Resumen de Interleucina 2 - Basofilos

RESUMEN GRUPO N° 2
La interleucina 2 regula la activación de los basófilos humanos

Se reconoce cada vez más que los basófilos desempeñan un papel importante en la
inflamación alérgica, respuesta inmune antiparasitaria y trastornos inflamatorios de la piel. En
una variedad de trastornos de la piel, como dermatitis atópica, urticaria, penfigoide ampuloso,
foliculitis pustulosa eosinofílica, se han observado basófilos y a menudo están asociados con
infiltración de eosinófilos, aunque normalmente no se detecta en los pacientes.
Se sabe que los basófilos expresan el receptor de afinidad para el Fc ε (Fc ε RI), que permite
fijarse a la inmunoglobulina E (IgE). ). La conjugación cruzada de FcεRI en los basófilos
mediante la interacción entre la IgE capturada y un alérgeno específico conduce a una rápida
liberación de la histamina almacenada en los gránulos citoplasmáticos de los basófilos. Un
estudio in vitro mostró que la IL-2 sola no tenía efecto en la liberación de histamina, pero
mejoró la liberación de histamina mediada por IgE a dosis altas. La administración intravenosa
in vivo de IL-2 a pacientes con melanoma maligno metastásico indujo una mayor liberación de
histamina en el lavado nasal. Hay varios informes que indican que la pre-incubación de los
basófilos humanos con IL-2 no tiene ningún efecto sobre la liberación de histamina mediada
por la IgE. Sin embargo, el efecto de la IL-2 sobre basófilos aún no se ha dilucidado.
En este estudio, identificamos que la IL-2 inducía independientemente la activación de

basófilos humanos que expresan numerosas citocinas inflamatorias, incluidas IL-5 y GM-CSF,
que se identificaron para expresarse abundantemente mediante la infiltración de basófilos en
enfermedades cutáneas.
2. Métodos
2.1. Pacientes y aprobación del estudio.
En este estudio se incluyeron seis pacientes con penfigoide ampolloso y cuatro con eczema. El
diagnóstico en cada caso se basó en los criterios recomendados en la Clasificación de la
Organización Mundial de la Salud de 2004. Ninguno de los pacientes había sido tratado
preoperatoriamente.
2.2. Purificación de los basófilos humanos
Para la purificación de los basófilos humanos, se enriquecieron células mononucleares de

sangre periférica (PBMC) con Buffy Coat usando Lymphoprep. Los basófilos fueron pre-
enriquecidos a partir de PBMCs mediante la selección positiva de clasificación de células
activadas magnéticamente (MACS) utilizando microperlas conjugadas con CRTH2. A
continuación, los basófilos fueron purificados aún más por la clasificación FACS.
2.3. Cultivo celular y citometría de flujo
Los basófilos purificados fueron cultivados en el medio RPMI 1640 complementado con 2 mM
de L-glutamina, 10% FCS desactivado por calor y 50 ug/mL gentamicina
2.4. Análisis de microarrays de expresión génica
El ARN total fue extraído usando un miRneasy Mini Kit. Las concentraciones de ARN fueron
analizadas con Espectrofotómetro NanoDrop ND-1000.
2.5. Ingenuity pathway analysis (IPA)
El programa de Ingenuity pathway analysis (IPA) se realizó para anotar el tipo molecular y las
ubicaciones de las expresiones diferenciales de genes.
2.6. PCR cuantitativa en tiempo real
El ADNc se sintetizó utilizando un ADNc de alta capacidad Kit de transcripción reversa.
2.7. ELISA
Se utilizaron para la medición de la expresión de IL-5, IL-13 y GM-CSF humanos.
2.8. Inmunohistoquímica
Tejidos incluidos en parafina de pacientes con penfigoide bulloso (n = 6) y el eczema (n = 4) se

incluyeron para el análisis inmunohistoquímico de la expresión de IL-5 y GM-CSF en los
basófilos.
2.9. Análisis estadístico
Todos los datos fueron expresados como la media ± SD. Las diferencias entre dos grupos
experimentales fueron analizadas por el test t de Student para datos emparejados.
3. Resultados
3.1. Los basófilos humanos expresan constitutivamente la cadena alfa del receptor de IL-2
que está regulado por el IL-3.
En primer lugar investigamos la expresión de los receptores de IL-2, incluyendo IL2RA, IL2RB y
IL2RG en los basófilos. Al activarse con IL-3, uno de los activadores clave de los basófilos
humanos, la expresión de ARNm de los receptores de IL-2 en los basófilos humanos aumentó
enormemente.
3.2. La IL-2 indujo la expresión de múltiples citoquinas inflamatorias en basófilos humanos.
Identificamos que los basófilos humanos en respuesta a la estimulación de la IL-2 expresaron

una variedad de transcripciones que codifican las citoquinas inflamatorias y mediadores como
la IL13, GZMB y TNF, que se ha informado anteriormente que son expresados por basófilos
humanos en respuesta a la IL-3 y anti-IgE, así como IL5, CSF2 (GMCSF), CCL17 (TRAC), LIF, LTA
(TNFB), LTB (TNFC) e IL32.
3.3. IL-2 en lugar de IL-3 o anti-IgE induce la expresión de IL-5
El IL-5 se clasificó como uno de los genes con más expresión diferencial. A continuación,
preguntamos si la inducción de la IL-5 estaba regulada principalmente por la IL-2. El
tratamiento in vitro de los basófilos con IL-3 o anti-IgE, no mostró ninguna inducción en la
expresión de IL5, aunque la IL-3 o anti-IgE mejoraron la expresión de un marcador de
activación establecido CD203c. Sin embargo, la IL-2 por sí sola indujo un gran aumento en la
expresión de la IL5.
3.4. La IL-2 promueve la supervivencia de los basófilos humanos.
Considerando la mayor expresión de BCL2 en los basófilos estimulados por IL-2, examinamos el
efecto anti-apoptótico de la IL-2 en los basófilos por el flujo de Citometría.
3.5. La IL-5 y el GM-CSF se expresan en penfigoide bulloso y dermatitis atópica.
Es bien sabido que las enfermedades alérgicas y una variedad de trastornos de la piel se
caracterizan por una pronunciada infiltración de eosinófilos. Cada vez hay más pruebas que
indican que la IL-5 y el GM-CSF desempeñan un papel importante en la maduración e
infiltración de los eosinófilos. El aumento de la evidencia indica que IL-5 y GM-CSF
desempeñan un papel importante en la infiltración de eosinófilos.
Por lo tanto, el objetivo era investigar si los basófilos infiltrados localmente expresaban IL-5 y
GM-CSF en los trastornos de la piel. Dado que grandes aumentos de basófilos infiltrantes se
han observado en el penfigoide bulloso y dermatitis atópica, recogimos lesiones de piel de
pacientes con penfigoide bulloso (n = 6) o eczema (n = 4). Análisis de Inmunohistoquímica de
basófilos mediante tinción con anticuerpos 2D7, han sido ampliamente utilizados para la
tinción inmunohistoquímica de los basófilos, se identificó la presencia de basófilos infiltrados
en todos los especímenes. . Curiosamente, muchos basófilos locales infiltrados expresaron IL-5
y GM-CSF, lo que indica que los basófilos locales infiltrados son una de las importantes fuentes
de IL-5 y GM-CSF (Fig. 5). Esto puede, al menos en parte, explicar la observación que los
basófilos son generalmente detectados en enfermedades de la piel en las que están presentes
los eosinófilos.
4. Debate
Los basófilos son células inmunes efectoras importantes en los trastornos alérgicos. En este
estudio, por primera vez identificamos que la IL-2 regulaba la activación de los basófilos
humanos para expresar una variedad de citoquinas como IL-5, IL-13, GM-CSF y CCL17. A
continuación, demostramos la expresión de IL-5 y GM-CSF en basófilos locales infiltrados de
pacientes con penfigoide bulloso o eczema, que se sabe que tienen expresión aumentada de
IL2. La IL-5 y la GM-CSF juegan un papel fundamental en la proliferación, maduración,
supervivencia, activación e infiltración de eosinófilos.
El factor inhibitorio de la leucemia (LIF) aumenta la liberación de eosinófilos peroxidasa y su

nivel sérico aumenta en los pacientes atópicos. Estos implican colectivamente que la activación
inducida por la IL-2 de los basófilos puede tener un papel importante en las enfermedades
inflamatorias orientadas a las Th2.
El tratamiento con IL-2 humano recombinante (aldesleukina) ha sido clínicamente utilizado en

el tratamiento del melanoma y el carcinoma de células renales. Sin embargo, esta estrategia
de tratamiento está limitada por una variedad de aspectos efectos como la eosinofilia
periférica.
En este estudio, la combinación in vitro e in vivo, demostraron que los basófilos estimulados
por IL-2 expresan abundantemente el IL-5 y el GM-CSF, que se han establecido como cruciales
en la regulación de la activación e infiltración de los eosinófilos.
Por lo tanto, nuestros hallazgos pueden explicar parcialmente la eosinofilia observada en

Terapia de IL-2. . Daclizumab, un anticuerpo monoclonal humanizado terapéutico contra CD25
(IL-2RA), mejora la función pulmonar y el control del asma en pacientes con asma crónica de
moderada a severa. Por otra parte, es posible que la droga pueda ejercer sus efectos en otras
Células efectoras CD25, como los basófilos, que expresan un número de citoquinas
inflamatorias como IL-5 y GM-CSF en el ambiente, como identificamos en este estudio. Se
justifican estudios adicionales para examinar si los tratamientos con aldesleukina o
daclizumab tienen impacto sobre los basófilos in vivo, como la infiltración de basófilos y
eosinófilos, así como la expresión de IL-5 y GM-CSF por parte de los basófilos. Tales estudios
pueden ayudar a dilucidar los papeles de los basófilos en la inflamación, enfermedades de la
piel y conducir a nuevas estrategias terapéuticas dirigidas a los basófilos o a la vía de la IL-2 en
los basófilos.
Se identifica a la IL-2 como un novedoso regulador de los basófilos humanos, que expresan la
IL-5 y la GM-CSF en los trastornos de la piel. Esto añade un nuevo peldaño para apoyar la
importancia de los basófilos en los trastornos de la piel.

Resumen de Interleucina 2 - Basofilos

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Resumen de Interleucina 2 - Basofilos

Cargado por

Información del documento

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Resumen de Interleucina 2 - Basofilos

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

RESUMEN GRUPO N° 2

La interleucina 2 regula la activación de los basófilos humanos

En este estudio, identificamos que la IL-2 inducía independientemente la activación de

2.1. Pacientes y aprobación del estudio.

2.2. Purificación de los basófilos humanos

Para la purificación de los basófilos humanos, se enriquecieron células mononucleares de

2.3. Cultivo celular y citometría de flujo

2.4. Análisis de microarrays de expresión génica

2.6. PCR cuantitativa en tiempo real

El ADNc se sintetizó utilizando un ADNc de alta capacidad Kit de transcripción reversa.

Se utilizaron para la medición de la expresión de IL-5, IL-13 y GM-CSF humanos.

Tejidos incluidos en parafina de pacientes con penfigoide bulloso (n = 6) y el eczema (n = 4) se

3.2. La IL-2 indujo la expresión de múltiples citoquinas inflamatorias en basófilos humanos.

Identificamos que los basófilos humanos en respuesta a la estimulación de la IL-2 expresaron

3.3. IL-2 en lugar de IL-3 o anti-IgE induce la expresión de IL-5

3.4. La IL-2 promueve la supervivencia de los basófilos humanos.

El factor inhibitorio de la leucemia (LIF) aumenta la liberación de eosinófilos peroxidasa y su

El tratamiento con IL-2 humano recombinante (aldesleukina) ha sido clínicamente utilizado en

Por lo tanto, nuestros hallazgos pueden explicar parcialmente la eosinofilia observada en

También podría gustarte

Pfad - The Proxy pFad of © 2024 Garber Painting. All rights reserved.