Scribd Logo
Cargar

¡Te damos la bienvenida a Scribd!

  • 77 vistas

    Cromatografía - Generalidades XP

    Cargado por

    Margot Mendoza Salas
    La cromatografía es un método de separación de mezclas basado en el intercambio de solutos entre dos fases. Existen varios tipos clasificados por la naturaleza de sus fases o por su proceso químico-físico. La cromatografía en capa fina usa una capa de partículas como fase estacionaria sobre un soporte, mientras que la cromatografía en columna separa grandes cantidades de material. La elección del eluyente y adsorbente depende de la polaridad de los componentes a separ

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como PDF, TXT o lea en línea desde Scribd

    Cromatografía - Generalidades XP

    Cargado por

    Margot Mendoza Salas
    77 vistas39 páginas
    La cromatografía es un método de separación de mezclas basado en el intercambio de solutos entre dos fases. Existen varios tipos clasificados por la naturaleza de sus fases o por su proceso químico-físico. La cromatografía en capa fina usa una capa de partículas como fase estacionaria sobre un soporte, mientras que la cromatografía en columna separa grandes cantidades de material. La elección del eluyente y adsorbente depende de la polaridad de los componentes a separ

    Descripción original:

    vv

    Derechos de autor

    © © All Rights Reserved

    Formatos disponibles

    PDF, TXT o lea en línea desde Scribd

    ¿Le pareció útil este documento?

    ¿Este contenido es inapropiado?

    La cromatografía es un método de separación de mezclas basado en el intercambio de solutos entre dos fases. Existen varios tipos clasificados por la naturaleza de sus fases o por su proceso químico-físico. La cromatografía en capa fina usa una capa de partículas como fase estacionaria sobre un soporte, mientras que la cromatografía en columna separa grandes cantidades de material. La elección del eluyente y adsorbente depende de la polaridad de los componentes a separ

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como PDF, TXT o lea en línea desde Scribd
    Descargar como pdf o txt
    77 vistas39 páginas

    Cromatografía - Generalidades XP

    Cargado por

    Margot Mendoza Salas
    La cromatografía es un método de separación de mezclas basado en el intercambio de solutos entre dos fases. Existen varios tipos clasificados por la naturaleza de sus fases o por su proceso químico-físico. La cromatografía en capa fina usa una capa de partículas como fase estacionaria sobre un soporte, mientras que la cromatografía en columna separa grandes cantidades de material. La elección del eluyente y adsorbente depende de la polaridad de los componentes a separ

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como PDF, TXT o lea en línea desde Scribd
    Descargar como pdf o txt
    Está en la página 1de 39

    Cromatografía

    Andrade Gameros Eder Arturo


    Jimenez Nava Carlos Eduardo
    Rivera Islas Salma Natalia
    Suárez Montero Evelin Daniela
    a)Cromatografía
    -Es un método de separación de mezclas, basado en el
    intercambio de los solutos entre 2 fases.

    Tipos: Existen distintos criterios


    de clasificación de cromatografías.

    ⇓ ⇓ ⇓
    1.a)Por la naturaleza de sus fases
    #Cromatografía Líquido -Líquido.

    #Cromatografía gas-líquido

    #Cromatografía Líquido-Sólido

    #Cromatografía gas-Sólido
    2.a)Proceso químico-físico
    Cromatografía de Adsorción
    Se basa principalmente en las diferencias en la
    afinidad relativa de los compuestos por el sólido
    utilizado como fase estacionaria.

    Las separaciones obtenidas se determinan casi


    exclusivamente por interacciones polares,
    siendo la fase estacionaria más polar que la
    fase móvil.
    Cromatografía de reparto.

    En la cromatografía de reparto se utilizan fases estacionarias


    polares (sílice, alúmina, hidroxiapatito) y fases móviles
    apolares (ciclohexano, isooctano, tetracloruro de carbono,
    etc.).

    Interacción de los grupos polares de los analitos con los


    grupos polares de la superficie del relleno.
    Cromatografía de Partición:
    La fase estacionaria es un líquido soportado en un sólido inerte. Otra vez, la fase
    móvil puede ser un líquido o un gas.

    Ejemplos: La cromatografía en papel es un tipo de cromatografía de partición en


    la cual la fase estacionaria es una capa de agua adsorbida en una hoja de papel.

    La cromatografía de gases y de alta resolución son técnicas de partición


    ampliamente empleadas.
    Con base en la naturaleza del soporte en el que se aloja la fase
    estacionaria:

    -Cromatografía plana.

    -Cromatografía en columna,
    fenómeno de adsorción
    Adsorción:
    La adsorción es un proceso por el cual los átomos, iones o moléculas quedan
    retenidas en la superficie de un material; dentro de la química se dice que la
    adsorción de una sustancia es su acumulación en una determinada superficie
    interfacial entre dos fases.
    Tipos de adsorción según el tipo de interacción soluto-
    adsorbente
    Adsorción por intercambio: Ocurre cuando los iones de la sustancia se concentran en una
    superficie como resultado de la atracción electrostática en los lugares cargados de la superficie.
    Adsorción física o fisisorción: Se debe a las fuerzas de Van der Waals, y la molécula adsorbida no
    está fija en un lugar específico de la superficie; por ello es libre de trasladarse en la interfase. En
    este tipo de adsorción el adsorbato conserva su naturaleza química.

    Adsorción química o quimiosorción: Ocurre cuando el adsorbato forma enlaces fuertes en los
    centros activos del adsorbente.
    En este tipo de adsorción el adsorbato sufre una transformación, más o menos intensa, de su
    naturaleza química
    Propiedad de retención
    El comportamiento de retención refleja la distribución del soluto entre la fase móvil
    y la estacionaria. El volumen de fase móvil necesario para transportar la banda de
    soluto desde el punto de inyección, a través de la columna, hasta el detector (en el
    máximo del pico del soluto) se define como el volumen de retención, V r

    Vr = tr Fc
    El gasto o flujo volumétrico, en términos de los parámetros de la columna, depende
    la sección transversal de la columna vacía, la porosidad total del relleno (empaque)
    de la columna y la velocidad lineal promedio de la fase móvil.
    Rf
    Rf significa “Relación de frentes”, es una relación de distancias, y se expresa como el
    cociente entre la distancia recorrida por la sustancia y la distancia recorrida por el disolvente
    hasta el frente del eluyente:

    Rf = (a) distancia que recorre la muestra desde el punto de aplicación


    (b) distancia que recorre el disolvente hasta el frente del eluyente
    c) Cromatografía en capa fina
    Para la cromatografía en capa fina (TLC), la fase estacionaria es una capa de
    partículas de unos milímetros de espesor, fijadas sobre un soporte sólido
    generalmente de aluminio, plástico o vidrio. Después de aplicar el analito cerca de
    la parte inferior de la placa seca el, disolvente empieza a producir la separación.

    La ventaja principal de la TLC es que se analizan simultáneamente la muestra y


    el patrón, mientras que en la cromatografía en columna las muestras se analizan
    individualmente.
    Aplicación de la Cromatografía en capa fina
    -Las técnicas de aplicación de la cromatografía en capa fina se aplican para
    desarrollar las condiciones para la separación en cromatografía en líquidos de
    alta resolución.

    -La cromatografía en capa fina tiene amplio uso en los laboratorios clínicos y es
    la estructura de apoyo de muchos estudios bioquímicos y biológicos. También
    tiene una gran aplicación en los laboratorios industriales.
    D) Eluyentes utilizados en la cromatografía de
    capa fina
    Los eluyentes más utilizados se dividen en dos
    los que son Polares y los que son ligeramente
    polares o no polares.
    Polares LP o NP

    AcetOEt Éter de petróleo

    Piridina Éter dietílico

    Benceno Ciclohexano

    Etanol CCL4

    Metanol CHCl3

    H2O Hexano
    Soportes utilizados en la cromatografía de capa
    fina Los Soportes más utilizados sólo son 3.

    Vidrio

    Plático

    Metálicos
    Reveladores utilizados en la cromatografía de
    capa fina
    Los tres reveladores más comunes son 3:

    Luz UV

    vapores de yodo

    Rocío con solución de H2O/H2SO4


    Factores que influyen en una separación por
    cromatografía en capa fina
    a) Temperatura: a menor temperatura las sustancias se adsorben más en la fase estacionaria.

    b) La cromatografía debe llevarse a cabo en un área sin corrientes de aire.

    c) Limpieza de las placas. Muchas placas están contaminadas con grasa o agentes plastificantes o
    adhesivos. Para el trabajo a pequeña escala, éstas deben limpiarse corriendo primero una mezcla de
    cloroformo y metanol y después dejar secar completamente antes de aplicar la muestra.

    d) Pureza de los disolventes.


    Cromatografía en columna. (CC) Características
    y aplicaciones

    Se utiliza para la separación de una mezcla formada por


    dos o más compuestos diferentes,
    El proceso de cromatografía en columna consta de una fase móvil
    (eluyente) y una fase estacionaria (adsorbente), los cuales dependen de
    las sustancias que se deseen separar.
    Uso

    La cromatografía en columna se va a utilizar


    en la separación de grandes cantidades de
    material (por ejemplos, > 100 mg)
    Consta de cuatro etapas:

    ● Empaque de la columna con el absorbente y el eluyente adecuados

    ● Adición de la mezcla a separar dentro de la columna

    ● Elución de la columna hasta lograr la separación de los componentes de la


    mezcla

    ● Recuperación de las sustancias ya separadas


    Factores que influyen en una separacion por
    cromatografia en columna

    Temperatura: A menor temperatura las


    sustancias se absorben más en la fase móvil.

    Masa de la muestra: Muestras de gran masa


    tardan más en ser separadas.
    H) Elección del eluyente
    El eluyente a elegir debe tener ciertas características y se debe de realizar una
    prueba en cromatografía en capa fina, debe de presentar una buena separación
    de los componentes de la muestra. y se debe de seleccionar aquél eluyente en el
    cual el Rf tenga un valor <3 y >0.

    la elección del eluyente, tiene que tomar en consideración la polaridad del líquido
    y la eleutropía de la misma.
    Elección del adsorvente
    Un adsorbente es un sólido que tiene la capacidad de retener sobre su superficie
    un componente presente en corrientes líquidas o gaseosas.

    La elección del adsorvente va de la mano con la elección del eluyente, ya que


    esta elección tiene que ver con la eleutropía del eluyente.
    cromatografía de gases
    la fase móvil es un gas inerte (helio o nitrógeno) y la fase estacionaria es un
    sólido (cromatografía gas-sólido) o un líquido “sostenido” por un sólido inerte
    (cromatografía gas-líquido).

    Este tipo de cromatografía siempre es en columna, ya que es la única manera de


    que la fase móvil gaseosa se mantenga fluyendo, confinada dentro del sistema.
    La columna puede estar rellena con la fase estacionaria, en forma semejante a la
    cromatografía líquida, o bien la fase estacionaria puede depositarse sobre las
    paredes de un tubo muy delgado (0.25mm de diámetro) y largo (hasta 100m)
    Aplicación
    Las áreas de aplicación son muy diversas

    El análisis de drogas y fármacos en fluidos biológicos como la saliva, la sangre, la orina

    Seguir la transformación de las sustancias responsables de la transmisión neurológica

    Determinar la presencia de contaminantes en el medio ambiente

    Descifrar la composición de los combustibles fósiles

    Realizar el control de calidad de los productos químicos y farmacéuticos manufacturados

    etc.
    CROMATOGRAFÍA DE FASE REVERSA
    En la cromatografía de fase reversa (RPC) permite separar moléculas en base a su
    polaridad; se utiliza un empaque hidrofóbico, usualmente un grupo funcional
    octadecilo u octilo y una fase móvil polar.

    Fase estacionaria

    consiste en una matriz porosa e insoluble a la que se le han unido químicamente


    compuestos hidrofóbicos. Los soportes para casi todos los rellenos se preparan
    con sílica rígida, formada por partículas mecánicamente resistentes, porosas y
    uniformes, con diámetros de 3, 5 o 10 micras.
    También llamada como cromatografía de interacción hidrofóbica (HIC); para
    referirse a las aplicaciones en las que se emplean sustituyentes y matrices
    compatibles con fluidos biológicos. Es común cuando se habla de purificación de
    proteínas y carbohidratos,

    RPC es más empleado para referirse a la separación de moléculas en sistemas


    que son inadecuados para la separación de macromoléculas biológicas.
    Puede considerarse que la RPC es un proceso de partición en donde los solutos
    están distribuidos entre una fase estacionaria no polar y una fase móvil polar. Los
    solutos no polares tienden a adsorberse en la fase estacionaria y se mueven a
    través del sistema más lentamente que los solutos polares.
    Purificación de biomoléculas
    la RPC se usa de manera generalizada para separar los siguientes grupos de
    biomoléculas:
    • Proteínas y péptidos de origen natural
    • Proteínas y péptidos recombinantes
    • Péptidos obtenidos por digestión enzimática
    • Péptidos sintetizados químicamente
    • Oligonucleótidos sintéticos
    Equipo de HPLC

    La técnica de fase reversa es el tipo de cromatografía más ampliamente utilizada


    en HPLC que son las siglas del inglés High Performance Liquid Chromatography.

    La cromatografía de líquidos de alta resolución utiliza presiones elevadas para


    hacer pasar un flujo de fase móvil a través de una columna empacada con
    partículas micrométricas
    Sistemas de bombeo

    Las bombas utilizadas en el HPLC son muy potentes y precisas. El flujo debe ser libre de pulsaciones y con
    un caudal que pueda variar entre 0.1 y 10 ml/min, la presión puede ser hasta de 6000psi (lbs/in 2 ) y todos los
    componentes deben ser resistentes a la corrosión. Existen tres tipos de bombas: bombas recíprocas, bombas
    de jeringa y bombas de presión constante o neumática.

    Sistemas de inyección de la muestra

    el factor limitante en la precisión de las medidas en cromatografía de líquidos por HPLC, es la


    reproducibilidad con que se puede introducir la muestra en la columna. El problema se agrava por el
    ensanchamiento de banda que acompaña a la carga de las columnas.

    Columnas, la separación de los componentes de la muestra se produce en la columna. La mayoría de las


    columnas para HPLC se construyen con tubos de acero inoxidable de diámetro interno uniforme. Esta clase
    de tubos miden entre 10 y 30 cm. El diámetro interno de las columnas es a menudo de 4 a 10 mm y los
    tamaños de las partículas de los rellenos más comunes son 3, 5 y 10 μm. Para aumentar la vida de la
    columna analítica se coloca delante una precolumna que elimina la materia en suspensión y los
    contaminantes de los disolventes
    Termostatos

    La mayoría de los aparatos lleva hornos que controlan la temperatura en las


    columnas. Otra forma de controlar con precisión la temperatura es colocando las
    columnas en camisas con agua que provenga de un baño de temperatura constante

    detectores

    Detectores de absorbancia: son los detectores más empleados ya que tanto las
    proteínas como los ácidos nucleicos absorben luz de esta región

    Los detectores de absorbancia ultravioleta más simples son los fotómetros de filtros
    con una lámpara de mercurio como fuente. La desventaja que presentan estos
    aparatos es que el efluente no se puede monitorear a varias longitudes de onda al
    mismo tiempo.
    otros detectores

    fluorescencia

    infrarrojo

    indice de refracción

    dispersión de luz (ELSD)

    espectrometría de masa

    Detectores de arreglos de diodos

    Sistemas para el tratamiento de los disolventes Los recipientes que contienen


    los solventes a menudo se equipan con un sistema para eliminar los gases
    disueltos, como oxígeno y nitrógeno, que interfieren formando burbujas en los
    Referencias :v
    UNAM; Cromatografía; 04/06/2017
    http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/5.3CromatografiadeGasesInstrumentacion_2759.pdf

    CUN; Cromatografía de partición; 05/06/2017 http://www.cun.es/diccionario-medico/terminos/cromatografia-particion

    UNAM; Técnicas Cromatográficas; 05/06/2017; http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/M.Cromatogrficos_6700.pdf

    OMS; La cromatografía en capa fina y su aplicación; 05/06/2017


    http://apps.who.int/medicinedocs/es/d/Jh1790s/24.7.html

    Edgar Ernesto Esquivel Soto Q; Lidia Irene Leal Guadarrama, Métodos fisicoquímicos en
    Biotecnología CROMATOGRAFÍA DE FASE REVERSA. 08/06/17
    http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/cromatografia_de_fase_reversa.pdf

    También podría gustarte

    pFad - Phonifier reborn

    Pfad - The Proxy pFad of © 2024 Garber Painting. All rights reserved.

    Note: This service is not intended for secure transactions such as banking, social media, email, or purchasing. Use at your own risk. We assume no liability whatsoever for broken pages.


    Alternative Proxies:

    Alternative Proxy

    pFad Proxy

    pFad v3 Proxy

    pFad v4 Proxy