Laboratorio de Análisis Instrumental – Universidad Santiago de Cali

CUANTIFICACION DE CALCIO PRESENTE EN LA LECHE, POR ESPECTROSCOPIA DE

ABSORCION ATOMICA
Stephany Bedoya, Francisco Molineros, Leidy Carolina Peña, David Valencia.
Práctica No 4. Universidad Santiago de Cali
Enviado abril 12 2022
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Resumen
En la presente práctica podemos observar que se realizaron la preparación de soluciones, estándares y la muestra
utilizada, para realizar la cuantificación de Ca en el espectrofotómetro. Se inició preparando solución de La al 1%,
luego se realizó la preparación de la solución estándar de calcio, en la que se empezó con una solución patrón de
calcio, para con esta preparar una solución de calcio de 100ppm, para finalmente, a partir de la solución de calcio
de 100ppm y la solución de La al 1%, preparar los estándares junto con el blanco y realizar la curva de
calibración, Luego se preparó la muestra a partir de 10ml de leche pasteurizada y 1ml de HCl concentrado,
tomando el sobrenadante de esta y adicionando solución de lantano y agua destilada, pasaremos a cuantificar el
Ca presente en la muestra con el espectrofotómetro. En el espectrofotómetro se realizó la lectura de los estándares
y la muestra por triplicado, sus resultados se promediaron y se obtuvieron los siguientes: Estándar 1 (0.1128),
estándar 2 (0.2117), estándar 3 (0,.3728), estándar 4 (0.5377), estándar 5 (0.7197), muestra diluida (0.1890),
muestra concentrada (1.4631).

Palabras clave: Estándares, cuantificación de Ca, espectrofotómetro.

Abstract
In this practice we can see that the preparation of solutions, standards and the sample used to perform
the quantification of Ca in the spectrophotometer were carried out. The preparation of the calcium
standard solution began with the preparation of a calcium standard solution, which was used to prepare
a 100ppm calcium solution, and finally, from the 100ppm calcium solution and the 1% La solution, to
prepare the standards together with the blank and perform the calibration curve, Then the sample was
prepared from 10ml of pasteurized milk and 1ml of concentrated HCl, taking the supernatant of this and
adding lanthanum solution and distilled water, we will quantify the Ca present in the sample with the
spectrophotometer. In the spectrophotometer the standards and the sample were read in triplicate, their
results were averaged and the following results were obtained: Standard 1 (0.1128), standard 2
(0.2117), standard 3 (0,.3728), standard 4 (0.5377), standard 5 (0.7197), diluted sample (0.1890),
concentrated sample (1.4631).

Keywords: Standards, Ca quantification, spectrophotometer.

1. Introducción determinar la cantidad de proteína. En la

La espectroscopia de absorción es a menudo cuantificación de proteína, un
utilizada en el análisis químico, como en el espectrofotómetro de absorción produce luz y
análisis de proteínas donde ser prueba la luz luego la reduce a una simple longitud de onda
visible ultravioleta contra una solución acuosa utilizando un componente llamado
para encontrar la concentración de proteína. monocromador. (Lopez, Opereza, &
Funciona porque todas las proteínas absorben Betancourt, 2017) La luz monocromática se
luz a longitudes de onda específicas y, con el ajusta a una longitud de onda que no es
uso de fórmulas específicas, se puede calcular absorbida por el contenedor en el que está la
la cantidad de luz que es absorbida al detectar muestra porque esto impactará negativamente
la cantidad de luz que es reflejada en la la habilidad del espectrofotómetro para medir la
solución. Esto permite a los científicos reflectancia
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El equipo consiste en una fuente de radiación, concentrado y agua destilada hasta disolver
una zona de muestra, un selector de completamente el carbonato de calcio, por último
longitud de onda, un detector y un se realizó la preparación de la curva de calibración
procesador de la señal y de la lectura de salida. de calcio y la cuantificación del Ca presente en la
La fuente de radiación más utilizada en muestra de la leche, en el cual se realizó una
espectroscopia de absorción atómica es la muestra blanco y 5 estándar, donde se realizó la
lámpara de cátodo hueco, la cual consiste en un cuantificación del Ca mediante el
cilindro relleno de un gas inerte dentro del cual espectrofotómetro, realizando lecturas del blanco
se encuentra un cátodo, constituido del metal a y por triplicado para cada uno de los estándares.
analizar, y un ánodo. En la espectroscopia de
3. Datos, calculo y resultados
absorción atómica se usan atomizadores con o
Para la cuantificación de calcio presente en una
sin llama para producir átomos libres del
muestra de leche se realizó haciendo uso del
metal en el haz de radiación. Como detector
método espectrofotométrico de absorción atómica,
se emplea un fotomultiplicador que produce
la muestra fue tomada de una leche colanta que
una corriente eléctrica, la cual es proporcional a
según su etiqueta tiene un porcentaje del 25% de
la intensidad de la línea aislada por el
calcio.
monocromador. Un amplificador selectivo
amplifica la señal pasando luego a un
dispositivo de lectura que puede ser un
TABLA 1. Absorción por triplicado
voltímetro digital o un registrador, entre
SOLUCION ABS- 1 ABS- 2 ABS- 3
otros. (Skoog, 2001) ESTANDAR 1 0,1121 0,1128 0,1135
La espectroscopia de absorción atómica se ha ESTANDAR 2 0,2059 0,2150 0,2144
usado para la determinación de más de 70 ESTANDAR 3 0,3757 0,3710 0,3716
elementos. Las aplicaciones en la industria ESTANDAR 4 0,5386 0,5372 0,5345
incluyen muestras clínicas y biológicas, ESTANDAR 5 0,7210 0,7164 0,7217
materiales forenses, alimentos, bebidas, agua y
efluentes, análisis de suelos, análisis de En la tabla 1, se presenta las diferentes la
minerales, productos petrolíferos, absorbancia de los estándares por triplicado.
farmacéuticos y cosméticos. (Silvia trejos &
Valverde, s.f.) El objetivo de esta práctica fue TABLA 2. Curva de calibración
cuantificar el contenido de calcio presente en la
leche realizando la curva de calibración de Concentración (ppm) Promedio
calcio, y el tratamiento de la muestra para absorbancia
cuantificar el calcio en la leche. 1,00 0,1128
2,00 0,2117
2. parte experimental 4,00 0,3728
Para determinar la cuantificación de calcio 6,00 0,5377
presente en la leche, se realizó primero la 8,00 0,7197
preparación de la solución La al 1%, donde se
debía preparar 100mL de solución al 1%, Se realizó el grafico de los datos tabulados en la
mediante 1,1727g de La2O3 y se adicionó a un tabla 2, se obtienen los valores de Pendiente
balón aforado de 100ml, se le agrego 5,0 mL de (0,0854) e Intercepto (0,0322), teniendo una
HCl concentrado y agua destilada hasta lograr la linealidad obtenida en la curva de calibración
dilución total, luego se realizó la preparación de la considera aceptable teniendo un R2= 0,9993
solución estándar de calcio, donde se debía pesar
0,2500g de CaCO3 seco y trasladarlo a un balón
aforado de 100mL, luego se adiciono HCL
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C 1 V 1=C 2 V 2(2)
curva de calibracion Concentracion vs
Absorvancia
0.8 ( 1. 8 3 ppm )( 100 mL )=C 2 ( 2 mL )
0.7
0.6 f(x) = 0.0854103658536585 x + 0.0322164634146342
R² = 0.999307514201081 C 2=91.5 ppm
absorbancia

0.5
0.4
0.3
0.2
Concentración en la Muestra: 91,5 ppm
0.1 Esta concentración está contenida en una bolsa de
0 leche de 1,100ml, por lo que se obtiene
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
concentracion(ppm) mg de calcio=91,5 ppm∗1,1l=100,65 mg
Grafica 1. Curva de calibración
Tabla 3. Cuantificación del calcio presente Seguidamente los mg de leche obtenidos
en la leche. experimentalmente se compararon con el valor
concentración Absorbancia teórico de la concentración de leche el cual según
1,8360 0,1890 la etiqueta era de 125mg de Calcio, y así hallar el
1,8301 0,1890 porcentaje de error
125 mg−100,65 mg
1,8430 0,1896 %error = ∗100
Promedio 0,1890 125 mg
%error =19,48 %

4. Discusión
Teniendo en cuenta los resultados obtenidos de la
En está practica se realizó la determinación
curva de calibración se relaciona la curva con su
de calcio por espectroscopia atómica, la
coeficiente de relación (0.9993).
espectroscopia de absorción atómica
y=mx+b (EAA) consiste en la determinación de un
(1)
analito previamente atomizado, mediante
Tomando en consideración la ecuación 1, se
la medida de la absorción de radiación de
realizó el cálculo de la concentración de calcio
una longitud de onda determinada. Esta
despejando x, obteniendo como resultado 1,38ppm
radiación es absorbida selectivamente por
y=0.0854 x+ 0.0322 átomos que tengan niveles energéticos
cuya diferencia en energía corresponda en
y−0.0322 valor a la energía de los fotones incidentes.
x= La cantidad de fotones absorbidos está
0.0854
determinada por la ley de Lambert-
0.1890−0.0322 Beer, que relaciona la absorción con la
x= concentración de la especie absorbente.
0.0854
(A., 2014), la EAA necesita una fuente que
solo emita a longitudes de onda propia del
x=1. 83 mg/l
elemento a analizar en este caso se utilizó
una lámpara de cátodo hueco de calcio.
El calcio es un mineral que el cuerpo
Para hallar la concentración partimos de una
necesita para formar y mantener huesos
muestra de 10 mL aforada en un balón de 100 mL
fuertes y llevar a cabo muchas funciones
y de esa solución se tomaron una alícuota de 2 mL
importantes.
y se aforo nuevamente en un balón de 100 mL por
El cuerpo necesita calcio para que los
lo que su concentración de calcio se calculó
músculos se muevan y los nervios
posteriormente con la siguiente ecuación:
transmitan mensajes desde el cerebro hasta
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las distintas partes del cuerpo. Además, el 5. Conclusiones

calcio ayuda a que la sangre circule a Se comprobó que la espectrometría de
través de los vasos sanguíneos por todo el absorción atómica es una técnica muy
cuerpo y a liberar las hormonas necesarias específica para determinar la concentración
para muchas funciones del organismo. de un metal.
(Victoria, 2016) Se logró encontrar la concentración en
Se realizó la curva de calibración, esta se nuestra muestra problema, que fue de
muestra en el grafico 1, en la cual se puede 91,5ppm un valor que entra entre el rango
observar el cumplimiento de la ley de permitido por las autoridades sanitarias.
Lambert-beer, pues tiene un Se comprobó que la ley de Lambert-beer
comportamiento lineal lo que indica que la se cumplió ya que a medida que aumenta
concentración es directamente la concentración (ppm), así mismo
proporcional a su absorbancia, además se aumenta la señal analítica (absorbancia)
muestra un buen ajuste de los datos con su mediante la gráfica 1 de la curva de
coeficiente de determinación 0,999, dando calibración.
gran confiabilidad a los datos. Se realizó la comparación de la cantidad de
Al reemplazar la absorbancia obtenida en calcio determinada con la registrada en la
la ecuación de la recta, se obtuvo etiqueta de la leche, donde se tomó la
experimentalmente una concentración de muestra, se notó una diferencia
calcio de 91,5ppm, la cual cumple con la significativa, debido a errores aleatorios
normativa NTC 5246 pues no supera los al momento de preparar la muestra.
184mg, se aleja del valor reportado en la
etiqueta el cual es 125mg, que equivalen al 6. Preguntas
25%, seguidamente se calculó el
porcentaje de error, tomando como 1. Cuál es la longitud de onda de resonancia
referencia el valor reportado en la etiqueta del calcio
de la leche, se obtuvo un porcentaje de R//la longitud de onda usual es de 422.7.
error de 19,48%, el cual es un porcentaje 2. Calcule la absortividad del calcio utilizando
bastante alto e indica algún error en el la línea de calibración, (se utiliza un
experimento ya sea un error sistemático o quemador de 10 cm)
errores aleatorios, las diferencias pueden R// teniendo en cuenta la ley de Lambert-
ser atribuidas a diferentes causas, como Beer, que nos dice que la absorbancia es
por ejemplo los volúmenes tomados para directamente proporcional a la
la preparación de la muestra pudieron ser concentración, por lo que se calcula de la
más bajos de lo necesario por lo cual las siguiente manera, despejando la ecuación
concentraciones obtenidas se vieron A=ε ∙l ∙ c quedando:
disminuidas, además de esto pudo existir A
errores personales al momento de realizar ε=
l∙ c
la preparación de las muestras De igual
forma cabe la posibilidad de que la
Absortividad de la curva de calibración
concentración de calcio reportada en la
etiqueta de leche no corresponde al valor
Concentración: 1 ppm
que realmente contiene este producto.
0.1128
ε= =0.01128 Lmol−1 cm−1
10 ∙1

Concentración: 2 ppm
0.2118 −1 −1
ε= =0.01059 Lmol cm
10 ∙2
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experimentalmente y comparando con el

Concentración: 4 ppm contenido de calcio reportado en la
0.3728 −1 −1 literatura para la leche de vaca, la muestra
ε= =0.00932 L mol cm
10 ∙ 4 analizada cumple con la especificación?
R// según los resultados obtenidos
Concentración: 6 ppm experimentalmente y realizando la
0.5368 comparación entre los valores reportados en
ε= =0.00895 Lmol−1 cm−1
10 ∙6 la literatura, nuestra muestra en la cual se
obtuvo 100,65mg de calcio, cumple con la
Concentración: 8 ppm especificación, puesto que teóricamente la
0.7197 −1 −1
leche contiene entre 100-110mg de calcio
ε= =0.00899 L mol cm
10 ∙8 aproximadamente, al igual está entre el
rango aceptada por la autoridad de sanidad.
Absortividad de la muestra diluida

Concentración: 1.8360 ppm Referencias

0.1890 −1 −1
ε= =0.01029 L mol cm
10∙ 1.8360

3. ¿De acuerdo con sus resultados cuál es el

porcentaje de Ca en la leche analizada?
De acuerdo a los resultados de esta práctica
el contenido de calcio presente en la leche
es de
( 1.83 ppm ) ( 100 mL )=C 2 ( 2 mL )

C 2=91.5 ppm

4. ¿Por qué es necesario adicionar solución de

Oxido de Lantano a las muestras?

R// El óxido de lantano es necesario agregar

a la muestra, para evitar la interferencia
química durante la cuantificación, el calcio con
el fosfato forma el fosfato de calcio, el cual se
transforma en pirofosfato de calcio, que es
relativamente estable en una llama
aire/acetileno. Así la cantidad de átomos libres
de calcio generados en la llama será menor que
la obtenida con una solución de calcio de igual
concentración, pero sin presencia de fosfato,
provocando una disminución de la señal.

5. ¿El Cloruro de Potasio tiene el mismo

efecto que el lantano? Explique.
R//
6. según los resultados obtenidos
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1. REFERENCIAS
A., B. R. (2014). Analisis instrumental . sintesis S.A.
Lopez, h., Opereza, I., & Betancourt, c. (2017). Obtenido de Determinación de la concentración de calcio, magnesio y potasio
en leche líquida en tres marcas comerciales, empleando la técnica de espectroscopia atómica. :
https://www.redalyc.org/pdf/3761/376156279009.pdf
Silvia trejos, P., & Valverde, M. (s.f.). Validación de la metodología analítica para cuantificar el calcio mediante la
espectroscopía de absorción atómica de llama y su cuantificación en alimentos de la canasta básica costarricense. .
Obtenido de https://dialnet.unirioja.es/descarga/articulo/483529.pdf
Skoog, D. A. (2001). principios del analisis instrumental. 5ta. edicion .
Victoria, E. M. (2016). Departamento de Fisiología. Instituto de Nutrición y Tecnología de Alimentos "José Mataix". Centro
de Investigación Biomédica. Universidad de Granada. . Obtenido de El calcio, escencial para la vida :
https://scielo.isciii.es/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0212-16112016001000007#:~:text=El%20calcio%20(Ca)
%20es%20el,del%202%25%20del%20peso%20corporal.