Practica 7 Inactivacion de Enzimas Peroxidasa y Catalasa
Practica 7 Inactivacion de Enzimas Peroxidasa y Catalasa
Practica 7 Inactivacion de Enzimas Peroxidasa y Catalasa
PRÁCTICA N° 07:
INTEGRANTES:
Docente:
Fecha: 22/05/15
2015
RESUMEN
ABSTRACT
The aim of this study was to determine the kinetics of inactivation of the peroxidase enzyme and
the kinetics of color and texture in potato tubers. Under scalded by water at 80 ° C, 100 ° CA
different times precooking the potato tuber presented an area where it happened enzymatic
browning, a fact that was modeled according to Michaelis-Menten kinetics and another area
where the color change It decreased due to enzyme inactivation that corresponded to first order
kinetics, similar to the behavior of the texture way. The inactivation of the peroxidase enzyme
obeyed the mechanism Lumry - Eyring.
INTRODUCCION
La papa criolla se destaca por sus cualidades culinarias y características como alto valor
nutricional, aporte de carbohidratos, fuente de proteínas de alto valor biológico, vitaminas
solubles en agua (vitamina V y complejo B), minerales (Fe, Zn, Vu y Va) y carotenoides,
diversidad de genotipos con altos contenidos de proteína y masa seca (MS), agradable sabor y
textura, fácil preparación, buena aceptación en el mercado y alto potencial de exportación en
diversas formas de procesamiento. La papa criolla se considera un alimento funcional debido a
la presencia de metabolitos secundarios como compuestos fenólicos, carotenoides y alcaloides.
El escaldado se define como un tratamiento térmico cuyo fin es la estimulación (activación y/o
inactivación) de las enzimas presentes en el tejido de las plantas. La actividad enzimática
aparente se incrementa cuando aumenta la temperatura hasta alrededor de 50°C, donde
alcanza un nivel máximo conocido como la temperatura óptima para la acción enzimática. A
temperaturas más altas se observa una considerable disminución en la actividad debido a la
desnaturalización de su estructura proteínica. En el escaldado de la papa se busca la
inactivación de las enzimas que puedan ser perjudiciales en la calidad del producto final como
la enzima polifenoloxidasa que es la responsable del pardeamiento en los tubérculos
procesados. Esta reacción se genera cuando la enzima contenida en los cloroplastos entra en
contacto con el oxígeno y los sustratos fenólicos contenidos principalmente en la corteza
(alrededor del 50%) y en los tejidos en donde la concentración disminuye desde la corteza
hacia el centro. El contacto se genera mediante ruptura de las membranas celulares y los
organelos que contienen la enzima debido a procedimientos de pescoceadas deficientes como
golpes, sometimiento del tubérculo a esfuerzos y a etapas del proceso como pelado, cortado o
troceado, escaldado y cocción, entre otros
Otro efecto de los procesos de escaldado es el cambio de textura que sufre el tubérculo debido
principalmente a gelatinización de almidones y solubilización de sustancias pécticas, lo que
produce perdida de firmeza en el tejido. En papa criolla, esto puede conducir al rompimiento de
la piel cuando los tubérculos se procesan enteros.
El proceso de escaldado generalmente se hace a temperaturas que oscilan entre 80°C y 100°C
y tiempos entre 20 s y 15 min, sin embargo, se han reportado tratamientos entre 55°C y 75°C
en los que se obtienen productos con alta firmeza debido a la menor separación celular que se
genera; adicionalmente, se ha propuesto que la enzima juega un rol importante en este
fenómeno debido a que posibilita la formación de redes con iones calcio y magnesio.
OBJETIVO GENERAL
MARCO TEORICO
2.1. Escaldado
WOODROOF (1988) señala que muchos vegetales congelados, así como los deshidratados y
enlatados, requieren del escaldado si han de ser almacenados por periodos de tiempo
prolongados. Con el tiempo, los vegetales sin escaldar gradualmente llegan a ser más fibrosos,
menos dulces e insípidos y sin sabor ni aroma atractivos; cualidades que siguen
deteriorándose, perdiendo, en muchos casos, la frescura después de 6 meses. Después de un
año o más el sabor y el aroma llegan a ser desagradables al cocerlos, con una pronunciada
cualidad similar al heno. El sobreescaldado produce una excesiva lixiviación de minerales,
pigmentos, vitaminas, pérdida de sabor y valor nutricional.
La presencia de agua dura en el escaldado, o agua a la cual se le han agregado sales de calcio
o magnesio, tiende a producir endurecimiento del producto. Ello se origina al reaccionar estos
cationes con las sustancias pécticas presentes, lo cual crea una estructura de malla originada
por los puentes entre moléculas constituidos por estos iones, lo que vuelve más rígida la
estructura (FENNEMA, 2000).
Si bien es cierto el escaldado es un proceso que nos entrega beneficios que se citaron
anteriormente, también debemos conocer algunas desventajas como pérdida de textura, de
color, sabor y calidad nutritiva por el proceso de calentamiento; formación de sabor a cocido,
cierta pérdida de sólidos solubles (especialmente en escaldado acuoso) e impacto ambiental
por los requerimientos de grandes cantidades de agua y energía (MATHEIS, 1990). Otros
efectos adversos del escaldado son la modificación irreversible de la estructura celular, la
solubilización y/o destrucción de alguna vitamina y nutrientes, y la conversión de la clorofila
verde a feofitinas verde-amarillas.
2.2 Enzimas en los Alimentos. En los tejidos vegetales, enzimas como la lipoxigenasa, la
polifenoloxidasa, la poligalacturonasa y la clorofenolasa causan pérdidas en el valor nutritivo, el
sabor y la textura que canalizan las reacciones de deterioro en el interior de la célula
(endógenas), afectando la calidad de los vegetales congelados. Estas enzimas difieren en su
resistencia térmica, lo que implica que la velocidad de desactivación enzimática variará
dependiendo del tipo de enzima, variedad del vegetal, etc. (MATHEIS, 1990).
Además, la peroxidasa (POD) y la catalasa son dos de las enzimas más resistentes al calor y
de más amplia distribución. Aunque a estas enzimas no se les consideran como causantes del
deterioro durante el almacenamiento, su actividad se utiliza para evaluar la eficacia del
escaldado (SHARMA et al., 2003)
2.2.1. Peroxidasa
Se cree que el proceso de regeneración enzimática después del tratamiento térmico se deriva
de la regeneración de la estructura terciaria de la parte proteica de la enzima, cuando ésta no
ha sido inactivada o desnaturalizada en forma total por el tratamiento térmico (SHARMA et al.,
2003). Si el tratamiento térmico es incompleto la peroxidasa tiende a regenerarse, al menos
parcialmente, después del tratamiento. Las temperaturas muy altas por tiempos cortos de
inactivación tienden a producir mayor regeneración que procesos equivalentes a menor
temperatura y tiempos más largos. La regeneración de la actividad residual depende del
almacenamiento, habiéndose encontrado que a menor temperatura de almacenamiento más
largo es el tiempo para la regeneración. (BARREIRO y SANDOVAL, 2001).
METODOLOGIA
PARTE EXPERIMENTAL.
Materiales Y REACTIVOS
MÉTODO:
LA UNIDAD EXPERIMENTAL: la papa debe ser de igual tamaño, peso análogo completamente
uniforme en sus características físicas. De conseguirse las características, se puede modelar la
muestra a tamaño uniforme
tiempo resultado
(t minutos) peroxidasa
2 +(positiva)
4 +(positiva)
6 +(positiva)
8 +(positiva)
10 +(positiva)
En todas las muestras de papa la peroxidasa sale positiva, esto quiere decir que la
enzima fue inactivada por el tratamiento térmico.
60
50
40
30
20
10
0
0 2 4 6 8 10 12
tiempo
tiempo resultado
(t minutos) peroxidasa
2 +(positiva)
4 +(positiva)
6 +(positiva)
8 -(negativa)
En las muestras de papa la peroxidasa sale positiva en las tres primeras pruebas, esto
quiere decir que la enzima fue inactivada por el tratamiento térmico a tiempos de 2, 4, 6
minutos.
TABLA N° 5: Resultados del % de área inactivada a un tratamiento de 100°c.
grafica de analisis
80
70
60
% de area inactivacion
50
40
30
y = 1.8633x2 - 22.343x + 112.8
20 R² = 0.9915
10
0
0 2 4 6 8 10
tiempo
DISCUSIONES
CONCLUSIONES:
REFERENCIA BIBLIOGRAFICA
CUESTIONARIO
La polifenoloxidasa es una enzima que contiene cobre y que cataliza dos diferentes reacciones:
(a) la hidroxidación de monofenoles a o- difenoles y (b) la oxidación de o- dihidroxifenoles a
oquinonas, para llevar a cabo estas reacciones se requiere oxígeno molecular, los cuales
oxidan los sutratos produciendo el fenómeno denominado pardeamiento enzimático.
En una investigación la peroxidasa ha sido usada para evaluar la eficiencia del escaldado o
blanqueo de verduras (rabanito, papa, manzana, pera, etc) y también en el control de
pasteurización de la leche. Así, a la temperatura de pasteurización, la lactoperoxidasa se
inactiva, pero se regenera; en cambio, si la leche es sobrecalentada (más de 80-85°C) la
peroxidasa pierde su actividad en forma definitiva.
Una de las evidencias del cambio de maduración ocurre por la actividad que emplean esta
enzimas durante los primeros días el color de la corteza de los vegetales o frutos evoluciona
desde verde pintón hasta el amarillo brillante característico; después del climaterio el
pardeamiento se evidenció con la aparición de manchas entre rosadas y marrón, que con el
tiempo se incrementaron en área, número e intensidad.
Las frutas y hortalizas poseen una amplia variedad de compuestos fenólicos, de los cuales sólo
una pequeña parte de estos son sustrato para la polifenoloxidasa.
Los más importantes son catequinas ( 3-hidroxiflavanes), ésteres de ácido cinámico ácido
clorágenico ( 3- O-cafeoyl-D-ácido quinico) el cual, es el sustrato más encontrado en la
naturaleza, el 3,4-dihidroxipenilalanina (L-DOPA) que es el producto de la hidroxilación de
tirosina; y la Tirosina la cual siendo un fenol y al mismo tiempo un aminoácido constituyente de
proteínas, se encuentra en cada tejido de las plantas.
6. ¿La actividad de estas enzimas cambia con las condiciones de almacenamiento? ¿Por
qué razón?
Tienen gran importancia por una parte se ha reportado que bajo condiciones de
almacenamiento en frío la actividad de la POD disminuye (Thompson, 2003). Al respecto se ha
indicado que la actividad antioxidante de los vegetales se debe a la presencia de grupos
hidroxilo en los compuestos fenólicos, donde las condiciones de almacenamiento a bajas
temperaturas pueden favorecer su expresión. El uso de bajas temperaturas aumenta la
actividad enzimática de peroxidasa, el contenido de fenoles totales y vitamina C.