Universidad el Bosque

Programa de Biología
Asignatura: Bioquímica
Docente: Susana Lara
Práctica de laboratorio Nº2. Extracción de fibras de ADN
Cardona Julian C., Santander jorge A., Garcia Alejandro., Ahumada Eliana
20/09/2018
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Resumen:

El ADN, es la estructura que define las características que va a tener un individuo, tanto
genotípicas (internas), como externas (fenotípicas). Esta molécula se compone por
nucleótidos, que a su vez están constituidos por una base nitrogenada, un azúcar y un
grupo fosfato. Para lograr observar las fibras de ADN, en la práctica de laboratorio, se
trabajaron tres sustancias: espinaca y higado de pollo; a cada una se le agregó un buffer
casero previamente preparado, para luego centrifugar los tubos eppendorf con las muestras
y observar el desprendimiento de las fibras. Al final de la práctica se logró observar que las
fibras se desprenden gracias a movimientos circulares que se realizan en el tubo.

Palabras clave:
ADN, fibras, centrifugación, buffer

Abstract:
DNA is the structure that defines the characteristics that an individual will have, both
genotypic (internal), and external (phenotypic). This molecule is composed of nucleotides,
which in turn are constituted by a nitrogenous base, a sugar and a phosphate group. In order
to observe the DNA fibers, in the laboratory practice, two substances were worked: spinach
and chicken liver; a pre-prepared homemade buffer was added to each one, to then
centrifuge the eppendorf tubes with the samples and observe the detachment of the fibers.
At the end of the practice it was possible to observe that the fibers are detached thanks to
circular movements that are made in the tube.

Key words:
DNA, fibers, centrifugation, buffer
Introducción: superenrollada, que en los procariotas es
Fue en 1865, cuando el padre de la de forma circular y en los eucariotas tiene
genética, Gregor Mendel, empezó a enrollamiento de la hélice sobre sí mismo
estudiar la bases moleculares de la que observada más de cerca, es una
herencia basado en su experiencia de doble hélice; las cuales se unen mediante
hibridación con plantas ; pero fue hasta puentes de nitrógeno que se anclan a las
1868 que Watson y Crick quienes bases nitrogenadas, que pueden ser
basados en los datos recopilados por purinas (adenina y guanina) o pirimidinas
Rosalind Franklin, descubrieron el modelo (citosina y timina). La guanina se une con
molecular del ADN (ácido la citosina formando tres puentes de
desoxirribonucleico) (Solari, 2004). El hidrógeno, mientras que la adenina se
ácido desoxirribonucleico, es un ácido una con la timina formando dos puentes
nucleico que se encuentra que contiene de hidrógeno. En las paredes de las
los datos e información genética que se hélices, se encuentran azúcares, de tipo
van a expresar en un individuo. Esta pentosa, y un grupo fosfato que se une a
molécula se encuentra en la célula en la pentosa en el carbono cinco de esta.
forma de X, también llamado cromosoma, Una base nitrogenada, un azúcar y un
la cual alberga una estructura grupo fosfato, forman un nucleótido. Se
sabe también, que el ADN posee tres
tipos de estructuras: la primaria, que es la
secuencia de nucleótidos; la secundaria,
que se constituye por la doble hélice
antiparalela por lo que una va en sentido
5’ - 3’ y la otra en sentido 3’ - 5’, y
finalmente la estructura terciaria que es la
forma en que el ADN se almacena (Singer
& Berg, 2015).
Figura 3. Trituración del material con el
mortero

Figura 1. Unidades básicas que forman el

ADN llamados nucleótidos, hebras
simples de ADN unidos mediante un
azúcar y un grupo fosfato, polimerización
mediante la cual se unen dos hebras
simples, formación de puentes de
hidrógeno y la doble hélice del ADN ya
formada (Alberts, 2008)

Materiales y métodos Figura 4. Pesaje de muestras de hígado de

pollo y espinaca con el buffer.
Para la práctica de laboratorio se realizó
la extracción del ADN de dos productos Posteriormente se procedió a preparar el
orgánicos, los cuales fueron el hígado de Buffer el cual consiste en una mezcla de
pollo y la espinaca, cada muestra con un agua destilada (120 ml), sal (1,5 g),
peso de 2,5 g(Fig. 2) bicarbonato de sodio (5 g) y detergente
líquido (5 ml). seguido a esto se adiciono
en un vaso precipitado el cual fue
conservado en un baño de hielo triturado
para controlar su T°
Se mezcló 5 ml del triturado con 10 ml
del tampón frío y se centrifugó a baja
velocidad durante 5 minutos, (Fig. 5) este
proceso se realizó tanto para la espinaca
como para el hígado de pollo.
Figura 2. muestras (2.5 g) de Hígado de
pollo y de espinaca.

para este proceso fue necesario cortar el

material en pequeños pedazos y realizar
la trituración del material por medio de un
mortero y un pistilo, con 10 ml de agua
destilada el cual permite romper las
células y exponer así su material genético
(Fig. 3)

Figura 5. Centrifugado a baja velocidad

durante 5 minutos
 se disocia con facilidad, dándole la
Al terminar los 5 minutos de centrifugado, capacidad de actuar en una
se sacó con la pipeta el sobrante de la solución acuosa como ácido o
superficie y se retiró 5 ml del caldo base (Cotton,1996)
molecular a un tubo de ensayo, ● Sal de mesa (NaCl) que actúa
posteriormente fue añadido una pequeña como base.
cantidad de ablandacarnes y después ● Detergente líquido, el cual
con una pipeta se adicionan 10 ml de contiene sodio dodecilo sulfato
alcohol frío lentamente por las paredes (SDS) que se encuentra
del tubo que debe estar inclinado, normalmente en productos de
evidenciando así la estructura del ADN aseo personal (Falcón, 2007)
(fig. 6). Finalmente, se agita suavemente ● Agua destilada.
por 2 a 3 minutos para extraer fibras
blancas de ADN. La ruptura de tejidos y paredes celulares
macerando los diferentes compuestos
(Fig. 3) se realiza con el objetivo de
exponer las membranas y su contenido,
sin embargo este método tiene como
desventaja que no permite recuperar ADN
de buena calidad. (Rocha,2002) Posterior
a esto para la liberación de ADN, se hace
uso del SDS que es un detergente iónico,
(posee un grupo ionizado fuerte en su
extremo hidrófilo). Estos detergentes
iónicos desplazan y separan las
moléculas lipídicas entre sí, y separan las
moléculas lipídicas con las proteínas de
membrana, liberando el ADN del núcleo y
la célula contenido celular queda
expuesto liberando el ADN del núcleo.
Cuando las células se rompen, su ADN y
Figura 6. Fibras de ADN en muestras de
contenido se vierten en el buffer. A
hígado de pollo y espinaca
menudo se incluyen además, la ARNasa
Resultado y análisis (destruye el ARN), las proteasas
(destruye las proteínas), y el SDS. En
Para poder llevar a cabo la extracción del conjunto, este caldo de contenido celular,
ADN se preparó un buffer el cual estaba fragmentos de ARN y proteínas puede
compuesto por:
tener un gran impacto en el pH de la
● El bicarbonato de sodio (HCO3) el solución. Debido a que el ADN es
cual actúa como un ácido, ya que sensible al pH, es importante que la
tiene la capacidad tanto de solución buffer regule el caldo y mantenga
eliminar un protón (H+) y pasar a el pH en un valor estable (Falcón ,2007).
ser un carbonato (de fórmula En el caso de la sal (NaCl), esta, en
particular forma una capa iónica suave
molecular CO3 -2) como de ganar
un protón y pasar a ser ácido que recubre al ADN protegiéndolo y
carbónico, esto se debe a que el ayudando a evitar su degradación
ácido carbónico es muy inestable y (Rocha,2002)
Las enzimas desoxirribonucleicas se mantiene compacto sin diluirse, lo que
(ADNasas) pueden cortar el ADN en ayuda al desprendimiento de sus fibras.
pedazos como defensa biológica, Un componente muy común en los
evitando que se observe con éxito el detergentes es el sulfato de sodio, el cual
ADN, por esta razón es necesario desempeña una gran labor removiendo
desnaturalizarlas por medio de un agente grasas y proteínas que constituyen las
caotrópico (NaCl) que es una sustancia membranas que rodean la célula y el
que desorganiza la red tridimensional del núcleo. Una vez que estas membranas se
agua influyendo en la organización de sus han roto, el ADN es liberado de la célula.
moléculas a través de sus enlaces de El alcohol cumplió una función de gran
hidrógeno, y en la interacción de estas importancia debido a que el ADN junto
con otros solutos como macromoléculas con este se precipita y de esta forma
tales como proteínas tendiendo a puede ser evidenciado, además separa el
disolverlas (Bidegain,2016). ADN de otros componentes celulares, los
posteriormente con el objetivo de retirar cuales son dejados en la solución acuosa.
los contaminantes de la muestra de ADN
se usa la centrifugación. (Fig. 5)
El ADN es insoluble en alcohol, por lo que Cuestionario
al verterlo a bajas T° en la sustancia
buffer nos permite ver el ADN con 1. Para qué se somete la muestra a
triturado?
claridad, gracias a que el alcohol lo
➢ Mediante la maceración
separa de otros componentes celulares, generamos el rompimiento de
los cuales son dejados en la solución muchas membranas celulares
acuosa. como son la pared celular y la
De las extracciones de ADN realizadas membrana celular generando una
(fig. 6), el tejido donde más se evidencio liberación de el contenido nuclear
el ADN fue en hígado, esto pudo deberse en el que se encuentra el ADN
a que en los tejidos vegetales son más
2. Cuál es la función del
frágiles y la maceración puede afectar en detergente y las sales?
mayor medida el ADN de estos tejidos ➢ El detergente líquido ayuda a
dañándose o separándolo, a diferencia romper la bicapa de fosfolípidos de
del tejido del hígado que tiene más las membranas plasmáticas y la
resistencia y el ADN se mantiene de envoltura nuclear. La molécula de
mejor calidad. ADN es soluble en agua y por
tanto invisible, pero si se pone en
contacto con ADN que haya
Conclusiones estado en un medio salado y
Se logró el desprendimiento de fibras de alcohol frío el ADN se vuelve
ADN en las tres sustancias, que se insoluble y precipita. Por lo tanto el
evidenciaron con largas estructuras agua salada ayuda a la
fibrilares blancas. precipitación en el alcohol. La sal
también ayuda a separar el ADN
Todos los procesos de extracción, y
de las histonas ( Martinez, 2015).
purificación se basan en las
características fisicoquímicas del ADN, 3. Cuál es la función del
que es soluble en soluciones ablandacarnes?
concentradas de sal pero insoluble en ➢ Cuando agregamos una pizca de
alcohol. Ya que el bicarbonato de sodio es ablandador de carnes
una sal de reacción ácida, el ADN se detenemos a las proteínas
libera muy fácil en el buffer y en el alcohol (conocidas como nucleasas)
 para que ADN no sea degradado Recuperado 7 de septiembre
Las células se libera una gran de 2016, de monografias.com
cantidad de proteínas, algunas Sitio web:
de estas proteínas tienen como http://www.monografias.com/tr
función degradar al ADN de abajos91/informe-experimento-
patógenos como son las extraccion-adn/informe-
bacterias y los virus. Para experimento-extraccion-
evitarlo agregamos el adn.shtml
ablandador de carnes, el cual
➢ Bidegain, B. F. D. A. (2016,
contiene proteasas, es decir,
June). Series liotrópicas en la
proteínas especializadas en la
degradación de otras proteínas. química macromolecular. In
En los ablandadores de carnes Anales de Química (Vol. 112,
usualmente encontramos No. 2).
papaína, la cual se extrae de la ➢ Cotton, F. A. (1996). Química
papaya. Otras fuentes de inorgánica básica. Limusa,.
proteasas que puedes usar en Falcón, L. I., & Valera, A. (2007).
vez del ablandador de carnes Extracción de ácidos nucleicos.
son: jugo de piña, solución Eguiarte LE; Souza V y Aguirre
limpiadora de lentes de X.(eds). Ecología Molecular.
contacto, y jugo de papaya. México DF CONABIO, 499-
4. Qué papel cumple el alcohol en 515.
la extracción?
➢ Krude, T (2008) ADN.
➢ El alcohol se utiliza para precipitar
el ADN en la interfase alcohol y Estados Unidos: Editorial Akal.
agua debido a que este se vuelve Concepción, J (2005) Prácticas de
apolar e insoluble en alcohol, de biología molecular. Bogotá,
esta manera es posible evidenciar Colombia: Editorial Pontificia
las fibras de ADN ya que se hace Universidad Javeriana.
visible porque las diferentes ➢ Rocha, P. J. (2002). Teoría y
cadenas se van aglutinando entre
sí al precipitar debido a la acción práctica para la extracción y
de fuerzas físicas . El alcohol es purificación del ADN de palma
menos denso que el agua del de aceite. Revista Palmas,
extracto y por eso flota sobre la 23(3), 9-17.
capa del extracto( Martinez, 2015). ➢ Singer, M., Berg, P. (2015)
GENES & GENOMES A
Bibliografía:
CHANGING PERSPECTIVE.
➢ Alberts, B., & Bray, D. (2006). University Science Books. Mill
Introducción a la biología Valley. pp 14 - 24
celular. Ed. Médica ➢ Solari, A. (2004) GENÉTICA
Panamericana. HUMANA Fundamentos y
aplicaciones en medicina. Ed
➢ Alberts, B. & et al (2008) Panamericana 3° edición.
Molecular Biology of THE Buenos Aires. pp. 2 - 8
CELL. Ed Garland Science 5°
edición. New York. pp 3 - 17

➢ Arnulfo salas betancour.

(2016). Extracción de ADN.