Alejandro de la Llata Paulin A01208942

Norma Valeria González Jiménez A01209098

Laritza Márquez Cristancho A01702253
Jesús Alejandro Morales Migueles A01704366
Práctica 12: DETERMINACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA DE FÓSFORO
Equipo 1
09/11/19
Laboratorio de Química Grupo 4: lunes 4:00 pm - 7:00 pm
M. en C. Abigail Moreno Martell
Objetivo
1. Conocer los componentes de un espectrofotómetro.
2. Aprender a manejar el espectrofotómetro.
3. Determinar espectrofotométricamente el contenido de fósforo en un refresco
de cola, utilizando el método de fosfomolibdato.
4. Aplicar las leyes de la espectrofotometría en el cálculo de la concentración de
una muestra problema.
5. Aprender a elaborar e interpretar las curvas de calibración.

Materiales

Equipo o material Reactivos

1 Espectrofotómetro 0.0273 g Fosfato diácido de potasio

(KH2PO4)

9 matraces de aforación de 50 mL 0.7800 Molibdato de amonio

3 pipetas de 5 mL 1.056 g Ácido ascórbico

1 pipeta de 1 mL 11 mL de H2SO4 concentrado

6 celdas para espectrofotómetro Agua desionizada

2 vasos de precipitado de 50 mL

Piceta Insumos que debe traer el alumno

(INDISPENSABLE PARA PODER
REALIZAR LA PRÁCTICA)

Papel de arroz Refresco de cola, ponerse de acuerdo

para traer diferentes marcas.

1 agitador magnético con magneto NOTA: El equipo deberá desgasificar el

refresco un día antes de la práctica
(destapándolo y agitándolo contínuamente
hasta eliminar el gas).
1 probeta de 25 mL

1 propipeta de 2mL

1 propipeta de 5mL

1 incubadora con termómetro

Todo el material utilizado debe lavarse

previamente con agua destilada. No
emplear jabón para su limpieza.

Soluciones

IMPORTANTE: ANTES DE PREPARAR CUALQUIERA DE LAS SOLUCIONES, SE

DEBERÁ ENJUAGAR PERFECTAMENTE TODOS LOS MATRACES CON AGUA
DESTILADA CON EL FIN DE ELIMINAR CUALQUIER RESIDUO DE JABÓN.

· Solución stock de P2O5

Pesar 0.1915 g de KH2PO4 seco. Disolver con agua desionizada y aforar a 1000 mL.
Esta solución contiene 100 ppm de P2O5.

· Solución de trabajo
Diluir la solución anterior a una concentración final de 20 ppm de P2O5

· Solución reductora
Se compone de tres reactivos: a) 0.7800 g de molibdato de amonio en 39 mL de agua;
b) 1.056 g de Ácido ascórbico en 60 mL de agua; c) 11 mL de H2SO4 concentrado en
125 mL de agua. Mezclar a, b y c, y aforar a 250 mL con agua desionizada.

Introducción

México es el primer lugar per cápita en consumo de refresco en el mundo. En general,

se piensa que los refrescos de cola son bebidas relativamente inofensivas y que un
excesivo consumo de estos productos no causa más daño que caries dental y aumento
de peso debido al alto contenido de azúcar. Sin embargo, los daños pueden ir más allá.
Además de azúcar, un refresco de cola tiene ácido fosfórico, cafeína y nuez de cola, y
estos elementos pueden llegar a causar diferentes trastornos al organismo. El fósforo
está íntimamente relacionado con el calcio tanto en la nutrición humana como en la
absorción de este mineral. Un aporte alto de fósforo impide la absorción de calcio y
aumenta la cantidad de hormona paratiroidea, la cual puede disminuir la formación de
huesos (Farías, 1988).

ESPECTROFOTOMETRÍA Se refiere a la medida de cantidades relativas de luz

absorbida por una muestra, en función de la longitud de onda. Cada componente de la
solución tiene su patrón de absorción de luz característico. Comparando la longitud de
onda y la intensidad del máximo de absorción de luz de una muestra versus soluciones
estándar, es posible determinar la concentración de componentes disueltos en la
muestra.
Las ventajas de la espectrofotometría sobre otros métodos analíticos de laboratorio son
varias: es rápida, precisa, versátil, fácil de usar y eficiente en costo. Los
espectrofotómetros se han mejorado en precisión y versatilidad en los últimos años con
los avances de tecnología, y hoy se consideran indispensables en un laboratorio de
química analítica.

Para la determinación de fósforo la reacción es la siguiente:

+
7H3PO4 + 12(NH4)6Mo7O24 4H2O 7(NH4)3(PO4(MoO3 )12) + 51NH4 + 51OH-
+ 33H2O

El complejo de fosfomolibdato tiene una mezcla de Mo+5 y Mo+6, su composición es

indefinida. Este complejo es reducido a un compuesto azul soluble cuya absorbancia es
medida espectrofotométricamente a una longitud de onda de 830 nm y es proporcional
a la cantidad de fósforo presente en la muestra, como agente reductor se utiliza el ácido
ascórbico.

Procedimiento
Resultados
 Tabla 1. Curva de Calibración para determinación de fósforo

Concentración en Absorbancia a 830 nm

ppm P2O5

0.4 0.25

0.8 0.261

1.2 0.387

1.6 0.528

2.0 0.648

Refresco 0.145

2. Hacer la gráfica en Excel para la curva de calibración usando la

concentración en ppm de P2O5 en las abscisas y la Absorbancia en el eje
de las ordenadas. Obtener la ecuación de la recta, calcular el coeficiente
de correlación (r), y emitir juicios respecto al valor obtenido.
 Gráfica 1. Curva de calibración

Como resultado obtuvimos la siguiente ecuación correspondiente a la recta y =

0.2658x+ 0.0959 y el coeficiente de correlación (R2) igual a 0.9513. Al analizar la gráfica
podemos evidenciar que el valor que obtuvimos en el coeficiente de correlación es válido
ya que su valor no puede menor a 0.80 ni superar el valor de 0.99 de no ser así no sería
válido.

3. Calcular la concentración del P2O5 en el refresco:

a) Interpolando en la gráfica
Gráfica 2. Curva de calibración con la muestra
 b) Usando la ecuación de la gráfica obtenida

𝑦 = 0.2658𝑥 + 0.0959
0.145 = 0.2658𝑥 + 0.0959
0.145 = 0.2658𝑥 + 0.0959
𝑥 = (0.145 − 0.0959)/0.2658
𝑥 = 0.1847 𝑝𝑝𝑚 𝑑𝑒 𝑃2𝑂5

4. Determinar el contenido de fósforo presente en el refresco, toma en

cuenta la dilución realizada y el factor estequiométrico para
transformar P2O5 en P.

𝑃𝑝𝑚 𝑃 = (0.1847 𝑝𝑝𝑚 𝑑𝑒 𝑃2𝑂5) (50 ) (50 ) (62 𝑔 𝑑𝑒 𝑃/142 𝑑𝑒 𝑃2𝑂5)

𝑃𝑝𝑚 𝑃 = 201.6091549

𝑚 𝑃 = 𝑝𝑝𝑚 𝑑𝑒 𝑃 ∗ 𝑉 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛
𝑚 𝑃 = 201.6091549 ∗ 50 𝑚𝑙
𝑚 𝑃 = 10080.45 𝑚𝑔

Imagen 1. Evidencia fotográfica de las soluciones utilizadas para determinar la curva de calibración
Imagen 2. Evidencia fotográfica de las soluciones depositandose en las celdas

Imagen 3. Evidencia
fotográfica del valor de la absorbancia de la muestra

Cuestionario

1. Definir cada uno de los siguientes términos:

a) Absorbancia: Se trata de la medida que refleja cómo se atenúa la radiación
cuando atraviesa un elemento. (Pérez, 2015)
b) Transmitancia: refleja la cantidad de energía que pasa por un elemento en una
cierta unidad de tiempo. El cociente entre la potencia de la radiación que sale
de la muestra y la de la que incidió sobre ella (NA, 2010) (Perez, 2015)
 c) Absortividad molar: cantidad de radiación que absorbe a una longitud de onda
determinada por unidad de concentración (NA, 2010)
d) Longitud de paso óptico: anchura de la célula que contiene la disolución de la
sustancia (NA, 2010)
e) Longitud de máxima absorción: Longitud de onda correspondiente al máximo
de absorción, donde la sensibilidad es máxima. (NA, 2010)

f) Curva de calibración: representación gráfica de una señal que se mide en

función de la concentración de un analito. Compara una propiedad del analito
con la de estándares de concentración conocida del mismo analito. (NA, 2010)

2. Dibuja un diagrama esquemático de un espectrofotómetro indicando cada una de

sus partes y realiza una breve descripción de su función.
3. Enuncia las siguientes leyes de la espectrofotometría.
La ley de Lambert trata sobre la iluminancia de una superficie situada a una cierta
distancia de una fuente de luz. Determina que la iluminación producida por una
fuente luminosa sobre una superficie es directamente proporcional a la
intensidad de la fuente y al coseno del si ángulo que forma la normal a la
superficie con la dirección de los rayos de luz y es inversamente proporcional
al cuadrado de la distancia a dicha fuente.(NA, 2019)
La ley de Lambert-Beer "A mayor concentración mayor absorbancia" afirma que la
cantidad de luz absorbida por un cuerpo depende de la concentración en la
solución.(NA, 2019)
Según la ley de Beer, si hiciéramos que un rayo de luz atravesara el primer vaso,
la cantidad de luz que saldría del otro lado sería mayor que si repitieras esto
en el segundo, ya que en este último las ondas electromagnéticas chocan
contra un mayor número de átomos o/y moléculas y son absorbidos por
estos.(NA, 2019)
La ley de Bouguer-Beer-Lambert es una combinación de las citadas anteriormente.
Al hacer pasar una cantidad de fotones o de radiaciones hay una pérdida que
se expresa con la ecuación:(NA, 2019)
 It/Io=T-kdc
donde It es la intensidad de luz que sale de la cubeta y que va a llegar a la celda
fotoeléctrica (llamada radiación o intensidad transmitida); Io es la intensidad
con la que sale al atravesar la celda (radiación intensidad incidente), y la
relación entre ambas (T) es la transmitancia. El superíndice k es la capacidad
de la muestra para la captación del haz del campo electromagnético, d es la
longitud de la cubeta de espectrofotometría que recorre la radiación, y c es la
concentración del soluto en la muestra ya ubicada en la cubeta.(NA, 2019)
La ecuación simplificada de la ley de Lambert-Beer:
A = ε.d.c
Relaciona la concentración (c), la absorbancia de la muestra (A), el espesor
recorrido por la radiación (d) y el factor de calibración (ε), que relaciona la
concentración y la absorbancia de los estándares.
Las ecuaciones mencionadas de las leyes son válidas solo y solo si:
● la radiación incidente es monocromática;
● las especies actúan independientemente unas de otras durante la
absorción;
● la absorción ocurre en un volumen de sección transversal uniforme.(NA,
2019)

4. ¿Qué tipo de soluciones no cumplen la Ley de Lambert- Beer?

Se cumple para soluciones diluidas a longitud de onda fija donde la radiación incidente
es monocromática, las especies actúan independientemente unas de otras durante la
absorción y la absorción ocurre en un volumen de sección transversal uniforme. (NA,
2019)

5. ¿Qué es una curva de calibración y para qué sirve?

Una curva de calibración es una representación gráfica de una señal que mide la
concentración de una substancia. Sirve para tener un punto de referencia y así
poder determinar una concentración desconocida.
6. ¿Por qué es importante el preparar un blanco para esta prueba?
Se usa para ajustar el instrumento para leer transmitancia del 100 % o 0 de
absorbancia. Es decir al tener una muestra con cero soluto se determina cual es
el 100% de transmitancia y de ahí se determinan los demás porcentajes.
7. ¿Cuál es la razón de que la longitud de onda que se selecciona en el
espectrofotómetro sea de 820 nm?
Al ser una longitud infrarroja se espera que todas las moléculas absorban esa
energía y por se tenga mejor absorbancia.
8. Explique la razón de lo siguientes cuidados que se deben tener con la celda del
especrofotómetro:
a. Limpiarla con papel arroz antes de introducirla al equipo
Para asegurarse que no haya ninguna otra partícula que interfiera.
b. Llenarla hasta un volumen determinado
Así la luz pasa completamente a través de la solución y no donde no
hay nada
c. Escurrir perfectamente la celda antes de emplearla nuevamente.
El agua afecta la transmitancia
 d. No usar escobillón al lavarla
Se puede rayar lo cual también afecta la transmitancia
e. No emplear jabón en su limpieza.
Se pueden quedar restos de jabón que afecta los resultados.
f. Tener cuidado de que coincida la marca de la celda con la del
espectrofotómetro.
Las celdas tienen un lado específico por el cual debe pasar la luz ya
que de los otros lados se agarra y se ensucia.

9. ¿Cuáles pueden ser las posibles fuentes de error en las determinaciones

espectrofotométricas?

Una de las posibles causas de error en las determinaciones espectrofotométricas

se puede deber a la falta de medición de un blanco porque esto nos ayudar a
minimizar errores. Otra causa posible causa es la no exactitud en la concentración
de las soluciones preparadas en el laboratorio.

10. Calcular el índice de absortividad molar (e) para el P2O5 usando la gráfica

Al obtener esta función de la recta y = 0.2658x+ 0.0959, obtuvimos el valor de la

pendiente que tiene un valor de 0.2658. Por otra parte la pendiente tiene un valor
igual al producto entre el índice de absortividad molar y en ancho de la solución
por la cual atraviesa la luz, en este caso 1 cm que es la medida estándar celdas
para espectrofotómetro.

𝑚 = ɛ ∗ 𝑙
ɛ = 𝑚/ 𝑙
ɛ = 0.2658 / 1 𝑐𝑚
ɛ = 0.2658 𝑝𝑝𝑚−1 𝑐𝑚−1

11. ¿Qué problemas tendría con los resultados de la curva de calibración si no dejo
resposar las muestras el tiempo indicado por la técnica? ¿Qué pasa si los dejo mas
tiempo que el que me indica?

Si se deja menos tiempo no dejamos que la reacción termine por completo y los
resultados pueden salir erróneos. Por el otro lado si se deja más tiempo puede cambiar
debido a la absorción de luz de la solución y esto también daría resultados erróneos.

Conclusiones

En esta práctica aprendimos a manejar el espectrofotómetro y con ayuda de este

determinamos el contenido de fósforo en un refresco de cola, utilizando el método de
fosfomolibdato y después aprendimos a interpretar las curvas de calibración.

Utilizamos una solución de trabajo en diferentes matraces, agregamos 20 ml a todos los

matraces y al final aforamos con agua destilada. Después metimos a baño María las
siguientes soluciones y esperamos 45 minutos. Repetimos el proceso pero ahora con un ml
de refresco.

Al terminar el experimento obtuvimos la siguiente ecuación correspondiente a la recta y =

0.2658x+ 0.0959 y el coeficiente de correlación (R2) igual a 0.9513. Analizamos la gráfica
y podemos evidenciar que el valor que obtuvimos en el coeficiente de correlación esta
dentro del rango ya que su valor no puede menor a 0.80 ni superar el valor de 0.99.

Ética en el laboratorio

(Tomado de: Mutio, R. Ana M., López, S. Carolina, Venegas, B. Luz M., Segal, Ranjana.
Aprendiendo Química Gota por Gota. 1° Edición. México, Editorial Cengage Learning,
2010.

I. Completen el siguiente cuadro (Como equipo).

Residuo ¿Cómo se desechó ¿Les parece adecuado el
generado el residuo? manejo que se le dio?
Fundamenten su respuesta

Solución utilizada para Sí, porque al realizar esta mezcla

la elaboración de la Se desechó en el se obtiene una solución con
curva de calibración contenedor de ácidos tendencia a ser ácido

Solución de muestra Sí, porque al realizar esta mezcla

Se desechó en el se obtiene una solución con
contenedor de ácidos tendencia a ser ácido

II. Reflexión Personal

Como sabes, en esta práctica el tema estudiado fue Determinación espectrofotométrica
de fósforo. ¿Qué conceptos reafirmaste o aprendiste a lo largo de esta práctica que te
vayan a ser útiles en tu desempeño profesional o en tu vida cotidiana? Explica
detalladamente.

Alejandro: Reafirme conceptos como la curva de calibración y concentraciones, las cuales

fueron más faciles de visualizar con la ayuda del espectrofotómetro. Me gusto mucho que la
práctica fue aplicada a algo que consumimos diariamente, lo que nos ayuda a ver lo que
realmente metemos a nuestro cuerpo.
Laritza: En esta práctica de laboratorio además de reafirmar conceptos previos como la
definición de curva de calibración. Me pareció interesante como se puede obtener la
concentraciones de un soluto con ayuda de un Espectrofotómetro. Además me parece muy
importante conocer las concentraciones de fósforo que nos están brindando las gaseosas de
kola, ya que el consumo excesivo de este elemento es perjudicial para nuestro organismo.

Valeria: En esta practica me gusto mucho que podemos utilizar elementos de la

vida diaria para experimentar, de igual forma me ayudó a entender mejor el
concepto aprendido en la teoría.

Alejandro Morales: Definitivamente el poder determinar la concentración de una

solución a través de la absorbancia de luz es un concepto muy útil que puede tener
muchas aplicaciones por lo cual me siento más preparado para poder aplicarlo en
mi vida profesional.

Referencias

NA. (2010). Practica 4. 9/11/19, de UNAM Sitio web:

http://www.qfa.uam.es/labqui/practicas/practica4.pdf

Julián Pérez Porto. (2015). Definicion de absorbancia. 9/11/19, de Definición Sitio web:
https://definicion.de/absorbancia/

NA. (2019). Espectrofotometria. 9/11/19, de Wikipedia Sitio web:

https://es.wikipedia.org/wiki/Espectrofotometr%C3%ADa

Cavazos, Norma C.; Zárate, L.; Torres de Navarro, E. Determinación de fósforo y cafeína en
bebidas de cola. Educación Química, 2001, 12,2, pp.116- 120.