Solubilización Alcalina

Solubilizacin alcalina
Solubilidad
La solubilidad es la medida de la capacidad de disolverse una cierta sustancia
en un determinado medio, a una temperatura y presin determinadas. Las
protenas en disolucin muestran grandes cambios en su solubilidad, en
funcin de:
concentraciones salinas,
disolventes orgnicos
pH
temperatura.
Estas variables que son el reflejo del hecho de que las protenas son
electrolitos de peso molecular muy grande, pueden utilizarse para separar
mezclas de protenas, ya que estas poseen una composicin en aminocidos
caracterstica, la cual determina su comportamiento como electrolito.
1. Concentraciones salinas: solubilizaran y precipitacin por salado. Las
sales neutras ejercen efectos pronunciados sobre la solubilidad de las
protenas globulares. A baja concentracin, las sales incrementan la
solubilidad de muchas protenas, fenmeno que recibe el nombre de
solubilidad por salado o salting in, en el que los contraiones adicionales
recubren con mayor eficacia las numerosas cargas inicas de las
molculas proteicas, con lo que se incrementa la solubilidad de las
protenas. Las sales de los iones divalentes tales como el K2SO4 y el
(NH4) SO4, son mucho ms eficaces en la Solubilizacin de las
protenas que las sales de iones monovalentes tales como el NaCl y el
KCl. Este efecto lo observamos en el siguiente grafico que muestra la
solubilidad de la carboxihemoglobina en su punto isoelctrico
dependiendo de la fuerza inica y del tipo de ion. S y S representan
respectivamente las solubilidades de la protena en la disolucin de la
sal y en el agua pura.
La capacidad de las sales neutras para influir en la solubilidad de las protenas

est en funcin de su fuerza inica, que constituye una medida tanto de la
concentracin como del nmero de las cargas elctricas existentes en los
cationes y los aniones aportados por la sal. El efecto de solubilidad por salado
est causado por cambios de la tendencia a la ionizacin, de los grupos R
disociables de la protena. Por otra parte, a medida que la fuerza inica
aumenta, la solubilidad de una protena comienza a disminuir. A una fuerza
inica lo suficientemente elevada, una protena puede ser casi completamente
precipitada de su disolucin, efecto llamado insolubilizacin por salado o salting
out, que es el resultado de la competencia por molculas de solvatacin entre
los iones salinos agregados y los otros solutos disueltos. Uno de los factores
que explican este efecto es que la concentracin elevada de la sal puede
eliminar el agua de hidratacin de las molculas de protena, reduciendo
entonces su solubilidad. La solubilizaran e insolubilizacin por salado, son
procedimientos importantes para la separacin de mezclas de protenas, ya
que las diferentes protenas varan en su respuesta frente a la concentracin de
sales neutras. Las protenas precipitadas por salado retienen su conformacin
nativa y pueden disolverse de nuevo, normalmente sin experimentar
desnaturalizacin. El sulfato amnico es el preferido para precipitar las
protenas por salado, debido a su gran solubilidad en agua, lo que permite
alcanzar fuerzas inicas muy elevadas.
Ecuacin de la precipitacin con sales:

Log S = A m [Sal]
Dnde:
S = Solubilidad de la protena a un valor dado de concentracin salina.
A = Constante que depende fuertemente del pH y la temperatura.
m = Pendiente de la curva de Solubilizacin por salado.
Esta constante usualmente toma un valor mnimo en el punto isoelctrico, es
caracterstica de cada protena e independiente del tipo de sal.
sta es independiente del pH y la temperatura, pero vara con el tipo de sal y
de protena. Las sales que contienen aniones polivalentes tales como sulfatos y
fosfatos tienen valores de m mayores que las sales univalentes. Los cationes
polivalentes como el calcio y el magnesio disminuyen el valor de m.
2. Disolventes orgnicos: La adicin de disolventes orgnicos neutros
miscibles con el agua, particularmente etanol o acetona, disminuye la
solubilidad de la mayor parte de las protenas globulares en el agua, de
tal manera que precipitan de su disolucin. El estudio cuantitativo de
este efecto muestra que la solubilidad de una protena a un pH y fuerza
inica determinados est en funcin de la constante dielctrica del
medio. Puesto que el etanol posee una constante dielctrica, menor que
la del agua su adicin a una disolucin acuosa de protena incrementa la
fuerza de atraccin entre las cargas opuestas, disminuyendo de este
modo el grado de ionizacin de los grupos R de la protena. Como
resultado, las molculas de protena tienden a agregarse y precipitan.
3. Efecto del pH: La solubilidad de la mayor parte de las protenas

globulares se halla profundamente influida por el pH del sistema..
Casi todas las protenas globulares muestran un mnimo de solubilidad,
aunque el pH al que ello ocurre vara de una protena a otra. El pH al
que una protena muestra un mnimo de solubilidad es su pH
isoelctrico, definido como aquel valor de pH al que la molcula no
posee carga elctrica y es incapaz de desplazarse en un campo
elctrico. En estas condiciones no existe repulsin electroesttica entre
molculas de protena vecinas y tienden a precipitar. Puesto que las
diferentes protenas poseen valores de pH isoelctrico tambin
diferentes, debido a que difieren en el contenido de aminocidos con
grupos R ionizables, con frecuencia pueden separarse unas de otras,
mediante precipitacin isoelctrica. Cuando el pH de una mezcla de
protenas se ajusta al pH isoelctrico de uno de sus componentes, la
mayor parte o casi todo el componente precipitara, quedando en la
disolucin las protenas cuyos valores de pH isoelctrico se hallen por
encima o por debajo de aquel. La protena isoelctrica precipitada
permanece en su conformacin nativa, y puede re disolverse en un
medio de pH apropiado y concentracin salina adecuada.
4. Efecto de la temperatura: Dentro de una fluctuacin limitada entre los 0
y los 40C aproximadamente, la mayor parte de la solubilidad de las
protenas globulares aumenta al aumentar la temperatura, aunque
existen algunas excepciones, como ocurre con los electrolitos sencillos.
Por encima de los 40 y los 50C, la mayor parte de las protenas
aumentan en inestabilidad y comienzan a desnaturalizarse,
generalmente con prdida de solubilidad en la zona neutra de pH.
Solubilizacin de protenas de protenas

La Solubilizacin de protenas tiene por objeto la purificacin de protenas
solubles y biolgicamente activas, y consiste esencialmente en la incubacin
de cuerpos de inclusin que contienen la protena de inters con un extracto
celular purificado.
La solubilidad de una protena est influenciada por los siguientes factores:
a) su composicin en aminocidos (una protena rica en aminocidos
polares es en general ms soluble que una rica en aminocidos
hidrofbicos)
b) su estructura tridimensional (las protenas fibrosas son en general
menos solubles que las globulares)
c) el entorno de la propia protena.
En este ltimo sentido, podemos decir que los principales factores ambientales
que influyen en la solubilidad de una protena son los siguientes:
La temperatura
la constante dielctrica del medio
El pH del mismo
La fuerza inica.
La temperatura tambin influye en la solubilidad de las protenas. Dentro de un

intervalo limitado, de 0 a 40C, la solubilidad de la mayora de las protenas se
incrementa al aumentar la temperatura. Cuando la temperatura aumenta
considerablemente y se sale del intervalo de mxima solubilidad, el efecto se
hace inverso y la protena se desnaturaliza con su consecuente precipitacin
(coagulacin). La mayora de las protenas se vuelven inestables
a temperaturas mayores de 40-50C. Pero la protena de la pota es algo
especial que soporta altas temperaturas y cambios de bruscos de pH.
Los disolventes influyen en la solubilidad de las protenas. Al aadir solventes
orgnicos disminuye la solubilidad de las protenas, ya que se reduce la
constante dielctrica del medio, es decir, se aumenta la fuerza de atraccin
entre los iones de las protenas aumentando la interaccin protena y
disminuyendo la interaccin protena agua.
El hidrxido de sodio (NaOH) es un slido blanco e industrialmente se utiliza
como disolucin al 50 % por su facilidad de manejo. Es soluble en agua,
desprendindose calor. Absorbe humedad y dixido de carbono del aire y es
corrosivo
de
metales
y
tejidos.
Se obtiene, principalmente por electrlisis de cloruro de sodio, por reaccin de
hidrxido de calcio y carbonato de sodio y al tratar sodio metlico con vapor de
agua a bajas temperaturas.
Se solubiliza en solucin bsica, debido a que las protenas marinas tienden a
solubilizar mejor en soluciones alcalinas.
Bibliografa
Underwood, Mick. (2003). Reception Studies: Morley en Comunication,
Culture and Media Studies. [En lnea]. Londres, disponible en:
http://www.cultsock.ndirect.co.uk/MUHome/cshtml/index.html [Accesado el
da 23 de marzo de 2004]

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