CAPTULO 26: INTRODUCCIN A LAS SEPARACIONES

CROMATOGRFICAS
PREGUNTAS Y PROBLEMAS:
26.1. Defina:
a) Elucin
Es un proceso en el cual las especies son lavadas a travs de una columna
cromatogrfica por el flujo o la adicin del solvente fresco.
b) Fase mvil
La fase mvil en cromatografa es el que los movimientos encima o a travs de una fase
inmvil que se fija en su lugar en una columna o en la superficie de una placa plana.
c) Fase estacionaria
La fase estacionaria en una columna cromatogrfica es un slido o lquido se fija en su
lugar. La fase mvil entonces pasa encima o a travs de la fase estacionaria.
d) Constante de distribucin
La constante distribucin K en cromatografa es la relacin de la concentracin del
analito en la fase estacionaria a su concentracin (actividad) en la fase mvil cuando
existe equilibrio entre las dos fases.
e) Tiempo de retencin
El tiempo de retencin para un analito es el intervalo de tiempo entre su inyeccin en
una columna y la aparicin de su pico en el otro extremo de la columna.
f) Factor de retencin
El factor k de retencin se define por la ecuacin:

k =K A V S /V M
KA

Donde

es la constante de distribucin de la especie

A ,

VS y

V M son los

volmenes de las fases estacionarias y mviles, respectivamente.

g) Factor de selectividad
El factor de selectividad de una columna hacia las especies A y B es dada por

=K B /K A , donde

KB

fuertemente sostenidas y

es la constante de distribucin de las especies ms

KA

es la constante de distribucin de las especies menos

fuertemente sostenidas.
h) Altura de pico
La altura
2

H= /L

de la placa de una columna cromatogrfica se define por la relacin

donde

es la varianza obtenida de la Gaussiana en forma de pico

cromatogrfico y L es la longitud de la columna en centmetros.

i) Difusin longitudinal
Es una fuente de banda ampliar en una columna en el cual un soluto difunde desde el
centro de concentracin de la banda a las regiones ms diluidas en ambos lados.
j) Difusin en remolino
Es un fenmeno en el cual las molculas de un analito llegan al final de una columna en
diferentes momentos como consecuencia de viajar a travs de la columna por las vas
que difieren en longitud.
k) Resolucin de la columna
La resolucin
ecuacin

Rs

de una columna hacia dos especies

Rs=2 Z /(W A + W B )

donde

entre los picos de las dos especies, y

B est dada por la

Z es la distancia (en unidades de tiempo)

WA

W B son las anchuras (tambin en

unidades de tiempo) de las cumbres en sus bases.

l) Eluyente
El eluyente en cromatografa es la nueva fase mvil que lleva el analito a travs de la
columna.
26.2. Describa el problema general de la elucin
El problema general de elucin surge cuando cromatogramas se obtuvieron en muestras
que contienen especies ampliamente con diferentes constantes de distribucin. Cuando
las condiciones son tales que las buenas separaciones de las especies ms fuertemente
retenidas se realizan, se observa la falta de resolucin entre las especies que se
encuentran dbilmente. Por el contrario, cuando se condiciones favorables que dan
separaciones satisfactorias de los compuestos dbilmente retenidas, banda severa
ampliacin y se encuentran largos tiempos de retencin para las especies fuertemente
unidos. El problema general de elucin se resuelve a menudo en la cromatografa de
lquido por gradiente de elucin en cromatografa de gases y por la programacin de la
temperatura.
26.3. Enumere las variables que originan el ensanchamiento de banda en
cromatografa.
Las variables que conducen a la zona de ensanchamiento incluyen (1) dimetro de
partcula grande para fases estacionarias; (2) columna de grandes dimetros; (3) altas
temperaturas (importantes solamente en GC); (4) para lquidos fases estacionarias,
gruesas capas del lquido inmovilizado; y (5) caudales muy altos o muy bajos.
26.4. Cules son las principales diferencias entre la cromatografa gas
lquido y lquido lquido?
En cromatografa de gas-lquido, las fases mviles son los gases, mientras que en
cromatografa de lquidos, son los lquidos.
26.5. Cules son las principales diferencias entre la cromatografa lquido
lquido y lquido slido?

En la cromatografa lquido-lquido, la fase estacionaria es un lquido que est

inmovilizado por adsorcin o unin qumica a una superficie slida. Los equilibrios que
causa la separacin son equilibrios de distribucin entre dos fases lquidas inmiscibles.
En la cromatografa lquido-slido, la fase estacionaria es una superficie slida y los
equilibrios implicados son equilibrios de adsorcin.
26.6. Qu variables tienen ms probabilidad de afectar al factor de
selectividad

correspondiente a un par de analitos?

Las variables que afectan el factor selectividad incluyen la composicin de la fase

mvil, la temperatura de la columna, la composicin de la fase estacionaria, y qumicas
interacciones entre la fase estacionaria y uno de los solutos estn separados.

26.7. Explique la manera en que se puede manipular el factor de retencin de

un soluto.
En GC, el factor de retencin se vara mediante el cambio de la temperatura de la
columna como se hace en la programacin de la temperatura. En LC, las variaciones se
logran mediante la alteracin de la composicin del disolvente como en el gradiente de
elucin.
26.8. Describa un mtodo para determinar el nmero de platos de una
columna.
El nmero de placas en una columna se puede determinar midiendo el tiempo de
retencin

tR

entonces

N=16 (t R /W )2 .

y la anchura de un pico en su base

W . El nmero de placas de

es

26.9. Mencione dos mtodos generales para mejorar la resolucin de dos

sustancias en la columna cromatogrfica.
La disminucin de las anchuras de los picos aumentar resolucin ser el aumento de la
separacin de los picos. El aumento de la separacin se puede hacer por el
alargamiento de la columna para aumentar el nmero de placas o el aumento de la
selectividad.
26.10. Por qu el mnimo en la grfica de la altura de plato frente a tasa de
flujo se encuentra a tasas de flujo menores en cromatografa de lquidos que
en cromatografa de gases?
Difusin longitudinal es mucho ms importante en GC que en LC. Difusin longitudinal
es una gran contribucin a H a velocidades de flujo bajas. Los descensos iniciales de H
en tramos de altura de la placa frente a la velocidad de flujo son, pues, en gran parte el
resultado de la difusin longitudinal. Debido a que los coeficientes de difusin gaseosa
son rdenes de magnitud ms grande que los valores de lquidos, el fenmeno se hace
evidente a velocidades de flujo ms altas en GC que en LC. El mnimo a veces no se
observa en todos en LC.

26.11. Qu es la elucin con gradiente?

La elucin en gradiente es un mtodo de llevar a cabo cromatografa de lquido en el
que la composicin de la fase mvil se cambia continuamente o en pasos con el fin de
optimizar las separaciones.
26.12. Elabore una lista de las variables cromatogrficas que causan la zona
de separacin.
La zona de separacin est influenciada por (1) embalaje que producen coeficientes de
distribucin que difieren significativamente; (2) incrementos en la longitud de la
columna; (3) variaciones en la composicin de la fase mvil (LC); (4) optimizacin de
temperatura de la columna (GC); (5) los cambios en el pH de la fase mvil (LC); (6)
incorporacin de una especie en la fase estacionaria que selectivamente complejos de
ciertos analitos (LC).
26.13. Qu efecto causara en un pico cromatogrfico introducir la muestra a
una velocidad demasiado baja?
Introduccin lenta de la muestra conduce a la ampliacin de la banda.

26.14. Los siguientes datos corresponden a una columna cromatogrfica de

lquidos:
Longitud del
relleno
Tasa de flujo

24.7 cm

VM

0.313 mL/min
1.37 mL

VS

0.164 mL

Un cromatograma de una mezcla de las especies A, B, C y D proporciona los siguientes

datos:
Tiempo de
retencin, min

Anchura del pico en

la base

( W ) , min

No retenida
A
B

3.1
5.4
13.3

0.41
1.07
1.16

14.1

1.72

21.6

1.72

Calcule

a) El nmero de platos para cada pico

Se emplea la siguiente ecuacin:

N=16 (t R/W )2

Para A,

N=16 (5.4 /0.41) 2=2775.49 2775

Para B,

N=16 (13.3/1.07)2=2472.04 2472

Para C,

N=16 (14.1/1.16)2=2363.97 2364

Para D,

N=16 (21.6 /1.72)2=2523.31 2523

b) La media y desviacin estndar de N

N=( 2775.49+2472.04 +2363.97+2523.31 ) /4=2533.70 2500

s=200
c) La altura de plato de la columna
Usando la ecuacin:

H=

H=L/ N

24.7 cm
=0.0097 cm
2534 platos

26.15. Con los datos del problema 26.14 calcule para A, B, C y D.

a) el factor de retencin
Para ello usamos la siguiente ecuacin:
Para A:

k A =( 5.4 3.1 ) /3.1=0.74

Para B:

k B=( 13.3 3.1 ) /3.1=3.3

Para C:

k C =( 14.1 3.1 ) /3.1=3.5

Para D:

k =( t R t M ) /t M

k D= ( 21.6 3.1 ) /3.1=6.0

b) La constante de distribucin
Para ello usamos la siguiente ecuacin:

K=[ ( t Rt M ) /t M ]
Para A:

1.37
= ( t t ) /t 8.35
0.164 [ R M M ]

( 5.4 3.1 ) /3.1 8.35=6.2

K=k ( V M /V S )

( 13.3 3.1 ) /3.1 8.35=27

Para B:

Para C:

( 14.1 3.1 ) /3.1 8.35=30

Para D:

( 21.6 3.1 ) /3.1 8.35=50

26.16. Con los datos del problema 26.14, calcule para las especies B y C
a) La resolucin
Se emplea la siguiente ecuacin:

Rs =

Rs =

2 [ ( t R )C ( t R )B ]
W B+ W C

2 ( 14.13.1 )
=0.72
( 1.07+1.16 )

b) El factor de selectividad

C ,B =

( t R )Ct M
=1.08
( t R ) Bt M

c) La longitud de columna necesaria para separar las dos especies con una resolucin
de 1.5.

( R s )1 N 1 0.717 2534
=
=
=
( R s )2 N 2 1.5
N2
N 2=2534

(1.5 )2
=11090 platos
( 0.717 )2

L=H N
Pero

H=0.0097 cm/ plato

L=0.0097 11090=108 cm

Entonces:

d) El tiempo necesario para separar las dos especies con una resolucin de 1.5.
2

( t R )1 ( R s )1 14.1 ( 0.717 )2
=
=
=
( t R )2 ( R s )22 ( t R )2 ( 1.5 )2

( 1.5 )2
( t R )2=14.1
=61.7 62 min
( 0.717 )2

26.17. Con los datos del problema 26.14 calcule para las especies C y D
a) La resolucin

Rs =

2 [ ( t R )D ( t R ) C ]
W C +W D

R s=2 ( 14.113.3 ) /(1.07+1.16)=0.72

b) La longitud de columna necesaria para separar las dos especies con una resolucin
de 1.5
2

( R s )1
( 1.5 )2
N 1=N 2
=2534

=210 platos
2
( 5.21 )2
( R s )2
L=H N =0.0097

cm
210 platos=2.0 cm
plato

26.18. Los siguientes datos se obtuvieron mediante cromatgrafo gas lquido

con una columna relativa de 40cm:
Compuesto
Aire
Metilciclohexa
no
Metilciclohexe
no
Tolueno

t R , min

W , min

1.9

10.0

0.76

10.9

0.82

13.4

1.06

Calcule:
a) El nmero de platos promedio a partir de los datos
3

N=2.7 10

b) La desviacin estndar para el promedio en a)

s=100
c) La altura de plato promedio para la columna

H=0.015
26.19. En relacin con el problema 26.18, calcule la resolucin para
a) Metilciclohexano y metilciclohexeno:
b) Metilciclohexeno y tolueno:

Rs =2.7

c) Metilciclohexano y tolueno:

Rs =3.7

Rs =1.1

26.20. Si fuera necesaria una resolucin de 1.5 para separar metilciclohexano

y metilciclohexeno en el problema 26.18,
a) Cuntos platos se necesitaran?

N=4.7 103

b) Qu longitud debera tener la columna si se utiliza el mismo relleno?

L=69 cm

c) Cul sera el tiempo de retencin del metilciclohexeno en la columna del inciso b)?

t R=19min
26.21. Si

VS yVM

para la columna del problema 26.18 son 19.6 y 62.6 ml

respectivamente y el pico de aire no retenido aparece despus de 1.9 min,

calcule:

a) El factor de retencin para cada compuesto:

k 1=4.3, k 2=4.7 y k 3=6.1

b) La constante de distribucin para cada compuesto:

K 1=14, K 2=15 y K 3=19

c) El factor de selectividad para el metilciclohexano y el metilciclohexeno:

2,1=1.11, 3,2=1.28
26.22. Las reas relativas de pico para los cinco picos obtenidos por
cromatografa de gases en la separacin de cinco esteroides se indican a
continuacin. Tambin se proporcionan las respuestas del detector para los
cinco compuestos. Calcule el porcentaje de cada compuesto en la mezcla.
Compuesto

Deshidroepiandrost
erona
Estradiol
Estrona
Testosterona
Estriol

rea relativa,
de pico
27.6

Respuesta
relativa,
del detector
0.70

32.4
47.1
40.6
27.3

0.72
0.75
0.73
0.78

CAPTULO 27: CROMATOGRAFA DE GASES

PREGUNTAS Y PROBLEMAS:
27.1. En qu se diferencian la cromatografa gas lquido y la gas slido?
En la cromatografa de gas-lquido, la fase estacionaria es un lquido que est
inmovilizado sobre un slido. La retencin de constituyentes de la muestra implica
equilibrios entre una gaseosa y una fase lquida. En la cromatografa de gas-slido, la
fase estacionaria es una superficie slida que retiene analitos por adsorcin fsica. Aqu
separaciones implican la adsorcin / desorcin equilibrios.
27.2. Cmo funciona un medidor de flujo de pompas de jabn?
En un medidor de burbuja de jabn, una pelcula de jabn se forma en una bureta de
gas a travs del cual el efluente de una columna de GC est fluyendo. La velocidad de
flujo se determina entonces a partir del tiempo requerido para la pelcula de viajar entre
dos de las graduaciones en la bureta.
27.3. Qu es la programacin de temperatura en cromatografa de gases?
Por qu se usa con tanta frecuencia?
La programacin de la temperatura consiste en el aumento de la temperatura de una
columna de GC como una funcin del tiempo. Esta tcnica es particularmente til para
las muestras que contienen constituyentes cuyos puntos de ebullicin difieren
significativamente. Constituyentes de bajo punto de Boilin estn separados inicialmente
a temperaturas que proporcionan una buena resolucin. A medida que la separacin, la
temperatura de la columna se incrementa de manera que los constituyentes Boilin
superiores vienen de la columna con buena resolucin y en longitudes de tiempo
razonables.
27.4. Defina:
a) Volumen de retencin:
Volumen de retencin
tiempo de retencin y

VR
F

es definido por la ecuacin

es la tasa de flujo volumtrico.

V R =t R F

donde

tR

es el

b) Volumen de retencin corregido:

El volumen de retencin corregido

V 0R

es el volumen de retencin despus de

corregir la presin media dentro de la columna. Es dada por

V 0R = j t R F

donde

es

el factor de correccin de la presin.

c) Volumen de retencin especfico:
El

volumen

V g=

de

V 0RV 0M 273

ms
Tc

retencin
donde

VM

especfica

Vg

es

definido

por

la

ecuacin

es el volumen de retencin de una especie bien,

es la masa de la fase estacionaria, y

Tc

ms

es la temperatura de la columna en grados

Kelvin.
27.5. Cul es la diferencia entre un detector sensible a la concentracin y un
detector sensible a la masa? Los siguientes detectores son sensibles a la
masa o a la concentracin?
Un detector sensible a la concentracin responde a la concentracin de analito en la
fase mvil, mientras que una masa sensible detector responde a la cantidad de analito
molculas o iones que entran en contacto con el detector. reas de pico para un
detector sensible a la concentracin aumentan como la tasa de flujo disminuye porque
el analito est en contacto con el detector durante un largo periodo. reas de pico para
un detector sensible a la masa no son afectadas grandemente por caudal. Con CS para
concentracin sensible y MS para masa sensible, encontramos para cada uno de los
detectores figuran: (a) trmica conductividad (CS), emisin (b) atmica (MS), (c)
termoinica (MS), captura de electrones (d) (CS), (e) llama fotomtrica (MS), ionizacin
de llama (f) (MS).
27.6. Explique los principios de funcionamiento de los detectores que se
encuentran en el problema 27.5.
(a) el detector de conductividad trmica se basa en la disminucin de la conductividad
trmica del gas portador helio o hidrgeno provocada por la presencia de molculas de
analito. (b) el detector de emisin atmica se basa en la intensidad de las lneas de
emisin atmica generados a partir de algunos de los elementos contenidos en las
molculas de analito. La atomizacin del analito y excitacin de emisin atmica es
propiciada por el eluyente atravesando un campo energtico de microondas.
(c) el
detector termoinico se basa en las corrientes de iones se produce cuando la fase mvil
es quemado en una llama de hidrgeno y luego pas del grano de silicato de rubidio
calentada overa. Se utiliza principalmente para los analitos que contienen fsforo o
nitrgeno. (d) el detector de captura de electrones se basa en la atenuacin por
molculas de analito de un ion de pie actual generada por la ionizacin de las molculas
de la fase mvil con un emisor en el efluente.
27.7. Cules son las principales ventajas y limitaciones de cada uno de los
detectores que se mencionan en el problema 27.5?
(a) las ventajas, conductividad trmica: aplicacin general, amplio rango lineal, la
sencillez, no destructiva. Desventajas: baja sensibilidad.

(b) Ventajas, emisin atmica: selectividad, amplio rango lineal, alta sensibilidad,
aplicabilidad general. Desventajas: altos costos de equipos destructivos.
(c) Ventajas, terminicos: alta sensibilidad para compuestos que contienen N y P, buen
rango lineal. Desventajas: destructiva, no es aplicable para muchos analitos.
(d) Las ventajas, de captura de electrones: alta sensibilidad, selectividad hacia analitos
con grupos funcionales electronegativos, no destructivos. Desventajas: la respuesta no
lineal en algunas circunstancias, la gama limitada respuesta.
(e) Ventajas, llama fotomtrica: la selectividad hacia el S y P que contienen analitos,
buena sensibilidad. Desventajas: destructiva, aplicabilidad limitada.
(f) Ventajas: Ionizacin de llama aplicabilidad general, amplio rango lineal, buena
sensibilidad, bajo ruido, baja sensibilidad a la mayora de los gases portadores y el agua,
la sencillez, la facilidad de uso. Desventaja: destructiva.
27.8. Cul es la diferencia entre un cromatograma de iones totales y un
cromatograma de masas?
Un cromatograma de iones totales se obtiene mediante la suma de las abundancias de
iones en cada espectro de masas y el trazado en funcin del tiempo. Un cromatograma
de masa se obtiene mediante la supervisin de un valor m / z durante el experimento de
cromatografa y el trazado de la abundancia de iones en funcin del tiempo.
27.9. Analice por qu la combinacin de cromatografa de gases y
espectrometra de masas es tan potente.
La combinacin de GC con MS permite la identificacin de las especies que eluyen de la
columna cromatogrfica. El cromatograma de iones totales proporciona informacin
similar a un cromatograma GC convencional. Controlando otros iones, se puede obtener
informacin acerca de las diferentes especies. Al analizar el espectro de masas durante
el experimento de cromatografa, se pueden identificar las especies de elucin en varias
ocasiones. Cromatografa de gases acoplada a espectrometra de masas permite
identificaciones an ms especficas a realizar.
27.10. Qu son los mtodos acoplados de cromatografa de gases? Describa
brevemente dos de ellos.
Mtodos acoplados para GC con una tcnica instrumental diferente, tal como la
espectrometra de masas, FTIR, espectroscopa de RMN, o mtodos electroqumicos. El
efluente de la columna de la GC es tanto un seguimiento continuo por la segunda
tcnica o recogida y medida.
27.11. Cul es el material de relleno que se utiliza en la mayora de columnas
empacadas para cromatografa de gases?
El material de relleno utilizado con mayor frecuencia son las partculas de tierra de
diatomeas con dimetros que van desde 250 hasta 170 micras o 170 a 149 m.
27.12. En qu se diferencian las siguientes columnas tubulares abiertas?
(a) Una columna de trama (PLOT) es una capa de la columna tubular abierta porosa, que
tambin se llama una columna de soporte recubierto tubular abierta (SCOT). La
superficie interior de una columna parcela est llena de una pelcula delgada de un

material de soporte, tal como una tierra de diatomeas. Este tipo de columna contiene
varias veces una fase estacionaria tanto como lo hace una columna de pared recubierto.
(b) Una columna WCOT es simplemente un tubo capilar formado de slice fundida, acero
inoxidable, aluminio, cobre, plstico, o vidrio. Sus paredes interiores estn recubiertas
con una capa delgada de la fase mvil.
(c) La columna SCOT se describe en el apartado (a) de esta pregunta.
27.13. Cules son las columnas megacapilares? Para qu se utilizan?
Las megacolumnas son columnas tubulares abiertas que tienen un mayor dimetro
interior
desde

(530 m ) que columnas tubulares abiertas tpicas, que varan en dimetro

150 hasta320 m .

27.14. Cules son las ventajas de las columnas capilares de slice fundida en
comparacin con las columnas de vidrio o las metlicas?
Las columnas de slice fundida tienen una mayor resistencia fsica y flexibilidad de
columnas tubulares abiertas de vidrio y son menos reactivos frente a analitos que el
vidrio o las columnas metlicas.
27.15. Qu propiedades debe tener una fase estacionaria lquida en
cromatografa de gases?
Las propiedades deseables de una fase estacionaria para GC incluyen: baja volatilidad,
estabilidad trmica, inercia qumica, y las caractersticas de disolventes que
proporcionan valores de k y para los analitos a ser separados.
27.16. Qu efecto tiene el espesor de la pelcula de la fase estacionaria sobre
los cromatogramas de gases?
Espesor de pelcula influye en la velocidad a la que los analitos se llevan a travs de la
columna, con la tasa de aumento a medida que disminuye el espesor. Menos
ensanchamiento de la banda se encuentra con pelculas delgadas.
27.17. Por qu las fases estacionarias en cromatografa de gases estn con
frecuencia enlazadas o polimerizadas? Qu significado tienen estos
trminos?
Fases estacionarias lquidas son generalmente unidos y / o reticulados con el fin de
proporcionar una estabilidad trmica y una fase estacionaria ms permanente que no se
filtrar fuera de la columna. Vinculacin implica la unin de una capa monomolecular de
la fase estacionaria a la superficie de embalaje por medio de enlaces qumicos. La
reticulacin implica el tratamiento de la fase estacionaria mientras se encuentra en la
columna con un reactivo qumico que crea enlaces cruzados entre las molculas que
componen la fase estacionaria.
27.18. Enumere las variables que originan a) el ensanchamiento de la banda y
b) la separacin de la banda en cromatografa de gas lquido.
(a) la ampliacin de la banda se debe a valores muy altos o muy bajos de flujo, las
partculas grandes que componen el embalaje, las capas gruesas de la fase estacionaria,
la temperatura baja y las tasas de inyeccin lenta. (b) separacin de las bandas se ve
reforzada por el mantenimiento de condiciones para que k est en el intervalo de 1 a 10,

el uso de partculas pequeas para el relleno, lo que limita la cantidad de fase

estacionaria por lo que los recubrimientos de partculas son finas, y la inyeccin de la
muestra rpidamente.
27.19. Qu son los ndices de retencin? Explique cmo se determinan.
El ndice de retencin para un analito es una medida de la tasa a la cual se lleva a travs
de una columna en comparacin con la tasa de movimiento de los alcanos normales
dos, uno que se mueve ms rpido que el analito y el otro ms lentamente. Para
obtener el ndice de retencin de un analito en una columna dada, se determinan el
registro de los tiempos de retencin ajustados para los dos alcanos y el analito. El ndice
de retencin para butano es siempre 400 y 500 pentano. El ndice de retencin para el
analito entonces se deriva mediante la interpolacin entre los dos ndices de retencin
logartmica del alcano
27.20. El mismo compuesto polar se analiza por cromatografa de gases con
una columna SE-30 (muy poco polar) y luego con una columna Carbowax 20M
(muy polar). Cmo variar

K=C S /C M

entre las columnas?

El coeficiente de distribucin para un compuesto polar ser mayor en la columna

carbowax de 20 M que la columna SE-30 no polar.
27.21. Utiliza los datos de retencin que se dan a continuacin para calcular el
ndice de retencin del 1-hexeno.
Muestra
Aire
n-pentano
n-hexano
1-hexeno

Tiempo de
retencin, min
0.571
2.16
4.23
3.15

Para el 1-hexeno:

I =500+

( log 2.58log 1.59)

100=558
( log 3.66log 1.59)

27.22. Se utiliz una columna de GC en las siguientes condiciones de trabajo:

Columna: 1.10 m x 2.0 mm rellena con Chromosorb P; peso de fase
estacionaria lquida aadida, 1.40g; densidad del lquido, 1.02 g/ml ;
presiones: entrada, 26.1 psi por encima de la atmosfrica; atmosfrica, 748
torr; temperatura; ambiente, 21.2C; columna, 102.0C; tiempos de retencin:
aire, 18.0 s; acetato de metilo, 1.98 min; propionato de metilo, 4.16 min; nbutirato de metilo, 7.93 min; anchura de picos de los steres en su base: 0.19;
0.39 y 0.79, respectivamente.
Datos:

pH O =18.88torr a 21.2 C
2

Calcule:
a) Tasa de flujo promedio en la columna
Sustituyendo en la ecuacin 27-3,

T c =102.0+273=375 K , Fm =25.3

L
,T =21.2+ 273=294.2 K
min

P=748 torr

F=Fm

T c ( PP H O )
375 K
74818.88

=24.3

=30.2 L/min
T
P
294.2 K
748
2

b) Volmenes de retencin corregidos para el aire y para los tres steres.

0

V M= j tM F

i=

P=748 torr +26.1 psi

3 [ ( 883/748 )21 ]
2 [ ( 883 /748 ) 1 ]
3

5.17 torr
=883 torr
psi

=0.915

t M =18.0 s/60 s/min=0.3 min

0

V M = j t M F=0.915 0.3 min

30.2 L
=8.3 ml
min

(V 0R )1 =0.915 1.98 min

30.2 L
=54.7 ml
min

(V 0R )2 =0.915 4.16 min

30.2 L
=115.0 ml
min

(V 0R )3 =0.915 7.93 min

30.2 L
=219.1 ml
min

c) Volmenes de retencin especficos para los tres componentes.

Usando la ecuacin:

54.78.3

( V g )1= 1.40

V 0RV 0M 273
V g=

ms
Tc

273
=( 54.78.3 ) 0.520=24.1 ml /g
375

( V g )2=( 115.08.3 ) 0.520=55.5 ml/ g

( V g )3=( 219.18.3 ) 0.520=109.6 ml /g

d) Constantes de distribucin de cada uno de los steres
Se usa la siguiente ecuacin:

24.1
K 1=

K=

V g s T c
273

ml 1.02 g

375
g
ml
=24.1 1.40=33.8
273

K 2=55.5 1.40=77.8
K 3=109.6 1.40=154

e) Un volumen de retencin corregido y tiempo de retencin para el n-hexanoato de

metilo

De la ecuacin por regresin lineal

log t 'R=0.3286 ( tomos de C )0.7496

Para 7 tomos de C:

'

log t R=0.3286 70.7496=1.55

t 'R=35.53 y t R =35.53+0.30=35.83 min

V 0R = j t R F=0.915 35.83 30.2=990 ml

27.23. Con los datos del problema 27.22, calcule

a) factor de retencin k para cada componente
b) factor de selectividad

para cada pareja de compuestos adyacentes

c) nmero promedio de platos tericos y la altura de plato de la columna

d) resolucin para cada par de compuestos adyacentes
Usando las siguientes ecuaciones:

k A=

2 [ ( t R ) B ( t R ) A ]
t Rt M
N 1
, R s=
, R s=
tM
W A +W B
4

)(

kB
t
L
, N=16 R , N =
1+ k B
W
H

( )

27.24. La fase estacionaria lquida de la columna descrita en el problema

27.23 era didecilftalato, un solvente de polaridad intermedia. Si en lugar de
ste se hubiera utilizado un solvente no polar como aceite de silicona. Los
tiempos de retencin de los tres compuestos seran mayores o menores? Por
qu?
Dado que los tres compuestos son relativamente polares, seran menos compatibles con
un disolvente no polar tal como un aceite de silicona que con didecilftalato. Puesto que
menos tiempo se gastara en la fase estacionaria para el aceite de silicona,

tR

sera

ms pequeo.

27.25. Un mtodo de determinacin cuantitativa de la concentracin de

constituyentes en una muestra analizada mediante cromatografa de gases es
el de normalizacin de rea. En este mtodo se requiere la elucin completa
de todos los constituyentes de la muestra. El rea de cada pico se mide
despus y se correlaciona con las diferencias en la respuesta del detector
para los diferentes eluidos. Esta correccin requiere la divisin del rea
mediante un factor de correccin determinado de manera emprica. La
concentracin del analito se determina a partir del cociente de su rea
corregida respecto al rea total corregida de todos los picos. En el caso de un
cromatograma que contiene tres picos, las reas relativas determinadas
fueron 16.4, 45.2 y 30.2 en el orden en que se incrementa el tiempo de
retencin. Calcule el porcentaje de cada compuesto si las respuestas relativas
del detector son 0.60, 0.78 y 0.88, respectivamente.

27.26. Determine la concentracin de especies en una muestra a partir de las

reas de los picos y las respuestas relativas del detector para los cinco picos
de cromatografa de gases de la tabla siguiente. Aplique el mtodo de la
normalizacin del rea que se explica en el problema 27.25. Se indican
tambin las respuestas relativas del detector. Calcule el porcentaje de cada
componente en la mezcla.
Compuesto
A
B
C
D
E

rea relativa del

pico
32.5
20.7
60.1
30.2
18.3

Respuesta relativa del

detector
0.70
0.72
0.75
0.73
0.78

27.27. Cul sera el efecto de los siguientes casos sobre la altura de plato de
una columna? Explique su respuesta.
a) Aumentar el peso de la fase estacionaria respecto al peso del relleno.
Aumento de

V S /V M conduce a un aumento en el espesor de la pelcula

aumento provoca un aumento marcado en

CSu

d f . Este

y por lo tanto un aumento en el H.

b) Disminuir la velocidad de inyeccin de la muestra.

La reduccin de la tasa de inyeccin de la muestra dar lugar a la ampliacin de la
banda porque todas las molculas no comienzan a atravesar la columna en el mismo
instante. Reduccin de la capacidad y un aumento en los resultados de H.
c) Aumentar la temperatura de la portezuela de inyeccin.
El aumento de la temperatura del puerto de inyeccin tender a disminuir H debido a la
misma velocidad de evaporacin se incrementar. Por lo tanto, la muestra se puede
poner en la columna en una banda estrecha con zona menos propagacin inicial.
d) Incrementar la tasa de flujo.
El aumento de la velocidad de flujo puede causar aumenta o disminuye en H
dependiendo de la velocidad de flujo.

e) Reducir el tamao de la partcula del relleno.

La reduccin del tamao de partcula aumenta la superficie y por lo tanto disminuye de
espesor de pelcula

d f en el trmino de la

CSu

en las ecuaciones 26-23 y 26-24.

Una disminucin en el tamao de las partculas tambin hace que el trmino

CM u

ms pequeo. Ambos efectos conducen a una altura plato ms pequeo (Tabla 26-3).
f) Disminuir la temperatura de la columna.
Disminuyendo la temperatura disminuir las tasas de difusin

B /u

se convierte ms pequeo y los trminos de

CSu

DM y DS . El trmino
CM u

se convierten ms

grandes con la disminucin de los coeficientes de difusin. Esto puede conducir a un

aumento de H Si dominan los trminos
domina el trmino

CSu

CM u

o una disminucin de

H si

B /u . En la mayora de los casos, H aumenta a medida que la

temperatura disminuye.
27.28. Qu tipo de mezclas se separan por cromatografa gas slido?
La Cromatografa de gas-slido se utiliza principalmente para separar bajas especies
moleculares de masa gaseosas como dixido de carbono, monxido de carbono y xidos
de nitrgeno.
27.29. Por qu la cromatografa gas slido no se utiliza tanto como la
cromatografa gas lquido?
La cromatografa de gases-slidos se ha limitado su aplicacin porque los compuestos
activos o polares se conservan ms o menos permanentemente en la fase estacionaria.
Adems, se observa a menudo debido a las caractersticas no lineales del proceso de
adsorcin fsica.

CAPTULO 28: CROMATOGRAFA DE LQUIDOS

PREGUNTAS Y PROBLEMAS:
28.1. Enumere los tipos de sustancias en los cuales son ms aplicables los
siguientes mtodos de cromatografa:
a) Gas lquido
Especies que son un poco voltiles y trmicamente estables.
b) Absorcin de lquidos
No polares compuestos orgnicos de bajo peso molecular y especies orgnicas
particularmente ismeros.

c) Reparto lquido lquido

Especies moleculares que son permanentes o trmicamente inestables.
d) Reparto en fase inversa
Especies orgnicas de bajo o moderado peso molecular, no voltiles o trmicamente
inestables.
e) Intercambio inico
Sustancias que no son inicas.
f) Penetracin en gel
Compuestos de altos pesos moleculares que son solubles en disolventes no polares.
g) Gas slido
Gases de bajo peso molecular no polares.
h) Filtracin sobre gel
Compuestos hidroflicos de alto peso molecular.
i) Pares inicos
Iones orgnicos e inorgnicos pequeos.
28.2. Describa tres mtodos generales para mejorar la resolucin en la
cromatografa de reparto.
Tres mtodos para mejorar la resolucin incluyen:
(1)Ajuste de

kA

kB

mediante el empleo de una fase mvil de mltiples

componentes y la variacin de la revuelta de los disolventes de encontrar una

mezcla ptima.
(2)Variacin en la composicin qumica del sistema solvente de manera tal que ms
grande.
(3)Empleando un relleno diferente en que es mayor.
28.3. Explique una forma de modificar el factor de retencin de un soluto en la
cromatografa de reparto.
En cromatografa de reparto, k es variada convenientemente usando un sistema
componente solvente de dos (o ms) y variando la proporcin de los solventes.

28.4. Cmo se puede modificar el factor de selectividad en a) la

cromatografa de gases y b) la cromatografa de lquidos?
(a) en cromatografa de gases, es generalmente variada variando la columna del
relleno. (b) en LC, columna del relleno y composicin qumica de la fase mvil pueden
variar para producir mejores valores .
28.5. Al preparar un gradiente con hexano acetona para una columna de
HPLC rellena de almina, es deseable aumentar o disminuir la proporcin de
hexano a medida que progresa la elucin en la columna?

En cromatografa de adsorcin con un relleno de almina, es generalmente mejor

aumentar la polaridad de la fase mvil a medida que avanza la elucin. As la
proporcin de acetona con el hexano debe aumentarse a medida que avanza la elucin.
28.6. Qu significa el intervalo de respuesta lineal de un detector?
El rango de respuesta lineal de un detector es el rango de concentracin de analito o
masa sobre el cual el detector responde linealmente. Es el mismo que el rango
dinmico.
28.7. Defina:
a) Elucin isocrtica
En una elucin isocrtica, la composicin solvente se mantiene constante a lo largo de la
elucin.
b) Elucin con gradiente
En una gradiente elucin, se utilizan dos o ms solventes y la composicin de la fase
mvil va cambiando continuamente o en pasos a medida que avanza la separacin.
c) Inyeccin a flujo detenido
En una inyeccin de flujo detenido, se detiene el flujo de disolvente, se elimina un
accesorio a la cabeza de la columna, y la muestra se inyecta directamente en la cabeza
de la columna. El accesorio se sustituye a continuacin, y el bombeo se reanuda.
d) Relleno de fase inversa
Un relleno de fase inversa es un relleno no polar que se emplea en cromatografa de
particin con una fase mvil relativamente polar.
e) Relleno de fase normal
En un relleno de fase normal, la fase estacionaria es polar y la fase mvil es
relativamente no polar.
f) Cromatografa de pares de iones
En la cromatografa de pares inicos un gran contra-in orgnico se aade a la fase
mvil como un reactivo de apareamiento inico. La separacin se consigue ya sea a
travs de la particin neutro par inico o como un resultado de interacciones
electrostticas entre los iones en solucin y cargas sobre la fase estacionaria que resulta
de la adsorcin de la orgnica contra-in.
g) Cromatografa inica
En la cromatografa de iones, la fase estacionaria es una resina de intercambio inico y
deteccin se logra normalmente mediante un detector de conductividad.
h) Detector de propiedades de la solucin
Un detector de propiedad de la solucin responde a alguna propiedad de la fase mvil
(tales como la conductividad trmica o elctrica) que se ve alterada por la presencia de
analitos.
i) Detector de propiedades del soluto

Un detector de propiedad del soluto responde a alguna propiedad de analitos, tales

como la absorcin o fluorescencia.
j) Purga
Purga es un proceso para la eliminacin de gases disueltos desde una solucin barriendo
el lquido con un flujo de burbujas finas de un gas inerte de baja solubilidad.
28.8. Qu es la columna de proteccin en la cromatografa de reparto?
Una columna de proteccin es una columna corta a travs del cual la fase mvil fluye
antes que la regin de la inyeccin y la columna de anlisis de instrumentos de HPLC. La
composicin de la columna de proteccin es similar a la de la columna analtica, excepto
que las partculas son generalmente ms grandes para reducir al mnimo la cada de
presin. El propsito de la columna de proteccin es para eliminar la materia en
partculas y los contaminantes de la fase mvil y para saturar la fase mvil con la fase
estacionaria de modo que las prdidas de esa fase de la columna analtica se reducen al
mnimo.
28.9. En qu se parecen la cromatografa de reparto en fase normal y la
cromatografa de adsorcin?
La cromatografa de reparto en fase normal y la cromatografa de adsorcin son
similares en el sentido que las fases estacionarias en ambos son polares, mientras que
las fases mviles son relativamente no polares.
28.10. Cul es el orden en que los compuestos siguientes saldrn de una
columna para HPLC que contiene un relleno de fase inversa?
a) benceno, dietilter, n hexano

dietilter , benceno ,nhexano

b) acetona, dicloroetano, acetamida

acetamida , acetona, d icloroetano

28.11. Cul es el orden de elucin de los compuestos siguientes en una
columna para HPLC con relleno de fase normal?
a) acetato de etilo, cido actico, dimetilamina

ace tato de etilo , dimetilamina ,cido actico

b) propileno, hexano, benceno, diclorobenceno

hexano , propileno, benceno , diclorobenceno

28.12. Enumere las diferencias fundamentales
adsorcin y cromatografa de reparto.

entre

cromatografa

de

En cromatografa de adsorcin, las separaciones se basan en equilibrios de adsorcin

entre los componentes de la muestra y una superficie slida. En cromatografa de
particin, las separaciones se basan en equilibrios de distribucin entre dos lquidos
inmiscibles.

28.13. Enumere las diferencias fundamentales entre cromatografa de

intercambio de iones y cromatografa de exclusin por tamao.
En cromatografa de exclusin por tamao las separaciones se basan en el tamao y en
cierta medida la forma de molculas con poco las interacciones entre la fase
estacionaria y los componentes de la muestra que se producen. En cromatografa de
intercambio inico, en contraste, las separaciones se basan en reacciones de
intercambio inico entre la fase estacionaria y los componentes de la muestra en la fase
mvil.
28.14. Qu tipos de especies se puede separar con cromatografa de lquidos
de alta resolucin pero no con cromatografa de gases?
Por HPLC pero no por GC se pueden separar compuestos inestables al calor y no
voltiles.
28.15. Describa las diferentes clases de bombas que se usan en la HPLC.
Cules son las ventajas y desventajas de cada una?
Bombas neumticas son simples, baratas y pulso gratis. Consisten en un contenedor
plegable solvente ubicado en un buque que puede ser presurizado por un gas
comprimido. Esta bomba tiene una limitada capacidad y presin de salida y no es
adaptable a gradiente elucin. Solvente viscosidad depende de la velocidad de bombeo.
Bombas de jeringa impulsada por tornillo consisten en una jeringa grande en el cual el
pistn es movido por un tornillo impulsado por motor. Son libres de pulso y la tasa de
partos es variada fcilmente. Sufren por la falta de capacidad y son inconvenientes
cuando deben cambiarse de solventes. Las bombas reciprocantes son verstiles y
ampliamente utilizadas. Consisten en una pequea cmara cilndrica que se llena y
luego vaciada por el movimiento de idas y venidas de un pistn. Las ventajas incluyen
pequeo volumen interno, presiones de salida alta, adaptabilidad a gradiente elucin y
caudales constantes que son independientes de presin viscosidad y espalda. La salida
de pulsos debe ser amortiguada.
28.16. Seale las diferencias entre la cromatografa de una sola columna y la
cromatografa inica de columna inhibidora.
En columna inhibidora de cromatografa de iones es seguido por una columna supresora
cuyo propsito es convertir los iones utilizados para la elucin de especies moleculares
que son en gran medida no inicos y por lo tanto no interfieran con conductimtrico
deteccin de la especie de analito. En una columna de iones, intercambiadores de iones
de baja capacidad se utilizan para que las concentraciones de iones en la solucin de
elucin puedan mantenerse bajas. Entonces la deteccin se basa en las pequeas
diferencias en conductividad causada por la presencia de componentes muestra eluido.
28.17. La espectrometra de masa es un sistema de deteccin
extremadamente verstil para la cromatografa de gases. No obstante,
acoplar un sistema de cromatografa de lquidos de alta resolucin con un
espectrmetro de masa es una tarea a menudo difcil. Proporcione las
principales razones por las que es ms difcil combinar la HPLC con la
espectrometra de masa que combinar la cromatografa de gases con la
espectrometra de masa.
Se necesita una muestra de la fase gaseosa por espectrometra de masas. La salida de
la columna de LC es un soluto disuelto en un solvente, mientras que la salida de la

columna GC es un gas y as directamente compatibles. Como un primer paso para

LC/MS, el disolvente debe ser vaporizado. Cuando est vaporizado, sin embargo, el
solvente LC produce un volumen de gas 10 - 1000 veces mayor que el gas portador en
cromatografa gaseosa. Por lo tanto, tambin debe eliminarse la mayora de los
solventes.

28.18. Cul de los detectores de cromatografa de gases de la tabla 27.1 son

apropiados para la HPLC? Por qu algunos de los mencionados son
inadecuados para la HPLC?
Los detectores de GC que son adecuados para HPLC son el espectrmetro FTIR y
posiblemente fotoionizacin. Muchos de los detectores de GC son inadecuados para
HPLC porque necesitan el componente liberador de analito en la fase gaseosa.
28.19. Aunque la temperatura no afecta las separaciones en cromatografa de
lquidos de alta resolucin como lo hace en las separaciones por
cromatografa de gases, puede desempear un papel importante. Analice
cmo y por qu la temperatura podra no influir en las separaciones
siguientes:
a) separacin cromatogrfica en fase inversa de una mezcla de esteroides
b) una separacin cromatogrfica por adsorcin de una mezcla se ismeros muy
relacionados.
Una serie de factores que influyen en la separacin es claramente constantes de
distribucin incluyendo dependientes de la temperatura y las tasas de difusin. Adems,
los cambios de temperatura pueden influir en la selectividad si los componentes A y B
son influenciados diferentemente por los cambios de temperatura. Porque la resolucin
depende de todos estos factores, la resolucin tambin ser dependiente de la
temperatura
(a) Para una separacin cromatogrfica de fase inversa de una mezcla de esteroides,
la separacin podra ser influenciado por cambios dependientes de la temperatura
en los coeficientes de distribucin.
(b) Para una separacin cromatogrfica de adsorcin de una mezcla de ismeros, la
separacin podra ser influenciado por cambios dependientes de la temperatura
en los coeficientes de distribucin.
28.20. En una separacin con cromatografa de lquidos de alta resolucin dos
componentes tienen tiempos de retencin que difieren en 15s. El primer pico
eluye en 9.0 minutos y los anchos de los picos son casi iguales. El tiempo
muerto

tM

es 65s. Mediante una hoja de clculo determine la cantidad

mnima de platos tericos que se necesitan para alcanzar los siguientes

valores de resolucin:

Rs :0.50, 0.75,0.90, 1.0,1.10,1 .25,1.50, 1.75,2.0, 2.5 . Qu tanto

cambiaran los resultados si el pico 2 tuviera el doble de ancho del pico 1?

28.21. Se perfeccion un mtodo de cromatografa de lquidos de alta

resolucin para separar y determinar ibuprofeno en muestras de plasma de
rata como parte de un estudio del curso de tiempo del frmaco en los
animales de laboratorio. Se sometieron a estudios cromatogrficos varios
patrones y se obtuvieron los resultados siguientes:
Concentracin del
ibuprofeno, g/ml
0.5
1.0
2.0
3.0
6.0
8.0
10.0
15.0

rea relativa del

pico
5.0
10.1
17.2
19.8
39.7
57.3
66.9
95.3

Luego se administr por va oral una muestra de 10mg/kg de ibuprofeno a una

rata de laboratorio. Se tomaron muestras de sangre en diferentes tiempos
despus de la administracin del frmaco se sometieron a anlisis de HPLC.
Se obtuvieron los resultados siguientes:
Tiempo, h

rea del pico

0
0.5
1.0
1.5
2.0
3.0
4.0
6.0
8.0

0
91.3
80.2
52.1
38.5
24.2
21.2
18.5
15.2

Determine la concentracin de ibuprofeno en el plasma sanguneo para cada

tiempo dado y grafique la concentracin contra el tiempo. En porcentaje,
durante qu periodo de media hora (primero, segundo, tercero, etc) se
pierde la mayor parte del ibuprofeno.

De la hoja de clculo la mayor prdida de porcentaje se produce entre 1,0 y 1,5 hrs.
28.22. En una columna de reparto en fase normal, se determin que un soluto
tiene un tiempo de retencin de 29.1 minutos y una muestra no retenida tiene

un tiempo de retencin de 1.05 minutos cuando la fase mvil contiene 50% en

volumen de cloroformo y 50% de n-hexano. Calcule a)
la composicin de solventes que disminuira

para el soluto y b)

a un valor de alrededor de

10.
Se usa la ecuacin:

k2
P P ) /2
=10(
(1)
k1
'
1

Donde

'
2

'

'

P1 y

P2

son los ndices de polaridad de cloroformo y n-hexano,

respectivamente.
a) Usando la Ecuacin:

k 1=

k A=

t Rt M
(2)
tM

29.11.05
=26.7
1.05

b) Usando la Ecuacin:

P'AB= A P'A + B P'B (3)

P'AB=0.50 4.1+0.50 0.1=2.10

Sustituyendo en la ecuacin (1):

10
( 2.1P ) / 2
=10
26.7
'
2

Tomando el logaritmo de ambos lados de esta ecuacin da:

log

10
'
=0.427=( 2.1P2 ) /2
26.7

P'2=2 0.427+ 2.1=2.95

Sustituyendo

P'2 por

2.95= A 4.1+ B 0.1

Dnde:

A + B=1.00

2.95=4.1 A +0.1 ( 1 A )

P'AB

en la ecuacin (3) da

 A=

( 2.950.1 )
=0.712
4.0

As la mezcla debe ser

CH Cl 3 el 71% y 29%

nhexano