CENTRO DE CIENCIAS BÁSICAS

DEPARTAMENTO DE QUÍMICA
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA
REPORTE no. 4
“Preparación de un Buffer y su acción amortiguadora”

ALUMNOS:
ELIZABETH MEZA SANDOVAL
MARIA FERNANDA MELENDREZ REYES
DIANA YERALDINE ROMO GONZÁLEZ

M. en C.
Javier Martínez Rodríguez

Aguascalientes, Ags.

Sábado 11 de septiembre de 2021

 Objetivo:
 Lograr preparar una solución amortiguadora.
 Entender y observar su acción en material biológico.
 Diluir o adicionar una base fuerte a un amortiguador.

Introducción:
Las disoluciones amortiguadoras son frecuentes en la naturaleza, como es el caso del
sistema H2CO3/NaHCO3 que predomina en el plasma y fluido intersticial (Vega &
Konigsberg, 2001). Asimismo, los amortiguadores tienen diversas aplicaciones, como
en los medios empleados en los cultivos bacterianos que requieren de cierto valor de
pH para que las bacterias crezcan (Skoog et al, 2001) (1)
Una disolución amortiguadora, llamada también disolución reguladora, buffer o tampón
(Harris, 2001), es aquella que tiene la capacidad de regular los cambios bruscos de pH
debidos a la adición de ácidos o bases fuertes y de resistir los cambios de pH por
efecto de diluciones. Una disolución amortiguadora está formada por un ácido débil y
su base conjugada o bien por un base débil y su acido conjugado; de manera tal que
en la misma disolución coexisten un componente que reacciona con los ácidos (la
base) y otro que reacciona con las bases (el ácido). (2)
En los organismos vivos, las células deben mantener un pH casi constante para la
acción enzimática y metabólica. Los fluidos intracelulares y extracelulares contienen
pares conjugados ácido-base que actúan como buffer.
Las sustancias amortiguadoras o buffers tienen un papel importante para la regulación
del pH en los medios biológicos celulares y extracelulares. Su función es reducir al
mínimo los cambios en la concentración de iones hidrógeno y, por lo tanto, también en
la concentración de iones hidroxilo, cuando se agregan pequeñas cantidades de ácidos
o bases. Otros sistemas que ayudan a mantener el pH sanguíneo son:
 H2PO4 - / HPO4 -2
 Proteínas
 Ácidos Nucleicos
 Coenzimas
 Metabolitos intermediarios
Algunos poseen grupos funcionales que son ácidos o bases débiles, por consiguiente,
ejercen influencia en el pH intracelular y éste afecta la estructura y el comportamiento
de tales moléculas. (2)

Materiales y reactivos:
 Diagrama de flujo:
I.- PREPARACIÓN DE LA SOLUCION BUFFER.

1.- En un vaso de
precipitado de
250 ml colocar 77
ml de la solución
de KH2PO4 0.15
M.

2.- Añadir 49 ml
3.- Guarde su de la solución de
solución buffer para Na2HPO4 0.15 M
el experimento y medir con el
número dos. potenciómetro
hasta obtener un
pH de 7.0

II.- ACCIÓN AMORTIGUADORA DEL BUFFER PREPARADO Y UN BUFFER

BIOLÓGICO.
 Poner en una gradilla una Seguir con las
serie de tubos numerados del indicaciones dadas por la
1 al 6. tabla 1.

Paso Paso
Resultados de la practica:
Tabla 1. Resultados de pH medido con tiras de pH.

TUBO NO. SOLUCIÓN PH INICIAL ADICIONAR PH FINAL

PARA
COLOCAR
1 10 ml H2O 6 4 gotas HCl 3
destilada 0.1 N
2 10 ml solución 7 4 gotas HCl 7
buffer 0.1 N
preparada
3 10 ml albumina 6 4 gotas HCl 4
de huevo 0.1 N
4 10 ml H20 6 4 gotas de 9
destilada NaOH 0.1 N
5 10 ml solución 7 4 gotas de 7
buffer NaOH 0.1 N
preparada
6 10 ml albumina 6 4 gotas de 10
de huevo NaOH 0.1 N
Tabla 1. Tabla comparativa de los pH iniciales y finales, a los cuales se le agrego una base o un ácido.

Imágenes:
Fig 1. Se pueden observar las 6 soluciones a Fig 2. Se logran ver las tiras de pH con las que se
las que se les midió el pH. realizó la práctica.

Fig. 3. Se pueden observar las tiras de pH una vez Fig. 4. Pueden observarse el buffer sintético y la
usadas para determinar la de cada sustancia, albumina de huevo.
solo que la foto fue tomada después de tiempo
por lo que no muestra la coloración real que
tomaron después del experimento.

Discusión de resultados:
Como puede verse, los resultados son consecuencia de la preparación de 6 soluciones,
dos buffers sintéticos o preparados, dos soluciones de albumina de huevo, que es un
buffer natural y dos soluciones de agua destilada, a los cuales se les determinó su pH
inicial, para después, agregarle NaOH 0.1 N a una de las soluciones de agua
destilada, buffer preparada y albumina de huevo, mientras que a las otras 3, se les
agregó HCl 0.1 N, para posteriormente determinar una vez más el pH de las
soluciones, para así poder evaluar la capacidad amortiguadora de los buffers naturales
y sintéticos, además de la reacción de una sustancia que no posee la capacidad de
amortiguar, en este caso, el agua destilada.
“Existen soluciones específicas, a las cuales se les puede agregar cantidades elevadas
ya sea de ácido o de álcalis y, aun así, su pH no se verá tan alterado. A este tipo de
soluciones se les conoce como soluciones Buffer o amortiguadoras. Una solución
buffer debe contener un ácido débil y una sal de este ácido; por ejemplo, ácido
acético/acetato de sodio o amoníaco/cloruro de amonio. Esta propiedad amortiguadora
se aprovecha para preparar soluciones que mantienen un pH constante.” (Rubinson,
2000) (3). Es por esta razón que, dentro de los resultados, se puede observar como es
que en aquellas mezclas clasificadas como solución buffer, a pesar de habérsele
agregado un gran numero de gotas de HCl, es decir, de un ácido, y en otro caso de
NaOH, es decir, de una base, en ambas ocasiones el pH se mantuvo tal como inició, en
7, dentro de la escala de las tiras de pH, lo cual indica la neutralidad de la solución, aun
después de haberse alterado su sistema inicial. Otro reactivo que funcionó como buffer
fue la albumina de huevo, solo que, al ser natural, no evitó de forma tan exacta la
disminución o el aumento de pH, mas si se nota la diferencia con relación a la
sustancia que no posee capacidad de amortiguar en absoluto, el agua destilada, dentro
de la cual los valores de pH inicial y final, si muestran variaciones en sus valores más
representativas. La causa por la cual, las soluciones buffer actúan de esta forma es
porque siguen el principio de Le Chatelier, el cual indica que: “Si a una reacción en
equilibrio, se le aplica una distorsión, el equilibrio se desplazará en la dirección que
contrarreste la distorsión” (Buitrago, 2005) (4). El intervalo de pH para el cual un
sistema buffer regula adecuadamente es: pKa – 1 < pH < pKa + 1, es decir, “El sistema
buffer más adecuado es aquel cuyo valor de pKa está lo más cerca posible del pH que
se desea regular”. (Guerrero, P, 2018) (5). Lo que menciona esta última cita es
bastante importante, ya que fue lo que permitió el buen funcionamiento de el buffer y la
capacidad de amortiguamiento que lo acompaña.
“La capacidad de un amortiguador para mantener un pH especifico depende de 2
factores: La concentración molar del par acido-base conjugada y el cociente de sus
concentraciones. Es decir, cuantas más moléculas de amortiguador estén presentes,
más cantidades de iones H+ y OH- pueden absorberse sin generar variaciones en el
valor del pH o generando variaciones muy pequeñas”. (Buitrago, J, 2005) (4). Es por
esto por lo que, aunque tanto la albumina de huevo, como el buffer preparado son
amortiguadores, no tuvieron la misma efectividad dentro de la práctica, siendo una
mejor opción la solución de buffer preparado, si es que el objetivo de quien este
desarrollando la práctica sea buscar mantener la concentración de iones hidrogeno o
de iones hidroxilo lo más que se pueda, es decir mantener la sustancia con la que se
está trabajando, siendo acido o base. Para determinar la concentración requerida en el
buffer sintético se hace uso de la ecuación de Henderson-Hasselbach, la cual permitirá
realizar el cálculo de cantidad necesaria de cada reactivo y volumen total de la
solución, solo que en el caso de este experimento no fue necesario realizar los
cálculos, ya que estas cantidades fueron dadas de forma directa.

Conclusión:
El objetivo de la práctica el cual era preparar una solución amortiguadora y observar su
acción en material biológico fue completado de forma exitosa. Se concluyó que la
acción de una sustancia amortiguadora consiste en mantener el equilibrio dentro de la
reacción siguiendo el principio de Le Chatelier, adaptando un nuevo equilibrio una vez
que se modificó el sistema inicial de la reacción. Este nuevo equilibrio fue dirigido por la
acción amortiguadora de las soluciones buffer, las cuales mantuvieron el pH constante,
aún después de que la sustancia inicial fuera expuesta a una base que fue el hidróxido
de sodio y un ácido, el ácido clorhídrico. También se logró establecer una comparación
entre dos soluciones buffer; una natural y una sintética, analizando que el buffer
sintético, es decir aquel que se hizo en el laboratorio, fue mucho mas eficiente que el
buffer natural, esto debido a que al ser sintético, se logró establecer un pH especifico,
mezclando un ácido débil con la sal de este ácido, lo cual permitió que se tuvieran más
moléculas de amortiguador, que a la vez lograron absorber mas iones OH - Y H+,
manteniendo el pH invariable. En el caso del amortiguador natural, se puede decir que
el amortiguador fue menos eficiente debido a las concentraciones de iones
amortiguadores, la cual fue bastante para evitar que las variaciones fueran muy
grandes, mas no suficiente para evitarlas. Y en el caso del agua fue bastante claro
como el pH varió en gran medida sus valores al ser expuesto tanto a un ácido como a
una base, descalificando que alguna vez pueda funcionar como amortiguador.
Además, se dijo que en caso de que a la hora de preparar la solución Buffer, no se
posean ya las concentraciones directas, tal como fueron proporcionadas en este caso,
se pueden calcular haciendo uso de la ecuación de Henderson-Hasselbach.
Entonces, se puede decir que la practica sirvió para conocer y demostrar las
características de las distintas soluciones buffer, las cuales serán muy útiles dentro de
la bioquímica y la química en general, ya que es uno de los procedimientos básicos a
realizar a la hora de desarrollar análisis químico-biológicos. También es importante, ya
que permitió conocer un proceso que ocurre dentro del mismo cuerpo humano,
específicamente en la sangre, ya que existen distintas enfermedades que modifican el
pH del organismo, el cual, para evitar esto, realiza la producción de sus buffers
naturales, para que combatan dicho cambio. Demostrando una vez más, que los
buffers pueden ser naturales o sintéticos, y que además son de gran importancia, no
solo en el laboratorio, sino también en la vida diaria.
 Cuestionario del profesor:
1.- ¿Cómo define el equilibrio acido-base? Explicar
Se denomina equilibrio ácido-base al balance que mantiene un organismo o una
sustancia entre ácidos y bases con el objetivo de mantener un pH constante. (7)
2.-En el equilibrio anterior, ¿los términos disociación e ionización indican lo mismo o
existe alguna diferencia? explicar.
Los dos poseen el mismo significado siempre y cuando se esté hablando de ácidos, se
referirán a la liberación de electrolitos dentro de una solución. (8)
3.- ¿Qué es la constante de acidez
Es una medida de la fuerza de un ácido débil (que no se disocia completamente). (8)
4.- ¿Qué es una base conjugada y con que otro(s) nombre(s) se le conoce?
La base conjugada de un ácido de Brønsted-Lowry es la especie que se forma
después de que un ácido donó un protón. El ácido conjugado de una base de
Brønsted-Lowry es la especie que se forma cuando una base acepta un protón. (9)
5.- ¿Qué es el termino pka?
El pKa es una magnitud que refleja cómo tienden las moléculas de una solución
acuosa a disociarse. (8)
6.- ¿Cuál es la importancia del conocimiento de los ácidos débiles y de las bases
débiles en la bioquímica? explicar.
Es necesario, ya que de esta forma sabremos que reactivo es capaz de reaccionar con
cual, logrando hacer soluciones exitosamente. (10)
7.-En cuestión de cálculos de acidez que es más fácil utilizar ¿Ka o pka? explicar.
Con Ka, ya que es más fácil interpretar sus resultados, así como un Ka elevado revela
un ácido fuerte (ya que se disocia en sus iones), un Ka reducido se vincula a un ácido
débil (se disocia poco). En contrapartida, un pKa pequeño está relacionado a un ácido
fuerte y un pKa grande, a un ácido débil. (11)
8.- ¿Qué es la ecuación de Henderson-Hasselbach y para que se utiliza?
La ecuación de Henderson-Hasselbalch es una expresión utilizada en química para
calcular el pH de una disolución reguladora, o también, a partir del pKa o el pKb
(obtenidos de la constante de disociación del ácido o de la constante de disociación de
la base) y de las concentraciones de equilibrio del ácido o base y de sus
correspondientes base o ácido conjugado, respectivamente. (12).
9.- ¿Qué es una solución amortiguadora? Explicar
Son aquellas soluciones específicas, a las cuales se les puede agregar cantidades
elevadas ya sea de ácido o de álcalis y, aun así, su pH no se verá tan alterado. (3)
10.- ¿Con que otro(s) nombre(s) se les conoce a las soluciones amortiguadoras?
Soluciones buffer, reguladora o tampón. (3)
11.-¿Qué similitud guarda una solución amortiguadora en un sistema fisicoquímico con
los amortiguadores en un sistema de suspensión de un automóvil? explicar.
Que ambos evitan que ocurran cambios muy grandes en el sistema de las reacciones
de cada uno de estos, evitando así, que se dañen. (3)
12.-¿A qué se le denomina “tris” en las soluciones amortiguadoras?
A la abreviatura de tris (hidroximetil) aminometano que es un compuesto ampliamente
utilizado para la creación de soluciones amortiguadoras. (13)
13.-Mencionar 2 ejemplos de soluciones amortiguadoras naturales. y explicar su
funcionamiento fisicoquímico.
Ácido acético/acetato de sodio o amoníaco/cloruro de amonio. (3)
14.- ¿Qué es una curva de titulación de un ácido débil con una base fuerte? explicar.
Es aquella curva donde se representa la relación entre estos. La curva de una
valoración de ácido fuerte con base fuerte presenta un salto de pH en las proximidades
del punto de equivalencia. El punto de equivalencia es el punto de máxima pendiente y
si se representa la derivada de la curva de valoración, el punto de equivalencia
corresponde al máximo. (14)
15.- En una curva de titulación del punto anterior, ¿qué significado tiene el o los puntos
de inflexión en la misma? Explicar.
La curva de una valoración de ácido débil con base fuerte presenta un salto de pH en
las proximidades del punto de equivalencia, siendo el valor de pH>7 en este punto.
Además del punto de equivalencia, existe otro punto de inflexión en este tipo de curvas
que corresponde al punto de semineutralización, que corresponde al volumen de base
necesario para neutralizar la mitad del ácido. En este punto las concentraciones
analíticas del ácido y la base conjugada son idénticas, eliminándose estos términos de
la expresión de la constante ácida, siendo máxima la capacidad de tamponamiento de
esta disolución respecto de todas aquellas formadas antes del punto de equivalencia.
(14)
 Cuestionario del manual:
1.- ¿Por qué el agua destilada observa mayor alteración de pH?
Debido a que esta no es una solución amortiguadora y que no hay mas sustancias en
ella y al agregar acido y el hidróxido se convierte en una solución con mayor número
de hidrógenos y/o iones hidroxilo, alterando su pH constantemente. (3)
2.- ¿Por qué se considera que la albúmina de huevo debe tener propiedades
amortiguadoras?
Se considera que debido a que la albumina es una proteína y tienen diferentes cargas
por tener grupos amino y carboxilo, y esto hace que tenga diferentes pKa, por lo cual
puede funcionar como buffer. (5)
3.- ¿Qué papel desempeñan las soluciones buffer dentro de la bioquímica? (En
general).
Su papel es el de regular el pH fisiológico de los organismos. (6)
4.- ¿Qué sucede cuando en un sistema amortiguador la concentración molar de la sal y
el ácido que integran la solución son iguales?
La capacidad amortiguadora es máxima y el pH de la solución es igual al pKa. (6)

Referencias bibliográficas:
1- Harris Daniel C. 2001. “Análisis químico cuantitativo”. 2ª edición. Editorial Reverté,
S.A. México. Rubinson J.F., Rubinson K.A. 2000.
2- Skoog Douglas A., West Donald M., Holler F. James, Crouch Stanley R. 2008.
“Química Analítica Contemporánea”. 1ª ed. Prentice Hall, México.
3- Rubinson, J. F y Rubinson K. (2000) “Química analítica contemporánea”. Editorial:
Prentice Hall; México
4- Buitrago, J, (2005). “Bioquímica”, 3er edición. Madrid. McGraw-Hill. Interamericana,
pp 65-92.
5- Guerrero, P, 2018, Monografías. Preparación de soluciones Buffer.
https://www.monografias.com/trabajos73/preparacion-soluciones-buffer/preparacion-
soluciones-buffer.shtml
6- Chang Raymond. (2010). “Química”. México, DF. McGraw Hill.
7- equilibrio ácido-base.
https://www.fundaciontorax.org.ar/page/index.php/pacientes/diccionario/484-
equilibrio-acido-base#:~:text=Se%20denomina%20equilibrio%20%C3%A1cido
%2Dbase,iones%20de%20hidr%C3%B3geno%20(H%2B).
8- La Constante de Acidez Ka. https://www.quimicas.net/2015/05/la-constante-de-
acidez.html
9- Teoría ácido-base de Brønsted-Lowry. https://es.khanacademy.org/science/ap-
chemistry/acids-and-bases-ap/acids-bases-and-ph-ap/a/bronsted-lowry-acid-base-
theory
10- Equilibrios acido-base.
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Capitulo16GarritzGasqueMartinez_2725
5.pdf
11- Definición de pKa. https://definicion.de/pka/
12- Calculation of protein isoelectric point.
https://web.archive.org/web/20130429005222/http://isoelectric.ovh.org/
13-Gomori, G, (1955). Preparation of Buffers for Use in Enzyme Studies. Methods
Enzymology. Pp 138-146.
14- Equilibrios y volumetrías acido-base.
https://www.um.es/documents/4874468/11830096/tema-5.pdf/e9fc6f0c-2d0d-4bca-
8b07-6e1f03ff7c30