CROMATOGRAFIA DE GASES

La cromatografía de gases es la técnica a elegir para la separación de compuestos orgánicos e

inorgánicos térmicamente estables y volátiles. Su principal objetivo es la cuantificación de cada
compuesto presente en la mezcla.
La cromatografía de gases tiene amplia aplicación, en las industrias se enfoca principalmente a
evaluar la pureza de los reactantes y productos de reacción o bien a monitorear la secuencia
de la reacción. Para los fabricantes de reactivos químicos, su aplicación es en la determinación
de la pureza.
Un cromatógrafo de gases consiste en varios módulos básicos ensamblados para:

 Proporcionar un gasto o flujo constante del gas transportador (fase móvil).

 Permitir la introducción de vapores de la muestra en la corriente de gas que
fluye.
 Contener la longitud aproximada de fase estacionaria.
 Mantener la columna a la temperatura apropiada.
 Detectar los componentes de la muestra conforme salen de la columna
 Proveer una señal legible proporcional en magnitud a la cantidad de cada
componente.

Existen dos tipos de cromatografía de gases (GC): la cromatografía gas-sólido (GSC) y la

cromatografía gas-líquido (GLC), siendo esta última la que se utiliza más ampliamente, y que se
puede llamar simplemente cromatografía de gases (GC). En la GSC la fase estacionaria es sólida
y la retención de los analitos en ella se produce mediante el proceso de adsorción.
Precisamente este proceso de adsorción, que no es lineal, es el que ha provocado que este
tipo de cromatografía tenga aplicación limitada, ya que la retención del analito sobre la
superficie es semipermanente y se obtienen picos de elución con colas. Su única aplicación es
la separación de especies gaseosas de bajo peso molecular. La GLC utiliza como fase
estacionaria moléculas de líquido inmovilizadas sobre la superficie de un sólido inerte.
La GC se lleva a cabo en un cromatógrafo de gases. Éste consta de diversos componentes
como el gas portador, el sistema de inyección de muestra, la columna (generalmente dentro
de un horno), y el detector.
Descripción del equipo:

El esquema general de un cromatógrafo de gases se muestra en la figura 1.

Los componentes fundamentales de un cromatógrafo de gases, son:

 Fuente de gas.
 Sistema de inyección.
 Horno y columna cromatografía.
 Sistema de detección.
 Sistema de registro.

Figura 1. Esquema de un cromatógrafo de gases

Los gases portadores utilizados en cromatografía no afectan, en principio, a la separación

ya que no tienen ninguna influencia sobre los procesos de sorción-desorción o de partición que
se producen en la columna, por lo que no afectan a la selectividad de ésta; de cualquier forma,
los términos de difusión en la fase móvil de la ecuación de Van Deemter, sí dependen de la
naturaleza del gas portador, por lo que las curvas de AEPT (figura 2) serán ligeramente
distintas para cada tipo de gas, lo que a su vez influirá sobre la velocidad óptima de la fase
móvil y, en consecuencia sobre los tiempos de análisis.

Al margen del efecto que la naturaleza del gas portador puede ejercer sobre la altura de plato,
la elección de uno u otro tipo de gas, estará determinada fundamentalmente por el sistema de
detección utilizado. Como fuentes de gas portador se suelen utilizar cilindros de gas
comprimido de elevada pureza, capaces de suministrar una presión de gas adecuada y
constante; es de hacer notar que, en muchos casos, es necesario eliminar las trazas de
impurezas que pueda contener el gas (O2 y H2O fundamentalmente) que pueden afectar al
sistema cromatográfico, por medio de filtros adecuados. El control de la velocidad del gas
portador a través de la columna, se realiza por medio de válvulas que suministran un caudal
constante (columnas empaquetadas) o que mantienen constante la presión en cabeza de
columna (sistemas capilares).

Figura 2. Curvas de AEPT para tres gases portadores de uso habitual

El horno de un cromatógrafo de gases, tiene como misión el mantener la columna

termostatizada a una temperatura fijada con gran precisión (dentro de unos límites de ± 1 EC).

Por otro lado, es necesario que el control de termostatización del horno permita incrementar
la temperatura de éste a una velocidad prefijada y constante (para trabajar con técnicas de
temperatura programada). Evidentemente, el primer requisito es fácil de cumplir, pero cuando
se requiere trabajar con temperatura programada, el horno debe cumplir una serie de
requisitos tales como tener escasa inercia térmica (particularmente si es necesario realizar
rampas de temperatura muy rápidas) y poseer un sistema de control de temperatura muy
sofisticado que incluya la posibilidad de programar las posibles variaciones de temperatura del
horno así como los tiempos a los que han de realizarse.
 En cromatografía de gases la muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columna
cromatográfica. La elución se produce por el flujo de una fase móvil que es un gas inerte, y a
diferencia de la mayoría de los tipos de cromatografía, la fase móvil no interacciona con las
moléculas del analito; su única función es la de transportar el analito a través de la columna.
Respecto a la cromatografía líquida, la cromatografía de gases tiene la ventaja de disponer de
detectores mucho más universales (por ejemplo, el de ionización de llama). Además, para
numerosas aplicaciones, los métodos son más simples, más rápidos y más sensibles que los
correspondientes a la cromatografía líquida de alta resolución. La instrumentación requerida
para cromatografía de gases también es mucho más sencilla y económica que la empleada en
HPLC. Sin embargo, en cromatografía de gases, la influencia de la temperatura sobre la
distribución del equilibrio es considerable, a diferencia de la cromatografía líquida. Por ello, la
cromatografía de gases presenta limitaciones en tres casos:

 compuestos poco volátiles, generalmente los de peso molecular superior a 300 u.m.a.
 compuestos sensibles a una elevación de la temperatura incluso moderada (determinados
compuestos de interés biológico)
 compuestos que se encuentran en forma iónica (puesto que son e n general poco volátiles)
Por esta razón, la cromatografía de gases se emplea cuando los componentes de la mezcla
problema son volátiles o semivolátiles y térmicamente estables a temperaturas de hasta 350-
400ºC. En cambio, cuando los compuestos a analizar son poco volátiles y/o termolábiles, la
técnica separativa adecuada suele ser la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC).
A menudo la cromatografía de gases se emplea para confirmar de la presencia o ausencia de
un compuesto en una muestra determinada.

Un cromatógrafo de gases consiste de:

Fase móvil:

Gaseosa, líquida o fluido supercrítico (potencia disolvente de los fluidos a temperaturas y

Presiones superiores al punto crítico). Estas fases son generalmente gases inertes como
Helio, Argón o Nitrógeno. El gas portador lleva las moléculas del analito a través de la
Columna, este movimiento es inhibido por la adsorción que presenta el analito tanto en las
paredes de la columna cuanto en los materiales empaquetados en la misma.

Puerto de inyección:

Es un dispositivo que permite la introducción de la muestra en la corriente del gas portador.

Existe cierta variedad de diseños según el tipo de muestra que se trata de analizar. El más
común es el inyector de líquidos, que puede utilizarse para sólidos (en disolución) y gases
(mediante jeringas especiales). El inyector se trata de una cámara situada a la entrada de la
columna y calentada independientemente de ésta (a temperatura superior del punto de
ebullición del componente más volátil de la muestra, generalmente), que suele tener una
membrana de caucho a través de la cual se introduce la muestra con la ayuda de una micro
jeringa hipodérmica.
Horno de la columna:

En el interior se sitúa la columna, donde se debe tener una buena regulación de ltemperatura.
Dentro del horno la columna se conecta en un extremo al puerto de inyección, y en el otro al
detector. La columna debe estar en el centro del horno sin tener contacto conlas paredes.

Fase estacionaria:

La fase estacionaria es la encargada de separar los componentes de la muestra. Esta puede ser
un sólido o un líquido, dispuestos sobre un sólido que actúa como soporte (columna). El sólido
de la fase estacionaria puede ser de aluminio, sílica gel, carbón o tierra de diatomeas; y el
líquido de la fase estacionaria debe tener una baja viscosidad y una alta y diferencial
solubilidad. Cuando la fase estacionaria es un sólido, la interacción que puede tener con la fase
móvil se puede clasificar en: Adsorción, intercambio iónico y de filtración sobre geles porosos.
Cuando es un líquido, la interacción con la fase móvil recibe el nombre de reparto, esta última
es la forma más usual de hacer cromatografía de gases.

Para obtener la mejor resolución de dos substancias dentro de la columna, se requiere tener
una fase estacionaria donde su retención relativa sea mayor a la unidad. Esto depende del
punto de ebullición y el coeficiente de actividad de los solutos en dicha fase. De aquí que en
series homólogas el orden de elución sea el de los puntos de ebullición crecientes,
independientemente de la fase empleada, salvo en casos especiales. Por otra parte, dos
sustancias de punto de ebullición idéntico, pero de estructura química diferente, podrán
separarse fácilmente con base en su distinta solubilidad.

Soporte:

La función básica del soporte sólido es sostener la fase estacionaria. El soporte debe de tener
elevada superficie por unidad de volumen, estabilidad térmica, dureza mecánica, inactividad
química y baja resistencia al paso de un gas.
La mayoría está hecho de tierra de diatomeas (diatomita o Kieselguhr), principalmente se trata
de sílice hidratada micro amorfa, la calcinación de esta tierra dará lugar a diversos productos
según la forma y temperatura de tratamiento.

Fundente carbonato sódico, productos blancos utilizados para filtración. Celita, Celatom.
Tiene menor actividad superficial residual. El cromosorbo G es utilizado en columnas con poca
fase estacionaria y se obtienen mejores eficacias. El cromosorbo A es utilizado en escala
preparativa.

Sin fundente y a mayor temperatura, productos rosados utilizado para ladrillos refractarios.
Sil-O-Cel, Sterchamol, C-22. Son de mayor superficie y mejor resistencia mecánica, pero son los
que presentan mayor actividad superficial residual.

Columna cromatográfica:

Las columnas están hechas de cobre, acero inoxidable o tubos de vidrio, dobladas o
enrolladas. Excepto para las de vidrio, las columnas son empacadas mientras se están
doblando. Las columnas analíticas tienen una longitud de 1-6 m. de longitud y de 2-4 mm de
diámetro. Según se encuentre en ella distribuida la fase estacionaria y el valor que alcance la
relación de fases se originan los diferentes tipos de columnas. La separación de la mezcla se
realiza dentro de la columna, por lo tanto, es la parte más importante del cromatógrafo.

La primera columna utilizada fue una de relleno (James & Martin, 1952), posteriormente fue
introducida la columna capilar, siendo así los dos extremos en la gama de columnas utilizadas
en la cromatografía de gases. El criterio para la diferenciación de columnas es con base en dos
propiedades de éstas:

 Relación de fases: volumen de fase móvil/volumen de fase estacionaria; Vm/Vs

 Permeabilidad: representada por una constante dependiente de las características
geométricas de la columna; k

Con base en estas dos características se encuentran los siguientes tipos de columnas, en las
que Vm/Vs y k aumentan en orden progresivo:

1. Clásicas de relleno
2. Capilares rellenas
3. Capilares de capa porosa
4. Capilares abiertas

La elección de las columnas es lo más crítico, existen dos diferencias fundamentales que deben
ser consideradas para la elección de la columna: la cantidad de muestra que admiten
(capacidad de carga) y los valores de los flujos del gas portador. La capacidad de carga se
define como la cantidad de muestra que se puede inyectar sin pérdida apreciable de eficacia y
está relacionado con la cantidad de fase estacionaria por unidad de longitud de la columna.

Las columnas empaquetadas contienen un soporte sólido inerte con una cubierta delgada de la
fase líquida. El soporte sólido es frecuentemente tierra de diatomeas. La fase líquida puede
tener una viscosidad baja y una alta solubilidad para la mezcla de componentes.

Las columnas de capilaridad originalmente contenían una película del líquido cubriendo la
pared interna de la columna de vidrio o metal. Las columnas de capilaridad ahora contienen
una capa de revestimiento sólido dentro de ella con poro en el centro. Estas columnas son
mejores porque se les puede aplicar una velocidad óptima de flujo más rápida (aprox. de 2-5
ml por min en lugar de 1 ml por min). Debido a este tipo de columnas, los análisis han podido
ser más sensibles.

1.- Columnas clásicas de relleno

Constituidas por un tubo de metal o vidrio con relleno de soporte granular con la superficie
recubierta por una película de la fase estacionaria.

Longitud 1-10 m
Diámetro interno 2-4 mm hasta 5 cm en escala preparativa
Tamaño de la partícula de relleno diez veces menor que el diámetro del tubo
Capacidad de carga grande
Relación de fases pequeña
Permeabilidad baja

A mayor tamaño de partícula del relleno mayor será su permeabilidad, cuanto más rugosa
sea su superficie mayor capacidad de carga se obtendrá. Por esta razón es el único tipo de
columna que se usa a escala preparativa.

La suspensión del soporte en la disolución de la fase estacionaria debe agitarse

mecánicamente y, si es necesario, calentar ligeramente para evaporar la mayor parte del
solvente. El tubo de la columna debe estar perfectamente limpio, para rellenarlo se debe
introducir un extremo de ésta en el relleno preparado con la ayuda de un embudo, mientras
que por el otro extremo se hace vacío con una bomba. Como tapones es conveniente utilizar
lana de vidrio o cuarzo y una malla metálica fina (Fig. 3).

2.- Columnas capilares rellenas

Se distinguen de las columnas clásicas de relleno por le diámetro interno del tubo, no
excede un milímetro. Además, la relación entre los diámetros del tubo y de la partícula de
relleno es del orden de tres a cinco veces. Esto hace que sea un relleno más irregular y una
permeabilidad del orden de diez veces superior.

Longitud de 10-50 m.
Diámetro interno de 1 mm.
Tamaño de la partícula de relleno de 3 a 5 veces
Capacidad de carga pequeña
Relación de fases grande
Permeabilidad mayor que las clásicas

Al ser mayor la permeabilidad pueden construirse columnas más largas (10-50 m). Guichon
(1966) y Halasz (1967) han hecho estudios muy detallados de este tipo de columna.

Este tipo de columnas no está comercializado, debido a lo difícil de introducir un soporte en

un tubo capilar metálico de esa longitud. Por el contrario, es más sencillo cuando se trata de
tubos de vidrio. Se rellena un tubo Pyrex con el soporte elegido antes de estirarlo, entonces
al capilar resultante contiene ya el soporte en su interior. La fase estacionaria se
introducede manera similar a las columnas capilares abiertas (Fig. 3).
3.- Columnas capilares de capa porosa

En este caso el soporte es depositado en la pared interior del tubo, después es recubierto
por la fase estacionaria y la parte central del capilar permanece vacía.

Longitud de 25-200 m
Diámetro interno de 0.1-0.5 mm
Tamaño de la partícula de relleno varía entre el de un soporte clásico y las partículas de
carbono producidas por la pirolisis de una sustancia orgánica. Permeabilidad valores
máximos (al igual que las capilares abiertas)

El procedimiento dependerá de la naturaleza de la columna y del soporte.

Columna metálica: se prepara una suspensión del soporte, se llena la columna con la
suspensión, se cierra un extremo y se evapora el agente dispersante quedando así
adheridos a la pared del capilar.

Columna de vidrio: similar al de columnas capilares rellenas. La diferencia consiste en

introducir una varilla de acero inoxidable un el tubo de vidrio y situar el soporte entre
ambos. Después se procede al estirado manteniendo fija la varilla (Fig. 3).

4.- Columnas capilares abiertas

También conocidas como columnas Golay, quien fue el primero en utilizarla (Golay, 1958).
La fase estacionaria va depositada en la pared interior del tubo que actúa como soporte.

Longitud hasta 200 m, los más utilizados varían entre 50-100 m

Diámetro interno 0.1-0.5 mm
Capacidad de carga muy pequeña
Relación de fases es la más alta

Debido a la pequeña cantidad de fase estacionaria por unidad de longitud de la columna

tiene una capacidad de carga muy pequeña. Necesita detectores más sensibles.

Entre los factores que disminuyen la eficacia de una columna se encuentran:

 Longitud de la columna. Limita en cuanto a las velocidades lineales del gas

portador, originando tiempos de análisis muy largos y sin mejorar la resolución.

 Diámetro de la columna. Más importante en columnas capilares abiertas, por la

resistencia que opone la fase móvil a la transferencia de masas.

 Tamaño de la partícula de relleno.

 Naturaleza de las fases. Fase estacionaria: no afecta. Gas portador: viscosidad y

valores del coeficiente de difusión en la fase móvil.

 Cantidad de fase estacionaria. A menor cantidad mayor eficacia.

  Temperatura de la columna. Al aumentar esta disminuye la eficacia al afectar
directamente en el coeficiente de reparto.

 Velocidad del gas portador. Una velocidad elevada es la óptima.

 Cantidad de muestra inyectada.

Fig. 3 : Tipos de columnas cromatográficas

Detectores:

Los detectores son dispositivos que indican y miden los solutos en la corriente del gas
acarreador, convirtiendo una señal no medible directamente en una señal elaborable de una
propiedad física. Esta señal es elaborada por una comparación entre el gas acarreador puro
(blanco) y el mismo gas llevando cada uno de los componentes previamente separados en la
columna, esto es traducido en una señal eléctrica que es amplificada y registrada al momento
de salir de la columna.

Un buen detector es altamente sensible (sensibilidad), tiene una respuesta lineal (linealidad)
sobre un amplio rango de concentración y es relativamente insensible a variaciones de flujo y
temperatura (rango dinámico lineal)
Pueden ser clasificados por:

 Grado de selectividad: universales que responden a la mayoría de los solutos;

específicos-selectivos con respuesta a un grupo particular de sustancias.
 Recuperación de la muestra: en referencia a si la muestra es destruída o no.
 Modo de respuesta: dependientes de flujo de masa (cantidad de soluto
independientemente de la cantidad de gas portador); dependientes de concentración
(cantidad de soluto por unidad de volumen de gas portador).
  Proceso de detección: ionización; óptico-espectroscópico; electroquímico.

Los detectores más ampliamente utilizados son el detector de conductividad térmica (TCD)
y el detector de ionización de flama (FID).

Detector de conductividad térmica (TCD thermal conductivity detector)

Consiste de dos celdas metálicas idénticas, cada una conteniendo un filamento de alambre de
tungsteno o de tungsteno con lámina de oro. El efluente fluye a través de una celda y el gas
portador (He o H2) fluye a través de la otra. En un lado de la muestra el gas fluye por el
filamento mientras que en el lado de referencia el gas puede pasar sobre el alambre del
filamento y difundir a través de él.

Detector de ionización de flama (FID flame ionization detector)

El FID consiste de una flama hidrógeno/aire y una placa colectora. Las muestras que salen de la
columna pasan a través de la flama, la cual rompe las moléculas orgánicas y produce iones. Los
iones son colectados en un electrodo parcial y produce una señal eléctrica. Es
extremadamente sensible en un amplio rango dinámico. La única desventaja es que destruye
la muestra.
Detector fotométrico de flama (FPD flame photometric detector)

Es uno de los más usados en los métodos selectivos de cromatografía de gases. El FPD consiste
de una flama reductora que produce especies quimioluminiscentes. Estas especies emiten una
luz característica que es óptimamente filtrada por la longitud de onda deseada, la cual
determina que componentes son los detectados. La luz filtrada es medida por un
fotomultiplicador (PMT) y transducida a una señal. Se puede agregar un segundo
fotomultiplicador, el cual permite una detección simultánea de una segunda señal.
Detector de captura de electrones (ECD electron capture detector)

Es altamente sensible a compuestos halogenados y por lo tanto muy útil en la detección de

pesticidas. Da un poco de respuesta a hidrocarburos y otros carbonilos conjugados. Para
este tipo de cromatografía la muestra debe contener una fase gaseosa electrófora. Este es un
sistema donde se detectan partículas ß por absorción de especies que contienen
halógenos, nitrilos, nitratos, organometales y dobles enlaces conjugados.

Detector de fotoionización (PID photoionization GC detector)

Este tipo de detector es muy selectivo para los compuestos con hidrocarburos aromáticos o
con heteroátomos, los cuales tienen potenciales de ionización. Utiliza luz ultravioleta para
ionizar un analito, la longitud de onda oscila entre 106-150 nm. Los iones producidos son
colectados por electrodos siendo la corriente generada una medida de la concentración del
analito.
Aplicaciones:

Medioambientales:

Análisis de pesticidas y herbicidas, análisis de hidrocarburos, semivolátiles y volátiles, análisis

del aire...

Alimentos y aromas:

Fragancias y aromas, aceites, bebidas, ácidos orgánicos, azúcares, FAMES, ésteres metílicos,
triglicéridos, alcoholes...

Química Industrial:

Alcoholes, ácidos orgánicos, aminas, aldehídos y cetonas, ésteres y glicoles, hidrocarburos,

disolventes, anilinas, gases inorgánicos...

Biociencia:

Drogas, fármacos, alcoholes y contaminantes en sangre, disolventes residuales...

Derivadas del petróleo:

Gas natural, gases permanentes, gas de refinería, gasolinas, gasóleos, parafinas...