ANTIBIOGRAMA

DOCENTE: ANDREA GUTIERREZ LOZA

 ANTIBIOGRAMA
El antibiograma sirve para medir la sensibilidad de una cepa
bacteriana a uno o varios antibióticos. El estudio de la
sensibilidad in vitro es uno de los requisitos previos para la
eficacia in vivo de un tratamiento antibiótico.
También es importante para realizar estudios sobre la
evolución de las resistencias bacterianas que permite revisar
los protocolos de la antibioticoterapia empírica. Por lo que el
antibiograma tiene una utilidad terapéutica y epidemiológica.
CONCENTRACIÓN MÍNIMA INHIBIDORA (CIM)

 La determinación de la CIM es la medida de la sensibilidad

de una bacteria a un antibiótico. Es la mínima cantidad de
antimicrobiano que es capaz de impedir el crecimiento de un
microorganismo en unas condiciones normalizadas.
 Es el método habitual utilizado en los laboratorios de
Microbiología Clínica. Para llevarlo a cabo es necesario
utilizar cepas control (de referencia) con el fin de que los
resultados sean reproducibles y comparables. Este método
nos ofrece información sobre la sensibilidad de las bacterias
S (sensible), I (intermedia) y R (resistente).
✓ Sensible: si existe una buena probabilidad de éxito terapéutico en el caso de un tratamiento a
la dosis habitual.
✓ Resistente: si la probabilidad de éxito terapéutico es nula o muy reducida. No es de esperar
ningún efecto terapéutico sea cual fuere el tipo de tratamiento.
✓ Intermedia: cuando el éxito terapéutico es imprevisible. Se puede conseguir efecto terapéutico
en ciertas condiciones (fuertes concentraciones locales o aumento de la posología).
 Existen diferentes técnicas de laboratorio que permiten medir o
calcular de forma rutinaria, y de manera semicuantitativa, las CIM
(métodos manuales y métodos automatizados o semiautomatizados).
 MÉTODOS DE SENSIBILIDAD BACTERIANA IN VITRO

 En la época posterior al descubrimiento de las sulfonamidas y de la penicilina rara vez se

probaba la sensibilidad de los microorganismos a las drogas. Los pacientes eran tratados en
forma empírica y los microorganismos generalmente eran sensibles. Sólo tras el surgimiento
de las cepas resistentes, poco después de la introducción de estos agentes, los
microbiólogos comenzaron a probar la sensibilidad de un microorganismo infectante frente a
los agentes antimicrobianos.

 En un primer momento, el método estándar utilizado para las pruebas in vitro fue el de
dilución en caldo, que proporcionaba un resultado cuantitativo de la concentración de agente
antimicrobiano necesaria para inhibir el desarrollo de un organismo dado.
 MÉTODOS
• Dilución:
*CIM:
► Macrodilución
► Microdilución
• Difusión:
* E – Test CIM

*Bauer Kirby
1. Dilución en caldo
Se colocan concentraciones decrecientes del agente
antimicrobiano, generalmente diluciones 1:2, en tubos
con un caldo de cultivo que mantiene el desarrollo del
microorganismo. Los antibióticos se preparan en
"soluciones madre" concentradas y luego se diluyen
en caldo hasta obtener las concentraciones
apropiadas.
Un tubo de caldo se mantiene sin inocular como
control negativo de crecimiento. Después de un
periodo de incubación adecuada se observa la
turbidez de los tubos que indica el desarrollo
bacteriano. El microorganismo crecerá en el tubo
control y en todos los que no contengan suficiente
antibiótico que sea capaz de inhibir su desarrollo. La
concentración de antibiótico que presente ausencia
de crecimiento es la Concentración Mínima
Inhibitoria.
A partir de la CMI, se siembra una cantidad
conocida de inóculo de cada uno de los tubos
de caldo que no tienen turbidez en placas de
agar, y el número de colonias que crece en
estos subcultivos, después de incubar
durante la noche, se compara con el número
de UFC/ml del cultivo original. La mínima
concentración del agente antibacteriano que
permite sobrevivir a menos de 0,1 % del
inóculo original se denomina concentración
bactericida mínima (CBM).
 2. Difusión en agar
Este método incorpora el antimicrobiano a discos de
papel de filtro. Su introducción permitió agilizar la
determinación de la sensibilidad de las cepas
bacterianas frente a un número importante de
antimicrobianos de forma simultánea. El empleo de los
discos de papel de filtro para las pruebas de sensibilidad
está estandarizado y se correlaciona con las CMIs.
Durante muchos años, y a pesar de ser una técnica
puramente cualitativa, el método de difusión por disco (o
método Kirby-Bauer), en función sobre todo de su
comodidad, economía y fiabilidad, ha sido uno de los
más utilizados en los laboratorios.
 MEDIOS DE CULTIVO UTILIZADOS

Agar Mueller - Hinton

Agar Mueller - Hinton

c/sangre de carnero al 5%
Agar HTM

Agar GC suplementado + 1%
de Isovitalex
 1. PREPARACIÓN DEL INÓCULO

Seleccionar una a dos colonias bien aisladas, del Transferirlo a un tubo que contiene
mismo tipo morfológico, de un cultivo en placa. de 1 a 2 ml de solución fisiológica
Tocar la superficie de cada colonia con un asa de estéril.
siembra esterilizada.
 2. ESTANDARIZACIÓN DEL INÓCULO
2.1. Ajustar la turbidez del inóculo hasta el tubo 0.5 de la escala de
Mc. Farland, por comparación visual con el estándar
PATRÓN DE TURBIDEZ

1,5 x 108 UFC/mL

Comparando inóculo con el patrón O,5 de la ESCALA Mc FARLAND
(Sulfato de Bario)
 Preparación del estándar (0,5 mc.
Farland) para el inóculo
 Para estandarizar la densidad del inóculo se usa una
suspensión de sulfato de bario (0,5 de la escala de Mac
Farland) como estándar.

Preparación del estándar de turbidez.

Agregar 0,5 ml de una solución de BaCl2 0,048 M

(BaCl22H2O al 1,175% P/V) a 99,5 ml de una solución de
H2SO4 0,18 M (0,36 N) (1% V/V) en constante movimiento
para mantener la suspensión.

 Verificar la densidad correcta del estándar usando un

fotocolorímetro ó espectrofotómetro, cuya absorbancia a
625 nm es 0,08 a 0,10 para el estándar 0,5 de Mc.
Farland.
 2. Estandarización del Inóculo
2.2. La turbidez adecuada del inóculo preparado deberá
presentar una absorbancia de 0,08 a 0,10 leída a una longitud de
onda de 625 nm.
▪ Espectrofotómetro: 0,08 a 0,10
625 nm

▪ Fotocolorímetro
 3. INOCULACIÓN DE LAS PLACAS
3.1. Dentro de los 15 minutos siguientes al
ajuste de la turbidez del inóculo, sumergir
un hisopo estéril en la suspensión, rotar el
hisopo varias veces presionando
3.2
firmemente sobre la pared interior del tubo
por encima del nivel del líquido para
3.1
remover el exceso de inóculo.

3.2. Inocular la superficie seca de la placa

de Mueller Hinton
3.3 3.3. Estriando con el hisopo en tres
direcciones para asegurar una distribución
uniforme del inóculo Antes de colocar los
discos dejar secar la placa a temperatura
ambiente durante 3 a 5 minutos para que
cualquier exceso de humedad superficial
sea absorbido
 4. APLICACIÓN DE LOS DISCOS
▪ Sacar los antimicrobianos dos horas antes de
usar.
▪ No usar más de 6 discos por placa de l00 mm, ni
más de 12 discos en placas de 150 mm
▪ Verificar carga de discos de acuerdo
▪ al microorganismo.
▪ Colocar el disco sobre sobre la superficie del agar
con la ayuda de una pinza estéril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un
contacto completo con la superficie del agar
▪ Distancia entre discos debe ser de 2,5 cm
▪ No remover el disco una vez colocado sobre el
agar
 5. INCUBACIÓN
 Incubar lar placas en posición invertida a 37°C dentro de
los 15 minutos posteriores a la aplicación de los discos.

 Las placas de Haemophilus spp Neisseria spp y

Streptococcus spp, deben ser incubadas en atmósfera
del 5% de CO2.
 Se incuban las placas durante 16-24 horas y se estudia
el crecimiento. En los casos de Staphylococcus spp y
Enterococcus spp el tiempo de incubación debe
prolongarse por 24 horas para una mejor detección de la
resistencia a Oxacilina y Vancomicina, respectivamente
6. LECTURA E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

 Se valora el diámetro de la zona de inhibición que se forma alrededor de cada disco y se

compara con las referencias oportunas publicadas por la NCCLS.
 De esta manera se sabe si el microorganismo es Sensible, Intermedio o Resistente a cada
uno de los antibióticos.

• Medir zonas de inhibición

uniformes y circulares.
• Medir con regla o calibro
sosteniendo la placa en forma
invertida, sobre fondo oscuro,
usando luz reflejada
• Lectura MH c/sangre quitar tapa,
leer con luz transmitida
• Medir zona de inhibición. No
hemólisis
• Utilizar tablas de la CLSI (Clinical and
Laboratory Standars Institute) /
NCCLS M100S, 32 edit. 2022

Tres categorías:
• Sensible
• Intermedio
• Resistente
 3. Método de E-test

Es un método más reciente, es una combinación de

características de los métodos anteriores. Se trata de una
técnica cuantitativa en placa que permite obtener una lectura
directa de CMI en µg/ml, ya que se emplean tiras plásticas
impregnadas en concentraciones crecientes de antibiótico.
El microorganismo se inocula en una placa y sobre ella se
deposita la tira del antibiótico (o antibióticos) a ensayar. Se
incuba durante 16-24 horas a 35ºC y se valora la zona de
inhibición alrededor de cada tira. La CMI se lee directamente
observando el punto más bajo de la elipse que presente el
crecimiento
4. Métodos automatizados
 La mayoría de estos métodos utilizan sistemas de microdilución en medio líquido sobre
microplacas con pocillos en "U" e interpretan el crecimiento bacteriano en los diferentes pocillos
por medio de un autoanalizador (mediciones por turbidez o fluorescencia). Anteriormente se
realizaba por lectura óptica del técnico a través de un espejo invertido.
 Son sistemas fáciles y rápidos, generalmente automatizada o semiautomatizada. Son métodos
ideales para grandes volúmenes de trabajo. Una de sus grandes limitaciones es que sólo
ofrecen garantía para investigar microorganismos de crecimiento rápido y que no tengan
requerimientos especiales.
 LOS ANTIBIÓTICOS
 Los antibióticos son sustancia químicas
producida por un ser vivo o derivado sintético,
que mata o impide el crecimiento de ciertas
clases de microorganismos sensibles.
Generalmente, son fármacos usados en el
tratamiento de infecciones por bacterias, de
allí que se les conozca como
«antibacterianos»
 PRINCIPALES GRUPOS DE ANTIBIÓTICOS

1. Aminoglucósidos: estreptomicina, neomicina, amikacina, kanamicina,

tobramicina, gentamicina, capreomicina, paromomicina
2. Betalactámicos:
Penicilinas:
Bencilpenicilinas: bencilpenicilina (penicilina G); fenoximetilpenicilina
(penicilina V).
Isoxazolilpenicilinas: cloxacilina
Aminopenicilinas: amoxicilina; ampicilina.
Ureidopenicilinas: piperacilina.
Cefalosporinas:
1ª generación: cefadroxilo, cefalexina, cefazolina sódica.
2ª generación: cefaclor, cefuroxima, cefonicida, cefoxitina, cefminox.
3ª generación: cefixima, cefpodoxima proxetilo, cefditoreno pivoxilo,
cefotaxima, ceftazidima, ceftriaxona.
4ª generación: cefepima.
5ª generación: ceftarolina fosami, ceftobiprole medocaril,
ceftolozano.
 Monobactámicos: aztreonam.
Carbapenemes: imipenem, meropenem, ertapenem.
Inhibidores de las beta-lactamasas (entre paréntesis el
betalactámico al que se asocia): (amoxicilina)/ácido clavulánico;
(ampicilina)/sulbactam; (piperacilina)/tazobactam;
(ceftazidima)/avibactam; (ceftolozano)/tazobactam.
3. Anfenicoles: cloranfenicol.
4. Glucopéptidos: vancomicina, teicoplanina, dalvabancina.
5. Lincosamidas: clindamicina, lincomicina.
6. Macrólidos:
Macrólidos de 14 átomos: eritromicina, claritromicina, roxitromicina.
Macrólidos de 15 átomos: azitromicina.
Macrólidos de 16 átomos: espiramicina acetil, josamicina,
midecamicina diacetil.
7. Nitroimidazol: metronidazol, tinidazol.
8. Oxazolidinona: linezolid, tedizolid.
9. Quinolonas:
1ª Generación: ácido nalidíxico
2ª Generación: ciprofloxacino; norfloxacino; ofloxacino; ozenoxacino.
3ª Generación: levofloxacino.
4ª Generación: moxifloxacino; nadifloxacino.

10. Rifamicinas (ansamicinas): Rifabutina, rifampicina, rifaximina.

11. Sulfonamidas (entre paréntesis el antibiótico al que se asocian):

(trimetoprima)-sulfametoxazol, conocido como cotrimoxazol; (trimetoprima)-
sulfadiazina, conocido como cotrimacina; sulfacetamida; sulfadiazina argéntica.

12. Tetraciclinas:
•1ª Generación: tetraciclina clorhidrato.
•2ª Generación: doxiciclina, minociclina.
•3ª Generación: oxitetraciclina, tigeciclina.

13. Miscelánea: ácido fusídico; bacitracina; gramicidina; tirotricina; bedaquilina;

delamanid; daptomicina; fosfomicina; isoniazida; pirazinamida; etambutol;
mupirocina; nitrofurantoína; polimixinas; trimetroprima.
 DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA
A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA DE Enterobacterias
 Amikacina
 Ampicilina
 Ácido Nalidíxico
 Cefalotina
 Norfloxacina(1)
 Cefalexina
 Ampicilina -Sulbactam  Ciprofloxacina
 Amoxicilina-clavulanico  Levofloxacina
 Ácido Clavulánico.  Cotrimoxazol
(Trimetoprim/Sulfametox
 Cefuroxima azol)
 Cefotaxima  Nitrofurantoína(1)
 Ceftriaxona  Aztreonam
 Cefoxitina
(1) Solo utilizar para  Colistin
 Ceftazidima
orinas  Cefoperazona/Sulbactam
 Cefixima
 Imipenem
 Cefepime
 Meropenem
 Gentamicina
 Piperacilina – tazobactam
 DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA
A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA DE
Pseudomona aeruginosa

 Aztreonam  Levofloxacina
 Amikacina  Gatifloxacina (1)
 Ceftazidima  Imipenem
 Ceftazidima – clavulanico SIM  Meropenem
 Cefepime  Polimixina B
 Colistin  Norfloxacina (1)
 Ciprofloxacina  Piperacilina
(1) Solo utilizar para  Gentamicina  Piperacilina –tazobactam
orinas
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA
A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA DE A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA DE
Burkholderia cepacia Stenotrophomonas maltophilia

 Ceftazidima  Levofloxacina
 Meropenem  Cloranfenicol
 Minociclina  Minociclina
 Trimetoprima –sulfametoxazol  Trimetoprima –sulfametoxazol
Antibióticos a utilizar en el antibiograma de Salmonella
spp y Shigella spp aisladas de coprocultivos:

 Ampicilina
 Ácido nalidixico
 Cefpodoxima
 Azitromicina
 Trimetoprim/Sulfametoxazol
 Ciprofloxacina
 Cloranfenicol (solo para Salmonella)
 DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA
A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA DE Estafilococos

 Ciprofloxacina  Minociclina
 Clindamicina  Norfloxacina (1)
 Cefoxitima  Rifampicina
 Ceftarolina  Tigeciclina
 Eritromicina  Teicoplanina
 Gentamicina  Trimetoprima+
 Linezolid sulfametoxazol
(1) Solo utilizar para  Vancomicina SIM
 Nitrofurantoina (1)
orinas
 DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA
A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA DE Enterococos spp

 Norfloxacina (1)
 Ampicilina  Teicoplanina
 Ciprofloxacina  Tetraciclina
 Gentamicina alta carga  Tigeciclina
 Linezolid  Estreptomicina alta
 Minociclina carga
 Nitrofurantoina (1)  Vancomicina
(1) Solo utilizar para
orinas
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA
A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA DE
Estreptococo spp

 Oxacilina
 Eritromicina
 Clindamicina
 Trimetoprim/sulfametoxazol
 Penicilina
 Levofloxacina
 Vancomicina