentro de tubos falcon de 15ml.
5. Colocar 150l del sobrenadante recuperado en el ltimo paso de la fase de
extraccin y centrifugar durante 4min a 900rpm.
6. Descartar las columnas y recuperar los tubos colectores con el extracto de dsRNA
purificado.
7. Almacenar a -20C hasta su procesamiento.

Anexo A. Mtodos de extraccin de RNA

123

Anexo A.4: SV Total RNA Isolation System (Promega)

1. Adicionar 350l de buffer de dilucin de RNA, mezclar por inversin 3 - 4 veces .
Incubar en un bao mara a 70C durante 3min.
2. Centrifugar durante durante 10min a 12000rpm y transferir el sobrenadante a un
tubo nuevo.
3. Adicionar 200l de etanol al 95% y mezclar por pipeteo 3-4 veces. Transferir la
mezcla a una columna y se centrifugo a 12000rpm durante 1min.
4. Se descarta el fluido que pasa a travs de la columna (que queda en el tubo
colector) y adicionar 600l de Solucin de lavado de RNA. Centrifugar a
12000rpm durante 1min.
5. Descatar el fluido que pasa a travs de la columna (que queda en el tubo
colector); y adicionar directamente sobre la membrana una mezcla de 40l buffer
yellow core, 5l 0.09M de MnCl2 y 5l de DNasa (tenga cuidado de homogenizar
esta mezcla cuidadosamente, no hacer vrtex), hay que tener cuidado de que
esta mezcla haga contacto con toda la membrana.
6. Incubar durante 15min a 20-25C. Adicionar 200l de Solucin de parado de
DNasa a la membrana y centrifugar 12000rpm durante 1min.
7. Adicionar 600l de solucin de lavado de RNA y centrifugar a 12000rpm durante
1min.
8. Adicionar 250l de solucin de lavado de RNA y centrifugar a 12000rpm durante
2min.
9. Cambiar el tubo colector de 1.5ml y adicionar 100l de agua libre de nucleasas.
Centrifugar durante 1min a 12000rpm.
Almacenar a -20C hasta su procesamiento.

Anexo B: Cuantificacin de RNA

Anexo B.1: Cuantificacin de RNA utilizando el kit QuantiTTM RiboGreen Assay (Invitrogen)
1. Preparar la solucin de trabajo diluyendo el reactivo Quant-itTTM 1:200 en el buffer
Quant-iTTM. Tener en cuenta que se requieren 200l de solucin de trabajo por
cada muestra y para cada estndar.
2. Preparar los tubos de acuerdo a la siguiente tabla.
Tabla Anexo B - 1. Reaccin para la cuantificacin de RNA utilizando el kit Quant-iT
Assay
Estndar
Muestra
Volumen de solucin de trabajo
190l
180-199l
Volumen de estndar
10l
Volumen de muestra
1-20l
Volumen de reaccin
200l
200l

TM

RiboGreen

3. Agitar vigorosamente por vrtex durante 2-3 segundos. Incubar durante 2min a
temperatura ambiente.
4. Hacer las lecturas en el fluormetro QubitTM.

Anexo B.2: Cuantificacin de RNA por

espectrofotometra a 260nm
1. Encender 20min la lmpara de UV en el espectrofotmetro para su calentamiento.
2. Usar agua tratada con DEPC en una celda de cuarzo (no usar celda plstico
porque no transmite eficientemente la luz ultravioleta) y utilizarla como blanco de
referencia.

126

Deteccin y cuantificacin del Potato yellow vein virus (PYVV) en aislamientos

de diferentes rganos de Solanum tuberosum Grupo Phureja

3. A 990l de agua tratada con DEPC 10l de extracto de RNA, mezclar y transferir
a la celda de cuarzo.
4. Leer la absorbancia a 260nm y a 280nm.
5. Calcular la concentracin de RNA teniendo en cuenta que 1OD260: 40g/ml
Calcular la relacin 260/280, los extractos de buena calidad tendrn una relacin superior
a 1.6, hay que tener en cuenta que un valor igual a 2 indica que el extracto de RNA es
puro..

Anexo C: Estimacin de la integridad de RNA

Anexo C.1 Gel de agarosa denaturante
Anexo C.1.1: Composicin de buffers
-

Buffer de carga adicionado con folmaldehido

95l de buffer de carga
5l de formaldehido al 37%

Mezcla para denaturar muestras de RNA

1l de extracto de RNA
3l de buffer de carga adicionado con folmaldehido
1l de agua destilada estril

Anexo C.1.2: Preparacin del gel de agarosa denaturante

1. Adicionar 1g de agarosa a 85ml de agua destilada estril y disolver la agarosa en
un microondas.
2. Adicionar 10ml de buffer MOPS 10X y una vez que se haya enfriado un poco
adicionar 4.5ml de solucin de formaldehido 37% y 0.5l de SYBRSafe, mezclar
bien y poner a gelificar en un molde para cmara electrofortica.

Anexo C.1.3: Denaturacin de RNA

1. En un tubo de reaccin prepare la mezcla descrita en la seccin de preparacin
de buffers y mezcle.
2. Calentar a 70C durante 10min y transferir rpidamente a hielo.

128

Deteccin y cuantificacin del Potato yellow vein virus (PYVV) en aislamientos

de diferentes rganos de Solanum tuberosum Grupo Phureja

Anexo C.1.4: Cargar las muestras y correr la electroforesis

1. Coloque el gel previamente calentado en una cmara electrofortica horizontal y
sumrjala en buffer MOPS 1X.
2. Cargar las muestras de RNA previamente denaturadas en cada uno de los pozos
y correr la electroforesis durante 1h a 70V constantes.
3. Visualizar el gel utilizando luz UV en un digitalizador Gel Doc (BIO-RAD).

Anexo C.2: Determinacin de la intensidad de las bandas

para la estimacin de la integridad del RNA
Para la determinacin de la intensidad de las bandas en los geles denaturantes de
agarosa se hizo utilizando el programa ImageJ 1.37 (Rasband, 1997). Despus de
cargada la imagen en el programa el genera un pico por cada banda presente en un carril
(su altura y amplitud es proporcional a la intensidad de la banda) (
Figura Anexo C - 1) y para poder estimar la intensidad se calcula el rea bajo la curva.
Posteriormente con estos valores se estima la relacin entre la intensidad de la banda
28S y la intensidad de la banda 18S.

Figura Anexo C - 1. Imagen generada por ImageJ a partir de un carril de un gel

denaturante de agarosa de RNA.

Anexo D. Reacciones de Amplificacin

Anexo D.1: Primers y sondas
Tabla Anexo D - 1. Secuencias e informacin de primers y sondas utilizadas
Reaccin
RT-PCR

qPCR

Primer
Sonda
Primer
3
Primer
F2
Primer
PYVV-591-F
Primer
PYVV-670-R

Direccin
Reverse
Forward
Forward
Reverse

Sonda CP
(465:510)
Primer
COX F
Primer
COX R
Sonda COX
(533:580)

Forward
Reverse

Secuencia
5 AAG CTT CTA CTC AAT AGA
TCC TGC TA 3
5 CTC GAG GAT CCT CAT
GGA AAT CCG AT 3
5 CGG AGA TTA TGT CAA
TGG TTC GA 3
5 TTG CTG CAT TCT TGA ACA
GGT AA 3
5 6-FAM AAC CAA CAT TTC
TGA TGA TGA TTT GAC TGC
AA 3 BHQ1
5 CGT CGC ATT CCA GAT
TAT CCA 3
5 CAA CTA CGG ATA TAT
AAG AGC CAA AAC TG 3
5 HEX TGC TTA CGC TGG
ATG GAA TGC CCT 3 BHQ2

Gen

Tamao
esperado

Referencia

Protena
mayor de
la cpside

769 pb

Rodrguez et al.,
2009

Protena
mayor de
la cpside

79pb
Lpez et al.,
2006

*Citocromo
oxidasa

79pb

Los valores que estn dentro de los parntesis corresponden a las longitudes de excitacin y de
emisin de las sondas utilizadas en las reacciones de qPCR.

Anexo D.2: Retrotranscripcin

En un tubo de PCR se sirve 5l del molde y se incuba durante 10min a 72C.
Posteriormente se adiciona el mix de reaccin (Tabla Anexo D 2).
Tabla Anexo D - 2. Reaccin de retrotranscripcin
Casa
Concentracin
Comercial
Inicial
Buffer de reaccin
Epicentre
10X
dNTPs
Bioline
10mM
DTT
Epicentre
100mM
Primer 3
IDT DNA
10M
Agua tratada con DEPC
RNAse inhibitor
Fermentas
40U/l
MMLV HP
Epicentre
200U/l
RNA
20ng/l
Volumen final

Concentracin
Final
1X
1mM
10mM
0.4M
1.6U
8U
100ng/l

Volumen
(l)
1
1
1
0.4
1.52
0.04
0.04
5
10

130

Deteccin y cuantificacin del Potato yellow vein virus (PYVV) en aislamientos

de diferentes rganos de Solanum tuberosum Grupo Phureja

La reaccin se incub durante una hora a 42C seguida de una denaturacin a 70C por
10min.

Anexo D.3: PCR

El cDNA obtenido en las reacciones de retrotranscripcin fue utilizado como molde en
PCR teniendo en cuenta la reaccin descrita en la siguiente tabla:
Tabla Anexo D - 3. Reaccin de PCR
Casa
Comercial
Buffer NH4
Bioline
MgCl2
Bioline
dNTPs
Bioline
Primer 3
IDT DNA
Primer F2
IDT DNA
Agua tratada con DEPC
Biolasa
Bioline
cDNA
Volumen final

Concentracin
Inicial
10X
50mM
10mM
10M
10M

Concentracin
Final
1X
2.5mM
0.4mM
0.4M
0.4M

5U/l

1U

Volumen
(l)
1
0.5
0.4
0.4
0.4
5.5
0.2
1.6
10

El perfil trmico de la reaccin fue el siguiente:

Tabla Anexo D - 4. Prfil trmico utilizado en PCR
Ciclos
Fase
Temperatura C
1
Denaturacin inicial
94
35
Denaturacin
94
Alineamiento
55
Extensin
72
1
Extensin final
72

Tiempo (min)
3
1
1
1
10

Anexo D.4: qPCR

El molde utilizado en las reacciones de PCR cuantitativa tambin fue el producto de la
retrotranscripcin.
Tabla Anexo D - 5. Reaccin de PCR en tiempo real
Casa
Concentracin
Comercial
Inicial
Buffer NH4
Bioline
10X
MgCl2
Bioline
50mM
dNTPs
Bioline
10mM
Primer Forward
IDT DNA
10M
Primer Reverse
IDT DNA
10M
Sonda
Biosearch
10M
Agua tratada con DEPC

Concentracin
Final
1X
5.5mM
0.5mM
0.3M
0.3M
0.24M

Volumen
(l)
1
1.21
0.55
0.33
0.33
0.165
5.5

Anexo D. Reacciones de Amplificacin

131

Tabla Anexo D 5: Continuacin

Biolasa
Cdna
Volumen final

Casa
Comercial
Bioline

Concentracin
Inicial
5U/l

Concentracin
Final
1U

Volumen
(l)
0.22
2.2
11

El perfil trmico de esta reaccin se describe en la siguiente tabla

Tabla Anexo D - 6. Perfil trmico utilizado en las reacciones de PCR en tiempo real
Ciclos
Fase
Temperatura C
Tiempo
1
Denaturacin inicial
95
10min
Denaturacin
95
10s
45
Alineamiento
55
30s
Extensin
72
1s

Anexo E. Transcripcin in vitro

Se utiliz un plsmido pGEM-T (Promega) cuyo inserto corresponda al gen completo
de la protena mayor de la cpside donado por Patricia Rodrguez del Laboratorio de
Virus Vegetales del Instituto de Biotecnologa de la Universidad Nacional de Colombia.

Anexo E.1: Linearizacin del plsmido

Inicialmente se seleccion la enzima Pst I que presenta un solo sitio de restriccin en el
plasmido de manera que el promotor T7 de la RNA polimerasa quedaba corriente arriba
del inserto para este pudiera ser transcribido (Anexo E-1). La reaccin de digestin se
describe en la siguiente tabla:

Figura Anexo E - 1. Sitio de reconocimiento de la enzima PstI en el panel superior, y en el panel

inferior esquema del plsmido linearizado
Tabla Anexo E - 1. Reaccin de digestin con la enzima Pst I
Casa
Concentracin
Comercial
Inicial
Buffer 10X
Promega
10X
Albumina de suero bovino
Promega
100X
Pst I
Promega
10U/l
Agua tratada con DEPC
Plsmido
20ng/l
Volumen final
La reaccin debe ser mezclada por pipeteo

Concentracin
Final
1X
1X
5U
100ng

Cantidad
(l)
3
0.3
0.5
21.2
2
30

134

Deteccin y cuantificacin del Potato yellow vein virus (PYVV) en aislamientos

de diferentes rganos de Solanum tuberosum Grupo Phureja

Anexo E.2: Purificacin del plsmido linearizado

El plsmido linearizado se purific con el kit Wizard DNA Clean-Up System (Promega):
1. Disolver la resina Wizard Clean-Up calentndola durante 10min a 37C.
2. Enfriar la resina Wizard Clean-Up a 25-30C.
3. Adicionar 1ml de la resina Wizard Clean-Up en un tubo de 1.5ml y el DNA (el
volumen de DNA debe estar entre 50 y 500l) y mezclar por inversin.
4. Unir una jeringa de 3ml sin mbolo a una minicolumna y pipetear la mezcla
resina/DNA en el interior de la jeringa como se describe en la siguiente figura.
Coloque el mbolo y empuje cuidadosamente el contenido dentro de la
minicolumna.

Figura Anexo E - 2. Montaje de la jeringa con la columna del kit Wizard Clean-Up (Promega).

5. Quitar nuevamente el mbolo de la jeringa y adicionar dentro de la jeringa 2ml de

isopropanol 80%, vuelva a colocar el mbolo y empuje el contenido dentro de la
columna.
6. Quitar le jeringa y colocar la columna dentro de un tubo de 1.5ml. Centrifugar a
mxima velocidad durante 2min con el objetivo de secar la resina.
7. Transferir la columna a un nuevo tubo de 1.5ml y adicionar 50l de agua o buffer
TE precalentado a 65-70C y esperar por un minuto. Centrifugar la columna a
mxima velocidad durante 20s para eluir el DNA.
8. Quite la columna y descrtela, en eludo que queda en el tubo de 1.5ml sera el
DNA recuperado el cual se debe almacenar a -20C hasta su utilizacin.

Anexo D. Reacciones de Amplificacin

135

Anexo E.3: Transcripcin in vitro

Tabla Anexo E - 2. Reaccin de retrotranscripcin
Casa
Comercial
DNA
rNTPs
Invitrogen
Buffer 5X
Promega
RNA polimerasa T7
Promega
RNAse inhibitor
Fermentas
DTT
Promega
Volumen final

Concentracin
Inicial
10mM
5X
20U/l
40U/l
100mM

Concentracin
Final
1g
0.5mM
1X
30U
50U
10mM
50l

La reaccin se incub durante 2h a 37C. La reaccin debe prepararse a temperatura

ambiente para evitar la precipitacin del DNA por la presencia de espermidina a bajas
temperaturas.

Anexo E.4: Purificacin de los transcritos

1. Adicionar 6.25l de LiCl 4M y 187.25l de etanol absoluto pre-enfriado.
2. Almacenar toda la noche a -20C..
3. Centrifugar a 13000g durante 5min a 4C.
4. Descartar el sobrenadante y lavar el pellet con etanol 70% enfriado en hielo.
5. Centrifugar a 13000g durante 5min a 4C
6. Descartar el sobrenadante y dejar secar el pellet.
7. Resuspender cuidadosamente con 30l de agua tratada con DEPC.

Anexo E.5: Tratamiento de los transcritos con DNasa I

Para la preparacin de la DNasa I se disuelve 5mg de la enzima en 1ml de NaCl 0.15M
estril. Los transcritos fueron tratados con DNasa I adicionando 20U de la enzima a 1g
de transcrito y se incuba a 37C durante 15 min, esto se repite dos veces. Posteriormente
los transcritos se almacenaron a -80C hasta su utilizacin.

Anexo F. Resultados artculo 1.

Anexo F.1: Determinacin del rendimiento de los
extractos de RNA
Tabla Anexo F - 1. Determinacin de la concentracin y clculo del rendimiento
Zona

rgano Extracto

Mtodo de
extraccin

Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area

Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo

CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol

E322
E340
E343
E346
E321
E349
E352
E355
E320
E331
E334
E337
E35
E36
E37
E38
E39
E40
E41
E42
E43
E44
E45
E46
E47
E48
E49
E50
E51
E52
E53
E54
E25
E26
E27
E28
E29
E30
E31
E32
E33
E34

Peso del
material
vegetal (mg)
49
32
59
34
52
52
53
55
39
38
43
55
150
150
150
150
150
150
150
150
150
150
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100

Dilucin
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
ND
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
ND
1:10
1:10
1:10
ND
ND
1:10
1:10
1:10
1:100
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10

Concentracin
de la dilucin
(ng/l)

Concentracin
del extracto
(ng/l)

150
115
150
121
110
103,5
104,2
94,2
86
86,8
91,1
105
42
67,9
47,5
43
39,6
53,1
440
61,1
98,9
51,5
98
86
77,8
630
82,7
86,3
98,6
1000
693
83,5
170
110
12,2
150
140
109,8
180
110
140
150

1500
1150
1500
1210
1100
1035
1042
942
860
868
911
1050
420
679
475
430
396
531
440
611
989
515
980
860
778
630
827
863
986
1000
693
835
1700
1100
1220
1500
1400
1098
1800
1100
1400
1500

Rendimiento
(ngRNA/mg de
material
vegetal)
918,37
1078,13
762,71
1067,65
634,62
597,12
589,81
513,82
661,54
685,26
635,58
572,73
84
135,8
95
86
79,2
106,2
88
122,2
197,8
103
294
258
233,4
189
248,1
258,90
295,80
300,00
207,90
250,50
510
330
366
450
420
329,4
540
330
420
450

138

Deteccin y cuantificacin del Potato yellow vein virus (PYVV) en aislamientos

de diferentes rganos de Solanum tuberosum Grupo Phureja

Tabla Anexo F 1. Continuacin

Zona

rgano

Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area

Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral

Mtodo de
Extracto
extraccin
E251
E252
E253
E254
E255
E256
E257
E258
E259
E260
E261
E262
E263
E264
E265
E266
E267
E268
E269
E270
E241
E242
E243
E244
E245
E246
E247
E248
E249
E250
E101
E102
E103
E104
E105
E106
E107
E108
E109
E110
E137
E138
E139
E140
E141
E142
E143
E144
E145
E146
E65
E66
E67
E68
E69
E70
E71
E72
E73
E74

CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol

Peso del
Concentracin
material
Dilucin de la dilucin
vegetal
(ng/l)
(mg)
150
1:10
15,8
150
1:10
11
150
1:10
22,4
150
1:10
38,4
150
1:10
15,8
150
1:10
11
150
1:10
38,1
150
1:10
33,9
150
1:10
36,1
150
1:10
28,1
100
1:10
34
100
ND
52,3
100
1:10
24
100
1:5
62,4
100
ND
NA
100
ND
25,1
100
1:5
79,1
100
1:5
48,7
100
1:10
45,3
100
1:10
53
100
1:10
74,1
100
1:10
63,4
100
1:10
70
100
1:10
80
100
1:10
72
100
1:10
77,1
100
1:10
82
100
1:10
72,3
100
1:10
51,3
100
1:10
78,7
36
1:10
89
42
1:100
8,5
31
1:100
9,3
46
1:10
75
39
1:100
7,4
34
1:100
8,8
37
1:100
6,7
46
1:100
7,1
40
1:100
5,9
39
1:100
7,1
45
1:10
90
46
1:5
183
37
1:10
80
39
ND
568
32
1:10
61,5
41
1:10
65,8
40
1:10
93,3
39
1:10
98,8
37
1:10
85,2
42
1:10
89,7
35
1:10
96,7
32
1:10
91,1
40
1:5
220
43
1:10
100
36
1:5
205,4
32
1:100
10,6
37
1:10
94,9
43
1:10
130
39
1:10
130
32
1:10
110

Concentracin
del extracto
(ng/l)
158
110
224
384
158
110
381
339
361
281
340
261,5
240
312
NA
251
395,5
243,5
453
530
741
634
700
800
720
771
820
723
513
787
890
850
930
750
740
880
670
710
590
710
900
915
800
568
615
658
933
988
852
897
967
911
1100
1000
1027
1060
949
1300
1300
1100

Rendimiento
(ngRNA/mg de
material
vegetal)
31,60
22,00
44,80
76,80
31,60
22,00
76,20
67,80
72,20
56,20
102,00
78,45
72,00
93,60
NA
75,30
118,65
73,05
135,90
159,00
222,30
190,20
210,00
240,00
216,00
231,30
246,00
216,90
153,90
236,10
741,67
607,14
900,00
489,13
569,23
776,47
543,24
463,04
442,50
546,15
600,00
596,74
648,65
436,92
576,56
481,46
699,75
760,00
690,81
640,71
828,86
854,06
825,00
697,67
855,83
993,75
769,46
906,98
1000,00
1031,25

Anexo F. Resultados artculo 1. Evaluacin de tres mtodos de extraccin de

RNA para la deteccin por RT-PCR del Potato yellow vein virus (PYVV) a
partir de muestras de diferentes rganos de plantas de Solanum tuberosum
Grupo Phureja

139

Tabla Anexo F 1. Continuacin

Zona

rgano

Extracto

Mtodo de
extraccin

Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area

Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo

E111
E112
E113
E114
E115
E116
E117
E118
E119
E120
E147
E148
E149
E150
E151
E152
E153
E154
E155
E156
E75
E76
E77
E78
E79
E80
E81
E82
E83
E84
E91
E92
E93
E94
E95
E96
E97
E98
E99
E100
E127
E128
E129
E130
E131
E132
E133
E134
E135
E136
E55
E56
E57
E58
E59
E60

CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol

Peso del
material
vegetal (mg)
98
82
79
84
83
92
94
87
90
79
98
83
99
84
82
79
80
96
100
75
96
82
75
99
98
82
79
88
84
97
150
150
150
150
150
150
150
150
150
150
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100

Dilucin
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:5
1:10
1:10
1:10
1:10
ND
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
ND
ND
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:5
1:5
1:5
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10

Concentracin
de la dilucin
(ng/l)
59,2
69,6
55,2
87,2
58,3
67,3
130
76,3
88,7
61,1
75,1
700
75
74,2
63,9
57,4
77,8
57,4
819
649
85,3
98,8
92,9
90,6
65,1
81,3
82,6
100,2
79,5
98,5
61,7
60,8
44,3
34,5
27,7
41,3
65,2
67,9
52,3
35,2
45
47,1
51
63,3
50
60
79,8
83
104
43,9
99,3
85,3
76,2
62,5
69,6
63,5

Concentracin
del extracto
(ng/l)
592
696
552
872
583
673
650
763
887
611
751
700
750
742
639
574
778
574
819
649
853
988
929
906
651
813
826
1002
795
985
617
608
443
345
277
413
652
679
523
352
450
471
510
633
500
600
399
415
520
439
993
853
762
625
696
635

Rendimiento
(ngRNA/mg de
material
vegetal)
181,22
254,63
209,62
311,43
210,72
219,46
207,45
263,10
295,67
232,03
229,90
253,01
227,27
265,00
233,78
217,97
291,75
179,38
245,70
259,60
266,56
361,46
371,60
274,55
199,29
297,44
313,67
341,59
283,93
304,64
123,40
121,60
88,60
69,00
55,40
82,60
130,40
135,80
104,60
70,40
135,00
141,30
153,00
189,90
150,00
180,00
119,70
124,50
156,00
131,70
297,90
255,90
228,60
187,50
208,80
190,50

140

Deteccin y cuantificacin del Potato yellow vein virus (PYVV) en aislamientos

de diferentes rganos de Solanum tuberosum Grupo Phureja

Tabla Anexo F 1. Continuacin

Zona

rgano

Area
Area
Area
Area
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical

Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria

Mtodo de
Extracto
extraccin
E61
E62
E63
E64
E294
E295
E296
E297
E298
E299
E300
E303
E304
E305
E306
E307
E275
E276
E277
E278
E279
E280
E281
E282
E283
E284
E285
E286
E287
E288
E290
E291
E292
E293
E301
E302
E183
E184
E185
E186
E187
E188
E189
E190
E191
E192
E203
E204
E205
E206
E207
E208
E209
E210
E211
E212
E163
E164
E165
E166

Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol

Peso del
Concentracin
material
Dilucin de la dilucin
vegetal
(ng/l)
(mg)
100
1:10
75,6
100
1:10
85,5
100
1:10
58,1
100
1:10
71,2
83
1:10
75,7
79
1:10
90,1
63
1:10
86,3
100
1:10
76,2
95
1:10
69,4
91
1:10
79,2
83
1:100
8,9
88
1:100
7,4
76
1:100
6,2
81
1:100
4,9
98
1:10
90,5
100
1:10
96,4
79
1:10
45,6
76
1:10
66,4
92
1:10
71,7
83
1:10
60,4
76
1:10
61,3
81
1:10
44
100
1:10
72,1
94
1:10
40,1
97
1:10
68,8
86
1:10
50,7
71
1:10
100
89
1:10
86,2
100
1:10
81,8
83
1:10
81,7
94
1:10
92,6
99
1:10
110
100
1:10
130
94
1:10
71,7
92
1:10
130
84
1:10
98
150
1:10
50,1
150
1:10
60,1
150
1:10
69,6
150
1:10
97,9
150
1:10
56,3
150
1:10
68,1
150
1:10
53,5
150
1:10
86,2
150
1:10
84,6
150
1:10
91,4
100
1:10
58,7
100
1:10
76,1
100
1:10
53,7
100
1:10
52,8
100
1:5
100,3
100
1:10
48
100
1:10
50,5
100
1:10
55,7
100
1:10
43
100
1:10
59,8
100
1:10
58,9
100
1:10
56,3
100
1:10
89,7
100
1:5
91,20

Concentracin
del extracto
(ng/l)
756
855
581
712
757
901
863
762
694
792
890
740
620
490
905
964
456
664
717
604
613
440
721
401
688
507
1000
862
818
817
926
1100
1300
717
1300
980
501
601
696
979
563
681
535
862
846
914
587
761
537
528
501,5
480
505
557
430
598
589
563
897
456

Rendimiento
(ngRNA/mg de
material
vegetal)
226,80
256,50
174,30
213,60
273,61
342,15
410,95
228,60
219,16
261,10
321,69
252,27
244,74
181,48
277,04
289,20
173,16
262,11
233,80
218,31
241,97
162,96
216,30
127,98
212,78
176,86
422,54
290,56
245,40
295,30
295,53
333,33
390,00
228,83
423,91
350,00
100,20
120,20
139,20
195,80
112,60
136,20
107,00
172,40
169,20
182,80
176,10
228,30
161,10
158,40
150,45
144,00
151,50
167,10
129,00
179,40
176,70
168,90
269,10
136,80

Anexo F. Resultados artculo 1. Evaluacin de tres mtodos de extraccin de

RNA para la deteccin por RT-PCR del Potato yellow vein virus (PYVV) a
partir de muestras de diferentes rganos de plantas de Solanum tuberosum
Grupo Phureja

141

Tabla Anexo F 1. Continuacin

Zona

rgano

Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical

Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria

Extracto

Mtodo de
extraccin

E168
E167
E169
E170
E171
E172
E193
E194
E195
E196
E197
E198
E199
E200
E201
E202
E213
E214
E215
E216
E217
E218
E219
E220
E221
E222
E173
E174
E175
E176
E177
E178
E179
E180
E181
E182

Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol

Peso del
Concentracin
material
Dilucin de la dilucin
vegetal
(ng/l)
(mg)
100
1:10
43
100
1:10
69,3
100
1:5
100,5
100
1:5
92,6
100
1:10
44,2
100
1:5
93
150
1:10
73,7
150
1:10
64
150
1:10
74,9
150
1:10
75,5
150
ND
521
150
1:10
69,2
150
1:10
74,4
150
1:10
45,1
150
1:5
123,5
150
1:5
158,3
100
1:10
64,5
100
1:10
67,4
100
1:10
51,1
100
1:10
81,7
100
1:10
42
100
1:10
48
100
1:10
77,7
100
1:10
78,4
100
1:10
68,9
100
1:10
42
100
1:10
100
100
1:10
73,4
100
1:10
88,7
100
1:10
95,4
100
1:10
65,5
100
1:10
82,2
100
1:10
93,3
100
1:10
83
100
1:5
150
100
1:10
64,8

Concentracin
del extracto
(ng/l)
430
693
502,5
463
442
465
737
640
749
755
521
692
744
451
617,5
791,5
645
674
511
817
420
480
777
784
689
420
1000
734
887
954
655
822
933
830
750
648

Rendimiento
(ngRNA/mg de
material
vegetal)
129,00
207,90
150,75
138,90
132,60
139,50
147,40
128,00
149,80
151,00
104,20
138,40
148,80
90,20
123,50
158,30
193,50
202,20
153,30
245,10
126,00
144,00
233,10
235,20
206,70
126,00
300,00
220,20
266,10
286,20
196,50
246,60
279,90
249,00
225,00
194,40

ND: No diludo

Anexo F.2: Determinacin de la calidad de los extractos

de RNA y Resultados de RT-PCR
Tabla Anexo F - 2. Calculo de la relacin 260/280 para la determinacin de la calidad de los
extractos de RNA, y resultados de RT-PCR
Zona
Area
Area
Area
Area
Area
Area

rgano
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera

Extracto
E322
E340
E343
E346
E321
E349

Mtodo de
extraccin
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex

OD
260nm
0,24
0,22
0,28
0,23
0,29
0,23

OD
280nm
0,14
0,13
0,16
0,13
0,16
0,14

260/280
1,68
1,60
1,74
1,73
1,84
1,71

RT-PCR
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo

142

Deteccin y cuantificacin del Potato yellow vein virus (PYVV) en aislamientos

de diferentes rganos de Solanum tuberosum Grupo Phureja

Tabla Anexo F 2. Continuacin

Zona
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area

rgano

Extracto

Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo

E352
E355
E320
E331
E334
E337
E35
E36
E37
E38
E39
E40
E41
E42
E43
E44
E45
E46
E47
E48
E49
E50
E51
E52
E53
E54
E25
E26
E27
E28
E29
E30
E31
E32
E33
E34
E251
E252
E253
E254
E255
E256
E257
E258
E259
E260
E261
E262
E263
E264
E265
E266
E267
E268
E269
E270
E241
E242

Mtodo de
Extraccin
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol

OD
260nm
0,20
0,26
0,35
0,30
0,24
0,31
0,11
0,13
0,16
0,15
0,16
0,15
0,11
0,13
0,18
0,18
0,14
0,26
0,32
0,34
0,29
0,28
0,18
0,16
0,24
0,18
0,86
0,97
0,86
0,85
0,44
0,32
0,34
0,32
0,30
0,40
0,13
0,12
0,08
0,13
0,06
0,06
0,09
0,14
0,09
0,15
0,10
0,15
0,08
0,13
0,11
0,15
0,07
0,13
0,10
0,05
0,10
0,10

OD
280nm
0,11
0,14
0,19
0,17
0,13
0,16
0,08
0,09
0,10
0,09
0,09
0,09
0,07
0,10
0,11
0,10
0,09
0,16
0,18
0,18
0,17
0,17
0,11
0,10
0,15
0,12
0,44
0,53
0,43
0,44
0,26
0,18
0,17
0,16
0,16
0,21
0,07
0,07
0,04
0,07
0,04
0,04
0,05
0,07
0,05
0,08
0,06
0,09
0,05
0,07
0,06
0,08
0,04
0,07
0,06
0,03
0,05
0,05

260/280
1,76
1,80
1,85
1,81
1,80
1,88
1,52
1,56
1,65
1,71
1,83
1,67
1,50
1,34
1,66
1,76
1,59
1,69
1,78
1,85
1,70
1,65
1,67
1,66
1,60
1,52
1,98
1,81
1,99
1,94
1,70
1,77
1,95
1,95
1,87
1,89
1,74
1,75
1,88
1,79
1,63
1,69
1,92
1,86
1,84
1,87
1,82
1,77
1,71
1,85
1,80
1,85
1,74
1,83
1,65
1,80
1,96
1,76

RT-PCR
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo

Anexo F. Resultados artculo 1. Evaluacin de tres mtodos de extraccin de

RNA para la deteccin por RT-PCR del Potato yellow vein virus (PYVV) a
partir de muestras de diferentes rganos de plantas de Solanum tuberosum
Grupo Phureja
Tabla Anexo F 2. Continuacin
Zona

rgano

Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area

Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo

Extracto
E243
E244
E245
E246
E247
E248
E249
E250
E101
E102
E103
E104
E105
E106
E107
E108
E109
E110
E137
E138
E139
E140
E141
E142
E143
E144
E145
E146
E65
E66
E67
E68
E69
E70
E71
E72
E73
E74
E111
E112
E113
E114
E115
E116
E117
E118
E119
E120
E147
E148
E149
E150
E151
E152
E153
E154
E155
E156

Mtodo de
extraccin
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex

OD
OD
260nm 280nm
0,08
0,07
0,08
0,07
0,09
0,08
0,08
0,14
0,23
0,21
0,22
0,23
0,22
0,11
0,12
0,13
0,18
0,16
0,26
0,26
0,22
0,19
0,17
0,25
0,14
0,27
0,21
0,16
0,24
0,27
0,30
0,24
0,27
0,25
0,28
0,27
0,25
0,31
0,26
0,31
0,26
0,21
0,20
0,11
0,15
0,27
0,29
0,23
0,19
0,09
0,12
0,14
0,07
0,11
0,13
0,11
0,11
0,09

0,04
0,04
0,04
0,04
0,05
0,04
0,04
0,07
0,14
0,13
0,12
0,14
0,13
0,06
0,07
0,07
0,10
0,09
0,16
0,14
0,15
0,11
0,12
0,14
0,09
0,15
0,14
0,09
0,13
0,13
0,17
0,13
0,15
0,13
0,16
0,15
0,14
0,16
0,15
0,17
0,16
0,12
0,12
0,06
0,09
0,15
0,17
0,12
0,12
0,05
0,06
0,08
0,04
0,06
0,08
0,06
0,05
0,05

260/280

RT-PCR

1,88
1,72
1,88
1,88
1,88
1,95
2,00
1,97
1,66
1,61
1,76
1,67
1,63
1,74
1,74
1,78
1,93
1,79
1,69
1,82
1,43
1,71
1,45
1,75
1,63
1,78
1,48
1,76
1,80
2,02
1,84
1,91
1,88
1,95
1,82
1,77
1,79
1,88
1,77
1,85
1,66
1,81
1,68
1,82
1,73
1,77
1,76
1,88
1,58
1,85
1,85
1,79
1,74
1,86
1,68
1,81
1,98
1,80

Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Negativo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo

143

144

Deteccin y cuantificacin del Potato yellow vein virus (PYVV) en aislamientos

de diferentes rganos de Solanum tuberosum Grupo Phureja

Tabla Anexo F 2. Continuacin

Zona

rgano

Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical

Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo

Extracto

Mtodo de
extraccin

E75
E76
E77
E84
E78
E79
E80
E81
E82
E83
E91
E92
E93
E94
E95
E96
E97
E98
E99
E100
E127
E128
E129
E130
E131
E132
E133
E134
E135
E136
E55
E56
E57
E58
E59
E60
E61
E62
E63
E64
E294
E295
E296
E297
E298
E299
E300
E303
E304
E305
E306
E307
E275
E276
E277
E278
E279
E280
E281
E282
E283
E284

Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex

OD
OD
260nm 280nm
0,10
0,08
0,07
0,07
0,20
0,09
0,12
0,07
0,16
0,05
0,19
0,14
0,20
0,19
0,17
0,12
0,11
0,12
0,22
0,27
0,17
0,12
0,15
0,20
0,21
0,21
0,19
0,25
0,21
0,19
0,11
0,14
0,15
0,10
0,15
0,21
0,18
0,16
0,24
0,21
0,23
0,27
0,21
0,05
0,44
0,58
0,13
1,37
0,70
0,57
0,14
0,44
0,26
0,20
0,34
0,05
0,24
0,13
0,14
0,35
0,27
0,19

0,05
0,05
0,04
0,04
0,10
0,05
0,06
0,04
0,09
0,03
0,12
0,09
0,14
0,11
0,09
0,07
0,06
0,07
0,12
0,14
0,12
0,08
0,08
0,14
0,12
0,12
0,14
0,14
0,14
0,12
0,06
0,07
0,08
0,05
0,08
0,10
0,10
0,08
0,12
0,11
0,14
0,15
0,13
0,03
0,25
0,34
0,08
0,79
0,39
0,31
0,08
0,25
0,14
0,12
0,20
0,03
0,15
0,08
0,09
0,20
0,18
0,10

260/280

RT-PCR

1,85
1,78
1,73
1,74
2,00
1,89
1,91
1,71
1,84
1,74
1,62
1,69
1,51
1,70
1,84
1,70
1,69
1,72
1,77
1,85
1,42
1,60
1,79
1,43
1,70
1,67
1,39
1,78
1,57
1,58
1,84
2,03
1,90
1,85
1,93
2,05
1,84
1,98
1,92
1,90
1,68
1,73
1,66
1,56
1,76
1,71
1,69
1,73
1,78
1,84
1,72
1,80
1,82
1,63
1,74
1,87
1,68
1,69
1,63
1,73
1,52
1,89

Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo

Anexo F. Resultados artculo 1. Evaluacin de tres mtodos de extraccin de

RNA para la deteccin por RT-PCR del Potato yellow vein virus (PYVV) a
partir de muestras de diferentes rganos de plantas de Solanum tuberosum
Grupo Phureja
Tabla Anexo F 2. Continuacin
Zona

rgano

Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical

Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria

Extracto

Mtodo de
extraccin

E285
E286
E287
E288
E290
E291
E301
E292
E293
E302
E183
E184
E185
E186
E187
E188
E189
E190
E191
E192
E203
E204
E205
E206
E207
E208
E209
E210
E211
E212
E163
E164
E165
E166
E167
E168
E169
E170
E171
E172
E193
E194
E195
E196
E197
E198
E199
E200
E201
E202
E213
E214
E215
E216
E217
E218
E219
E220

Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex

OD
OD
260nm 280nm
0,31
0,26
0,27
0,29
0,40
0,46
0,55
0,29
0,60
0,04
0,07
0,26
0,23
0,24
0,21
0,20
0,18
0,11
0,23
0,23
0,20
0,02
0,05
0,08
0,20
0,05
0,08
0,28
0,09
0,07
0,17
0,11
0,12
0,05
0,14
0,11
0,12
0,13
0,31
0,27
0,12
0,14
0,11
0,19
0,14
0,11
0,09
0,12
0,12
0,13
0,11
0,20
0,10
0,04
0,20
0,13
0,28
0,05

0,18
0,14
0,14
0,15
0,22
0,25
0,29
0,16
0,32
0,02
0,04
0,15
0,14
0,14
0,12
0,11
0,10
0,06
0,14
0,12
0,13
0,01
0,03
0,04
0,12
0,03
0,04
0,15
0,05
0,04
0,09
0,06
0,07
0,03
0,08
0,06
0,07
0,07
0,17
0,15
0,07
0,08
0,06
0,10
0,08
0,07
0,05
0,08
0,07
0,08
0,07
0,11
0,06
0,03
0,11
0,08
0,17
0,03

260/280

RT-PCR

1,70
1,86
1,91
1,93
1,80
1,85
1,89
1,88
1,85
1,87
1,76
1,74
1,67
1,69
1,72
1,85
1,78
1,73
1,69
1,86
1,61
1,88
1,96
1,90
1,67
1,84
1,92
1,88
1,73
1,69
1,88
1,78
1,80
1,79
1,78
1,86
1,78
1,82
1,85
1,80
1,65
1,77
1,75
1,85
1,72
1,67
1,75
1,63
1,67
1,76
1,63
1,79
1,65
1,76
1,80
1,72
1,68
1,71

Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo

145

146

Deteccin y cuantificacin del Potato yellow vein virus (PYVV) en aislamientos

de diferentes rganos de Solanum tuberosum Grupo Phureja

Tabla Anexo F 2. Continuacin

Zona

rgano

Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical

Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria

Extracto

Mtodo de
extraccin

E221
E222
E173
E174
E175
E176
E177
E178
E179
E180
E181
E182

Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol

OD
OD
260nm 280nm
0,08
0,11
0,24
0,12
0,12
0,13
0,27
0,25
0,12
0,14
0,14
0,19

260/280

RT-PCR

1,61
1,69
1,80
1,67
1,74
2,00
1,85
1,77
1,80
1,89
1,65
1,82

Negativo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Negativo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo

0,05
0,06
0,13
0,07
0,07
0,06
0,15
0,14
0,07
0,07
0,08
0,11

Anexo F.3: Determinacin de la integridad de los

extractos de RNA
Tabla Anexo F - 3 Determinacin de la integridad de los extractos de RNA
Zona

rgano Extracto

Mtodo de Intensidad Intensidad

28S/18S
extraccin
28S
18S

Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area

Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo

CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol

E322
E340
E343
E346
E321
E349
E352
E355
E320
E331
E334
E337
E35
E36
E37
E38
E39
E40
E41
E42
E43
E44
E45
E46
E47
E48
E49
E50
E51
E52
E53
E54
E25
E26
E27
E28
E29
E30
E31

3698541
3964210
4956213
4213658
3698742
2365874
5843216
4326874
4563213
3694852
5231497
1265987
3471430
5325449
3277087
3016510
2939439
3928459
2065409
3171894
4918217
2578024
855648
2849083
6956347
5999205
5207447
NA
6913326
1647012
4149690
5231941
6152430
6972874
5358439
5292439
7336459
6847167
5962430

1964231
3025743
2974631
3021589
2036854
1458961
3587124
2985412
2863123
2198742
2953214
796321
2515530
3775238
2349359
2112752
1905154
3037581
1573104
2604439
4036238
1763350
516506
1672912
3893347
3987254
3871692
NA
5025945
1030820
2507276
3092924
3593510
4135853
3357489
3143217
3882045
4062359
3306459

1,88
1,31
1,67
1,39
1,82
1,62
1,63
1,45
1,59
1,68
1,77
1,59
1,38
1,41
1,39
1,43
1,54
1,29
1,31
1,22
1,22
1,46
1,66
1,70
1,79
1,50
1,35
NA
1,38
1,60
1,66
1,69
1,71
1,69
1,60
1,68
1,89
1,69
1,80

Anexo F. Resultados artculo 1. Evaluacin de tres mtodos de extraccin de

RNA para la deteccin por RT-PCR del Potato yellow vein virus (PYVV) a
partir de muestras de diferentes rganos de plantas de Solanum tuberosum
Grupo Phureja
Tabla Anexo F 3. Continuacin
Zona

rgano

Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area

Foliolo
Foliolo
Foliolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral

Extracto

Mtodo de Intensidad Intensidad

28S/18S
extraccin
28S
18S

E32
E33
E34
E251
E252
E253
E254
E255
E256
E257
E258
E259
E260
E261
E262
E263
E264
E265
E266
E267
E268
E269
E270
E241
E242
E243
E244
E245
E246
E247
E248
E249
E250
E101
E102
E103
E104
E105
E106
E107
E108
E109
E110
E137
E138
E139
E140
E141
E142
E143
E144
E145
E146
E65
E66
E67
E68

Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol

6837681
5163702
3977045
2634539
1863175
NA
3016246
1754640
395820
324740
1342811
2599882
2360054
NA
196092
1799154
NA
NA
NA
1101192
2440447
1691539
2183518
3130066
4240974
NA
2783267
1513660
2503660
1776439
2608459
NA
2260761
1746962
4083560
5941953
3967468
401447
4223385
223719
NA
NA
3542296
NA
NA
NA
NA
NA
2514841
2565205
3879790
3544983
4028397
9417359
5972903
7765823
7548894

4062338
2931782
2101468
1933418
1398770
NA
2464426
1415146
254021
189749
972811
1665134
1839317
NA
110092
1100933
NA
NA
NA
719021
1425569
942355
1373770
1657782
2562903
NA
1573731
947255
1316811
984004
1463317
NA
1433468
840577
1939225
2925983
2025569
193870
2224134
104790
NA
NA
1853861
NA
NA
NA
NA
NA
1342912
1302154
3261276
1916619
2048962
5362487
3435231
4285632
4589217

1,68
1,76
1,89
1,36
1,33
NA
1,22
1,24
1,56
1,71
1,38
1,56
1,28
NA
1,78
1,63
NA
NA
NA
1,53
1,71
1,80
1,59
1,89
1,65
NA
1,77
1,60
1,90
1,81
1,78
NA
1,58
2,08
2,11
2,03
1,96
2,07
1,90
2,13
NA
NA
1,91
NA
NA
NA
NA
NA
1,87
1,97
1,19
1,85
1,97
1,76
1,74
1,81
1,64

147

148

Deteccin y cuantificacin del Potato yellow vein virus (PYVV) en aislamientos

de diferentes rganos de Solanum tuberosum Grupo Phureja

Tabla Anexo F 3. Continuacin

Zona

rgano

Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area

Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo

Extracto

Mtodo de Intensidad Intensidad

28S/18S
extraccin
28S
18S

E69
E70
E71
E72
E73
E74
E111
E112
E113
E114
E115
E116
E118
E117
E119
E120
E147
E148
E149
E150
E151
E152
E153
E154
E155
E156
E75
E76
E77
E78
E79
E80
E81
E82
E83
E84
E91
E92
E93
E94
E95
E96
E97
E98
E99
E100
E127
E128
E129
E130
E131
E132
E133
E134
E135
E136
E55
E56
E57
E58
E59

Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol

6990075
1542648
6335196
5304167
9656238
6366530
NA
NA
NA
NA
NA
1996468
4237146
NA
6258338
4866095
NA
6752501
6280401
6672610
1261426
NA
2310853
1982075
NA
NA
4371309
5777380
3529087
3946803
1287033
1859962
4942024
5350773
5703279
5719572
2752832
3944539
3651510
3010439
3165217
2478903
3308439
2868095
2282560
3250782
1483619
4543853
1664447
7060903
NA
1291406
6544409
834841
3741903
1336690
6948258
5196338
4707510
5393459
2938853

4516924
933163
4162338
3112832
5245782
3722832
NA
NA
NA
NA
NA
1713255
2909577
NA
4068426
3614234
NA
4524660
4593894
5100095
961820
NA
1388054
1494208
NA
NA
2972933
4037447
2437761
3008761
869820
1260941
3061004
3397024
4164731
2889782
1596569
2427539
2090276
1966820
2210305
1627347
2262175
2013376
1414225
2445711
865231
3243660
1117953
4988296
NA
955045
6468711
626648
2456321
823154
4231562
2896412
2531245
2784532
1720132

1,55
1,65
1,52
1,70
1,84
1,71
NA
NA
NA
NA
NA
1,17
1,46
NA
1,54
1,35
NA
1,49
1,37
1,31
1,31
NA
1,66
1,33
NA
NA
1,47
1,43
1,45
1,31
1,48
1,48
1,61
1,58
1,37
1,98
1,72
1,62
1,75
1,53
1,43
1,52
1,46
1,42
1,61
1,33
1,71
1,40
1,49
1,42
NA
1,35
1,01
1,33
1,52
1,62
1,64
1,79
1,86
1,94
1,71

Anexo F. Resultados artculo 1. Evaluacin de tres mtodos de extraccin de

RNA para la deteccin por RT-PCR del Potato yellow vein virus (PYVV) a
partir de muestras de diferentes rganos de plantas de Solanum tuberosum
Grupo Phureja
Tabla Anexo F 3. Continuacin
Zona

rgano

Area
Area
Area
Area
Area
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical

Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria

Extracto

Mtodo de Intensidad Intensidad

28S/18S
extraccin
28S
18S

E60
E61
E62
E63
E64
E294
E295
E296
E297
E298
E299
E300
E303
E304
E305
E306
E307
E275
E276
E277
E278
E279
E280
E281
E282
E283
E284
E285
E286
E287
E288
E290
E291
E292
E293
E301
E302
E183
E184
E185
E186
E187
E188
E189
E190
E191
E192
E203
E204
E205
E206
E207
E208
E209
E210
E211
E166

Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol

4030409
4689702
5524016
5245823
5721744
2365982
3659872
4659832
3652987
3269854
5362987
325987
2589321
3659874
659874
1356241
3652417
2035463
3657892
2639875
3654982
3597421
4569874
2698745
5487963
4562879
3498721
2013658
3569874
4986523
3698754
2659741
4569852
5369821
3654289
4698752
3698521
440790
739447
4384477
226092
1166518
1143104
1402820
5341406
3185728
3214849
1469912
3349811
1798497
2381447
2832569
3134154
3755983
1874811
1413740
NA

2381731
2572103
2963214
2732154
2993265
1865324
2365421
3265412
2365987
2365487
3265874
254986
1865124
2546987
456982
965874
2451023
1369521
1896413
1596421
2123698
2036541
2531246
1986541
2985421
2987321
1985421
1113698
1965487
2784521
1896325
1569821
2698412
2975412
1965421
2453125
1985324
322087
418338
2634246
159903
836510
767652
910711
3278894
2064489
1964731
880991
2599690
1061062
1689861
1952933
2465761
2965418
1122347
830104
NA

1,69
1,82
1,86
1,92
1,91
1,27
1,55
1,43
1,54
1,38
1,64
1,28
1,39
1,44
1,44
1,40
1,49
1,49
1,72
1,30
1,72
1,77
1,81
1,36
1,84
1,53
1,76
1,81
1,82
1,79
1,95
1,69
1,69
1,80
1,86
1,92
1,86
1,37
1,77
1,66
1,41
1,39
1,49
1,54
1,63
1,54
1,64
1,67
1,29
1,69
1,41
1,45
1,27
1,27
1,67
1,70
NA

149

150

Deteccin y cuantificacin del Potato yellow vein virus (PYVV) en aislamientos

de diferentes rganos de Solanum tuberosum Grupo Phureja

Tabla Anexo F 3. Continuacin

Zona

rgano

Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical

Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria

Extracto

Mtodo de Intensidad Intensidad

28S/18S
extraccin
28S
18S

E212
E163
E164
E165
E167
E168
E169
E170
E171
E172
E193
E194
E195
E196
E197
E198
E199
E200
E201
E202
E213
E214
E215
E216
E217
E218
E219
E220
E221
E222
E173
E174
E175
E176
E177
E178
E179
E180
E181
E182

Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol

3656983
1240631
1983740
951317
1188225
1729335
2081920
NA
1243125
1286648
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
4932146
4708296
NA
2794882
2041983
5558167
4827752
4783267
2506782
2132125
NA
NA
NA
NA
NA
NA
3450066
2177782
3725238
NA

2037761
833598
1159660
600092
850660
967669
1349983
NA
842782
933740
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
5165681
5164581
NA
2754497
2225569
6115622
4226874
3507125
2699702
2444196
NA
NA
NA
NA
NA
NA
4803974
2576439
3774832
NA

1,79
1,49
1,71
1,59
1,40
1,79
1,54
NA
1,48
1,38
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
0,95
0,91
NA
1,01
0,92
0,91
1,14
1,36
0,93
0,87
NA
NA
NA
NA
NA
NA
0,72
0,85
0,99
NA

NA: no asignado debido a que la muestra estaba con cierto grado de degradacin y por
lo tanto no pudo determinarse la intensidad del RNA 28 y/o 18S.

Anexo F. Resultados artculo 1. Evaluacin de tres mtodos de extraccin de

RNA para la deteccin por RT-PCR del Potato yellow vein virus (PYVV) a
partir de muestras de diferentes rganos de plantas de Solanum tuberosum
Grupo Phureja

151

Anexo F.5: Resmen de resultados

Tabla Anexo F - 4 Resumen de los resultados de PCR, rendimiento, calidad e integridad en cada
uno de los rganos evaluados
rgano

Extraccin

Antera

Foliolo

Peciolo
Pednculo
floral
Ptalo

Tallo
Brote de
Tubrculo
Raz
Primaria
Raz
Secundaria

CTAB
Sephadex
Trizol
CTAB
Sephadex
Trizol
CTAB
Sephadex
Trizol
CTAB
Sephadex
Trizol
CTAB
Sephadex
Trizol
CTAB
Sephadex
Trizol
CTAB
Sephadex
Trizol
CTAB
Sephadex
Trizol
CTAB
Sephadex
Trizol

PCR

Rendimiento
Error
estndar
583,84
25,32
638,78
24,24
956,71
74,25
109,72
11,30
253,56
11,70
414,54
23,88
50,12
7,09
100,88
9,84
216,27
8,64
607,86
47,56
613,16
31,14
876,29
33,86
238,53
13,21
240,34
9,63
301,47
15,98
98,18
9,11
148,11
7,23
224,04
11,94
275,17
17,63
202,62
13,03
327,54
21,77
143,56
10,83
164,54
8,52
165,02
13,95
133,96
7,07
186,51
14,50
246,39
11,70

Promedio

4/4
4/4
4/4
9/10
8/10
9/10
7/10
8/10
10/10
10/10
9/10
10/10
7/10
8/10
10/10
10/10
9/10
8/10
9/12
7/10
8/10
8/10
9/10
9/10
8/10
8/10
7/10

%CV

Promedio

8,67
7,59
15,52
32,57
14,59
18,22
44,74
30,83
12,63
24,74
16,06
12,22
17,51
12,67
16,77
29,34
15,44
16,85
22,19
20,33
21,02
23,85
16,37
26,73
16,69
24,58
15,01

1,69
1,78
1,83
1,62
1,67
1,89
1,80
1,78
1,89
1,73
1,65
1,86
1,77
1,80
1,82
1,71
1,59
1,92
1,72
1,72
1,85
1,75
1,81
1,81
1,72
1,70
1,80

Calidad
Error
estndar
0,031
0,029
0,018
0,045
0,030
0,031
0,029
0,021
0,029
0,029
0,046
0,025
0,022
0,035
0,030
0,031
0,047
0,023
0,021
0,037
0,020
0,021
0,039
0,011
0,021
0,020
0,033

%CV
3,64
3,25
2,00
8,84
5,71
5,16
5,13
3,67
4,83
5,37
8,76
4,24
3,95
6,12
5,20
5,83
9,25
3,81
4,24
6,71
3,45
3,82
6,77
2,00
3,89
3,79
5,77

Integridad
Error
estndar
1,56
0.13
1,63
0.07
1,66
0.04
1,37
0.03
1,59
0.05
1,74
0.03
1,41
0.05
1,67
0.03
1,75
0.04
2,02
0.03
1,77
0.10
1,69
0.03
1,38
0.05
1,41
0.04
1,52
0.06
1,54
0.04
1,43
0.06
1,82
0.03
1,44
0.03
1,63
0.06
1,82
0.03
1,54
0.04
1,52
0.07
1,55
0.05
NA
1,00
0.05
0,85
0.04

Promedio

NA

%CV
8,67
7,59
15,52
32,57
14,59
18,22
44,74
30,83
12,63
24,74
16,06
12,22
17,51
12,67
16,77
29,34
15,44
16,85
22,19
20,33
21,02
23,85
16,37
26,73
NA
24,58
15,01

Anexo F.6: Resultados anlisis estadsticos

Anexo F.6.1: Comparaciones entre mtodos de extraccin de
RNA por rgano
Tabla Anexo F - 5. Valores de p obtenidos en prueba Mann-Whitney para la comparacin entre
mtodos de extraccin por rgano.
rgano

Prueba Mann-Whitney
Parmetros comparados
Rendimiento
Mtodo

Antera

Calidad
Mtodo
Integridad
Mtodo

Valor p

Mtodos comparados

Sephadex-CTAB
0.000711 Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
Sephadex-CTAB
0.011 Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
0.755

valor p
0,7010264
0,0009156
0,0027170
0,0941158
0,0090194
0,3258475

152

Deteccin y cuantificacin del Potato yellow vein virus (PYVV) en aislamientos

de diferentes rganos de Solanum tuberosum Grupo Phureja

Tabla Anexo F-6. Continuacin

rgano

Brote de
tubrculo

Foliolo

Prueba Mann-Whitney
Parmetros comparados

Valor p

Rendimiento
Mtodo

0.000205

Calidad
Mtodo
Integridad
Mtodo

1.75 10-6

Calidad
Mtodo

3.56 10-5

Integridad
Mtodo

7.28 10-7

Rendimiento
Mtodo
Calidad
Mtodo
Peciolo

Integridad
Mtodo
Rendimiento
Mtodo
Calidad
Mtodo

Pednculo
Floral

Integridad
Mtodo
Rendimiento
Mtodo
Rendimiento
Mtodo

Ptalo

Raz
Primaria

0.00154

Calidad
Mtodo
Integridad
Mtodo
Rendimiento
Mtodo
Calidad
Mtodo
Integridad
Mtodo

2.72 10-12

0.0178

0.000158
6.95 10-13

0.000611

0.00195
2.45 10-5

0.0028
0.548
0.312
0.325
0.17
0.93

Mtodos comparados
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex

valor p
0,0187325
0,1087207
0,0001344
0,9988813
0,0034524
0,0045768
0,0067316
0,000001
0,0110551
4,80 10-6
0,000001
7,00 10-7
0,5805576
0,0000491
0,0007113
0,0007894
0,0000005
0,0304453
0,0010441
0,0000001
0,0000001
0,9156402
0,0555763
0,0228316
0,004441
0,0001792
0,5976829
0,9947033
0,0000957
0,0001243
0,24347
0,0276686
0,0004413
0,0434081
0,001603
0,6882554
0,994872
0,0062191
0,0078979

Anexo F. Resultados artculo 1. Evaluacin de tres mtodos de extraccin de

RNA para la deteccin por RT-PCR del Potato yellow vein virus (PYVV) a
partir de muestras de diferentes rganos de plantas de Solanum tuberosum
Grupo Phureja

153

Tabla Anexo F-6. Continuacin

Prueba Mann-Whitney
rgano

Raz
Secundaria

Tallo

Parmetros
comparados

Valor p

Rendimiento
Mtodo

1.05 10-6

Calidad
Mtodo

0.0311

Integridad
Mtodo

0.18

Rendimiento
Mtodo

3.7 10-9

Calidad
Mtodo

1.43 10-6

Integridad
Mtodo

1.9 10-5

Mtodos comparados

valor p

Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex

0,0088044
0,0000006
0,0028451
0,8710521
0,0992489
0,0345162

Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex

0,0029340
0,0000000
0,0000188
0,0662481
0,0004981
0,0000010
0,2566870
0,0009981
0,0000195

Las celdas que estn sombreadas corresponden a comparaciones en las que se present un valor
de p >0.05 por lo tanto se omiti la evaluacin por la prueba de Mann-Whitney

Anexo F.6.2: Efecto del rgano, el mtodo de extraccin y la

interaccin del rgano con el mtodo de extraccin en el
rendimiento, calidad e integridad
Tabla Anexo F - 6. Valores de p de prueba de Kruskall-Wallis para la evaluacin del efecto del
rgano, mtodo de extraccin y la interaccin del rgano y mtodo de extraccin
Valores de p
Parmetro
rgano
Mtodo
Interaccin rgano - Mtodo
-16
-16
-15
Rendimiento
< 2.6 10
< 2.6 10
1.65 10
-16
-5
Calidad
0.0408
< 2.6 10
1.35 10
-16
-10
-12
Integridad
< 2.6 10
2.82 10
2.42 10

Anexo G. Resultados artculo 2.

Anexo G.1: Determinacin del nmero de copias del gen
CP de PYVV
Tabla Anexo G- 1. Determinacin del nmero de copias del gen CP de PYVV y resultados de RTPCR en muestras de S. tuberosum Grupo Phureja en diferentes rganos de plantas infectadas
Sintomatologa
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica

rgano Extracto Ct (COX) Ct(CP) Copias CP

Tallo
T208
16,76 24,45
1,12 107
Tallo
T209
16,97 23,65
1,96 107
Tallo
T210
16,76 23,00
3,11 107
Peciolo
T211
16,77 23,42
2,31 107
Peciolo
T212
15,49 23,45
2,26 107
Peciolo
T213
15,30 23,50
2,19 107
Peciolo
T214
16,47 24,57
1,03 107
Peciolo
T215
15,70 23,12
2,86 107
Peciolo
T216
15,89 22,35
4,90 107
Peciolo
T217
16,83 21,58
8,42 107
Peciolo
T218
15,48 22,24
5,31 107
Peciolo
T219
16,58 22,50
4,43 107
Peciolo
T220
16,53 23,72
1,87 107
Peciolo
T221
16,98 23,12
2,86 107
Peciolo
T222
16,62 23,99
1,55 107
Peciolo
T223
16,89 22,20
5,45 107
Peciolo
T224
15,94 21,59
8,36 107
Peciolo
T225
16,35 22,19
5,50 107
Peciolo
T226
15,53 23,86
1,69 107
Peciolo
T227
16,88 23,99
1,55 107
Peciolo
T228
16,70 22,16
5,61 107
Peciolo
T229
16,57 22,17
5,59 107
Peciolo
T230
16,80 23,99
1,55 107
Peciolo
T231
15,83 22,20
5,45 107
Peciolo
T232
15,87 22,86
3,42 107
Peciolo
T233
16,31 23,11
2,87 107
Peciolo
T234
15,89 22,88
3,37 107
Foliolo
T235
15,85 23,11
2,87 107
Foliolo
T236
15,46 21,55
8,65 107
Foliolo
T237
15,44 21,64
8,11 107
Foliolo
T238
16,71 23,10
2,90 107
Foliolo
T239
15,81 21,41
9,50 107
Foliolo
T240
16,60 21,64
8,11 107
Foliolo
T241
16,73 24,19
1,34 107
Foliolo
T242
15,67 24,19
1,34 107
Foliolo
T243
15,93 21,64
8,11 107
Foliolo
T244
16,32 22,15
5,66 107
Foliolo
T245
15,72 22,88
3,37 107
Foliolo
T246
15,75 24,19
1,34 107
Foliolo
T247
15,79 22,11
5,80 107
Foliolo
T248
15,60 22,88
3,37 107
Foliolo
T249
15,82 22,59
4,16 107
Foliolo
T250
16,99 24,19
1,34 107

RT-PCR
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Positivo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo

156

Deteccin y cuantificacin del Potato yellow vein virus (PYVV) en aislamientos

de diferentes rganos de Solanum tuberosum Grupo Phureja

Tabla Anexo G 1. Continuacin

Sintomatologa
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada

rgano
Extracto Ct (COX) Ct(CP) Copias CP
Foliolo
T251
16,39 21,90
6,73 107
Foliolo
T252
16,73 22,97
3,17 107
Foliolo
T253
16,36 22,88
3,37 107
Foliolo
T254
15,99 22,88
3,37 107
Foliolo
T255
16,48 22,58
4,18 107
Foliolo
T256
16,42 23,08
2,93 107
Foliolo
T257
16,94 22,92
3,28 107
Foliolo
T258
15,45 21,99
6,32 107
Raz primaria
T259
16,60 22,92
3,28 107
Raz primaria
T260
16,73 22,02
6,19 107
Raz secundaria
T261
15,67 23,48
2,21 107
Raz secundaria
T262
15,93 24,24
1,30 107
Raz secundaria
T263
16,32 22,97
3,18 107
Raz secundaria
T264
15,72 21,57
8,52 107
Raz secundaria
T265
15,75 21,80
7,25 107
Raz secundaria
T266
15,79 23,59
2,05 107
Raz secundaria
T267
15,60 22,13
5,74 107
Tallo
T119
16,63 21,46
9,17 107
Tallo
T120
16,34 22,28
5,17 107
Tallo
T121
16,64 20,65
1,62 108
Tallo
T122
16,22 20,65
1,63 108
Tallo
T123
15,49 20,47
1,84 108
Tallo
T124
15,37 19,76
3,04 108
Tallo
T125
16,86 20,28
2,11 108
Peciolo
T126
16,73 21,45
9,24 107
Peciolo
T127
15,68 21,36
9,86 107
Peciolo
T128
15,32 20,27
2,12 108
Peciolo
T129
15,64 19,59
3,42 108
Peciolo
T130
15,73 19,51
3,64 108
Peciolo
T131
15,41 18,91
5,55 108
Peciolo
T132
15,53 21,38
9,69 107
Peciolo
T133
15,40 20,44
1,88 108
Peciolo
T134
15,83 21,35
9,96 107
Peciolo
T135
15,64 19,55
3,53 108
Peciolo
T136
15,78 19,14
4,72 108
Peciolo
T137
16,42 20,73
1,54 108
Peciolo
T138
16,27 19,20
4,52 108
Peciolo
T139
16.00 19,84
2,88 108
Peciolo
T140
15,52 19,02
5,13 108
Peciolo
T141
16,97 21,57
8,51 107
Peciolo
T142
15,39 20,63
1,65 108
Peciolo
T143
15,69 19,02
5,13 108
Peciolo
T144
15,64 20,32
2,05 108
Peciolo
T145
15,49 20,40
1,94 108
Peciolo
T146
15,85 18,68
6,50 108
Peciolo
T147
16,36 21,63
8,14 107
Peciolo
T148
15,48 18,68
6,50 108
Peciolo
T149
15,76 19,22
4,45 108
Peciolo
T150
15,57 18,68
6,50 108
Peciolo
T151
15,91 18,61
6,85 108
Peciolo
T152
16,60 19,09
4,87 108
Foliolo
T153
15,34 21,48
9,09 107
Foliolo
T154
15,99 19,26
4,33 108
Foliolo
T155
16,37 17,67
1,33 109
Foliolo
T156
15,30 18,56
7,08 108
Foliolo
T157
15,51 18,53
7,21 108
Foliolo
T158
15,60 20,73
1,54 108
Foliolo
T159
15,26 17,10
1,98 109
Foliolo
T160
15,85 20,73
1,54 108
Foliolo
T161
16,92 18,41
7,85 108
Foliolo
T162
16,36 20,73
1,54 108
Foliolo
T163
15,83 18,65
6,63 108

RT-PCR
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Negativo
Positivo

Anexo G. Resultados artculo 2. PCR en tiempo real para la deteccin y

cuantificacin del gen de la protena mayor de la cpside del Potato yellow
vein virus (PYVV) en diferentes rganos de plantas de Solanum tuberosum
Grupo Phureja infectadas con el virus
Tabla Anexo G 1. Continuacin
Sintomatologa
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa

rgano
Extracto Ct (COX) Ct(CP) Copias CP
Foliolo
T164
15,42 17,45
1,55 109
Foliolo
T165
15,91 18,53
7,21 108
Foliolo
T166
15,67 18,62
6,79 108
Foliolo
T167
15,31 18,37
8,11 108
Foliolo
T168
16,35 17,95
1,09 109
Foliolo
T169
15,81 17,34
1,67 109
Foliolo
T170
15,56 17,55
1,44 109
Foliolo
T171
15,89 21,48
9,09 107
Foliolo
T172
15,61 19,30
4,21 108
Foliolo
T173
15,41 17,67
1,33 109
Foliolo
T174
15,41 17,72
1,28 109
Foliolo
T175
15,77 19,57
3,48 108
Foliolo
T176
16,35 19,57
3,48 108
Foliolo
T177
16,71 18,48
7,51 108
Foliolo
T178
15,38 17,51
1,48 109
Foliolo
T179
15,76 17,42
1,58 109
Pednculo floral
T180
15,66 18,21
9,04 108
Pednculo floral
T181
15,57 17,50
1,49 109
Pednculo floral
T182
15,89 17,71
1,29 109
Pednculo floral
T183
15,49 18,32
8,37 108
Pednculo floral
T184
15,30 18,25
8,83 108
Pednculo floral
T185
16,62 18,37
8,11 108
Ptalo
T186
15,56 18,30
8,48 108
Ptalo
T187
16,56 18,66
6,62 108
Ptalo
T188
16,40 19,93
2,69 108
Ptalo
T189
15,64 19,21
4,47 108
Ptalo
T190
15,99 18,97
5,29 108
Ptalo
T191
16,25 20,58
1,71 108
Antera
T192
15,67 22,05
6,06 107
Antera
T193
16,33 22,04
6,13 107
Antera
T194
16,45 21,92
6,65 107
Antera
T195
15,68 22,50
4,42 107
Antera
T196
16,73 22,78
3,63 107
Antera
16,58 24,57
1,03 107
T197
Raz primaria
15,62
21,80
7,23 107
T198
Raz primaria
16,48 20,78
1,48 108
T199
Raz primaria
16,39 21,44
9,31 107
T200
Raz primaria
16,38 21,55
8,65 107
T201
Raz primaria
16,32 20,16
2,29 108
T202
Raz primaria
16,73 21,57
8,52 107
T203
Raz secundaria
15,39 21,27
1,05 108
T204
Raz secundaria
15,46 21,05
1,23 108
T205
Raz secundaria
16,66 21,92
6,65 107
T206
Raz secundaria
16,28 21,82
7,13 107
T207
T1
Tallo
16,40 20,75
1,51 108
T2
Tallo
16,50 17,06
2,03 109
T3
Tallo
15,58 18,39
8,01 108
T4
Tallo
15,70 19,17
4,60 108
T5
Tallo
15,92 18,24
8,87 108
T6
Tallo
15,57 18,51
7,35 108
T7
Tallo
15,53 17,55
1,44 109
T8
Tallo
15,55 17,72
1,28 109
T9
Tallo
15,60 18,50
7,39 108
T10
Tallo
15,74 19,12
4,77 108
Peciolo
T11
15,53 16,95
2,20 109
Peciolo
T12
15,52 18,62
6,78 108
Peciolo
T13
16,59 18,25
8,82 108
Peciolo
T14
16,32 16,58
2,86 109

RT-PCR
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo

157

158

Deteccin y cuantificacin del Potato yellow vein virus (PYVV) en aislamientos

de diferentes rganos de Solanum tuberosum Grupo Phureja

Tabla Anexo G 1. Continuacin

Sintomatologa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa

rgano Extracto Ct (COX) Ct(CP) Copias CP

Peciolo
T15
15,45 18,51
7,31 108
Peciolo
T16
16,36 18,44
7,69 108
Peciolo
T17
15,26 16,59
2,84 109
Peciolo
T18
15,56 18,34
8,28 108
Peciolo
T19
15,88 18,73
6,30 108
Peciolo
T20
16,27 17,14
1,93 109
Peciolo
T21
15,65 18,47
7,56 108
Peciolo
T22
15,93 18,35
8,20 108
Peciolo
T23
15,84 18,48
7,47 108
Peciolo
T24
15,71 17,96
1,08 109
Peciolo
T25
15,80 17,40
1,60 109
Peciolo
T26
15,43 17,05
2,05 109
Peciolo
T27
15,59 18,07
9,97 108
Peciolo
T28
15,74 18,56
7,08 108
Peciolo
T29
15,83 18,30
8,49 108
Peciolo
T30
15,80 18,38
8,03 108
Peciolo
T31
15,64 17,57
1,42 109
Peciolo
T32
15,92 21,27
1,05 108
Peciolo
T33
15,64 19,03
5,08 108
Peciolo
T34
15,43 17,95
1,09 109
Peciolo
T35
16,25 18,90
5,58 108
Peciolo
T36
15,81 16,71
2,60 109
Peciolo
T37
15,50 17,27
1,76 109
Peciolo
T38
15,27 19,00
5,19 108
Peciolo
T39
15,50 18,23
8,94 108
Peciolo
T40
15,94 17,13
1,94 109
Peciolo
T41
15,26 16,29
3,50 109
Peciolo
T42
15,37 17,73
1,27 109
Peciolo
T43
15,47 21,42
9.42 107
Peciolo
T44
15,40 17,49
1,50 109
Peciolo
T45
15,47 21,36
9,81 107
Peciolo
T46
15,43 20,16
2,30 108
Peciolo
T47
15,58 21,08
1,20 108
Peciolo
T48
15,89 19,28
4,28 108
Peciolo
T49
16,26 20,27
2,12 108
Foliolo
T50
16,42 18,32
8,40 108
Foliolo
T51
15,30 18,56
7,08 108
Foliolo
T52
15,34 16,17
3,80 109
Foliolo
T53
16,77 18,44
7,69 108
Foliolo
T54
15,84 18,44
7,69 108
Foliolo
T55
15,89 17,55
1,44 109
Foliolo
T56
15,59 18,34
8,27 108
Foliolo
T57
15,49 18,80
5,96 108
Foliolo
T58
15,33 16,62
2,77 109
Foliolo
T59
15,76 18,51
7,35 108
Foliolo
T60
15,47 17,28
1,75 109
Foliolo
T61
15,80 18,55
7,12 108
Foliolo
T62
15,19 17,14
1,92 109
Foliolo
T63
16,86 18,38
8,06 108
Foliolo
T64
15,33 18,20
9,11 108
Foliolo
T65
16,29 18,28
8,60 108
Foliolo
T66
15,40 18,54
7,16 108
Foliolo
T67
15,56 18,00
1,05 109
Foliolo
T68
15,70 18,11
9,71 108
Foliolo
T69
15,65 17,42
1,58 109
Foliolo
T70
15,31 17,28
1,75 109
Foliolo
T71
15,84 18,50
7,41 108
Foliolo
T72
15,55 18,65
6,63 108
Foliolo
T73
15,54 18,15
9,44 108
Foliolo
T74
15,34 16,48
3,06 109
Foliolo
T75
15,55 19,09
4,89 108
Foliolo
T76
15,79 17,78
1,23 109

RT-PCR
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Negativo

Anexo G. Resultados artculo 2. PCR en tiempo real para la deteccin y

cuantificacin del gen de la protena mayor de la cpside del Potato yellow
vein virus (PYVV) en diferentes rganos de plantas de Solanum tuberosum
Grupo Phureja infectadas con el virus

159

Tabla Anexo G 1. Continuacin

Sintomatologa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa

rgano
Extracto Ct (COX) Ct(CP) Copias CP
Foliolo
T77
15,84 19,23
4,42 108
Foliolo
T78
15,47 17,52
1,47 109
Foliolo
T79
15,75 18,03
1,03 109
Foliolo
T80
15,82 17,93
1,10 109
Foliolo
T81
15,70 17,52
1,47 109
Foliolo
T82
16,31 19,76
3,05 108
Foliolo
T83
15,96 21,19
1,11 108
Foliolo
T84
15,59 21,05
1,23 108
Foliolo
T85
15,70 16,26
3,57 109
Raz primaria
T86
15,67 20,14
2,32 108
Raz primaria
T87
15,95 19,59
3,43 108
Raz primaria
T88
16,49 21,19
1,11 108
Raz primaria
T89
15,48 20,59
1,70 108
Raz primaria
T90
16,29 20,42
1,91 108
Raz primaria
T91
15,87 19,11
4,82 108
Raz primaria
T92
15,72 19,38
3,97 108
Raz primaria
T93
15,86 21,20
1,10 108
Raz primaria
T94
15,73 20,49
1,82 108
Raz secundaria
T95
15,35 20,62
1,66 108
Raz secundaria
T96
16,38 19,08
4,91 108
Raz secundaria
T97
15,58 19,24
4,39 108
Raz secundaria
T98
15,45 18,93
5,45 108
Raz secundaria
T99
15,70 21,51
8,89 107
Raz secundaria
T100
15,96 21,34
9,97 107
Raz secundaria
T101
15,44 21,42
9,44 107
Raz secundaria
T102
15,93 19,31
4,19 108
Raz secundaria
T103
15,97 19,75
3,06 108
Raz secundaria
T104
15,4 20,29
2,09 108
Raz secundaria
T105
15,97 21,40
9,62 107
Raz secundaria
T106
15,68 21,57
8,53 107
Raz secundaria
T107
15,85 20,38
1,96 108
Raz secundaria
T108
15,33 21,40
9,62 107
Raz secundaria
T109
15,71 19,80
2,95 108
Raz secundaria
T110
16,78 20,65
1,63 108
Raz secundaria
T111
16,25 21,58
8,46 107
Raz secundaria
T112
15,69 21,58
8,45 107
Pednculo floral
T113
15,89 20,21
2,22 108
Pednculo floral
T114
15,85 18,84
5,80 108
Ptalo
T115
15,46 19,43
3,83 108
Ptalo
T116
15,44 20,39
1,95 108
Antera
T117
16,71 21,64
8,11 107
Antera
T118
15,81 22,26
5,24 107

RT-PCR
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo

Anexo G.2: Resumen de resultados

Tabla Anexo G- 2. Resumen de los resultados de PCR en tiempo real para la estimacin del
nmero de copias del gen CP
Sintomatologa

No
Sintomtico

rgano

RTPCR

Tallo
Peciolo
Foliolo
Raz Primaria
Raz Secundaria

3
24
24
2
7

0/3
1/24
20/24
2/2
5/7

Citocromo oxidasa
Ct
Desviacin
Promedio
estndar

16,83
16,26
16,12
16,67
15,83

0,12
0,53
0,50
0,09
0,24

%CV

Promedio

0,72
3,27
3,08
0,55
1,52

23,70
22,95
22,70
22,47
22,82

Gen de la protena mayor de la cpside de PYVV

Ct
Nmero de copias
Desviacin
Desviacin
%CV
Promedio
estndar
estndar

0,73
0,83
0,88
0,64
1,01

3,06
3,62
3,88
2,84
4,44

2,06
3,77
4,56
4,74
4,32

107
107
7
10
107
107

9,99
2,11
2,54
2,06
2,84

106
107
7
10
107
107

%CV

27,95
11,41
11,40
30,73
24,81

160

Deteccin y cuantificacin del Potato yellow vein virus (PYVV) en aislamientos

de diferentes rganos de Solanum tuberosum Grupo Phureja

Tabla Anexo G - 2. Continuacin

Sintomatologa

Moderada

Severa

rgano

Tallo
Peciolo
Foliolo
Pednculo floral
Ptalo
Antera
Raz primaria
Raz secundaria
Tallo
Peciolo
Foliolo
Pednculo floral
Ptalo
Antera
Raz primaria
Raz secundaria

7
27
27
6
6
6
6
4
10
39
36
2
2
2
9
18

RTPCR
6/7
27/27
25/27
6/6

6/6
6/6
6/6
8/2
38/39
33/36
9/9
15/18
2/2
2/2
2/2

Citocromo oxidasa
Ct
Desviacin
Promedio
estndar

16,22
15,84
15,80
15,76
16,07
16,24
16,32
15,95
15,81
15,72
15,72
15,87
15,45
16,26
15,90
15,80

0,58
0,44
0,45
0,47
0,41
0,46
0,37
0,62
0,36
0,33
0,39
0,03
0,01
0,64
1,58
1,16

%CV

Promedio

3,58
2,78
2,84
2,96
2,54
2,82
2,28
3,91
2,26
2,11
2,49
0,18
0,09
3,91
4,72
6,18

20,79
19,94
18,75
18,06
19,28
22,64
21,22
21,51
18,50
18,39
18,17
19,53
19,91
21,95
20,23
20,55

Gen de la protena mayor de la cpside de PYVV

Ct
Nmero de copias
Desviacin
Desviacin
%CV
Promedio
estndar
estndar

0,83
1,04
1,30
1,67
0,84
1,00
0,62
0,42
1,03
1,34
1,08
0,96
0,68
0,44
0,75
0,98

3,99
5,20
6,95
9,25
4,37
4,41
2,92
1,97
5,57
7,26
5,96
4,94
3,40
2,00
3,71
4,76

1,67 10
3,37 108
8
8,43 10
1,04 109
8
4,88 10
4,65 107
8
1,19 10
9,15 107
8
9,00 10
9
1,12 10
9
1,20 10
8
4,01 10
8
2,89 10
6,68E+07
8
2,46 10
2,20 108

8,16
2,05
5,55
1,04
2,50
2,12
6,00
2,71
5,49
8,43
8,78
2,53
1,33
2,03
1,31
1,57

10
108
8
10
108
8
10
107
7
10
107
8
10
8
10
8
10
8
10
8
10
7
10
8
10
108

Anexo G.3: Resultados anlisis estadsticos

Anexo G.3.1: Comparacin para evaluar el efecto del nmero de
copias en RT-PCR
Mann Whitney rank sum test
data: COPIAS and PCR
U = 36.1969, df = 7, p-value = 0.0123

Anexo G.3.2: Comparacin para evaluar la acumulacin de PYVV

en plantas con diferente grado de intensidad de la
expresin de sntomas
-

Prueba de Mann Whitney

Mann Whitney rank sum test

data: COPIAS and CATEGORIA
U = 33.1436, df = 7, p-value = 1.49e-15

%CV

18,50
11,71
12,68
4,10
20,90
18,56
20,58
14,83
19,28
12,07
12,24
44,64
32,53
21,50
17,75
16,83

Anexo G. Resultados artculo 2. PCR en tiempo real para la deteccin y

cuantificacin del gen de la protena mayor de la cpside del Potato yellow
vein virus (PYVV) en diferentes rganos de plantas de Solanum tuberosum
Grupo Phureja infectadas con el virus

161

Anexo G.3.3: Comparacin para evaluar diferencias en el nmero

de copias entre plantas con diferente grado de intensidad
de expresin de sntomas
Tabla Anexo G- 3. Valores de p de la prueba Mann Whitney para evaluar las diferencias en carga
viral entre plantas con diferentes grado de intensidad de sntomas
No sintomtica
Sintomatologa Moderada
Sintomatologa Severa

No sintomtica
0.0022992
0.0000007

Sintomatologa Moderada
0.1207959

Sintomatologa Severa
-

Anexo G.3.4: Comparaciones entre rganos por planta

Tabla Anexo G- 4. Valores de p prueba Mann Whitney para la evaluar si se presentaba
diferencias en la carga viral en rganos dentro de una planta
Sintomatologa
Valor de p
No sintomtica
0.136
-7
Sintomatologa Moderada
8.9 10
Sintomatologa Severa
0.103
Tabla Anexo G- 5. Valores de p del contraste entre los rganos de la planta con sintomatologa
moderada. Las celdas en negrilla corresponden a las parejas que presentaron diferencias
estadsticamente significativas (p<0.05)
Foliolo
Peciolo
Pednculo floral
Ptalo
Raz Primaria
Raz Secundaria
Tallo

Antera
7.4 10-5
5.6 10-6
0.00013
0.00885
0.78000
0.65000
0.00312

Foliolo

Peciolo

Pednculo floral

Ptalo

Raz Primaria

Raz Secundaria

0.90321
1.00000
0.75350
0.00045
0.00369
0.05235

0.00081
1.00000
1.00000
0.04231
1.00000

0.22517
0.00053
0.00200
0.00070

1.00000
0.00063
0.00501

1.00000
1.00000

1.00000

.Tabla Anexo G- 6. Valores de p del contraste entre los rganos de la planta con sintomatologa
severa. Las celdas en negrilla corresponden a las parejas que presentaron diferencias
estadsticamente significativas (p<0.05)
Foliolo
Peciolo
Pednculo floral
Ptalo
Raz Primaria
Raz Secundaria
Tallo

Antera
0.0038896
0.0048073
0.0099978
0.0099998
0.0099998
0.8110348
0.0099999

Foliolo

Peciolo

Pednculo floral

Ptalo

Raz Primaria

Raz Secundaria

0.9997866
0.7980644
0.6690065
0.1378152
0.2158231
0.9453644

0.8686979
0.7586575
0.3047982
0.0733825
0.9894701

0.0099999
0.0029999
0.0003999
0.9861907

1.0000000
1.0000000
0.9570846

1.0000000
0.5062931

0.2572929

Anexo H. Resultados artculo 3.

Anexo H.1: Determinacin del nmero de copias del gen
CP de PYVV en muestras de brote de tubrculo.
Tabla Anexo H - 1: Determinacin del nmero de copias del gen CP de PYVV y resultados de
RT-PCR en muestras de S. tuberosum Grupo Phureja en muestras de brote de tubrculo
Sintomatologa
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica

Planta

P1

Tubrculo
T1
T2
T3
T4
T1
T2
T3
T4
T5
T6

T1
P2

T2
T3
T1
T2
T3

T4

P3

T5

T6

T7
T8
T9
T10

Brote
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B7
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B1
B2
B3
B4
B1
B2
B3
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B1
B1
B1
B1

Extracto
Q302
Q303
Q304
Q305
Q306
Q307
Q308
Q309
Q310
Q311
Q312
Q313
Q314
Q315
Q316
Q317
Q318
Q319
Q320
Q321
Q322
Q323
Q324
Q325
Q326
Q327
Q328
Q329
Q330
Q331
Q332
Q333
Q334
Q335
Q336
Q337
Q338
Q339
Q340
Q341
Q342
Q343
Q344

Ct(COX)
16,40
16,50
15,58
15,70
15,92
15,57
15,53
15,55
15,60
15,74
15,53
15,52
16,59
16,32
15,45
16,36
15,26
15,56
15,88
16,27
15,65
15,93
15,84
15,71
15,80
15,43
15,59
15,74
15,83
15,80
15,64
15,92
15,64
15,43
16,25
15,81
15,50
15,27
15,50
15,94
15,26
15,37
15,47

Ct(CP)
24,67
24,53
24,46
24,55
22,40
22,79
24,75
24,76
24,41
24,77
24,87
24,91
24,46
24,72
NA
22,92
24,71
24,49
23,4
24,79
24,75
24,78
24,16
24,86
22,74
24,41
23,11
24,27
23,91
24,74
23,99
23,71
23,47
23,15
23,17
24,61
24,16
23,09
22,67
24,91
24,63
23,63
24,91

Copias CP
9,59 106
1,06 107
1,11 107
1,04 107
4,74 107
3,59 107
9,08 106
9,02 106
1,15 107
8,96 106
8,31 106
8,08 106
1,11 107
9,26 106
NA
3,29 107
9,29 106
1,09 107
2,35 107
8,84 106
9,08 106
8,88 106
1,37 107
8,40 106
3,73 107
1,15 107
2,87 107
1,27 107
1,64 107
9,13 106
1,55 107
1,88 107
2,23 107
2,80 107
2,75 107
1,00 107
1,37 107
2,92 107
3,91 107
8,09 106
9,89 106
2,00 107
8,09 106

RT-PCR
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo

164

Deteccin y cuantificacin del Potato yellow vein virus (PYVV) en aislamientos

de diferentes rganos de Solanum tuberosum Grupo Phureja

Tabla Anexo H-1. Continuacin

Sintomatologa
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica

Planta
P3

Tubrculo
T11
T12
T1

T2

T3

P4

T4

T5
T6
T7
T8
T9
T10
T11
T12

T1

P5

T2
T3
T4
T5
T6

P6

T1
T1
T2
T3

T4

T5
P7
T6

T7

T8

Brote
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B1
B1
B2
B3
B4
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B1
B1
B2
B3
B4
B5

Extracto
Q345
Q346
Q347
Q348
Q349
Q350
Q351
Q352
Q353
Q354
Q355
Q356
Q357
Q358
Q359
Q360
Q361
Q362
Q363
Q364
Q365
Q366
Q367
Q368
Q369
Q370
Q371
Q372
Q373
Q374
Q375
Q376
Q377
Q378
Q379
Q380
Q381
Q382
Q383
Q384
Q385
Q386
Q387
Q388
Q389
Q390
Q391
Q392
Q393
Q394
Q395
Q396
Q397
Q398
Q399
Q400
Q401
Q402
Q403
Q404
Q405
Q406

Ct(COX)
15,40
15,47
15,43
15,58
15,89
16,26
16,42
15,30
15,34
16,77
15,84
15,89
15,59
15,49
15,33
15,76
15,47
15,80
15,19
16,86
15,33
16,29
15,40
15,56
15,70
15,65
15,31
15,84
15,55
15,54
15,34
15,55
15,79
15,84
15,47
15,75
15,82
15,70
16,31
15,96
15,59
15,70
15,67
15,95
16,49
15,48
16,29
15,87
15,72
15,86
15,73
15,35
16,38
15,58
15,45
15,70
15,96
15,44
15,93
15,97
15,40
15,97

Ct(CP)
24,67
24,92
24,86
24,62
24,72
24,96
24,46
22,69
23,60
25,09
25,29
25,06
21,86
25,27
25,68
26,18
26,04
24,96
26,34
26,32
25,97
27,24
25,84
24,92
25,17
23,57
25,03
25,62
23,56
25,05
24,44
22,62
22,76
23,94
24,61
22,75
24,79
24,79
24,63
24,94
24,79
24,84
24,81
24,47
25,13
24,83
23,58
25,25
25,04
22,46
24,85
24,27
24,09
25,02
24,58
24,69
25,43
24,76
25,12
25,13
25,23
25,60

Copias CP
9,59 106
8,06 106
8,39 106
9,96 106
9,26 106
7,81 106
1,11 107
3,87 107
2,04 107
7,13 106
6,19 106
7,30 106
6,93 107
6,27 106
4,72 106
3,31 106
3,66 106
7,80 106
2,96 106
2,99 106
3,85 106
1,57 106
4,21 106
8,02 106
6,75 106
2,08 107
7,46 106
4,92 106
2,10 107
7,35 106
1,13 107
4,06 107
3,68 107
1,60 107
9,97 106
3,71 107
8,84 106
8,84 106
9,87 106
7,95 106
8,84 106
8,50 106
8,70 106
1,10 107
6,92 106
8,59 106
2,06 107
6,36 106
7,39 106
4,55 107
8,42 106
1,27 107
1,44 107
7,50 106
1,02 107
9,44 106
5,60 106
8,98 106
6,97 106
6,92 106
6,45 106
4,97 106

RT-PCR
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo

Anexo H. Resultados artculo 3. Evaluacin de la distribucin del Potato

yellow vein virus (PYVV) en brotes tubrculos de Solanum tumerosum Grupo
Phureja utilizando cuantificacin absoluta por la tcnica de PCR en tiempo
real (qPCR) con Sondas TaqMan.

165

Tabla Anexo H-1. Continuacin

Sintomatologa
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica

Planta

Tubrculo
T1
T2

P8
T3
T4
T5
P9

T1
T2
T1

T2
P10
T3
T4
T5
T6
T7
T1
T2
T3

P11

T4
T5
T6
T7
T8
T1
T2
T3
T4
T5
T6
T7

T8
P12
T9
T10
T11

P13

T12
T13
T14
T15
T16
T17
T18
T1

Brote
B1
B1
B2
B3
B4
B1
B1
B1
B2
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B1
B1
B1
B2
B3
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1

Extracto
Q407
Q408
Q409
Q410
Q411
Q412
Q413
Q414
Q415
Q1
Q2
Q3
Q4
Q5
Q6
Q7
Q8
Q9
Q10
Q11
Q12
Q13
Q14
Q15
Q16
Q17
Q18
Q19
Q20
Q21
Q22
Q23
Q24
Q25
Q26
Q27
Q28
Q29
Q30
Q31
Q32
Q33
Q34
Q35
Q36
Q37
Q38
Q39
Q40
Q41
Q42
Q43
Q44
Q45
Q46
Q47
Q48
Q49
Q50

Ct(COX)
15,68
15,85
15,33
15,71
16,78
16,25
15,69
15,89
15,85
15,46
15,44
16,71
15,81
16,76
16,97
16,76
16,77
15,49
15,3
16,47
15,7
15,89
16,83
15,48
16,58
16,53
16,98
16,62
16,89
15,94
16,35
15,53
16,88
16,7
16,57
16,8
15,83
15,87
16,31
15,89
15,85
15,46
15,44
16,71
15,81
16,6
16,73
15,67
15,93
16,32
15,72
15,75
15,79
15,6
15,82
16,99
16,39
16,73
16,36

Ct(CP)
25,13
24,27
23,09
23,13
23,13
22,44
24,62
25,13
25,17
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
26,10
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
28,00
28,19
28,37
28,17
NA
NA
NA
NA
NA
NA
28,30
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA

Copias CP
6,92 106
1,27 107
2,92 107
2,84 107
2,84 107
4,61 107
9,91 106
6,92 106
6,73 106
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
3,50 106
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
9,22 105
8,06 105
7,07 105
8,17 105
NA
NA
NA
NA
NA
NA
7,43 105
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA

RT-PCR
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo

166

Deteccin y cuantificacin del Potato yellow vein virus (PYVV) en aislamientos

de diferentes rganos de Solanum tuberosum Grupo Phureja

Tabla Anexo H-1. Continuacin

Sintomatologa
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica

Planta

Tubrculo

P13

T2

T1
T2

T3
P14
T4
T5
T6
T7
T1
T2
T3
P15
T4

T1
T2

T3

P16

T4

T5

P17

T6
T7
T1
T2
T3
T4
T5

T6

T1

T2
P18
T3
T4
T5

Brote
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B1
B1
B2
B1

Extracto
Q51
Q52
Q53
Q54
Q55
Q56
Q57
Q58
Q59
Q60
Q61
Q62
Q63
Q64
Q65
Q66
Q67
Q68
Q69
Q70
Q71
Q72
Q73
Q74
Q75
Q76
Q77
Q78
Q79
Q80
Q81
Q82
Q83
Q84
Q85
Q86
Q87
Q88
Q89
Q90
Q91
Q92
Q93
Q94
Q95
Q96
Q97
Q98
Q99
Q100
Q101
Q102
Q103
Q104
Q105
Q106
Q107
Q108
Q109
Q110
Q111
Q112
Q113

Ct(COX)
15,99
16,48
16,42
16,94
15,45
16,6
16,73
15,67
15,93
16,32
15,72
15,75
15,79
15,60
16,63
16,34
16,64
16,22
15,49
15,37
16,86
16,73
15,68
15,32
15,64
15,73
15,41
15,53
15,40
15,83
15,64
15,78
16,42
16,27
16,00
15,52
16,97
15,39
15,69
15,64
15,49
15,85
16,36
15,48
15,76
15,57
15,91
16,60
15,34
15,99
16,37
15,30
15,51
15,60
15,26
15,85
16,92
16,36
15,83
15,42
15,91
15,67
15,31

Ct(CP)
27,71
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
26,04
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
28,21
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
28,29
28,38
27,43
28,22
28,11
NA
NA
NA
NA

Copias CP
1,13 106
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
3,66 106
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
7,95 105
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
7,50 105
7,04 105
1,37 106
7,89 105
8,50 105
NA
NA
NA
NA

RT-PCR
Positivo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Positivo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo

Anexo H. Resultados artculo 3. Evaluacin de la distribucin del Potato

yellow vein virus (PYVV) en brotes tubrculos de Solanum tumerosum Grupo
Phureja utilizando cuantificacin absoluta por la tcnica de PCR en tiempo
real (qPCR) con Sondas TaqMan.

167

Tabla Anexo H-1. Continuacin

Sintomatologa
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica

Planta

Tubrculo

P18

T6

P19

P20

T1
T2
T3
T4
T5
T1

T2

T3
T4
T1
T2
T3
P21
T4
T5
T6
T1
T2
T3

P22

T4
T5
T6
T7
T8
T1
T2

T3
P23
T4
T5
T6
T7
T1

P24

T2
T3
T4
T5
T6
T7
T8

Brote
B1
B2
B3
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B1
B1
B2
B3
B4
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B1
B1

Extracto
Q114
Q115
Q116
Q117
Q118
Q119
Q120
Q121
Q122
Q123
Q124
Q125
Q126
Q127
Q128
Q129
Q130
Q131
Q132
Q133
Q134
Q135
Q136
Q137
Q138
Q139
Q140
Q141
Q142
Q143
Q144
Q145
Q146
Q147
Q148
Q149
Q150
Q151
Q152
Q153
Q154
Q155
Q156
Q157
Q158
Q159
Q160
Q161
Q162
Q163
Q164
Q165
Q166
Q167
Q168
Q169
Q170
Q171
Q172

Ct(COX)
16,35
15,81
15,56
15,89
15,61
15,41
15,41
15,77
16,35
16,71
15,38
15,76
15,66
15,57
15,89
15,49
15,30
16,62
15,56
16,56
16,40
15,64
15,99
16,25
15,67
16,33
16,45
15,68
16,73
16,58
15,62
16,48
16,39
16,38
16,32
16,73
15,39
15,46
16,66
16,28
16,40
16,50
15,58
15,70
15,92
15,57
15,53
15,55
15,60
15,74
15,53
15,52
16,59
16,32
15,45
16,36
15,26
15,56
15,88

Ct(CP)
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
28,12
NA
NA
26,60
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
28,21
NA
NA
NA
NA
27,33
NA
NA
28,15
NA
NA
NA
NA
NA
28,07
NA
NA
NA
NA
28,12
NA
NA
NA
NA
NA
26,60

Copias CP
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
8,43 105
NA
NA
2,47 106
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
7,93 105
NA
NA
NA
NA
1,47 106
NA
NA
8,25 105
NA
NA
NA
NA
NA
8,75 105
NA
NA
NA
NA
8,46 105
NA
NA
NA
NA
NA
2,46 106

RT-PCR
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo

168

Deteccin y cuantificacin del Potato yellow vein virus (PYVV) en aislamientos

de diferentes rganos de Solanum tuberosum Grupo Phureja

Tabla Anexo H-1. Continuacin

Sintomatologa
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica

Planta
P24

P25

Tubrculo
T9
T10
T1
T2
T3
T4
T5
T1

T2

P26

T3
T4
T5
T6
T1
T2
T3

P27
T4
T5
T6
T7
T8
T1
T2
T3
T4

T6

P28

T7
T8
T9
T10
T11

T12

P29

T13
T14
T15
T16
T17
T1

Brote
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B1
B1
B1
B1
B1
B1

Extracto
Q173
Q174
Q175
Q176
Q177
Q178
Q179
Q180
Q181
Q182
Q183
Q184
Q185
Q186
Q187
Q188
Q189
Q190
Q191
Q192
Q193
Q194
Q195
Q196
Q197
Q198
Q199
Q200
Q201
Q202
Q203
Q204
Q205
Q206
Q207
Q208
Q209
Q210
Q211
Q212
Q213
Q214
Q215
Q216
Q217
Q218
Q219
Q220
Q221
Q222
Q223
Q224
Q225
Q226
Q227
Q228
Q229
Q230
Q231
Q232
Q233
Q234
Q235

Ct(COX)
16,27
15,65
15,93
15,84
15,71
15,80
15,43
15,59
15,74
15,83
15,80
15,64
15,92
15,64
15,43
16,25
15,81
15,50
15,27
15,50
15,94
15,26
15,37
15,47
15,40
15,47
15,43
15,58
15,89
16,26
16,42
15,30
15,34
16,77
15,84
15,89
15,59
15,49
15,33
15,76
15,47
15,80
15,19
16,86
15,33
16,29
15,40
15,56
15,70
15,65
15,31
15,84
15,55
15,54
15,34
15,55
15,79
15,84
15,47
15,75
15,82
15,70
16,31

Ct(CP)
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA

Copias CP
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA

RT-PCR
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo

Anexo H. Resultados artculo 3. Evaluacin de la distribucin del Potato

yellow vein virus (PYVV) en brotes tubrculos de Solanum tumerosum Grupo
Phureja utilizando cuantificacin absoluta por la tcnica de PCR en tiempo
real (qPCR) con Sondas TaqMan.

169

Tabla Anexo H-1. Continuacin

Sintomatologa
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica

Planta

Tubrculo
T2

T3

P29

T4
T5
T6
T7
T8
T9
T10
T11

T1
P30
T2
T3
T4
T1

P31

P32

T2

T1

T2
T1

P33

T2

T4

P35

T1
T1
T2
T3

T1
P36

T2
T3
T4
T5

Brote
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B1
B2
B1
B2
B1
B1
B2
B1
B2
B3
B4
B1
B1
B1
B1

Extracto
Q236
Q237
Q238
Q239
Q240
Q241
Q242
Q243
Q244
Q245
Q246
Q247
Q248
Q249
Q250
Q251
Q252
Q253
Q254
Q255
Q256
Q257
Q258
Q259
Q260
Q261
Q262
Q263
Q264
Q265
Q266
Q267
Q268
Q269
Q270
Q271
Q272
Q273
Q274
Q275
Q276
Q277
Q278
Q279
Q280
Q281
Q282
Q283
Q284
Q285
Q286
Q287
Q288
Q289
Q290
Q291
Q292
Q293
Q294

Ct(COX)
15,96
15,59
15,7
15,67
15,95
16,49
15,48
16,29
15,87
15,72
15,86
15,73
15,35
16,38
15,58
15,45
15,70
15,96
15,44
15,93
15,97
15,40
15,97
15,68
15,85
15,33
15,71
16,78
16,25
15,69
15,89
15,85
15,46
15,44
16,71
15,81
16,76
16,97
16,76
16,77
15,49
15,30
16,47
15,70
15,89
16,83
15,48
16,58
16,53
16,98
16,62
16,89
15,94
16,35
15,53
16,88
16,70
16,57
16,80

Ct(CP)
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
28,00
NA
28,26
NA
NA
NA
27,19
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
27,96
NA
28,15
NA
27,44
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA

Copias CP
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
9,17 105
NA
7,63 105
NA
NA
NA
1,62 106
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
9,44 105
NA
8,24 105
NA
1,36 106
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA

RT-PCR
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo

170

Deteccin y cuantificacin del Potato yellow vein virus (PYVV) en aislamientos

de diferentes rganos de Solanum tuberosum Grupo Phureja

Tabla Anexo H-1. Continuacin

Sintomatologa
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica

Planta
P37

P38

Tubrculo
T1
T1

T2

Brote
B1
B2
B1
B2
B3
B4
B5

Extracto
Q295
Q296
Q297
Q298
Q299
Q300
Q301

Ct(COX)
15,83
15,87
16,31
15,89
15,85
15,46
15,44

Ct(CP)
NA
NA
NA
26,44
NA
NA
NA

Copias CP
NA
NA
NA
2,76 106
NA
NA
NA

RT-PCR
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo

NA corresponde a muestras que resultaron negativas.

Anexo H.2: Resumen de resultados

Tabla Anexo H - 2: Resmen de resultados obtenidos en la estimacin del nmero de copias gen
de la protena mayor de la cpside de PYVV en muestras de brotes de tubrculo
No sintomtica Sintomtica
n
301
114
Promedio
15.95
15.76
Ct(COX)
Desviacin estndar
0.49
0.36
%CV
3.06
2.27
Promedio
27.73
24.45
Ct(CP)
Desviacin estndar
0.72
0.97
%CV
2.58
3.95
6
7
1.29 10
1.43 10
Nmero de Promedio
5
7
copias del Desviacin estndar
8.44 10
1.18 10
gen CP
%CV
3.78
7.70

Anexo I. Presentaciones en congresos

Anexo I.1: Resmen presentacin en el IV Simposio
Nacional de Virologa. Red Colombiana de Virologa.
Medelln, Colombia. 2011.
Ttulo: Cuantificacin absoluta del Potato yellow vein virus (PYVV) en brotes de
tubrculos de Solanum tumerosum Grupo Phureja utilizando la tcnica de PCR en tiempo
real (qPCR) con Sondas TaqMan.
Autores: Anngie Katherine Hernndez Guzmn1, Liliana Franco-Lara2 y Mara Mnica
Guzmn Barney1.3.
Correspondencia: mmguzmanb@unal.edu.co
Instituciones: Universidad Nacional de Colombia, Sede Bogot 1. Universidad Militar
Nueva Granada 2. Coordinadora Laboratorio de Virus Vegetales Instituto de
Biotecnologa-UNAL3
Resumen estructurado:
Introduccin: Potato yellow vein virus (PYVV) es un virus de la familia Closteroviridae y
del gnero Crinivirus, su genoma es ssRNA(+) y tripartito. Es transmitido por Trialurodes
vaporariorum y tubrculos, en la actualidad se encuentra en Colombia y pases vecinos
(Per, Ecuador y Venezuela). La sintomatologa producida es amarillamiento foliar y
reduccin en la produccin.
Objetivo General: Detectar PYVV en muestras de brotes de tubrculos de plantas de S.
tuberosum Grupo Phureja (sintomticas y no sintomticas) por la tcnica de qPCR
utilizando la qumica de sondas TaqMan.
Metodologa: Se evaluaron 417 muestras de brotes de tubrculo, 114 brotes provenan
de plantas sintomticas (S) para PYVV (52 tubrculos/8 plantas) y 303 de plantas no
sintomticas (NS) (184 tubrculos/31 plantas), se evaluaron de uno a siete brotes por
cada tubrculo. A cada muestra se le hizo extraccin de RNA con fenol/cloroformo Sephadex G-50. Los brotes fueron evaluados por RT-PCR amplificando el gen de la
protena mayor de la cpside (CP) y de acuerdo a estos resultados se clasificaron en
cuatro categoras: brotes RTPCR negativo provenientes de plantas NS (B-NS: 301
brotes), brotes RTPCR negativos provenientes de plantas S (B-S: 1 brote), brotes RT
PCR positivo provenientes de plantas NS (B+NS: 2 brotes) y brotes RTPCR positivos
provenientes de plantas S (B+S: 113 brotes). Posteriormente, se analizaron por qPCR
con sondas TaqMan utilizando iniciadores para el gen CP y como control interno un gen

172

Deteccin y cuantificacin del Potato yellow vein virus (PYVV) en aislamientos

de diferentes rganos de Solanum tuberosum Grupo Phureja

de expresin constitutiva de la planta (citocromo oxidasa). Para determinar la carga viral

se hizo una curva estndar utilizando diferentes concentraciones de transcritos del gen
CP. Finalmente se analizaron las diferencias en las cargas virales entre las cuatro
categoras, entre los tubrculos provenientes de una misma planta y entre los brotes
provenientes de un mismo tubrculo, utilizando ANOVA seguida de una prueba de t con
ajuste de Tukey (Software R).
Resultados y Conclusiones: Por RT-PCR el 98% de los brotes provenientes de plantas S
fueron positivos (113 brotes), solamente el 1% de los brotes provenientes de plantas NS
(2 brotes) fueron positivos por RT-PCR. Por qPCR los rangos de carga viral estuvieron
entre 3.46X102 y 6.01X108, observndose que los brotes provenientes de plantas NS
presentaron menor carga viral con respecto a los provenientes de plantas S (log nmero
de copias en brotes provenientes de plantas NS= 2.690.67, log nmero de copias en
brotes provenientes de plantas S= 6.021.76). Las diferencias entre los brotes de las
categoras B-NS, B+NS y B-S fueron estadsticamente significativas con respecto a las
cargas virales en los brotes de la categora B+S (p=2.4X107). De las muestras analizadas
el 3.6% de los brotes RT-PCR negativo que provenan de plantas no sintomticas (11
brotes) pudieron ser detectados como positivos por qPCR, las cargas virales de estas
muestras estaba entre 3.42X102 - 6.51X104, lo que demuestra que esta tcnica es ms
sensible para determinar la presencia de plantas NS, que tienen el virus aunque en bajo
nmero de copias. Tambin se evalu las diferencias en la carga viral de tubrculos de
una misma planta y en brotes de un mismo tubrculo; en ambos casos las diferencias no
fueron estadsticamente significativas (p>0.05), lo que sugiere que las cargas virales
entre tubrculos de una misma planta y entre brotes de un mismo tubrculo son
similares; este punto sigue siendo tema de investigacin por el grupo del laboratorio de
virus vegetales del IBUN-UNAL.
Palabras Claves: Potato yellow vein virus (PYVV), Solanum tuberosum Grupo Phureja,
PCR en tiempo real (qPCR), Tubrculos, Sondas Taqman, Cuantificacin Absoluta.
Nombre del expositor: Anngie Hernndez
Modalidad de presentacin: Poster
rea temtica: Virologa vegetal.

Anexo I. Presentaciones en Congresos

Anexo I.2: Resumenes de presentacines en el XXV

Congreso de la Asociacin Latinoamericana de la
Papa ALAP, Uberlandia, Brasil, 2012

173

174

Deteccin y cuantificacin del Potato yellow vein virus (PYVV) en aislamientos

de diferentes rganos de Solanum tuberosum Grupo Phureja

Anexo I. Presentaciones en Congresos

175

176

Deteccin y cuantificacin del Potato yellow vein virus (PYVV) en aislamientos

de diferentes rganos de Solanum tuberosum Grupo Phureja

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