CORPORACIÓN UNIVERSITARIA respecto a la concentración salina

AUTÓNOMA DEL CAUCA difiere de unas proteínas. Por

Ejemplo, a una concentración de
PROGRAMA DE INGENIERÍA sulfato 0.8 M, el fibrinógeno
AMBIENTAL Y SANITARIA precipita, mientras que se requiere
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA una concentración 2.4 M para
precipitar la albúmina sérica. Por
Pajoy Dayanna, Alarcon Oscar. otro lado, la desnaturalización es la
pérdida de la estructura de una
proteína, con o sin pérdida de la
INTRODUCCIÓN actividad biológica, dependiendo a
que nivel de estructura fue la
desnaturalización. Para
La solubilidad de la mayoría de las desnaturalizar una proteína existen
proteínas disminuye frente a varios métodos, tanto físicos como
elevadas concentraciones de sales. químicos. En los primeros
Este efecto, llamado desalado encontramos el calor, el pH, bajas
(“salting out”), resulta muy útil temperaturas.
aunque no este completamente Las enzimas son proteínas y por
comprendido. La dependencia de la tantos se destruyen (desnaturalizan)
solubilidad respecto a la con el calor y
concentración salina difiere en las con los cambios de pH. Cuando se
proteínas. Por ejemplo, a una produce la desnaturalización, la
concentración de sulfato 0.8M, el enzima deja de ser activa y no
fibrinógeno precipita, mientras que cumple su función. La catalasa es
requiere una concentración 2.4M una enzima que actúa sobre el
para precipitar la albúmina sérica. El peróxido de hidrógeno H2O2
precipitado por salado también descomponiéndolo en H2O y O2, con
resulta útil para concentrar desprendimiento de energía en
disoluciones diluidas de proteínas. forma de calor. Esta enzima está
presente en todos los tejidos
animales y vegetales.
Por otro lado, la desnaturalización es En la saliva se encuentra una enzima
la pérdida de la estructura de una llamada ptialina que descompone
proteína, con o sin pérdida de la (hidroliza) el almidón produciendo
actividad biológica, dependiendo de glucosa. Vamos a comprobar la
a qué nivel de estructura fue la presencia de glucosa tras la acción
desnaturalización de la enzima realizan una reacción
de Fehling. La desnaturalización de
la enzima la realizaremos cambiando
1. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA: el pH por medio de la adición de
ácido (HCl). La sacarosa es un
glúcido sencillo formado por la unión
La Solubilidad de la mayoría de las de glucosa y fructosa. Cuando se
proteínas disminuye frente a rompe el enlace entre estas dos
elevadas concentraciones de sales. sustancias (esta reacción se llama
La dependencia de la solubilidad hidrólisis) se libera por lado glucosa
y por otro, fructosa. Para comprobar La amilasa, es un enzima hidrolasa
que se ha producido la reacción y que tiene la función de catalizar la
revelar la presencia de glucosa reacción de hidrólisis de los enlaces
realizaremos un Fehling. 1-4 del componente α-Amilosa al
digerir el glucógeno y el almidón para
2. OBJETIVOS formar azúcares simples, se produce
principalmente en las glándulas
 Observar la solubilidad y salivares (sobre todo en las
desnaturalización de las glándulas parótidas) y en el
proteínas con varios agentes páncreas. Tiene un pH de 7. Cuando
físicos y químicos una de estas glándulas se inflama
aumenta la producción de amilasa y
aparece elevado su nivel en sangre.
 Comprobar la actividad
enzimática de la amilasa y La catalasa es una enzima que
catalasa. descompone el peróxido de
Hidrogeno (H2O2) en agua y
oxígeno. El peróxido de Hidrogeno
 Identificar la resistencia física
se forma como uno de los productos
y química de las proteínas. finales del metabolismo aerobio de
los hidratos de carbono.

 identificar y observar la
actividad enzimática en 3.3 ¿Cuál es la enzima que contiene
diferentes soluciones la saliva y sobre que substrato
actúa?

Amilasa desdobla el glucóge

 demostrar la acción de la
no y el almidón convirtiéndo
amilasa con la saliva
l o s e n maltosa.

3.4 ¿Cuál es la enzima encargada de

2. CONSULTAS PRELIMINARES
desdoblar al almidón?

3.1 Que características presenta la La amilasa actúa sobre los

Albumina, amilasa y catalasa? almidones

La albúmina es la proteína más 3.5 ¿Cuál es el efecto del pH sobre

abundante en la sangre. Es la actividad enzimática?
fabricada por el hígado pero también
la proporcionan ciertos alimentos, Si no se encuentran en condiciones
especialmente la leche y los huevos. óptimas inhiben o rompen la
La albúmina es necesaria para la actividad enzimática
buena distribución de los líquidos
entre las diferentes estructuras: los
vasos sanguíneos, los tejidos y el
espacio entre ellos llamado espacio
intersticial.
 *Hígado res o pollo 6g

4. MATERIALES Solución de almidón 9 ml

MATERIAL CANTIDA Saliva (estudiante) 6 ml

D Reactivo Fehling 3 ml
Pipeta 1
Reactivo Lugol 3 ml
Propipeta 1
Vaso pdo. 250 ml 1
*Trae cada grupo: Albumina (clara
Vaso pdo. 100 ml 2
de huevo), Limón, Trozo de
Pinza tubo de 2 zanahoria e hígado (trozo de res o
ensayo pollo)

tubos de ensayo 19
Gradilla 2 6. EQUIPOS

rejilla de asbesto 1 EQUIPOS CANTIDAD

Balanza analítica 1
5. REACTIVOS
Plancha de 1
calentamiento
SUSTANCIAS CANTIDAD
NaOH al 20% 1 ml
7. PROCEDIMIENTO:
NaOH al 40% 1 ml
7.1. SOLUBILIDAD Y
Sulfato de cobre o 1 ml DESNATURALIZACIÓN DE PROTEÍNAS
Cloruro de Mercurio
Nitrato de Plata 1 ml 1. Desnaturalización de albumina
con ácidos y bases fuertes Prepara 2
solución saturada de 0.5 ml ml de H2SO4 con un 1ml de clara de
NaCl huevo, 1ml de Albúmina, igualmente
hacerlo con los reactivos HNO3 y el
HNO3 concentrado 1m
NaOH. (Ácidos fuertes y alcalinos).
Ácido Pícrico 1 ml Agitar los tubos y observar si se
presenta solubilidad.
Ácido Tricloroacético 1 ml
2. Desnaturalización de albumina
H2SO4 3 ml con metales pesados. Preparar 1ml
*Albumina 10 ml de Nitrato de Plata con 2 ml de
Albúmina, Agitar el tubo de ensayo
*Limón 1 con el reactivo y ver si se solubiliza.
HCl 1,5 ml 3. Adición de limón y ácido
*Zanahoria 6g clorhídrico a la leche. Coloca en dos
vasos de precipitado un poco de
leche. A uno adicionales unas 3
gotas de limón y al otro unas 4 gotas No tubo y Observaciones
de HCl concentrado. Anota tus sustancia
observaciones. Hay
1 ml de leche, desnaturalización
4 gotas de en la proteína.
limón
La leche se
1 ml de leche, coagula con el
4 gotas de hcl hcl. tambien
No Tubo podemos concluir
sustancia Observaciones que la proteína
H2SO4 Se muestra un se desnaturaliza
color violeta, la
reacción es
positiva ya que 7.2. ACTIVIDAD ENZIMÁTICA:
la sustancia
tubo un cambio  Presencia de catalasa en
en los enlaces tejidos animales y vegetales.
peptídicos. • Toma la zanahoria y corta
HCL Se muestra un dos trocitos
precipitado aproximadamente iguales.
blanco de • Toma el hígado de pollo y
albumina. prepara dos trozos del mismo
NAOH La solución de tamaño.
albumina se • Introduce cada muestra en
separó, tomo un tubo de ensayo.
un color • Vierte unos 5cc de agua
amarillento corriente en cada uno de los
debido a que cuatro tubos.
hay anillos • De los cuatro tubos que
bencénicos en tienes, toma uno que
la parte superior contenga zanahoria y otro con
y en la parte hígado. Hierve durante 6-8
inferior blanco. minutos. Pasado este tiempo
retira el agua.
No tubo y Observaciones • Echa peróxido de hidrógeno
sustancia en los cuatro tubos.
No se • Observa los resultados y
desnaturaliza anota en la tabla siguiente si
puesto que la la reacción es positiva (+)
Nitrato de plata albumina es o negativa (-):
insoluble con
sales metálicas
como lo es el
nitrato de plata
No. Tubo Reacción con herida se produce un
Sustancia H2O2 burbujeo,
Hígado - ¿Qué está ocurriendo?
hervido ¿Por qué se utiliza el agua
oxigenada como
Hígado sin + antiséptico?
hervir
Porque actúa sobre el
Zanahoria - peróxido de hidrogeno
hervida descomponiéndolo en H20 y
02, con desprendimiento de
Zanahoria + energía en forma de calor.
sin hervir Porque lo separa en H20 y 02

 Hidrólisis del almidón por

las enzimas hidrolíticas de
la saliva:
 ¿Qué tejidos presentan
desprendimiento de • Prepara los siguientes tubos de
oxigeno? ensayo:

El hígado y la zanahoria 1 Tubo: No.1: Solución de

hervida debido a que las almidón. 3 cc
moléculas de oxigeno se 1 Tubos No.2: Solución de saliva
desprenden del hígado y la 3cc
zanahoria haciéndose calor.
1 Tubos No.3: Solución de
 ¿Cuál de los tejidos fehling, saliva, almidón 3cc
presenta mayor actividad?
1 tubo No 4: solución de fehling,
El hígado hervido fue el que saliva, almidón 0,5 ml de ácido
presento mayores cambios clorhídrico
con la descomposición y el
libramiento de oxigeno 1 tubo No 5: solución de lugol
saliva, almidon
 ¿Por qué la reacción es 1 tubo No 6: solución de lugol.
negativa cuando cocemos Saliva, almidon, 0,5 ml de ácido
las muestras? clorhídrico.

Podemos observar que no • Dejar en reposo los tubos

ocurrió ningún cambio ni durante 30 minutos.
transformación.
• Observa y anota los resultados
en la tabla.
 Frecuentemente utilizamos
agua oxigenada como
antiséptico y se observa
que al aplicarla a una
 laboratorio deberá disponerse dentro
de los recipientes temporales según
la clasificación de segregación
No tubo lugol fehling establecida.

1 +
1 -
2 + CONCLUSIONES:

2 -
3 +  Las enzimas a altas
3 - temperaturas mayores de
77°cse desnaturalizan y se
vuelven inactivas en cambios
¿En qué tubo se demuestra la bruscos de PH
actividad de la enzima de la
saliva?
 La catalasa se encuentra en
En los tubos 2 y 3 por el método de los tejidos vegetal y animales
tinción con el lugol al haber tanto en su estado natural
presencia de almidones

¿En qué tubo se ha inactivado la  Los procesos enzimáticos se

enzima? ¿Por qué no ha actuado? llevan a cabo en presencia
de oxigeno de lo contrario su
actividad disminuye
Por presentar un pH acido ya que las
enzimas son inactivadas a cambios  Las enzimas funcionan
bruscos de pH y temperatura. Así correctamente dentro un
pues al adicionarle el reactivo de limitado rango de
fehling se obtuvo el resultado temperatura y pH
negativo.

1. Interpreta los resultados obtenidos

en la práctica de la catalasa.

2. Explica razonadamente los

resultados obtenidos en cada uno de
los tubos de la Hidrólisis del almidón.

8. RECUPERACIÓN, DESACTIVACIÓN Y/O

ALMACENAMIENTO TEMPORAL DE LOS
RESIDUOS QUÍMICOS.
NOTA: Lo que no se recupere o se
desactive dentro de la práctica de
ANEXOS: ACTIVIDAD ENZIMATICA
SOLUBILIDAD Y DENATURALIZACION DE HIGADO SIN HERBIR
PROTEINAS

H2S04

ZANAHORIA SIN HERBIR

HCL

HIGADO HERBIDO

NAOH

ZANAHORIA HERBIDA
NITRATO DE PLATA

FOTO
Hidrólisis del almidón por las 9. BIBLIOGRAFÍA
enzimas hidrolíticas de la saliva
ALMIDON  Microbiología Roger y stonier,
John L. Ingraham.2ª edición
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Editorial reverted http: //es.
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