Métodos de Siembra

MÉTODOS DE SIEMBRA
El método de siembra a emplear dependerá de los objetivos que se

pretendan alcanzar con el cultivo, ya que en ocasiones se requiere
que el desarrollo del microorganismo se produzca de forma masiva,
mientras que en otras resulta indispensable que las colonias queden
aisladas o que las manifestaciones del metabolismo tengan lugar con
tensiones reducidas o privadas de oxígeno
METODO DE SIEMBRA POR ESTRIA EN PLACA
La técnica de siembra en estría es usada para aislar cepas puras en

una placa Petri a partir de un inóculo o muestra con diferentes
especies. La técnica consiste en, mediante un asa de siembra
previamente esterilizada, rayar la superficie de cultivo de una placa
Petri de forma que en cada pasada sea menor el número de células
depositado, las últimas pasadas deberán depositar un número tan bajo
de células que, una vez incubadas, se formen colonias puras.
Existen distintas técnicas para la siembra en estrías, el objeto es obtener colonias
aisladas
Técnica A
Consiste en cargar el ansa con la muestra y hacer estrías paralelas en la cuarta

parte de la superficie de la placa, se quema el ansa, se enfría, se gira la placa a
90° y se vuelve a estriar tocando 3 o 4 veces el área sembrada inicialmente y
cubriendo otro cuarto de la placa. Por último, sin quemar el ansa, se estría el resto
de la superficie sin sembrar.
Técnica B
Con el ansa cargada se hacen 3 o 4 estrías; se quema el ansa, se hacen 3 o 4

estrías perpendiculares a las anteriores, se quema el ansa y se repite el
procedimiento hasta agotar la superficie de la placa.
 Los métodos de vertido en placa y extensión en placa

En estos métodos, las suspensiones de células microbianas se diluyen
antes de su siembra en placa. Se siguen estas técnicas cuando la
muestra contiene tantos microorganismos, que la dilución no se puede
realizar en una sola etapa.
En el método de vertido en placa, las muestras diluidas se mezclan

con agar fundido y se vierten en placa. Algunas colonias quedarán
embebidas en el agar y otras crecerán en la superficie. Las colonias
superficiales se extenderán y serán más grandes.
. En el método extensión en placa, las muestras diluidas se

siembran directamente en la superficie de la placa de agar,
extendiéndolas con ayuda de un asa de Diralsky de cristal estéril. La
suspensión se absorbe en el agar, dejando las células microbianas
sobre la superficie. En ambas técnicas las placas se incuban hasta la
aparición de las colonias.
Las dos técnicas de siembra por dilución presentan la ventaja de que

permiten obtener un mayor número de colonias aisladas que el
método de siembra por estría, por tanto se eligen cuando se ha de
seleccionar una cepa a partir de una mezcla con varios tipos de
microorganismos.
Condiciones ambientales idóneas para el cultivo en el laboratorio
Un medio se formula para suministrar todos los nutrientes que un

microorganismo necesita para crecer, pero esto no es suficiente. En el
laboratorio, también es preciso aportar las condiciones ambientales adecuadas.
Dentro de estas tenemos la Temperatura, El PH, y el Oxígeno.
TEMPERATURA
los microorganismos crecen más rápidamente cuando se aumenta la

temperatura, sin llegar hasta un punto en el cual se dañan las proteínas, para
favorecer un crecimiento rápido, las bacterias se suelen cultivar a la
temperatura más alta a la cual crecen bien, y que suele ser la de su medio
natural.
Los cultivos se mantienen a temperatura constante en incubadores o en baños
de agua, ambos controlados termostáticamente.
PH
El pH óptimo depende de la especie bacteriana, pero cada una de ellas crece en
un intervalo de pH relativamente estrech, la mayoría de las bacterias crecen
mejores a la neutralidad en el intervalo de 6,5 a 7,5 y los hongos crecen mejor
entre 4,5 y 6,0. El pH de un medio sea el adecuado cuando se inicia el cultivo, a
menudo el crecimiento microbiano lo modifica. Esto sucede porque algunos
microorganismos usan selectivamente algún componente ácido o básico del
medio; o bien, porque algún producto de su metabolismo es un ácido o una
base. Para disminuir los cambios de pH en los medios definidos se suelen utilizar
tampones. Los tampones más eficaces para valores neutros de pH son los
fosfatos y el carbonato cálcico.
OXIGENO
La concentración de oxígeno del medio es un determinante crítico para el

crecimiento bacteriano. Algunos microorganismos aerobios estrictos, no
pueden vivir sin oxígeno porque lo necesitan para obtener energía, y los
Anaerobios estrictos, no pueden vivir en presencia de oxígeno, para ellos es un
agente tóxico. Los anaerobios facultativos o los anaerobios
aerotolerantes, pueden crecer tanto en presencia de oxígeno como en su
ausencia Los organismos microaerófilos requieren ambientes con bajas
tensiones de oxígeno; las altas tensiones, como las que existen en el aíre son
tóxicas para ellos. Por tanto, dependiendo del microorganismo que se vaya a
cultivar, se tendrá que suministrar, restringir o eliminar el oxígeno.
2. Escalas de observación del mundo material
La escala de observación macroscópica es aquella que podemos percibir a través de nuestros ojos.
La escala de observación microscópica es aquella que no podemos ver con nuestros ojos y se basa
en la observación directa y la observación indirecta.
Veamos estos dos métodos de observación:
Observación Directa: Requiere la utilización de instrumentos adecuados, como

microscópicos ópticos, electrónicos, etc.
Observación Indirecta: Se basa en que a partir de hechos experimentales

observables a escala macroscópica, se idean modelos y establecen leyes y teorías
que describen el comportamiento de la materia a escala microscópica.

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El método de siembra a emplear dependerá de los objetivos que se

METODO DE SIEMBRA POR ESTRIA EN PLACA

La técnica de siembra en estría es usada para aislar cepas puras en

Consiste en cargar el ansa con la muestra y hacer estrías paralelas en la cuarta

Con el ansa cargada se hacen 3 o 4 estrías; se quema el ansa, se hacen 3 o 4

 Los métodos de vertido en placa y extensión en placa

En el método de vertido en placa, las muestras diluidas se mezclan

. En el método extensión en placa, las muestras diluidas se

Las dos técnicas de siembra por dilución presentan la ventaja de que

Un medio se formula para suministrar todos los nutrientes que un

Dentro de estas tenemos la Temperatura, El PH, y el Oxígeno.

los microorganismos crecen más rápidamente cuando se aumenta la

La concentración de oxígeno del medio es un determinante crítico para el

2. Escalas de observación del mundo material

Veamos estos dos métodos de observación:

Observación Directa: Requiere la utilización de instrumentos adecuados, como

Observación Indirecta: Se basa en que a partir de hechos experimentales

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