Análisis

 Instrumental  
Sustancias  absorbentes  
 Especies  absorbentes  
•  La  absorción  de  radiación  ultravioleta  o  visible  por  una  especie  atómica  o  melecular  
M  se  puede  considerar  como  un  proceso  de  dos  etapas,  la  primera  de  ellas  consiste  
en  una  excitación  electrónica  
 
M  +  hν  →  M*    
•  El   =empo   de   vida   de   la   especie   excitada   es   breve   (10-­‐8   a   10-­‐9s),   su   existencia   se  
termina  por  alguno  de  los  dis=ntos  procesos  de  relajación.  El  más  común  supone  la  
conversión  de  la  energía  de  excitación  en  calor  
 
M*  →  M  +  calor    
 
•  La   relajación   puede   ocurrir   también   por   la   descomposición   de   M*   para   dar   lugar   a  
nuevas   especies;   dicho   proceso   se   denomina   reacción   fotoquímica.   En   otros   casos   la  
relajación  puede  suponer  la  reemisión  de  fluorescencia  o  fosforescencia.    
•  Es   ú=l   reconocer   tres   =pos   de   transiciones   electrónicas   y   clasificar   las   especies  
absorbentes   sobre   esta   base.   Dichas   transiciones   incluyen   (1)   electrones   σ,   π   y   n,   (2)  
electrones  d  y  f,  y  (3)  electrones  de  transferencia  de  carga.    
•  Las   especies   absorbentes   que   con=enen   electrones   π,   σ   y   n   incluyen   iones   y  
moléculas  orgánicas,  así  como  algunos  aniones  inorgánicos.    
 a) Vapor
Espectros  de  absorción  ultravioleta  
para   1,2,4,5-­‐tetracina.   En   a)   se  
muestra   el   espectro   en   la   fase  
gaseosa,   en   él   se   pueden   ver  
b) Solución
H muchas   líneas   que   se   deben   a   las  
C t r a n s i c i o n e s   e l e c t r ó n i c a s ,  
Absorbancia

de hexano
N N
vibracionales   y   rotacionales.   En   un  
N N disolvente   no   polar   b),   se   pueden  
C
H
o b s e r v a r   l a s   t r a n s i c i o n e s  
electrónicas,   pero   se   pierde   la  
estructura   vibracional   y   rotacional.  
En   un   disolvente   polar   c),   las  
c) Solución potentes   fuerzas   intermoleculares  
acuosa
hacen  que  los  picos  electrónicos  se  
doblen,   lo   que   da   sólo   una   banda  
de   absorción   uniforme.   (Tomado  
de   S.   F.   Mason,   J.   Chem.   Soc.,   1959,  
p.  1265.)  

450 500 550 600

Longitud de onda, nm
 Especies  absorbentes  
•  Todos  los  compuestos  orgánicos  son  capaces  de  absorber  radiación  
electromagné=ca   porque   todos   con=enen   electrones   de   valencia  
que   pueden   ser   excitados   a   niveles   de   energía   superiores.   Los  
enlaces   sigma   se   pueden   excitar   solo   con   energía   proveniente   del  
ultravioleta  al  vacío.  Las  dificultades  experimentales  asociadas  con  
el   ultravioleta   de   vacío   son   significa=vas;   como   resultado   de   ello,   la  
mayoría   de   las   inves=gaciones   espectrofotométricas   de  
compuestos   orgánicos   se   han   realizado   en   la   región   de   longitudes  
de   onda   superiores   a   185   nm.   La   absorción   de   radiación   visible   y  
ultravioleta   de   longitud   de   onda   larga   está   restringida   a   un   número  
limitado   de   grupos   funcionales   (llamados   cromóforos)   que  
con=enen   electrones   de   valencia   con   energías   de   excitación  
rela=vamente  bajas.    
 Especies  absorbentes  
Transiciones   σ   →   σ*.   En   este   caso,   un   electrón   de   un   orbital   σ   enlazante   de   una  
molécula  se  excita  al  correspondiente  orbital  an=enlazante  mediante  la  absorción  de  
radiación.   Entonces   se   dice   que   la   molécula   se   encuentra   en   el   estado   excitado   σ*.  
Comparando   con   otras   posibles   transiciones,   la   energía   requerida   para   que   tenga  
lugar   la   transición   σ   →   σ*   es   grande,   correspondiendo   a   una   frecuencia   radiante   de   la  
región  ultravioleta  de  vacío.  Debido  a  las  complicaciones  experimentales  asociadas  a  
trabajar  en  el  vacío  el  estudio  de  este  =po  de  absorción  es  muy  limitado.    
 
Transiciones  n  →  σ*.  Los  compuestos  saturados  que  con=enen  pares  de  electrones  no  
compar=dos,   n,   son   capaces   de   sufrir   transiciones   n   →   σ*.   En   general,   estas  
transiciones   requieren   menos   energía   que   las   del   =po   σ   →   σ*   y   se   pueden   producir  
por  radiación  de  la  región  comprendida  entre  150  y  250  nm,  apareciendo,  la  mayoría  
de  los  picos  de  absorción,  por  debajo  de  200  nm.  Las  absor=vidades  molares  asociadas  
a   este   =po   de   absorción   son   de   magnitud   baja   e   intermedia   y   normalmente   se  
encuentran  entre  100  y  3000  L  cm-­‐1  mol-­‐1.    
•  Los   máximos   de   absorción   para   las   transiciones   n   →   σ*   =enden   a   desplazarse  
hacia  longitudes  de  onda  más  cortas  en  presencia  de  disolventes  polares  como  el  
agua  o  etanol.  El  número  de  grupos  funcionales  orgánicos  con  picos  de  este  =po  
en  la  región  ultravioleta  de  fácil  detección  es  rela=vamente  pequeño.    
 Especies  absorbentes  
•  Transiciones  n  →  π*  y  π  →  π*.  La  mayoría  de  las  aplicaciones  de  espectroscopia  de  
absorción  en  compuestos  orgánicos  se  basan  en  transiciones  de  los  electrones  n  y  π  al  
estado   excitado   π*   porque   la   energía   requerida   para   estos   procesos   produce   picos   de  
absorción   dentro   de   una   región   espectral   experimentalmente   accesible   (200   a  
700nm).   Ambas   transiciones   requieren   la   presencia   de   grupos   funcionales   no  
saturados   que   aportan   los   electrones   π.   Estrictamente   hablando,   es   a   estos   centros  
absorbentes   no   saturados   a   los   que   se   les   aplica   el   término   de   cromóforos.   Una  
diferencia   entre   ambos   procesos   es   el   efecto   que   =ene   el   disolvente   en   la   longitud   de  
onda   de   los   picos.   Los   picos   asociados   con   transiciones   n   →   π*   generalmente   se  
desplazan   hacia   longitudes   de   onda   más   cortas   (desplazamiento   hipsocrómico   o   hacia  
el  azul),  cuando  aumenta  la  polaridad  del  disolvente.    
 Especies  absorbentes  
Efecto   de   la   conjugación   de   los   cromóforos.   En   la   teoría   de   los   orbitales  
moleculares,   se   considera   que   los   electrones   π   están   deslocalizados   por  
conjugación;   los   orbitales,   por   lo   tanto,   incluyen   cuatro   (o   más)   centros  
atómicos.  El  efecto  de  esta  deslocalización  es  el  descenso  del  nivel  de  energía  
del   orbital   π*,   dotándole   de   menos   carácter   an=enlazante.   Como  
consecuencia,   los   máximos   de   absorción   se   desplazan   hacia   longitudes   de  
onda  más  largas.    
•  La  conjugación  entre  el  doble  enlace  del  oxígeno  de  los  aldehídos,  cetonas  
y   ácidos   carboxílicos   y   un   doble   enlace   olednico   da   lugar   a   un  
comportamiento   similar.   También   se   observan   efectos   análogos   cuando  
dos   grupos   carbonilos   o   carboxilatos   están   conjugados   entre   sí.   Para   los  
aldehídos   y   cetonas   α,   β   insaturados,   el   débil   pico   de   absorción  
correspondiente   a   las   transiciones   n→π*   se   desplaza   40nm   o   más   hacia  
longitudes   de   onda   más   largas.   Además,   aparece   un   pico   de   absorción  
intenso   correspondiente   a   la   transición   π   →   π*.   Este   úl=mo   pico   sólo  
aparece   en   la   región   ultravioleta   de   vacío   si   el   grupo   carbonilo   no   está  
conjugado.    
TABLA 14.1 Características de absorción de algunos cromóforos comunes.

Cromóforo Ejemplo Solvente Lmáx, nm Emáx Tipo de transición

Alqueno C 6H 13CH “CH 2 n-Heptano 177 13 000 p S p*

Alquino C 5H 11C ‚C ¬CH 3 n-Heptano 178 10 000 p S p*
196 2000 —
225 160 —
Carbonilo CH 3CCH 3 n-Hexano 186 1000 n S s*
‘
O 280 16 n S p*
CH 3CH n-Hexano 180 grande n S s*
‘ 293 12 n S p*
O
Carboxilo CH3COOH Etanol 204 41 n S p*
Amida CH 3CNH 2 Agua 214 60 n S p*
‘
O
Azo CH 3N “NCH 3 Etanol 339 5 n S p*
Nitro CH3NO2 Isooctano 280 22 n S p*
Nitroso C4H9NO Eter etílico 300 100 —
665 20 n S p*
Nitrato C2H5ONO2 Dioxano 270 12 n S p*

electrones de14.1  
En   la   tabla   valencia que pueden
se   enumeran   ser excitados
los   cromóforos   para comunes  
orgánicos   intrincada combinación
y   las   longitudes   de líneas
de   onda   traslapadas.
aproximadas   Elcuales  
a   las   resul-
llegar a niveles
presentan   de energía
absorción.   superiores.
Los   datos   para   la  La de y   la  tado
energía(lmáx)  
ubicación   es una máxima  
intensidad   banda de absorción
(emáx)   sirven  ancha que auna  
sólo   como   menudo guía  
excitación
aproximada   asociada
para   la  con los electrones
iden=ficación,   queaconstituyen
porque   parece ser
mbas   se   ven   influenciadas   por  continua. Ladel  
los   efectos   compleja
solvente,   naturaleza
así   como   pde
or  los es-
otros  
ladetalles  
mayoríaestructurales  
de los enlacesde   sencillos es lo suficientemente
la   molécula.   pectros
Además,   la   conjugación   entre  dificulta
dos   o   omás  
imposibilita
cromóforos   el análisis
=ende   a  teórico de-
ocasionar  
desplazamientos  
alta para que su absorción en  los  máximos  
quede de  restringida
absorción  aa  longitudes  
la re- de  tallado.
onda  más   No largas.  
obstante, Para  fiesnalizar,  
posible los  ededucir
fectos  vibracionales  
enunciados
ensanchan  
gión conocida los  como
picos  ultravioleta
de  absorción  de en  vacío
las  regiones  
(l ! 185ultravioleta  
nm), ycualitativos
 visible,  lo  cual   dificulta  con  frecuencia  
o semicuantitativos la  determinación  
en relación con los ti-
precisa  
donde de  componentes
los la  absorción  mde áxima.    
la atmósfera también ab- pos de transiciones electrónicas causantes de un espectro
sorben radiación en forma intensa. Dichas transiciones de absorción en particular a partir de consideraciones
 100 000 TABLA 14.2 Absorción por parte de compuesto
80 000 β -caroteno que contienen heteroátomos con electrones no e
60 000
40 000 Compuesto Lmáx, nm
20 000
0
350 400 450 500 550 600 650 CH3OH 167
(CH3)2O 184
1250
1000 CH3
O Las   absor=vidades  
CH3Cl molares   para  
173 las  
750 N N CH3 CH3I n  à  p*  son  normalmente  
transiciones   258
500 O N N
por  3)2lo  
bajas   y  (CH S regular   varían   de   22910   a  
Absortividad molar, ε

Cafeína
250
CH3-­‐︎NH 215
0 100   L   mol 1   cm
2 -­‐︎1
.   Por   otra   parte,   los  
250 270 290 310 330 350 (CH3)3N 227
valores   para   las   transiciones   p   à   p*  
500 O oscilan   casi   siempre   entre   1000   y   15  
400
300
C
O
OH
C CH3 000   L  ymol︎
no -­‐1   cm-­‐︎1con
llenos .   En  energías
la   figura  
que 14.2   se  
dependen de lo
200 O enlazados
muestran   a los ionesde  
espectros   metálicos. Las diferenci
absorción  
Ácido acetilsalicílico
100 gías entre estos orbitales d, y, por tanto, la p
0
(aspirina) hpicos.  
250 270 290 310 330 350 máximo de absorción correspondiente, depe
posición del elemento en la tabla periódica
15
12
O tado de oxidación y de la naturaleza del li
9 CH3 C CH3 do a él.
6 Acetona Los espectros de absorción de iones de
3
0
de transición de los lantánidos y actínidos
210 230 250 270 290 310 330 350 manera notable de los que se muestran e
Longitud de onda, nm 14.3. Los electrones que se ocupan de la ab
estos elementos (4f y 5f, respectivamente) e
FIGURA 14.2 Espectros de absorción de compuestos
gidos contra influencias externas por med
orgánicos típicos.
trones que ocupan orbitales con números
 TABLA 14.2 Absorción por parte de compuestos orgánicos
que contienen heteroátomos con electrones no enlazantes.

Compuesto Lmáx, nm Emáx

CH3OH 167 1480

(CH3)2O 184 2520
CH3Cl 173 200
CH3I 258 365
(CH3)2S 229 140
CH3NH2 215 600
(CH3)3N 227 900

Los   compuestos   orgánicos   saturados   que   con=enen   heteroátomos   como   oxígeno,  

nitrógeno,   yazufre  
no llenos o   halógenos   cuentan   con  
con energías queelectrones  
dependen no  de
enlazantes  
los ligandos que   se   pueden  
excitar   mediante   radiación   en   el   intervalo   de   170   a   250   nm.   En   la   tabla   se   enlistan  
enlazados a los iones metálicos. Las diferencias de ener-
ejemplos  de  dichos  compuestos.  Algunos  de  ellos,  como  los  alcoholes  y  los  éteres,  son  
gías entre
solventes   comunes,   de  estos
modo  orbitales d, y, poren  tanto,
que   su   absorción   la posición
esta   región   impide   del cuan=ficar   la  
absorción   de   los   analitos  
máximo disueltos   en  
de absorción estos   compuestos  dependen
correspondiente, a   longitudes   dede  
la onda   por  
debajo   de  posición
180   a   200  del nm.   En   ocasiones,  
elemento en lala  tabla
absorción   en   esta  de
periódica, región   se   usa   para  
su es-
determinar  halógenos  y  compuestos  con  azufre.    
tado de oxidación y de la naturaleza del ligando uni-
do a él.
 Especies  absorbentes  
•  AromáDcos.   Los   espectros   ultavioleta   de   los   hidrocarburos   aromá=cos   se  
caracterizan  por  tres  grupos  de  bandas  cuyo  origen  son  las  transiciones  π→π*.  En  el  
benceno   estas   tres   bandas   caracterís=cas   se   ven   muy   afectadas   por   la   sus=tución  
del   anillo;   los   efectos   sobre   las   bandas   de   las   dos   longitudes   de   onda   más   largas  
=enen   un   interés   especial   porque   pueden   estudiarse   con   un   equipo  
espectrofotométrico  común.    
•  Por   definición,   un   auxocromo   es   un   grupo   funcional   (-­‐OH,   -­‐NH2)   que   no   absorbe   en  
la  región  ultravioleta  pero  que  =ene  el  efecto  de  desplazar  los  picos  del  cromóforo  
hacia   longitudes   de   onda   más   largas,   así   como   de   incrementar   sus   intensidades.  
Estos  sus=tuyentes  auxocrómicos  =enen,  al  menos,  un  par  de  electrones  n  capaces  
de   interaccionar   con   los   electrones   π   del   anillo.   esta   interacción   =ene,  
aparentemente,  el  efecto  de  estabilizar  el  estado  π*,  disminuyendo,  de  ese  modo,  
su  energía;  el  resultado  es  un  desplazamiento  batocrómico.    
 Especies  absorbentes  
•  Aniones   inorgánicos.   Algunos   aniones   inorgánicos   presentan   picos   de   absorción   ultravioleta  
que  son  consecuencia  de  las  transiciones  n→π*.  Como  ejemplos  se  incluyen  los  iones  nitrato  
(313nm),  carbonato  (217nm),  nitrito  (360nm),  azida  (230nm)  y  tri=ocarbonato  (500nm).    
•  Absorción   por   iones   lantánidos   y   acEnidos.   Los   iones   de   la   mayoría   de   los   elementos  
lantánidos   y   achnidos   absorben   en   las   regiones   ultravioleta   y   visible.   A   diferencia   del  
comportamiento   de   la   mayoría   de   los   absorbentes   inorgánicos   y   orgánicos,   sus   espectros  
están   formados   por   picos   de   absorción   caracterís=cos,   bien   definidos   y   estrechos,   que   se  
ven  muy  poco  afectados  por  el  =po  de  ligando  asociado  con  el  ion  metálico.    
•  Las  transiciones  responsables  de  la  absorción  de  los  elementos  de  la  serie  de  los  lantánidos  
parecen  involucrar  los  dis=ntos  niveles  de  energía  de  los  electrones  4f,  mientras  que  en  la  
serie   de   los   achnidos   son   los   electrones   5f   los   que   interaccionan   con   la   radiación.   Estos  
orbitales   internos   están   muy   protegidos   de   las   influencias   externas   por   los   orbitales  
ocupados   por   electrones   con   mayores   número   cuán=cos   principales.   Como   consecuencia,  
las   bandas   son   estrechas   y   no   se   ven   rela=vamente   afectadas   por   la   naturaleza   del  
disolvente  o  de  las  especies  unidas  a  los  electrones  externos.    
a ser angostas y relativamente no se ven afectadas por

5 4 nant
4 Ni2+ 3 Ho3+ yodo
3
2 2 hexa
1 1 Prus
0 0
400 500 600 700 400 500 600 700
nato
de ca
10 000 3
8000 Cr2O72– Er3+ la tra
6000 2 a un
4000
Absortividad molar, ε

2000 1 hierr

Absortividad molar, ε
0
0
cont
400 500 600 700 400 500 600 700 tioci
10 8 elect
8 Cu2+ Pr 3+ estad
6 6
4 4 sione
2 excit
0 2
400 500 600 700 0 ción
400 500 600 700 espe
5
4 Co 2+ 3 E
3 Sm3+ carga
2 2
1 mo r
0 1
comp
400 500 600 700 0
Longitud de onda, nm 400 500 600 700 bre(I
Longitud de onda, nm el ion
FIGURA 14.3 Espectros de absorción de soluciones ejem
FIGURA 14.4 Espectros de absorción de soluciones L
acuosas de iones metálicos de transición.
acuosas de iones de tierras raras. trans
es la
Los   espectros   de   absorción   de   iones   de   las   series   de   transición   de   los  
la especie unida lantánidos  
mediantey  los
achnidos  
electronesdifieren  
externosde   manera  quin
(véa-
notable  de  los  que  se  muestran  en  la  figura  14.3.  Los  electrones  que  se  ocupan  de  la  absorción  en  estos  elementos  
se figura 14.4).
gión
(4f   y   5f,   respec=vamente)   están   protegidos   contra   influencias   externas   por   medio   de   elec-­‐   trones   que   ocupan  yodo
orbitales   con   números   cuán=cos   principales   más   grandes.  14B.3 Absorción
Entonces,   por transferencia
las   bandas   =enden   a  de carga
ser   angostas   y  
rela=vamente  no  se  ven  afectadas  por  la  especie  unida  mediante  
Desde los  eellectrones  
punto deevista
xternos    
cuantitativo, la absorción por
  transferencia de carga tiene particular importancia
porque las absortividades molares son muy altas (e !
 Especies  absorbentes  
•  Absorción  por  metales  de  transición.  Los  iones  y  complejos  de  los  
18  elementos  de  la  primera  de  las  dos  series  de  transición  =enen  a  
absorber   radiación   visible   en   uno,   si   no   en   todos,   sus   estados   de  
oxidación.   Sin   embargo,   al   contrario   que   en   los   elementos   de   los  
lantánidos  y  achnidos,  las  bandas  de  absorción  son,  con  frecuencia,  
anchas   y   están   enormemente   influenciadas   por   los   factores  
químicos  del  entorno.    
•  La  serie  de  los  metales  de  transición  se  caracteriza  por  tener  cinco  
orbitales  d  parcialmente  ocupados  (3d  en  la  primera  serie  y  4d  en  la  
segunda),   cada   uno   de   ellos   capaces   de   alojar   a   un   par   de  
electrones.   Las   caracterís=cas   espectrales   de   los   metales   de  
transición   suponen   transiciones   entre   los   dis=ntos   niveles   de  
energía  de  estos  orbitales  d.    
 Especies  absorbentes  
•  Absorción   por   transferencia   de   carga.   Desde   el   punto   de   vista   analí=co,  
las   especies   que   presentan   absorción   por   transferencia   de   carga   =enen  
par=cular  importancia,  ya  que  sus  absor=vidades  molares  son  muy  altas  (ε  
>  10,000).  Así,  estos  complejos  proporcionan  unos  medios  de  muy  elevada  
sensibilidad   para   la   detección   y   determinación   de   especies   absorbentes.  
Muchos   complejos   inorgánicos   presentan   absorción   por   transferencia   de  
carga  y  por  ello  se  llaman  complejos  de  transferencia  de  carga.  Ejemplos  
comunes   de   tales   complejos   incluyen   el   complejo   fenólico   y   el   complejo  
de  =ocianato  con  el  hierro(III),  el  complejo  de  o-­‐fenantrolina  de  hierro(II),  
el   complejo   de   yoduro   de   yodo   molecular   y   el   complejo   ferro/ferricianuro  
responsable  del  color  azul  del  azul  de  Prusia.    
 
 Especies  absorbentes  
•  Para   que   un   complejo   presente   un   espectro   de  
transferencia   de   carga,   es   necesario   que   uno   de   sus  
componentes   tenga   caracterís=cas   de   dador   de  
electrones  y  el  otro  componente  tenga  propiedades  de  
aceptor   de   electrones.   La   absorción   de   la   radiación  
implica,   entonces,   la   transferencia   de   un   electrón  
desde   el   dador   hasta   un   orbital   que   está   en   gran   parte  
asociado  con  el  aceptor.  Como  consecuencia,  el  estado  
excitado  es  el  resultado  de  un  proceso  =po  oxidación/
reducción  interno.  Este  comportamiento  difiere  del  de  
un   cromóforo   orgánico,   donde   el   electrón   en   el   estado  
excitado  está  en  un  orbital  molecular  formado  por  dos  
o  más  átomos  
 Aplicación  en  el  análisis  cualitaDvo  
•  Las   aplicaciones   de   la   espectrofotometría   ultravioleta   y   visible   en   el   análisis   cualita=vo   están  
en   cierta   medida   limitadas,   ya   que   el   número   de   máximos   y   mínimos   de   absorción   es  
rela=vamente  pequeño.  Por  tanto,  una  iden=ficación  inequívoca  es  a  menudo  imposible.    
•  Modalidades   de   registro   gráfico   de   datos   espectrales.   En   espectroscopia   molecular  
cualita=va   existen   diferentes   =pos   de   registros   espectrales.   Lo   más   habitual   es   representar  
en  ordenadas  el  porcentaje  de  transmitancia,  la  absorbancia,  el  logaritmo  de  la  absorbancia  
o  la  absor=vidad  molar.  En  abscisas  es  habitual  representar  la  longitud  de  onda  o  el  número  
de  onda.    
•  Al  elegir  un  disolvente  no  sólo  se  debe  tener  en  cuenta  su  transparencia  a  la  energía  radiante  
sino  también  sus  posibles  efectos  sobre  el  sistema  absorbente.  Con  bastante  frecuencia  los  
disolventes   polares   como   el   agua,   alcoholes,   ésteres   y   cetonas   =enden   a   modificar   la  
estructura   fina   del   espectro   que   se   ob=ene   en   fase   gaseosa.   Es   mas   probable   obtener  
espectros   parecidos   a   la   fase   gaseosa   cuando   se   u=lizan   disolventes   no   polares   como   los  
hidrocarburos.  Además,  las  posiciones  de  los  máximos  de  absorción  se  ven  afectadas  por  la  
naturaleza   del   disolvente.   Entre   los   disolventes   habituales   para   espectrofotometría  
ultravioleta   se   incluyen   agua,   etanol   del   95%,   ciclohexano   y   1,4-­‐dioxano.   Para   la   región  
visible,  cualquier  disolvente  incoloro  es  ú=l.    
 naturaleza del solvente. La regla es utilizar el mismo
1.6 solvente cuando se comparan 0.6espectros de absorción
con fines de identificación. 4
Fase 0.5
gaseosa En la tabla 14.3 se enumeran algunos solventes co-
n ultravioleta para el análisis 0.4
munes y la longitud de onda aproximada por abajo3 de

Absorbancia
1.4
do casi siempre soluciones Heptano de la cual no pueden usarse debido0.3 a la absorción. Estas
2
Absorbancia

caso de compuestos volátiles,

como solvente
longitudes de onda, denominadas longitudes de onda
0.2
eosa son1.2 más útiles a menudo de corte, dependen en gran medida de la pureza1 del
líquida 1.6o de soluciones. Com- solvente.5 Entre los solventes 0.1
habituales para espec-
Agua como
a 14.1a y la 14.1b. Los espec-
solvente 0.0
pueden 1.4 obtener dejando que
Alcohol 480 520
5 La mayoría de los proveedores de reactivos químicos en Estados Unidos
560 600
do puro se evaporen y equili- como Longituddedegrado
ofrece grados espectroquímicos de solventes. Los solventes onda,es-
nm
solvente
una celda o cubeta con tapón. pectral han sido tratados para eliminar las impurezas y cumplen o exceden
1.2
no sólo se tiene 260 que tener280 en 300 los requisitos320 establecidosFIGURA
en Reagent14.7 Espectros
Chemicals, 9a. ed.,de citocromo
Washington, DC:c reducido a
Longitud de onda, nm American Chemical Society,
cuatro anchos de banda del espectro.se1) 20 nm, 2) 10 nm,
2000. Los suplementos y actualizaciones
, sino también sus posibles pueden obtener en http://pubs.acs
FIGURA 14.6 Efecto del solvente en el espectro de 3) 5 nm .org/reagents/index.html.
y 4) 1 nm. (Cortesía de Varian, Inc., Palo Alto, CA.)
absorbente. Casi siempre,
absorción del acetaldehído.
los
o agua, alcoholes, ésteres y ce- TABLA 14.3 Solventes para las regiones ultravioleta y
a estructura
ble observar fina del parecidos
espectros espectroa los devisible.
fase gaseosa
(véase figura 14.6)
s vibracionales. Escuando se utilizan solventes no po-
más proba- trofotometría ultravioleta se incluyen agua, etanol de
lares, como los hidrocarburos. Además, las posiciones Límite 95%, inferiorciclohexano y 1,4-dioxano.
Límite inferiorPara la región visible,
de los máximos de absorción se ven afectadas por la de longitud de longitud
roscopia de absorción ultravioleta para
cualquier solvente incoloro es útil.
naturaleza del solvente. La regla es utilizarSolvente
el mismo de onda, nm Solvente de onda, nm
nales orgánicos
solvente se encuentra
cuando se comparanen R. espectros
M. de absorción
Morrill, Spectrometric Identification
con fines de identificación. of
tulo 6,EnNueva York:14.3
Wiley, 1991. Agua 180 Éter dietílico 210
la tabla se enumeran algunos solventes co- 14C.2 Efecto de la anchura de la rendija
f Organic Compounds, 2a. ed., Hoboken, Etanol 220 Acetona 330
munes y la longitud de onda aproximada por abajo de
n el pasado, varias organizaciones han El efecto Dioxano
de la variación de320
la anchura de la rendija y,
la cual no pueden usarse debido a la absorción.
que todavía pueden ser útiles, como el
HexanoEstas 200
longitudes de onda, denominadas longitudes
traviolet Spectral Data, A.P.I. Research
de onda
Ciclohexano por tanto,Cellosolve
200 del ancho de banda
320efectivo, se demostró ya
de corte,
stitute dependen
of Technology; en gran
Sadtler medida de la pureza del
Handbook para los espectros de fase gaseosa en la figura 13.8. El
Tetracloruro 260
solvente. 5 EntreLaboratories;
los solventes habituales para espec-
a: Sadtler Research Ame- de carbono efecto en los espectros de soluciones se ilustra para el
, Committee E-13, Philadelphia.
citocromo c reducido en la figura 14.7. Es evidente que
 Aplicación  en  el  análisis  cuanDtaDvo.    
La   espectroscopía   de   absorción   es   una   de   las   herramientas   más   ú=les   y   más  
u=lizadas   por   el   químico   en   el   análisis   cuan=ta=vo.   Las   importantes  
caracterís=cas  de  los  métodos  espectrofotométricos  y  fotométricos  incluyen:    
(1)  gran  aplicabilidad  tanto  para  sistemas  orgánicos  como  inorgánicos,    
(2)   sensibilidades   caracterís=cas   10-­‐4   a   10-­‐5M   (con   frecuencia   este   intervalo  
puede  ampliarse  de  10-­‐6  a  10-­‐7M  con  algunas  modificaciones),    
(3)  selec=vidad,  de  moderada  a  alta,    
(4)  buena  precisión  (normalmente,  se  encuentran  incer=dumbres  rela=vas  de  1  
a   3%,   aunque,   con   precauciones   especiales,   los   errores   se   pueden   reducir   a  
algunas  décimas  por  ciento)  y    
(5)  adquisición  de  datos  fáciles  y  adecuada.    
 Aplicación  en  el  análisis  cuanDtaDvo.    
Las   medidas   de   absorbancia   espectrofotométricas   se   hacen,   normalmente,   a   una  
longitud   de   onda   correspondiente   a   un   pico   de   absorción,   ya   que   el   cambio   en   la  
absorbancia  por  unidad  de  concentración  es  mayor  en  ese  punto,  consiguiéndose  así́,  
la  máxima  sensibilidad.  También  se  logra  que  las  medidas  sean  menos  sensibles  a  las  
incer=dumbres   que   surgen   de   las   limitaciones   del   instrumento   para   reproducir   con  
precisión  la  longitud  de  onda  seleccionada.    
Las  variables  que  suelen  influir  en  el  espectro  de  absorción  de  una  sustancia  incluyen  
la   naturaleza   del   disolvente,   el   pH   de   la   disolución,   la   temperatura,   las  
concentraciones  de  electrolito  y  la  presencia  de  sustancias  interferentes.    
 Aplicaciones  en  especies  absorbentes    
 
•  En   las   tablas   anteriores   se   enlistan   los   grupos   de   cromóforos  
orgánicos  más  comunes.  La  determinación  espectrofotométrica  de  
cualquier   compuesto   orgánico   que   con=ene   uno   o   más   de   estos  
grupos   es   fac=ble.   En   la   bibliograda   se   encuentran   muchos  
ejemplos  de  este  =po  de  determinaciones.    
•  También  numerosas  especies  inorgánicas  absorben  radiación  UV  y  
visible,  por  lo  que  son  suscep=bles  a  la  determinación  directa.  Ya  se  
mencionó   que   muchos   iones   de   los   metales   de   transición   son   de  
colores  cuando  están  en  solución,  por  lo  que  se  pueden  determinar  
por   medio   de   mediciones   espectrofotométricas.   Pero   además  
existen  otras  especies  que  también  presentan  bandas  de  absorción  
caracterís=cas.   Como   ejemplos   se   pueden   citar   los   iones   nitrito,  
nitrato   y   cromato,   los   óxidos   de   nitrógeno,   los   halógenos   y   el  
ozono.    
Selección  de  un  método  analí=co  
 Detalles  del  procedimiento    
El  primer  paso  de  cualquier  análisis  fotométrico  o  espectrofotométrico  es  el  establecimiento  de  
condiciones   de   trabajo   que   originen   una   relación   reproducible,   de   preferencia   lineal,   entre   la  
absorbancia  y  la  concentración  del  analito.    
1.  Selección  de  la  longitud  de  onda    

Por  lo  regular,  si  desea  la  más  alta  sensibilidad,  las  medidas  de  absorbancia  espectrofotométricas  
se   hacen   a   una   longitud   de   onda   correspondiente   a   un   pico   de   absorción   porque   el   cambio   en   la  
absorbancia  por  unidad  de  concentración  es  mayor  en  este  punto.  Además,  la  absorbancia  es  casi  
constante   con   longitud   de   onda   a   una   absorción   máxima,   lo   cual   produce   un   buen   cumplimiento  
de  la  ley  de  Beer.  Para  finalizar,  las  pequeñas  incer=dumbres  que  surgen  por  no  reproducir  con  
precisión   los   parámetros   de   longitud   de   onda   del   instrumento   =enen   menos   influencia   a   una  
absorción  máxima.  
 
2.        Variables  que  influyen  en  la  absorbancia.  
Entre  las  variables  comunes  que  influyen  en  el  espectro  de  absorción  de  una  sustancia  están  la  
naturaleza   del   solvente,   el   pH   de   la   solución,   la   temperatura,   las   altas   concentraciones   de  
electrolito   y   la   presencia   de   sustancias   que   interfieren.   Los   efectos   de   estas   variables   deben  
conocerse  y  se  deben  elegir  las  condiciones  para  el  análisis  de  manera  que  las  pequeñas  e  incon-­‐  
troladas  variaciones  en  sus  magnitudes  no  afecten  la  absorbancia.    
Determinación  de  la  relación  entre  absorbancia  
y  concentración    
•  El   método   de   los   patrones   externos   es   el   que   se   usa   con   frecuencia  
para   establecer   la   relación   entre   absorbancia   y   concentración.  
Después   de   decidir   las   condiciones   para   el   análisis,   se   prepara   la  
curva  de  calibración  a  par=r  de  una  serie  de  soluciones  patrón  que  
abarquen  el  intervalo  de  concentración  esperado  en  las  muestras.  
Rara  vez  es  seguro  suponer  que  se  cumpla  la  ley  de  Beer  y  u=lizar  
sólo   un   patrón   para   determinar   la   absor=vidad   molar.   Los  
resultados   de   un   análisis   nunca   se   deben   basar   en   los   valores   de  
absor=vidad  molar  encontrados  en  las  publicaciones  especializadas.    
•  Lo  ideal  es  que  los  patrones  de  calibración  tengan  una  composición  
parecida   a   la   de   las   muestras   por   analizar,   no   sólo   en   cuanto   a   la  
concentración  del  analito,  sino  también  respecto  a  la  concentración  
de  las  otras  especies  presentes  en  la  matriz  de  la  muestra.    
 Procedimiento  de  análisis  
•  Determinación  de  la  longitud  de  onda  
•  Variables  que  influyen  en  la  absorbancia  
•  Construcción  de  la  curva  de  calibración  
•  Análisis  simultaneas  de  mezclas  de  sustancias  absorbentes.  
Valoraciones  cuanDtaDvas  
Entonces tenemos que la constante de ionización en equilibrio para el rojo de

Determinación  de  la  constante  de  

metilo está dado por:

disociación  
K = de  un  electrólito  
[ H ][MR ]
[ HMR]
C
+
(10-1)
−

•  Los   electrolitos   débiles   en   solución   no   se   encuentran   totalmente  

disociados   sino   en   equilibrio,   entre   la   fracción   disociada   y   la   no  
disociada.  
• basándonos
Al  tomar  en
en  que la reacción
forma   general  existente
y  como  ees la siguiente,
jemplo,   un  ácido  débil  se  =ene:  
HMR H+ + MR- ( 10-2)

•  El  que  el  ácido  se  encuentre  totalmente  disociado  o  no  depende  de  
las  caracterís=cas  del  medio  o  sea,  del  pH  de  la  solución  en  la  que  
se  encuentra;  así  en  un  medio  bastante  ácido  la  muestra  del  acido  
débil  se  encontrará  casi  sin  disociar,  estableciéndose  que    
[HMR]  >>  1[MR],  
•  mientras   que   el   medio   es   altamente   básico   el   acido   débil   se  
encontrará   casi   totalmente   disociado   estableciéndose   entonces  
que    
[HMR]  <<  [MR]    
ón y el HMR tiene estructura básica, MR predominantemen

marillo. Determinación   de  la  porque

La forma básica es amarilla constante  
absorbedazul
e   y vio
disociación   d e   u n   electrólito  
es tenemos que la constante de ionización en equilibrio para
•  Para  estos  compuestos  es  posible  determinar  
está dado por:
la  pka    
[ H + ][MR − ]
KC =
[ HMR]
•  Tomando  log  en  ambos  lados  de  la  ecuación  
tenemos  que  
Tomando log en ambos lados de la ecuacuión 10-1 tenemos que;

onos en   que la reacción existente[MR

pK = pH − log(
C
es ]la
−
)
siguiente,
( 10-3)
[ HMR]
HMR H + MR-
+

La constante de ionización puede ser calculada de medidas de la razón de

 Determinación  de  la  constante  de  
disociación  de  un  electrólito  
•  La  constante  de  ionización  puede  ser  calculada  de  medidas  de  la  razón  de  [MR-­‐]/
[HMR]  a  valores  de  pH  conocidos.  
Ya  que  las  dos  formas  absorben  fuertemente  en  el  rango  visible,  la  razón  de  [MR-­‐]/
[HMR]  puede  ser  establecida  espectrofotométricamente.    
•  Los   espectros   de   absorción   de   un   electrólito   en   soluciones   ácidas   y   básicas   son  
determinadas  y  dos  longitudes  de  onda  son  seleccionados  para  analizar  mezclas  de  
ambas  formas.    
•  Estas  dos  longitudes  de  onda,  1  y  2,  son  escogidas  de  manera  que  en  una  la  forma  
ácida   =ene   una   absor=vidad   molar   (ε)   mucho   más   alto   comparado   con   la   forma  
básica.   Cuando   comparamos   los   valores   de   las   absor=vidades   molares   de   las  
soluciones  básicas  en  la  longitud  de  onda  de  máxima  absorción  de  las  bases  ocurre  
todo  lo  contrario.    
•  Las   absor=vidades   molares   de   HMR   y   MR-­‐   son   determinadas   en   la   longitud   de  
onda   que   corresponde   al   máximo   de   absorción   para   cada   una   de   las   especies.  
Construyendo  una  gráfica  de  Abs  vs  la  concentración  de  la  especie  a  su  longitud  de  
onda   máximo   correspondiente   podemos   determinar   el   valor   de   ε   para   [HMR]   y  
[MR-­‐]    
spectivamente
e las dos formas utilizado. Se establece de esta mane
Determinación  de  la  constante  de  
del rojo de metilo simultáneamente.

uaciones disociación  
el cual se dutiliza
e  un  esistemáticamente
lectrólito   par
•  La   composición   de   una   mezcla   (buffer)   de   [HMR]   y   [MR-­‐]   puede   ser  
,λ1 = ε HMR ] + εlas
ncentraciones λ1 b[ HMR
calculada   de
a   par=r   de  
MR
dos
− λ1ab
las   formas
[ MR
bsorbancias   −del
−](10A1   y4   A)2   arojo de metilo
  las   longitudes   simultán
de   onda   1   y  
2   respec=vamente   u=lizado.   Se   establece   de   esta   manera   un   sistema   de  
,λ2 = ε HMR λ 2 b[ HMR
ecuaciones   el  ] + ε MRse  
cual   b[ MR −
− λ 2 u=liza   ](10 − 5)
sistemá=camente   para   determinar   las  
concentraciones  de  las  dos  formas  del  rojo  de  me=lo  simultáneamente.    

Atotal ,λ1 = ε HMRλ1 b[ HMR] + ε MR −λ1 b[ MR −](10 − 4)

ntonces se utilizan = εlaHMR
Atotal ,λ en λ b[ HMR ] + ε MR − λ b[ MR −](10 − 5)
ecuación de Henderson-Hasselbalch
2 2 2

eterminar
Estos  el valor
valores   de pK
entonces   y Kce.n  la  ecuación  de  Henderson-­‐Hasselbalch  para  
se  uc=lizan  
finalmente  determinar  el  valor  de  pKa  y  Ka  

⎛ [ MR − ] ⎞
pK a =entonces
Estos valores pH − log ⎜ se utilizan
⎟ en la ecuación ( 10-4)
de Hend
⎝ [ HMR ] ⎠
Problema  prácDco  
 Determinación  de  la  constante  de  disociación  de  
un  electrólito  
Considerando  datos  experimentales  a  la  longitud  de  onda  de  431  nm:  
Aplicando  la  ecuación:  

[!! ] [!!" − !! ]
= !
[!"] [!! − !!! ]
Donde:  
 A=  Absorbancia  de  la  mezcla  a  431  nm  
AHA=  0.227  
AA-­‐  =  0,040  
   
Determinar  analíDcamente  los  pH  de  las  soluciones  buffer  preparadas