Evaluacion Macroscopica y Microscópica

EVALUACION MACROSCOPICA Y MICROSCÓPICA
DE PREPARADOS HERBALES.
Los preparados herbales se clasifican de acuerdo a las características

sensoriales, macroscópicas y microscópicas. Una evaluación al
determinar estas características es el primer paso para establecer la
identidad y el grado de pureza de tales materias. Siempre que sea
posible se deberá contar con muestras auténticas que pueden servir
como referencia.
La inspección visual proporción los medios más sencillos y rápidos por

el cual se establecen la identidad, pureza y calidad. Se basa en la
observación del color, olor, sabor, forma, tamaño, textura, etc., sin
embargo se debe tener precaución de la variabilidad en la evaluación
de persona a persona o de la sustitución y/o adulteración con materiales
muy similares al genuino.
Por lo tanto es necesario e indispensable corroborar los hallazgos con

microscopia y/o análisis fisicoquímico.
I. Evaluación visual
Las hojas, flores y hierbas arrugadas y contraídas podrían ser

suavizadas y estiradas. A través de un tratamiento preliminar.
Procedimientos recomendados.
 Tamaño: una regla graduada en milímetros es adecuada para

medir la longitud, anchura y espesor de los materiales crudos.
 Color: examine la muestra bajo la luz natural del día difusa, el
color de las muestras deben ser comparadas con la muestra de
referencia.
 Características superficiales de textura y fractura: examine
la muestra no tratada, si es necesario bajo una lente de 6X a
10X. toque el material para determinar si es blanda o dura;
doblando y rompiendo se puede obtener la información sobre la
fragilidad y la aparición del plano de fractura, si es fibrosa, lisa,
rugosa, granular.
 Olor: si e material es inocuo. colocar una pequeña porción de
la muestra en la palma de la mano o en vaso de precipitado de
tamaño adecuado y lentamente y repetidamente inhalar el aire
sobre el material. si no hay otro olor distinto, aplastar entre el
dedo pulgar y el dedo índice o entre las palmas de las manos.
en primer lugar determinar la fuerza del olor (ninguno, débil,
fuerte) y luego la sensación del olor (aromático, afrutado, rancio,
moho, etc).
 Sabor: se realiza solo si es requerido.
II. Inspección por microscopia:
a. Equipos:
 microscopio con lentes con amplia gama de amplificación y
objetivos con amplificación de 4X, 10X y 40X, filtros de vidrio
esmerilado.
 instrumentos de disección botánica.
b. Tratamiento preliminar:
 seleccionar una muestra representativa del material.
 las partes secas pueden requerir ablandamiento antes de la
preparación para las microscopias por colocación en un medio
húmedo o por inmersión en agua.
A. Ablandamiento de polvo herbal: para pequeñas
cantidades de material.
 colocar un algodón hidrófilo humedecido con agua en el
fondo de un tubo de ensayo, seguido de un pedazo de
papel filtro.
 colocar el material que está siendo examinado sobre el
papel filtro, tapar el tubo y dejar reposar toda la noche o
hasta que el material este suave y adecuado para el corte.
B. Ablandamiento de materiales densos y duros.
 el material botánico necesita ser remojado en agua o en
partes iguales de agua: etanol: glicerol hasta que sean lo
suficientemente suaves para e corte.
 cualquier contenido soluble puede eliminarse por la inmersión de
las células en agua, los granos de almidón pueden ser
gelatinizados por calentamiento en agua, en ciertos casos puede
ser humedecido durante pocos minutos.
Tratamiento de 12 horas. Tratamiento de 2 horas
Polvo herbal Remojar el polvo

herbal en partes
iguales de: Agua:
Papel filtro EtOH: glicerol.
Algodón empapado de
agua
c. Preparación de muestras:
Muestras herbales en polvo:
 colocar 1 o 2 gotas de agua o glicerol/etanol o hidrato de cloral

TS en un portaobjetos.
 humedecer la punta de una aguja y sumergir en el polvo herbal.
 transferir una pequeña cantidad del materia que se adhirió a la
aguja en las gotas del portaobjetos, homogenizar.
 sellar con un cubreobjetos, retirar el exceso del líquido con papel
filtro.
Tejidos superficiales de hojas y flores:
 tomar las piezas botánicas de un tercio a la mitad

de distancia desde la base de la hoja y deben
incluir la nervadura central, además de cortar 1 o
2 fragmentos de las orillas.
 colocar los fragmentos en un tubo de ensayo que contenga
hidrato de cloral TS y hervir hasta que se vuelvan transparentes.
 transferir los fragmentos al portaobjetos, añadir hidrato de cloral
TS y cubrir con portaobjetos.
Secciones:
 seleccionar piezas representativas del material y se corta en
secciones transversales y longitudinales con una cuchilla de
afeitar.
 transferir las secciones con un cepillo húmedo con etanol (15%) a
frasco que contenga la misma solución.
d. Clarificación de partículas microscópicas.
Las secciones botánicas en su mayoría suelen ser no translucidas y

oscuras, entonces se requiere la clarificación de las células para
observar el contenido celular como granos de almidón, aleurona,
plásticos, grasas y aceites. De modo que se revelen detalles de las
estructuras.
Los agentes de clarificación más frecuentes se describen a

continuación:
 Hidrato de cloral TS: disuelve los granos de almidón, de

aleurona, plástidos y aceites volátiles, se expande en el tejido
colapsado sin causar hinchazón excesiva de las paredes celulares
o la distorsión de los tejidos. de mucha utilidad para observar los
cristales
 Lactofenol TS: permite la observación de granos de almidón y
aleurona, los cristales de oxalato de calcio brillan con claridad con
luz polarizada.
e. Detección histoquímica de las paredes celulares y

contenidos:
Los reactivos se pueden aplicar a una muestra en polvo o a una sección

botánica en un portaobjetos de las siguientes formas:
 Añadiendo directamente sobre ellos gotas del reactivo y en

seguida aplicar el cubre-objetos, retirar el excedente con papel
filtro.
 Al cubrir la muestra o sección botánica con un cubreobjetos,
añadir por uno de los bordes el reactivo y por el borde opuesto
dejar succionar con tiras de papel filtro.
a) Células con paredes de celulosa: añadir 1º 2 gotas de cloruro de
zinc/yodado, dejar reposar durante unos minutos, añadir
alternativamente 1 gota de yodo, dejar reposar un minuto, retirar el
exceso con tiras de pape filtro, añadir una gota de acido sulfúrico,
las paredes celulares se tiñen azul a azul-violeta.
b) Paredes celulares lignificadas: humedecer el polvo o sección
sobre un portaobjetos con un pequeño volumen de floroglucinol TS,
y dejar reposar por 2 minutos o hasta que este casi seco, añadir una
gota de acido clorhídrico 42%, colocar el cubre-objetos, las paredes
lignificadas se observaran de color rosa a rojo cereza.
c) Granos de aleurona: añadir gotas de yodo TS/etanol. Los granos
se observan color marrón amarillento.
d) Carbonato de calcio: los cristales se disuelven lentamente con
efervescencia al añadir con acido acético (0,6%) o acido clorhídrico
(0.7%).
e) Oxalato de calcio: son insolubles en acido acético (0.6%), pero si
se disuelven en acido clorhídrico (0.7%) sin efervescencia.
f) Grasas, aceites grasos, aceites volátiles y resinas: añadir sudan
dejar reposar durante unos minutos o calentar suavemente, las
grasas se tiñen de color rojo anaranjado a rojo.
Determinación del índice de

estomas:
Tipos de estoma: por la disposición

de las células circundantes, se tienen
os siguientes cuatro tipos:
a. Anomocitico o tipo
ranunculaceous : rodeado por
un numero variable de células.
b. Anisocitico o tipo
cruciferous: rodeado por tres
o cuatro células subcidirias,
unode los cuales es notablemente mas pequeño que los demás.
c. Diacitico o tipo caryophyllaceous: acompañdo de dos celuas
subcidiarias las cuales forman un angulo recto con el eje del
estoma.
d. Paracitico o tipo rubiaceous: rodeado de dos células
subcidiarias, los ejes largos son paralelos al eje del estoma.
*los fragmentos de 5x5mm de tamaño, en un tubo que contenga 5ml de

hidrato de cloral TS, colocados en baño maria durante unos 15 minutos
hasta que se vuelvan transparentes, observar en un microscopio con
un objetivo de 40 aumentos y un ocular de 6X, en una hoja de dibujo
marcar una cruz para cada celula epidérmica y un circulo para cada
estoma, calcular el índice de estoma de la siguiente manera:
Índice de estomas = S + 100

E+S
Donde:
S: numero de estomas
E: número de células epidérmicas (incluyendo tricomas)
DIAFANIZACION

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Los preparados herbales se clasifican de acuerdo a las características

La inspección visual proporción los medios más sencillos y rápidos por

Por lo tanto es necesario e indispensable corroborar los hallazgos con

Las hojas, flores y hierbas arrugadas y contraídas podrían ser

 Tamaño: una regla graduada en milímetros es adecuada para

II. Inspección por microscopia:

Polvo herbal Remojar el polvo

Muestras herbales en polvo:

 colocar 1 o 2 gotas de agua o glicerol/etanol o hidrato de cloral

Tejidos superficiales de hojas y flores:

 tomar las piezas botánicas de un tercio a la mitad

d. Clarificación de partículas microscópicas.

Las secciones botánicas en su mayoría suelen ser no translucidas y

Los agentes de clarificación más frecuentes se describen a

 Hidrato de cloral TS: disuelve los granos de almidón, de

e. Detección histoquímica de las paredes celulares y

Los reactivos se pueden aplicar a una muestra en polvo o a una sección

 Añadiendo directamente sobre ellos gotas del reactivo y en

Determinación del índice de

Tipos de estoma: por la disposición

*los fragmentos de 5x5mm de tamaño, en un tubo que contenga 5ml de

Índice de estomas = S + 100

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