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    Laboratorio Adn

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    Este documento proporciona instrucciones para extraer ADN de un higado de pollo a través de una serie de pasos: 1) Triturar el higado y filtrar para separar los tejidos, 2) Añadir sal muerta para romper los núcleos y liberar el ADN, 3) Usar detergente SDS para separar el ADN de las proteínas, 4) Precipitar el ADN con alcohol isopropílico, y 5) Identificar el ADN mediante una reacción con difenilamina que lo tiñe de color.

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    Este documento proporciona instrucciones para extraer ADN de un higado de pollo a través de una serie de pasos: 1) Triturar el higado y filtrar para separar los tejidos, 2) Añadir sal muerta para romper los núcleos y liberar el ADN, 3) Usar detergente SDS para separar el ADN de las proteínas, 4) Precipitar el ADN con alcohol isopropílico, y 5) Identificar el ADN mediante una reacción con difenilamina que lo tiñe de color.

    Título original

    LABORATORIO ADN

    Derechos de autor

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    Este documento proporciona instrucciones para extraer ADN de un higado de pollo a través de una serie de pasos: 1) Triturar el higado y filtrar para separar los tejidos, 2) Añadir sal muerta para romper los núcleos y liberar el ADN, 3) Usar detergente SDS para separar el ADN de las proteínas, 4) Precipitar el ADN con alcohol isopropílico, y 5) Identificar el ADN mediante una reacción con difenilamina que lo tiñe de color.

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    Este documento proporciona instrucciones para extraer ADN de un higado de pollo a través de una serie de pasos: 1) Triturar el higado y filtrar para separar los tejidos, 2) Añadir sal muerta para romper los núcleos y liberar el ADN, 3) Usar detergente SDS para separar el ADN de las proteínas, 4) Precipitar el ADN con alcohol isopropílico, y 5) Identificar el ADN mediante una reacción con difenilamina que lo tiñe de color.

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    UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSÉ DE CALDAS

    FACULTAD DE MEDIO AMBIENTE Y RECURSOS NATURALES


    Laboratorio de Bioquímica-Ingeniería Ambiental
    EXTRACCIÓN DE DNA

    FUNDAMENTO

    El ADN es la mayor de las moléculas conocidas. Una hebra entera de ADN consta de
    millones de átomos. Al separarse de una célula, el ADN se rompe en múltiples
    fragmentos. En solución, esas hebras poseen una carga eléctrica levemente negativa,
    hecho que contribuye a crear una química fascinante. Por ejemplo, los iones salinos son
    atraídos hacia las cargas negativas del ADN, con el efecto de neutralizarlos, y ese
    fenómeno impide que los fragmentos separados de ADN se adhieran entre sí.
    Controlando las concentraciones de sales, los biólogos provocan que los fragmentos de
    ADN se dispersen o se aglomeren. Y en esto reside el secreto de la remoción del ADN
    celular.

    MATERIALES Y REACTIVOS

    IMPORTANTE. Cada grupo debe traer: Hígado de pollo, Arena, Gasa, Jabón Líquido

    • Mortero con Pistilo • 5 Tubos de ensayo


    • 1 probeta de 100ml • 1 Pinza para tubo de ensayo
    • 1 Erlenmeyer de 100ml • 1 Gradilla
    • 1 Embudo • Papel Filtro
    • 1 Pipeta graduada de 1 ml • Agua destilada
    • 1 Pipeta graduada de 10ml • NaCI 2M
    • 1 Beaker de 100ml • NaCI (sólido)
    • 1 Beaker de 250ml • NaHCO3
    • 1 Agitador de vidrio • Solución de SDS
    • 1 Mechero • Alcohol Isopropílico al 96%
    • 1 Placa • Reactivo de Difenilamina*
    • 1 Trípode

    *Reactivo de Difenilamina: 1g de difenílamina en 100ml de ácido acético glacial y 2.5ml de


    ácido sulfúrico concentrado
    DESARROLLO EXPERIMENTAL

    I. EXTRACCIÓN DE DNA

    • Triturar medio higadito de pollo en un mortero. Añadir arena para que al triturar se
    puedan romper las membranas y queden los núcleos sueltos.
    • Añadir al triturado, 50ml de agua. Remover hasta hacer una especie de papilla o
    puré.
    • Filtrar varias veces (2 o 3) para separar los restos de tejidos que hayan quedado por
    romper.
    • Medir el volumen del filtrado con una probeta.
    • Añadir al filtrado un volumen igual de cloruro sódico 2M. Con esto conseguimos
    producir el estallido de los núcleos para que queden libres las fibras de cromatina.
    • A continuación se añade 1ml de SDS o de jabón líquido. La acción de este detergente
    es formar un complejo con las proteínas y separarlas del ADN. Así quedará el ADN
    libre de las proteínas que tiene asociadas.
    • Añadir mediante una pipeta 50 centímetros cúbicos de alcohol isopropílico al 96%.
    Hay que hacerlo de forma que el alcohol resbale por las paredes del vaso y se formen
    dos capas. En la inferfase, precipita el ADN.
    • Introducir una varilla de vidrio e ir removiendo en la misma dirección. Sobre la varilla
    se van adhiriendo unas fibras blancas, visibles a simple vista, que son el resultado de
    la agrupación de muchas fibras de ADN.

    II. IDENTIFICACIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS. REACCIÓN DE DIFENILAMINA

    Tome el ADN obtenido en el proceso anterior y resuspéndalo en 3 ml del buffer preparado


    con 120ml de agua; 1.5g de NaCl; 5g de NaHCO3 y 5ml de jabón líquido. Adicione a esta
    solución 5ml del reactivo de difenilamina (recién preparado). Caliente en un baño de agua
    hirviendo durante diez minutos y observe la coloración obtenida.

    BIBLIOGRAFÍA

    • Deshilando el Tejido de la Vida. Revista Investigación y Ciencia. Noviembre de 1998.


    • PLUMMER, David. Bioquímica Práctica. Bogotá: Editorial Me Graw Huí. 1981.

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