Quimica Clinica

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DEFINICION DE CONCEPTOS
ENZIMAS: Son proteínas especializadas que tienen la

función de acelerar reacciones químicas.
VELOCIDAD: Cambio en la cantidad de materiales iniciales o

bien, de productos por unidad de tiempo. Ej.(moles/s)
CATALIZADOR: Agente que incrementa la velocidad de la

reacción química sin alterarse así mismo durante el proceso.
ENZIMA = CATALIZADOR
DEFINICION DE CONCEPTOS
APOENZIMA: Parte proteica de la enzima
COFACTORES: Moléculas pequeñas, orgánicas o

inorgánicas necesarias para la actividad de la
apoenzima
HOLOENZIMA: Enzima Activa

SUSTRATO: Molécula sobre la cual actúa la enzima
para formar productos
CARACTERÍSTICAS DE LAS ENZIMAS
Todas son proteínas

Son Altamente Específicas
Son sensibles a cambios de pH y Temperatura
CLASIFICACION GENERAL DE ACUERDO A SU

FUNCIÓN
1. Oxidoreductasas 1. Liasas
2. Transferasas 2. Isomerasas
3. Hidrolasas 3. Ligasas
ENZIMOLOGÍA CLÍNICA
Es la aplicación del conocimiento de las enzimas al

diagnóstico, tratamiento y pronóstico de algunas
enfermedades.
La alteración de la concentración sérica de una enzima

determinada, nos orienta sobre los tejidos más
probablemente afectados.
Con frecuencia se relacionan los valores de dos o más

enzimas distintas para realizar un diagnóstico más
preciso
Principios del análisis de enzimas
La concentración sérica de las enzimas es muy baja,

pero debido a su alta capacidad de catálisis, se puede
determinar su actividad.
Y se asume que«
ACTIVIDAD ENZIMATICA Į CONC. DE ENZIMA
Enzimología Clínica se basa en la evaluación de la

actividad catalítica ³in vitro´
Existen dos formas de evaluar la actividad enzimática:

Por la Aparición de productos
Por la Desaparición del sustrato
Las dos formas se evalúan bajo condiciones

controladas de pH y Temperatura.
(los óptimos para la enzima)
La actividad enzimática se expresa como Unidades

Internacionales por unidad de volumen
(UI/mL, UI/L)
UI= cantidad de enzima que transforma un micromol de

sustrato / min.
En condiciones estándar previamente establecidas
Fases de una reacción enzimática
Producto

6 6
Tiempo (minutos)
Fase de Retardo: Ocurre inmediatamente después de mezclar

los reactivos (sustrato) con el suero (enzima)
Fase Lineal: La formación del producto permanece constante.

El factor limitante es la concentración de la enzima
Fase de agotamiento de sustrato: El sustrato se va agotando y la

velocidad de la reacción disminuye hasta anularse
Desaparición de sustrato
Sustrato 6 6

Tiempo (minutos)
Es necesario realizar las determinaciones

enzimáticas en la fase lineal
Factor limitante es la concentración de la

enzima
Condiciones de reacción son óptimas

(exceso de sustrato, pH, Temperatura, etc.)
Técnicas de evaluación enzimática
Se emplean métodos espectrofotométricos
Si el producto absorbe luz a cierta Ȝ, se registra el

aumento de la Absorbancia
Si el sustrato absorbe luz a cierta Ȝ, se registra la

disminución de la Absorbancia
También es posible analizar la variación de algún

cofactor u otro componente de la reacción.
Frecuentemente se emplea la aparición de

NADH o NADPH como evaluación enzimática.
Y Y Y Y
Y Y Y Y

Con cualquiera de estas 3 formas es posible:
Analizar el ǻA/min
Se emplean métodos espectrofotométricos
Pueden ser de dos tipos:
Métodos a Punto Final

Métodos Cinéticos
Métodos a Punto Final
Se ponen en contacto los reactivos y la muestra

(sustrato y enzima)
Posterior a un período de incubación se

determina la absorbancia a la Ȝ indicada (Ai)
Al cabo de un tiempo establecido se detiene la

reacción y se mide la absorbancia final. (Af)
Métodos Cinéticos
1. Se ponen en contacto los reactivos y la

muestra (sustrato y enzima)
1. Se determina la absorbancia a la Ȝ indicada

(Ai)
1. Se realizan lecturas cada minuto durante 3-5

minutos. Para estar seguros de que se esta
trabajando en la fase lineal de la curva.
Consideraciones Importantes
1. No emplear sueros hemolizados
1. No emplear muestras que hayan sido

congeladas y descongeladas varias veces
1. Si se realiza transporte de la muestra desde

un lugar lejano al laboratorio se debe
conservar en frío sin congelar
Normalmente los niveles de enzimas en el suero son muy
bajos o nulos.
La importancia del análisis de la actividad enzimática se

fundamenta en el hecho de que
Las enzimas se encuentran y actúan en DENTRO de la

célula.
Si ocurre un daño celular, hay ruptura de la misma y se

libera el contenido, aumentando así la concentración de
la enzima en el suero o plasma.
Existen muy pocas enzimas específicas de un tejido.
Pero la concentración de una enzima por lo general es

mayor en un tejido que en otro.
Es decir, la enzima X, podemos encontrarla en riñón,

hígado y cerebro, pero su concentración más alta es en
riñón.
FOSFATASAS
Son un grupo de enzimas afines y clínicamente se

dividen en dos grupos importantes.
Fosfatasa Alcalina: actividad óptima a pH= 9.8

Fosfatasa Ácida: actividad óptima a pH= 4.9 ± 5.0
Su función consiste en transferir grupos fosfato de un

sustrato donador a un compuesto receptor que contiene
un grupo -OH
FOSFATASAS
Su función consiste en transferir grupos fosfato de un

sustrato donador a un compuesto receptor que contiene
un grupo -OH
Fosfatasa
R1 ± O ± P + R2 ± O - H R1 ± O ± H + R2 ± O - P
Ester donador Alcohol

de fosfato receptor
Fosfatasa
R1 ± O ± P + H±O-H R1 ± O ± H + H±O-P
Ion Fosfato
(HPO4)
Ester donador AGUA
de fosfato (receptor)
FOSFATASA ALCALINA (ALP)
Se le da el nombre de Fosfatasa Álcalina a la

fosfatasa que tiene actividad óptima a un pH de 9 -10
Su función es remover grupos fosfato del sustrato.
Se encuentra en hígado, conductos biliares, hueso,

placenta , intestino y riñón,.
Esta prueba se emplea como marcador de tumores y

como indicadora de enfermedad de hígado y huesos
cuando se correlaciona con otros datos clínicos y
pruebas de laboratorio.
Forma parte de las Pruebas de Función Hepática
En enfermedad ósea se En enfermedad hepática se

incrementa debido incrementa debido a que
principalmente a la su excreción se encuentra
actividad aumentada de las impedida por alguna
células osteoblásticas. obstrucción biliar
principalmente
Uno de los métodos más empleados para su

determinación es el de Bessey- Lowry- Brook
modificado por Bowers & McComb
Fosfatasa
alcalina
u-nitrofenilfosfato + H2O u-nitrofenol + HPO-4 + 2H+
OH-
Color amarillo
Ȝ= 405 nm
Prueba Cinética
V
Ú
±

Ú
ßa
6

! !

a
0.047. x 2.525 mL x 1000

Fosfatasa Alcalina U/L = ²²²²²²²²²²²²²²²²²²²²²
18.8 x 1cm x 0.025 mL
Fosfatasa Alcalina U/L = 0.047. x 5372
Fosfatasa Alcalina U/L = 252 U/L
ǻA/min. = Cambio de absorbancia por minuto

Volumen del ensayo = Volumen total de la reacción en mL
1000 = Conversión de U/mL a U/L
18.8 = Coeficiente de absorbancia del p-nitrofenol a 405 nm
Paso de luz = Longitud del paso de luz en cm
Volumen de muestra = Volumen de la muestra en mL
5372 = Factor derivado de las constantes en la ecuación
VALORES ESPERADOS
Fosfatasa Alcalina < 103 U/L (30ßC)

< 138 U/L (37ßC)
Valores Aumentados
Enfermedad Hepática: Enfermedad Osea:

Ictericia obstructiva Enfermedad metastática de
Cáncer y Abscesos hepáticos hueso
Cirrosis hepatocelular Sarcoma osteógeno
Cirrosis biliar
FOSFATASA ACIDA (AcP)
Se le da el nombre de Fosfatasa Ácida a la fosfatasa

que tiene actividad óptima a un pH de 4.9
Se encuentra en próstata, hígado, hueso, bazo y riñón.

Su mayor importancia se
encuentra en la próstata, ya
que su actividad es 100 veces
mayor en esta glándula que
en otros tejidos.
Su cuantificación se emplea para diagnosticar el cáncer

metastático de próstata y monitorear la eficacia del
tratamiento.
La AcP prostática se puede diferenciar de las demás en

análisis de laboratorio mediante la adición de L-tartrato,
ya que es sensible a este componente.
El aumento de la AcP-prostática se observa

cuando el cáncer ha migrado a otros tejidos,
principalmente hacia el hueso.
Į-naftilfosfato + H2O Į-naftol + HPO4-
Į-naftol + Colorante orgánico Rojo de TR

Compuesto Diazóico
ö
Si se agrega L-Tartrato a la solución de reacción, se inhibe la

actividad de la AcP-prostática presente en el suero, pero
todas las demás fosfatasas ácidas siguen reaccionando.
Prueba Cinética

V

Ú
±
Ú
ßa
Ú !"
ß a

M

a
A/min. x 2 Volumen del ensayo (mL) x 1000

Fosfatasa Acida U/L = ²²²²²²²²²²²²²²²²²²²²²
Coefici.de abs. x Paso de la luz (cm) x Vol. De muestra
(mL)
Fosfatasa Acida U/L = A/min. x 1240 para AcP Total

12.9 = Coeficiente de absorbancia del a-naftol a 405 nm
1240 = Factor derivado de las constantes en la ecuación para AcP Total
1264= Factor derivado de las constantes en la ecuación para AcP No prostática
a
0.003. x 3.2 mL x 1000

Fosfatasa Acida Total U/L = ²²²²²²²²²²²²²
12.9 x 1cm x 0.02 mL
Fosfatasa Acida Total U/L = 0.003. x 1240
Fosfatasa Acida Total U/L = 3.7 U/L

a
0.001. x 3.260 mL x 1000

Fosfatasa Acida No Prostática U/L = ²²²²²²²²²²²²²
12.9 x 1cm x 0.02 mL
Fosfatasa Acida No Prostática U/L = 0.001. x 1264
Fosfatasa Acida No Prostática U/L = 1.3 U/L

a
Fosfatasa Acida Prostática U/L = AcP Total (sin tartrato) ± AcP No Prostática
Fosfatasa Acida Prostática U/L = 3.7 U/L ± 1.3 U/L
Fosfatasa Acida Prostática U/L = 2.4 U/L
VALORES ESPERADOS
Fosfatasa Acida Total U/L = 2.4 ± 5.0 U/L
Fosfatasa Acida Prostática U/L = 0.0 U/L ± 1.2 U/L

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ENZIMAS: Son proteínas especializadas que tienen la

VELOCIDAD: Cambio en la cantidad de materiales iniciales o

CATALIZADOR: Agente que incrementa la velocidad de la

APOENZIMA: Parte proteica de la enzima

COFACTORES: Moléculas pequeñas, orgánicas o

HOLOENZIMA: Enzima Activa

Todas son proteínas

CLASIFICACION GENERAL DE ACUERDO A SU

Es la aplicación del conocimiento de las enzimas al

La alteración de la concentración sérica de una enzima

Con frecuencia se relacionan los valores de dos o más

La concentración sérica de las enzimas es muy baja,

ACTIVIDAD ENZIMATICA Į CONC. DE ENZIMA

Enzimología Clínica se basa en la evaluación de la

Existen dos formas de evaluar la actividad enzimática:

Las dos formas se evalúan bajo condiciones

La actividad enzimática se expresa como Unidades

UI= cantidad de enzima que transforma un micromol de

Fase de Retardo: Ocurre inmediatamente después de mezclar

Fase Lineal: La formación del producto permanece constante.

Fase de agotamiento de sustrato: El sustrato se va agotando y la

Es necesario realizar las determinaciones

Factor limitante es la concentración de la

Condiciones de reacción son óptimas

Se emplean métodos espectrofotométricos

Si el producto absorbe luz a cierta Ȝ, se registra el

Si el sustrato absorbe luz a cierta Ȝ, se registra la

También es posible analizar la variación de algún

Frecuentemente se emplea la aparición de

Con cualquiera de estas 3 formas es posible:

Se emplean métodos espectrofotométricos

Pueden ser de dos tipos:

 Métodos a Punto Final

 Métodos a Punto Final

Se ponen en contacto los reactivos y la muestra

Posterior a un período de incubación se

Al cabo de un tiempo establecido se detiene la

1. Se ponen en contacto los reactivos y la

1. Se determina la absorbancia a la Ȝ indicada

1. Se realizan lecturas cada minuto durante 3-5

1. No emplear sueros hemolizados

1. No emplear muestras que hayan sido

1. Si se realiza transporte de la muestra desde

La importancia del análisis de la actividad enzimática se

Las enzimas se encuentran y actúan en DENTRO de la

Si ocurre un daño celular, hay ruptura de la misma y se

Pero la concentración de una enzima por lo general es

Es decir, la enzima X, podemos encontrarla en riñón,

Son un grupo de enzimas afines y clínicamente se

Fosfatasa Alcalina: actividad óptima a pH= 9.8

Su función consiste en transferir grupos fosfato de un

Su función consiste en transferir grupos fosfato de un

Ester donador Alcohol

Se le da el nombre de Fosfatasa Álcalina a la

Su función es remover grupos fosfato del sustrato.

Se encuentra en hígado, conductos biliares, hueso,

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Todas son proteínas

Factor limitante es la concentración de la

Condiciones de reacción son óptimas

Si el producto absorbe luz a cierta Ȝ, se registra el

Si el sustrato absorbe luz a cierta Ȝ, se registra la

Métodos a Punto Final

Métodos a Punto Final

Fosfatasa Alcalina: actividad óptima a pH= 9.8

Į-naftilfosfato + H2O Į-naftol + HPO4-