Proyecto Específico PNPV 1135033

Jornada de actualización
e intercambio en control
biológico, comportamental y
genético de plagas
agropecuarias

Ediciones INTA
Resúmenes de la Jornada de actualización e intercambio en control biológico,
comportamental y genético de plagas agropecuarias : PE PNPV1135033 /
Andrea V. Andorno ... [et al.] ; editado por Lorena La Fuente ; editor literario
Silvia N. López ... [et al.]. - 1a ed . - Buenos Aires : Ediciones INTA, 2016.
Libro digital, PDF
Archivo Digital: descarga y online
ISBN 978-987-521-710-2
1. Control Biológico. 2. Manejo de Plagas. 3. Plagas. I. Andorno, Andrea V.
II. La Fuente, Lorena, ed. III. López, Silvia N., ed. Lit.
CDD 632.6
 Este libro no hubiera sido posible sin la colaboración
de todos aquellos amigos y profesionales que sumaron
su conocimiento a la realización de esta jornada que
involucró la participación de especialistas en el tema de
control de plagas. Para ellos, nuestro agradecimiento.

Silvia N. López Mariana Viscarret Diego Sauka Diego F. Segura

Cuando las arañas unen sus telas

pueden matar a un león
Proverbio etíope
 Uno de los problemas más importantes de la agricultura moderna es la
pérdida de rendimiento derivado del ataque de invertebrados perjudiciales.
El uso de plaguicidas químicos para enfrentarlos se contrapone a la demanda
mundial de alimentos sanos, con menores niveles de residuos químicos y obtenidos
bajo sistemas productivos respetuosos del ambiente.
El Programa Nacional de Protección Vegetal del INTA está fuertemente
comprometido con la búsqueda de soluciones a esta problemática promoviendo el
Manejo Integrado de Plagas (MIP) y sus distintas tácticas de control.
Desde el Proyecto Específico del INTA PNPV1135033 “Desarrollo de
herramientas para el manejo integrado de artrópodos perjudiciales” se propuso la
realización de esta Jornada cuyos objetivos fundamentales fueron:
1) generar un espacio para el intercambio de información científico-tecnológica
sobre control genético y comportamental y sobre el estudio de macro y
microorganismos destinados al control biológico de invertebrados plaga y
2) compartir la experiencia de investigadores de diversas instituciones que
contribuyen de manera decisiva en estas temáticas.
En la Jornada se abordaron, a lo largo del día, diversos aspectos relacionados
con:
- herramientas genéticas y fisiológicas para el desarrollo de métodos de
control autocida;
- estudio de entomófagos parasitoides y predadores como agentes de control
biológico;
- estudio de microorganismos destinados al biocontrol de artrópodos que
afectan la actividad agropecuaria.

Entendemos que esta jornada constituyó una experiencia enriquecedora para

estudiantes, investigadores y profesionales que trabajan o están interesados en
estas tácticas de control de plagas.

Silvia N. López
Coordinadora PNPV1135033
•Control biológico de plagas en eucaliptos: avances en el empleo de enemigos
naturales exóticos
•Andorno, A.; Hernández, C.; Cuello, E. y Botto, E. 1

•La ecología química como herramienta de bajo impacto ambiental para el control de
insectos plaga
•Fernández, P. 3

•Estudio de baculovirus para el control biológico de lepidópteros plaga

•Ferrelli, M. 5

•Bioinsumos de uso agropecuario: el rol del Ministerio de Agroindustria

•Gadaleta, P.
7
•Herramientas bioinformáticas dirigidas al estudio de la regulación de genes en el
parasitoide Diachasmimorpha longicaudata (Hymenoptera: Braconidae) y su
aplicación en la mejora de las técnicas de control no contaminantes de moscas de los
frutos
•Mannino, M.; Scannapieco, A.; Rivarola, M.; Conte, C.; Farber, M.; Cladera, J. y 9
Lanzavecchia, S.

•Control microbiano de Alphitobius diaperinus utilizando Bacillus thuringiensis

•Pérez, M.; Sauka, D. y Benintende, G.
10

•Estudios sobre el endoparasitoide larval Pseudapantales dignus (Hymenoptera:

Braconidae), un enemigo natural de la polilla del tomate Tuta absoluta (Lepidoptera:
Gelechiidae), a escala predial y regional
•Luna, M.; Salas Gervassio, N.; Vallina, C. y Sánchez, N. 12

•Estudio de las interacciones microbianas y generación de conocimientos básicos para

la incorporación de los hongos entomopatógenos en un manejo integrado de los
hemípteros plaga del maíz
•Toledo, A. y Brentassi, M. 14
Andrea V. Andorno*; Carmen M. Hernández; Eliana M. Cuello y Eduardo N. Botto
Insectario de Investigaciones para Lucha Biológica, IMYZA, INTA Castelar.
* andorno.andrea@inta.gob.ar

El INTA por medio del Programa Nacional Forestal ha considerado de interés

el área de Sanidad Forestal y ha contribuido con el desarrollo de estrategias de
Manejo Integrado de Plagas y Enfermedades que afectan a los principales cultivos
forestales del país.
Se presentan aquí, los avances en el empleo de parasitoides exóticos
utilizados para el control biológico de plagas de los eucaliptos: Cleruchoides
noackae (Hymenoptera, Mymaridae) enemigo natural de Thaumastocoris
peregrinus “chinche del eucalipto” (Hemiptera: Thaumastocoridae), Psyllaephagus
bliteus (Hymenoptera: Encyrtidae) parasitoide de Glycaspis brimblecombei “psilido
del escudo” (Hemiptera: Psylliadae) y Selitrichodes neseri (Hymenoptera,
Eulophidae) biocontrolador de Leptocybe invasa “avispa de la agalla”
(Hymenoptera: Eulophidae).
Thaumastocoris peregrinus se registró en Buenos Aires en 2005. Las
condiciones climáticas favorables, la disponibilidad de recursos alimenticios, el gran
potencial reproductivo de esta especie, la falta de enemigos naturales específicos y
su alta capacidad de dispersión promovieron la explosión poblacional de este
insecto que en unos 3 años invadió la mayoría de los eucaliptos de la Argentina y
países limítrofes. C. noackae es un parasitoide de huevos de la chinche originario
de Australia. Este microhimenóptero es utilizado como agente de biocontrol en
varios países del cono sur (Brasil, Chile y Uruguay). En 2013 mediante un acuerdo
firmado entre el INTA y el INIA Tacuarembó (Uruguay) en el marco de cooperación
propulsado desde el PROCISUR-COSAVE se concretó la introducción del
parasitoide Cleruchoides noackae en Argentina para el control biológico de la
chinche. La cuarentena se llevo a cabo en las instalaciones del Insectario de
Investigaciones para Lucha Biológica del IMYZA, donde se estableció un pie de cría
del biocontrolador. Una vez satisfechos los requisitos cuarentenarios solicitados por
SENASA y la Secretaria de Ambiente y Desarrollo Sustentable, se procedió a la
colonización del biocontrolador en el campo. Entre 2014 y 2015 se efectuaron 15
liberaciones de pequeños inóculos de C. noackae en el predio del INTA Castelar y
en plantaciones de eucaliptos en la localidad de Jáuregui, Bs. As. Se evaluó el
establecimiento del biocontrolador en el campo recobrándose en el predio de INTA
Castelar en abril de 2016. Se ha mantenido en el laboratorio un pie de cría de C.
noackae (generación 28 al mes de mayo de 2016) para expandir su colonización en
campo y consolidar su establecimiento.
Glycaspis brimblecombei es un insecto fitófago originario de Australia. Fue
detectado por primera vez en nuestro país en el año 2005 en la provincia de Entre
Ríos. Junto con el psílido también fue registrado su enemigo natural, Psyllaephagus
bliteus, parasitoide específico de ninfas de esta plaga.

1
 En muestreos a campo realizados en el INTA Castelar y en plantaciones de
eucaliptos en la localidad de Jáuregui se registró la presencia de P. bliteus y se
cuantificó el parasitismo natural.
Si bien, el porcentaje de parasitismo registrado a campo fue bajo (2 -6%), se
considera a este enemigo natural clave en el control biológico de G. brimblecombei
dada su especificidad. Se prevé realizar más evaluaciones sobre el parasitoide con
el fin de mejorar su potencial como biocontrolador.
Leptocybe invasa fue detectada en Buenos Aires en 2010. Esta plaga es
originaria de Australia y actualmente constituye un problema forestal creciente en
todo el mundo debido a que es una especie críptica de difícil detección precoz. En
Sudamérica esta plaga representa un organismo exótico invasor que carece de
enemigos naturales específicos que regulen su población. En la región se registró
inicialmente en Brasil y posteriormente se detectó su presencia en Argentina,
Uruguay y Chile. En nuestro país se encuentra ampliamente distribuida en las
regiones del NOA (Jujuy y Salta), el NEA (Corrientes, Misiones y Chaco), Cuyo
(San Juan y Mendoza) y también está presente en la región pampeana y el litoral
(La Pampa, Buenos Aires, Santa Fe y Entre Ríos). Selitrichodes neseri es un
microhimenóptero parasitoide específico de larvas desarrolladas-pupas de la
avispa. Este enemigo natural ha sido evaluado como agente de control biológico de
esta plaga en Sudáfrica y Kenia, obteniéndose resultados promisorios. A nivel
regional del Cono Sur esta especie fue importada por Brasil en 2015, donde se
están llevando a cabo estudios sobre su biología y manejo a campo. En Argentina,
en noviembre de 2015 se iniciaron formalmente los trámites necesarios (solicitud
de importación y dossier) para proceder a la importación de S. neseri desde Brasil.
Además, se elaboró un plan de trabajo conjunto entre INTA y SENASA para
coordinar las acciones y delinear las actividades en esta temática. El plan
mencionado de trabajo involucra una primera etapa de introducción del
biocontrolador, su multiplicación en laboratorio y liberación confinada y una etapa
posterior de colonización en el campo en áreas críticas y la transferencia de pies de
cría a EEA y otros. Una etapa inicial del plan de trabajo consistió en establecer una
cría de L. invasa en laboratorio en 2016. Actualmente, en un macrotúnel del IMYZA
se está multiplicando a la plaga en condiciones semi-controladas para obtener el
material vegetal necesario (plantines de eucaliptos con agallas maduras) para
recibir y multiplicar al parasitoide exótico. También se acondicionó un sector de la
cuarentena del IILB para recibir al biocontrolador. En marzo de 2016 se obtuvo el
permiso de importación del agente exótico en la Secretaría de Ambiente y
Desarrollo Sustentable de la Nación. A la fecha se espera que la institución que
proveerá el material (EMBRAPA - Brasil) finalice la gestión de los permisos
necesarios en el país exportador para proceder al envío del material biológico.

2
Patricia Carina Fernández
INTA EEA Delta del Paraná - CONICET. pcfernan@agro.uba.ar

En los últimos 40 años se ha desarrollado fuertemente la investigación en

Ecología Química, una rama de la ecología que estudia las sustancias químicas
involucradas en las interacciones entre los organismos. Esta disciplina provee una
aproximación mecanística para entender las causas y consecuencias de las
interacciones, distribución, abundancia y diversidad de especies. La Ecología
Química ha aportado conocimientos a la agronomía y a la industria farmacéutica y
tiene el potencial para proveer mecanismos causales para el entendimiento de las
interacciones ecológicas que permitan manipular más efectivamente los sistemas
manejados.
El desarrollo de sistemas de manejo integrado de plagas normalmente incluye
diversas estrategias complementarias tales como el control biológico, prácticas
culturales, uso de variedades resistentes, control químico, etc. En esta ponencia se
discutirá cómo la ecología química puede contribuir al manejo integrado de plagas
específicamente a través del uso de semioquímicos, sustancias naturales utilizadas
por animales y plantas para comunicarse. Dado que los semioquímicos influyen en
el comportamiento de los insectos, éstos pueden ser utilizados como un método de
protección de los cultivos. Se presentarán ejemplos tomados de nuestro trabajo con
avispa sierra del sauce y hormigas cortadoras en plantaciones de salicáceas del
delta del Paraná.
En el caso de la avispa sierra del sauce, Nematus oligospilus, observaciones
de campo mostraron diferencias marcadas en el daño por alimentación sobre
distintos genotipos de Salix spp. A partir de estas observaciones se realizaron
ensayos de laboratorio para establecer los genotipos preferidos para la oviposición
de las hembras. Se determinó S. nigra como uno de los genotipos más susceptibles
y S. viminalis como el genotipo menos preferido para la oviposición. Dado que las
preferencias de oviposición coincidieron con las observaciones de daño a campo,
se determinó que el patrón de preferencia en el campo está determinado por la
elección de la hembra para oviponer (Braccini et al 2013). Posteriormente se
realizaron ensayos de orientación en olfatómetro en Y que sugieren que las
hembras de avispa sierra se orientan hacia las plantas de sauce por medio de
sustancias volátiles. En particular, se observó la orientación preferencial de la
avispa hacia volátiles de S. nigra. El análisis de estos volátiles determinó la
presencia de varios compuestos químicos que incluyen volátiles de hojas verdes,
terpenos y sesquiterpenos.
La comparación con volátiles de un genotipo no preferido, Salix viminalis,
reveló la presencia de compuestos diferenciales, β-ocimeno y β-cariofileno, que
podrían estar relacionados con la atracción (Braccini et al 2015).

3
 Una vez sobre la hoja, claves de contacto químicas y físicas determinarían la
aceptación de la planta para oviponer. Ensayos de comportamiento mostraron que
las hembras ponen menos huevos en hojas cuyas ceras cuticulares fueron
removidas de la superficie, indicando la importancia de estas claves para la
oviposición.
El análisis químico de ceras cuticulares de las hojas mostró la mayor
diversidad de compuestos químicos no alcanos asociados a aquellas superficies
foliares donde la oviposición fue mayor (S. nigra) y la falta de estos compuestos
sobre la superficie abaxial de las hojas de S. viminalis, donde la oviposición fue
nula.
En el caso de las hormigas cortadoras de hoja, Acromyrmex ambiguus, a
partir de diversas aproximaciones comportamentales se buscaron sustancias que
actúen como atrayentes y repelentes. Posteriormente se evaluó en laboratorio y a
campo una combinación de atrayentes y repelentes que puedan utilizarse en una
estrategia estimulo-divergente o de “Push-Pull” (Cook et al. 2007). Estas estrategias
implican la manipulación del comportamiento de los insectos plaga y sus enemigos
naturales a través de la integración de los estímulos que actúan para hacer que el
recurso protegido sea poco atractivo para las plagas (“Push”), mientras que se los
atrae hacia una fuente atractiva (“Pull”), desde donde las plagas se eliminan
posteriormente. Estas estrategias push-pull maximizan la eficacia de los estímulos
en el comportamiento a través de la manipulación de los efectos aditivos y
sinérgicos de la integración de su uso. Se seleccionó el farnesol, un sesquiterpeno
presente en muchos aceites esenciales (hierba de limón, nardo, rosa, almizcle), que
actúa como repelente de hormigas Acromyrmex spp en bajas dosis en ensayos de
laboratorio. Por otro lado, en ensayos de preferencia diseñados para identificar
donde se encuentra la mayor cantidad de kairomonas en naranjas (Citrus sinensis),
se determinó que los volátiles de la pulpa de la misma muestran una atracción
preferencial en obreras (Perri, et al. en prep). Con estos datos se determinó el
efecto sinérgico de usar ambas estrategias combinadas (farnesol + pulpa de
naranja) para el manejo de hormigas en ensayos experimentales de laboratorio y
campo.

Braccini et al. 2013. Ecological Entomology, 38: 617-626.

Braccini et al. 2015. Journal of Chemical Ecology, 41: 985-996.
Cook et al. 2007. Annual Review of Entomology, 52: 375-400.

4
María Leticia Ferrelli
Instituto de Biotecnología y Biología Molecular (IBBM), UNLP-CONICET.
lferrelli@biol.unlp.edu.ar

El desarrollo de una agricultura sustentable requiere la búsqueda de

alternativas a los insecticidas químicos de amplio espectro por agentes de control
biológico inofensivos para los organismos no blanco. Entre los microorganismos
utilizados como agentes de biocontrol, los baculovirus son excelentes candidatos
debido a su alta virulencia, especificidad, factibilidad de producción y compatibilidad
con otras medidas de manejo de plagas. Los baculovirus son una familia de virus
específicos de insectos. Contienen un genoma circular de DNA doble cadena que
oscila entre 80 y 180 kpb, según la especie. Los viriones son envueltos y a su vez
incluidos en cuerpos de oclusión que le confieren protección para su persistencia
en el medio ambiente. La morfología de estos cuerpos de oclusión permitió
diferenciar a los baculovirus en dos grandes grupos: los granulovirus y los
nucleopoliedrovirus. Los miembros más conocidos y estudiados son aquellos que
infectan lepidópteros y que resultan de gran interés por su uso como
bioinsecticidas, contándose a nivel mundial con numerosos productos formulados.
En Argentina, el primer bioinsecticida comercial lo constituye el granulovirus de
Cydia pomonella (CpGV), registrado por el INTA en 2002 tras un desarrollo conjunto
con empresas privadas. Cabe destacar que existe una gran biodiversidad aún no
del todo explorada, que encierra un gran potencial para la obtención y producción
de nuevos bioinsecticidas baculovirales.
Nuestro grupo de investigación, en colaboración con el IMYZA (CICVyA-INTA),
se planteó como objetivo el estudio de diversos baculovirus autóctonos candidatos
a ser utilizados en el control de los principales lepidópteros plaga. Entre ellos, se
destacan los trabajos realizados con el nucleopoliedrovirus AgMNPV que infecta a
la oruga de las leguminosas Anticarsia gemmatalis; con el granulovirus EpapGV
aislado del "barrenador de los brotes" Epinotia aporema y con el granulovirus SfGV
que afecta a la oruga militar tardía Spodoptera frugiperda. Además, se han
realizado estudios complementarios a la caracterización y evaluación de un
nucleopoliedrovirus de Helicoverpa gelotopoeon (HegeSNPV).
En tal sentido, en nuestro grupo se generaron estrategias de mejoramiento
genético del virus AgMNPV, habiéndose desarrollado un sistema para la obtención
de AgMNPVs recombinantes que permite la introducción de genes con el fin de
aumentar su capacidad bioinsecticida natural.
Por otro lado, se realizó la caracterización bioquímica y molecular del virus
EpapGV y se diseñaron métodos apropiados para el control de calidad de inóculos
y formulados virales. Posteriormente, se realizaron estudios genómicos que
culminaron en la obtención y caracterización de su genoma completo. También se
realizaron estudios de genes involucrados en etapas importantes de la infección y
con posibles aplicaciones biotecnológicas.

5
 Respecto de SfGV, se comenzó recientemente la caracterización de un
aislamiento argentino. Se realizaron ensayos para la tipificación de SfGV-AR en la
familia Baculoviridae y se obtuvo el genoma preliminar a fin de compararlo con
otros aislamientos de esta especie. El interés en este virus es utilizarlo como
modelo en estudios de tropismo celular de granulovirus y por otra parte, evaluarlo
como posible incrementador de virulencia del nucleopoliedrovirus de S. frugiperda
(SfMNPV) en el desarrollo de formulaciones mixtas.
Por último, se colaboró en los estudios sobre la identificación de un nuevo
virus aislado de larvas de Helicoverpa gelotopoeon en la provincia de Córdoba, en
un trabajo conjunto entre el IMYZA, la U.N. Córdoba y el IBBM. El aislamiento de
HegeSNPV presenta alta virulencia hacia la especie huésped. El resultado de estos
estudios mostró que HegeSNPV es cercano filogenéticamente al grupo
"HezeSNPV", virus aislados de Heliothis zea y de amplio uso en el manejo del
"complejo de orugas bolilleras" Helicoverpa/Heliothis, lo cual lo sitúa como un
excelente candidato a ser desarrollado como bioinsecticida.
El estudio de los baculovirus a nivel molecular resulta de gran interés en la
generación de conocimientos que aportan a predecir, controlar y monitorear
aspectos relacionados con el rango de hospedadores, aparición de resistencia o
nivel de bioseguridad en el contexto de su aplicación como bioinsecticidas.
Además, es de utilidad para el desarrollo de otras aplicaciones biotecnológicas
entre las que se incluye el mejoramiento genético del control microbiológico a fin de
incrementar su eficiencia en el control de las plagas con impacto agronómico.

6
Patricia Gadaleta
Dirección de Biotecnología, Ministerio de Agroindustria. pgadal@magyp.gob.ar

Hasta el 2014, Argentina no contaba con una política explícita para el

desarrollo del sector relacionado con los bioinsumos. A mediados del 2013, el
Ministerio de Agricultura Ganadería y Pesca conjuntamente con el Instituto
Interamericano de Cooperación para la Agricultura, organizaron el “Taller sobre la
institucionalidad para el desarrollo y comercialización de bioinsumos en Argentina.
Experiencias en países de América Latina y el Caribe”. El propósito de éste fue
analizar el estado actual de la materia en Argentina, identificar a los actores
principales de la industria, conocer sus demandas y comparar las experiencias de
otros países latinoamericanos respecto de la regulación, con el objetivo de poder
formular políticas que promuevan el desarrollo del sector de los bioinsumos en un
marco institucional.
En diciembre de 2013 se crea por Resolución Secretaria Agricultura,
ganadería y Pesca 7/2013 el Comité Asesor en Bioinsumos de Uso Agropecuario
(CABUA), como un órgano asesor intersectorial de gestión, concertación y
formulación de propuestas para el sector de bioinsumos, que cuenta con un perfil
técnico-científico.
El mismo se encuentra integrado por representantes de instituciones públicas
como el Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria, Consejo Nacional de
Investigaciones Científicas y Técnicas y universidades, entre otros organismos
científicos; representantes de instituciones privadas como cámaras y asociaciones
agroindustriales y representantes de organismos regulatorios, como el Servicio
Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria, el Instituto Nacional de Semillas y
del Ministerio de Ambiente y Desarrollo Sustentable.
CABUA está organizado en 4 grupos de trabajo para tratar diferentes temas
pertinentes a bioinsumos, tales como: mecanismos de promoción de uso y difusión
de estos productos, registro de bioinsumos producidos con micro y
macroorganismos, regulaciones, microorganismos genéticamente modificados,
entre otras.
Otra medida llevada a cabo por el Ministerio de Agroindustria fue la creación
del Programa de Fomento del Uso de Bioinsumos Agropecuarios (PROFOBIO) que
tiene como objetivo facilitar a los productores el uso de Bioinsumos con el fin de
que se familiaricen con ellos. Para lograrlo se otorgó asistencia financiera para la
adquisición de estos productos y además otorgamiento de capacitación y
materiales de difusión.
En la primera convocatoria del PROFOBIO se recibieron 40 proyectos de
distintas localidades del país, solicitando financiamiento para la adquisición de
diversos bioinsumos agropecuarios. Ellos fueron presentados por los Ministerios de
Agricultura Provinciales o por Cooperativas Agrícolas. Como resultado se
seleccionaron 12 proyectos, 1 por cada provincia que beneficio a un total de 744
productores.

7
 En resumen, los bioinsumos son un factor importante para el desarrollo de los
diversos tipos de agricultura. La producción de bioinsumos se realiza, en muchos
casos, aplicando técnicas biotecnológicas por lo cual es menester garantizar la
calidad, eficacia y bioseguridad de estos, ya que un manejo inadecuado desde el
desarrollo hasta su llegada al productor puede tener efectos nocivos sobre la salud
humana y animal, sobre sobre el ambiente y/o consecuencias en la productividad.
Es evidente que para el desarrollo y consolidación del sector de los
bioinsumos en la agricultura es necesario contar con un marco de institucionalidad
que articule la satisfacción de las necesidades del sector con una regulación
eficiente, información científico-técnica fidedigna, programas de promoción con
miras al desarrollo de una agricultura sustentable; desarrollo de oportunidades de
interacción entre centros de investigación y empresas comercializadoras, entre
otras. En este sentido el CABUA se encuentra trabajando en la mejora y desarrollo
de estas herramientas para responder a las demandas del sector.

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María Constanza Mannino1,3; Alejandra Carla Scannapieco1,3; Maximo Rivarola2,3; Claudia
Alejandra Conte1; Marisa Farber2,3; Jorge Luis Cladera1; Silvia Beatriz Lanzavecchia1*
1 IGEAF, INTA Castelar; 2 Instituto de Biotecnología, INTA Castelar; 3 CONICET.
* lanzavecchia.silvia@inta.gob.ar

Los aspectos genéticos del parasitoide de moscas de la fruta

Diachasmimorpha longicaudata (Hymenoptera: Braconidae) han sido poco
explorados y revisten gran importancia tanto a nivel de investigación científica como
para respaldar su aplicación en el control de plagas a campo. Particularmente, la
caracterización genética de esta especie y de su sistema de determinación sexual
proporcionan información útil para el manejo de las crías artificiales y monitoreos a
campo. En nuestro laboratorio, comenzamos a explorar la expresión de genes en
esta especie mediante el análisis de los transcriptos de adultos de ambos sexos
mediante pirosecuenciación. La información generada permitió obtener los datos
completos y representativos del transcriptoma de la especie. Se realizaron
comparaciones con genomas de referencia de especies emparentadas y se halló
similitud con genes ya descriptos, logrando la anotación del 48 % de las secuencias
de transcriptos obtenidas. Se profundizaron los estudios en la identificación de
secuencias que se expresan diferencialmente entre machos y hembras adultos, y
se realizaron búsquedas específicas para identificar transcriptos candidatos a estar
involucrados en la determinación del sexo. Se seleccionaron y evaluaron algunos
de estos candidatos por medio RT-qPCR para confirmar las tendencias
evidenciadas por transcriptómica. Los resultados obtenidos hasta el momento
representan un primer paso en el estudio de expresión de los genes que se
encuentran involucrados en la determinación del sexo de D. longicaudata,
generando información genómica promisoria para la manipulación genética de la
proporción de sexos en la optimización de los protocolos de cría artificial de este
agente de control biológico.
Paralelamente, la información generada nos permitió identificar marcadores
moleculares para la caracterización genética de la especie. Se analizaron in silico
1100 marcadores microsatélites disponibles para realizar estudios de variabilidad
genética tanto en control de calidad genética en parasitoides bajo cría artificial
como en poblaciones establecidas en el campo. También ofrecen gran utilidad para
ser transferidos a otras especies de parasitoides nativos potencialmente útiles para
el diseño de estrategias de control biológico eficientes contra moscas de los frutos.

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Melisa Paula Pérez1,2*; Diego Herman Sauka1,2 y Graciela Beatriz Benintende1
1 Insumos Bacterianos, IMYZA, INTA Castelar; 2 CONICET. * perez.melisa@inta.gob.ar

Las explotaciones avícolas pueden verse afectadas por la presencia del

escarabajo de la cama de pollo (Alphitobius diaperinus). Este tenebriónido es capaz
de producir efectos traumáticos en las aves, transmitirles enfermedades, producir
daños físicos en las instalaciones e inducir reacciones alérgicas a los trabajadores
de la granja. Se basa su control mayoritariamente en el empleo de productos
químicos, pero su aplicación indiscriminada puede generar resistencia en el insecto,
posible intoxicación o contaminación de las aves de producción, como también de
los trabajadores. Una estrategia complementaria o alternativa de control podría
incluir el uso de bioinsecticidas que incluyan a Bacillus thuringiensis como
ingrediente activo. Esta bacteria entomopatógena sintetiza cristales paraesporales
de naturaleza proteica (proteínas Cry y Cyt) que son los responsables de la
principal toxicidad para distintos órdenes de insectos a través de un proceso de
ingestión. Además, puede secretar otros factores de virulencia durante la fase
vegetativa como la β-exotoxina, un metabolito termoestable e inespecífico. En el
mecanismo de acción de B. thuringiensis la solubilización de los cristales en la
alcalinidad del intestino medio de insectos susceptibles y su posterior
procesamiento enzimático, son pasos claves. Para ciertos coleópteros, se ha
reportado que la toxicidad puede verse afectada por una baja alcalinidad de sus
intestinos medios cuando se la compara con la de otros insectos. Esto generaría
una pobre solubilización de los cristales que impediría la consiguiente activación de
la toxina.
En el presente resumen se presentan los resultados de nuestro Grupo de
Trabajo en cuanto a la selección de cepas de B. thuringiensis tóxicas para larvas de
A. diaperinus que puedan ser utilizadas como base en la formulación de un nuevo
bioinsecticida.
Para el inicio de los estudios se estableció una cría de A. diaperinus en el
laboratorio, ajustando las condiciones necesarias para su desarrollo. Se diseñó un
bioensayo, utilizando la metodología de incorporación en dieta, para evaluar la
toxicidad de B. thuringiensis contra larvas del 2º estadio de A. diaperinus. Se
analizaron cultivos completos de 19 aislamientos nativos y 20 cepas exóticas del
cepario IMYZA-INTA. Estos fueron responsables de mortalidades menores al 20%
en todos los casos, exceptuando al aislamiento nativo INTA Mo4-4 que presentó la
mayor toxicidad (41,9±10,8%). Al analizar las distintas fracciones de su cultivo, se
observó que el porcentaje de mortalidad de su biomasa (45,8±16,8%) resultó
significativamente más elevado que el de su sobrenadante (4,2±0,0%). Esto
indicaría que él o los factores responsables de la toxicidad, se encontrarían en la
biomasa.

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 En la cepa seleccionada se determinó la presencia de cristales cuadrados
aplanados que se asociaron a un perfil proteico de ca. 72 kDa, similar al de la cepa
DSM2803 perteneciente al serovar tenebrionis. Mediante SDS-PAGE también se
evaluó la capacidad de solubilización de los cristales frente a diferentes soluciones
amortiguadoras y su posterior digestión enzimática in vitro. Todas las soluciones
probadas actuaron sobre la biomasa, siendo seleccionada la solución de Na2CO3
50 mM pH 10,6 como la de mayor capacidad solubilizadora. Tras la tripsinización de
las proteínas solubilizadas, se obtuvo un péptido resistente de ca. 60 kDa similar al
que se obtiene a partir de la mayoría de las proteínas Cry.
EI aislamiento INTA Mo4-4 presenta genes insecticidas (cry3, cry23 y cry37) y
ausencia de un gen asociado a la producción de β-exotoxina (thuE). La ausencia de
este metabolito fue confirmado en ensayos con larvas de mosca doméstica. Se
puede observar una similitud a la cepa de referencia DSM2803, sin embargo, esta
cepa fue previamente ensayada contra A. diaperinus resultando significativamente
menos tóxica que INTA Mo4-4. Otra diferencia radicó en su perfil electroforético de
REP-PCR. Paralelamente se evaluó la virulencia de INTA Mo4-4 mediante ensayos
de determinación de concentración letal media (CL50) y el efecto de la
solubilización y proteólisis in vitro de sus cristales sobre la actividad tóxica. Parte de
la biomasa obtenida anteriormente fue solubilizada en Na2CO3 50 mM pH 10,6, y
otra también solubilizada y luego digerida con tripsina. Mediante análisis Probit se
estimó una CL50 de 137 [113-171] µg/ml para INTA Mo4-4. Esta fue comparada
(ANOVA) con la CL50 de la biomasa solubilizada (158 [118-251] µg/ml) y con la de
la biomasa solubilizada y tripsinizada (165 [125-246] µg/ml). El análisis estadístico
no mostró diferencias significativas entre los tratamientos, lo que sugeriría que las
condiciones intestinales naturales de A. diaperinus serían las adecuadas para el
normal procesamiento de los cristales de INTA Mo4-4.
Estos estudios permitieron seleccionar un aislamiento nativo de B.
thuringiensis que presenta un gran potencial como base para el desarrollo de un
nuevo bioinsecticida que pueda destinarse para el control ambientalmente seguro
del escarabajo de la cama de pollo.

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María Gabriela Luna*; Nadia Gisela Salas Gervassio; Consuelo Vallina y Norma Elba
Sánchez.
CEPAVE (CCT La Plata-CONICET y UNLP). * lunam@cepave.edu.ar

Pseudapanteles dignus (Muesebeck) (Hymenoptera: Braconidae) es un

endoparasitoide de distribución americana, que ataca el estado larval de la “polilla
del tomate” Tuta absoluta (Meyrick) (Lepidoptera: Gelechiidae). Este lepidóptero es
una importante plaga en cultivos de tomate de América Central y del Sur, de donde
es originario, y actualmente es considerado como una especie invasora en Eurasia
y África. El control biológico de T. absoluta es uno de los métodos de protección
vegetal que más interés ha concitado, tanto en las regiones de origen de la plaga,
como en las invadidas. En nuestro país, numerosas investigaciones dieron cuenta
de varios atributos biológicos y ecológicos de P. dignus positivos para un agente de
control biológico. Algunos de ellos se evaluaron en el laboratorio , como por ej., una
mayor tasa de ataque (a’) que la tasa de crecimiento (rm) de T. absoluta, una
relativa facilidad para la cría de colonias, la ausencia de un período de pre-
oviposición de la hembra, por lo que se trata de una especie sinovigénica
moderada. Otros atributos fueron estudiados en cultivos de tomate, tales como un
impacto de parasitismo natural, que puede alcanzar el 65 % en el Cinturón
Hortícola Platense (noreste de la prov. de Buenos Aires), una fuerte sincronización
estacional con las poblaciones del hospedador y una respuesta de agregación a la
densidad de la plaga. En esta oportunidad se presentan resultados de
investigaciones cuyo propósito es aumentar el conocimiento existente sobre P.
dignus, de modo de evaluar la factibilidad y las limitaciones del uso como agente de
control biológico de T. absoluta. Así, a escala predial, se planteó: 1) entender cómo
utiliza este parasitoide los recursos, para lo cual se determinó el rango de
hospedadores de P. dignus en las huertas, y 2) evaluar la efectividad de control de
la polilla mediante distintas tasas de liberaciones aumentativas de P. dignus, en
invernáculos experimentales. A escala regional, se propuso: 3) determinar el rango
de distribución geográfica de P. dignus en cultivos de tomate de la Argentina y
estimar el parasitismo a campo en diferentes regiones, 4) determinar la existencia
de aislamiento reproductivo entre los diferentes strains locales de P. dignus y la
población de referencia (noreste de Buenos Aires), y 5) comparar caracteres
morfológicos y bioecológicos de individuos de P. dignus provenientes de
poblaciones de distintas regiones de la Argentina. Como resultados, se pudo
demostrar la persistencia de la interacción P. dignus – T. absoluta en predios
hortícolas del Cinturón Hortícola Platense a lo largo del año, a través de la
conformación de tramas tróficas que incluyen tanto solanáceas cultivadas como no
cultivadas, presentes en los predios.

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También a este nivel, y por medio de liberaciones aumentativas de P. dignus a
distintas densidades relativas. parasitoide:hospedador, según el método
experimental de jaula confinada, se observó que una tasa de liberación de hembras
de P. dignus a una densidad relativa de 1: 3, resultó en valores de parasitismo más
altos (hasta 61%). A escala regional, hasta el momento se realizaron muestreos de
T. absoluta en cultivos de tomate de la provincia de Salta (octubre de 2015), en los
cuales se encontró a P. dignus, aunque con valores de porcentaje de parasitismo
muy bajos (< 5%), probablemente a causa del uso intensivo de insecticidas en la
producción hortícola de esa región. Esta información aumenta el área de
distribución de la especie reportada hasta el momento para la Argentina. El
entrecruzamiento de individuos de las poblaciones de P. dignus del NOA y de
Buenos Aires dio descendencia femenina, una primera evidencia de interfertilidad.
La comparación de caracteres bioecológicos entre las dos poblaciones del
parasitoide se encuentra en marcha. Los resultados indican que P. dignus puede
contribuir a un control biológico exitoso de T. absoluta. Las poblaciones naturales
del parasitoide en los predios, presentes en la vegetación adyacente a los cultivos,
pueden migrar hacia éstos, beneficiando aún más el control ejercido por
liberaciones aumentativas, por lo que la conservación de la diversidad de hábitats a
esta escala debería ser promovida. La interfertilidad entre poblaciones alopátricas
de P. dignus y el conocimiento sobre características biológicas de las distintas
poblaciones locales del parasitoide permitirán mantener colonias viables, lo que a
su vez, ampliará la implementación del control biológico de T. absoluta, en aquellas
regiones productoras de tomate, donde las condiciones son apropiadas para el
desarrollo de la plaga.

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Andrea Vanesa Toledo1* y María Eugenia Brentassi2
1 Centro de Investigaciones de Fitopatología (CIDEFI), Facultad de Ciencias Agrarias

y Forestales, UNLP. * andytoledo75@yahoo.com.ar

2 División Entomología, Facultad de Ciencias Naturales y Museo, UNLP.

El maíz (Zea mays L.) es uno de los principales cultivos cerealeros del mundo
y representa un componente de gran importancia para la economía de la Argentina.
Uno de los factores limitantes de su producción lo constituyen los insectos plaga,
entre los que se encuentran los Hemiptera Auchenorrhyncha, principalmente de las
familias Cicadellidae y Delphacidae, capaces de actuar como vectores de
importantes fitopatógenos.
En la Argentina Dalbulus maidis (Hemiptera: Cicadellidae) y Delphacodes
kuscheli (Hemiptera: Delphacidae) son las dos especies que revisten mayor
importancia económica para el cultivo de maíz. D. maidis es considerada, en
América tropical, la especie de mayor interés por transmitir el “Maize rayado fino
virus”, el “Corn stunt spiroplasma” y el “Maize bushy stunt mycoplasma”. El “Corn
Stunt” o achaparramiento del maíz es una de las enfermedades de mayor
importancia económica desde los Estados Unidos de Norteamérica hasta zonas
templadas de América del Sur. En la Argentina fue detectada en áreas restringidas
del norte a comienzos de la década del '90, momento a partir del cual su incidencia
fue aumentando paulatinamente hasta constituir en la actualidad una seria
amenaza para el cultivo. D. kuscheli representa el principal vector del virus del Mal
de Río Cuarto del maíz, enfermedad endémica de la región central de la Argentina
que, desde fines de la década del '60, afecta la mayor parte del área maicera.
En la actualidad las estrategias de manejo de los insectos vectores y de las
enfermedades del maíz responden sólo al uso de insecticidas químicos y de
híbridos “tolerantes”, lo cual pone de manifiesto la falta de una herramienta
alternativa de control biológico. Dentro de los agentes de control biológico, los
hongos representan los únicos patógenos letales capaces de una transmisión
horizontal en el orden Hemiptera, debido a que ingresan a través del tegumento y
no necesitan ser ingeridos por el hospedador, lo cual en el caso de estos insectos
se vería impedido debido a la naturaleza de su aparato bucal picador suctor.
Desde el año 2002, nuestras investigaciones se enfocan en la búsqueda,
identificación y selección de aislamientos nativos de los hongos entomopatógenos
Beauveria bassiana y Metarhizium anisopliae (Ascomycota: Hypocreales) para su
incorporación en un manejo integrado de cicadélidos y delfácidos plaga del maíz.

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Los estudios involucran la identificación y caracterización fenotípica y genotípica de
los aislamientos, conocimiento de su estacionalidad y prevalencia en cultivos
extensivos, análisis de la diversidad poblacional, desarrollo de medios de cultivo
económicos para su multiplicación, ensayos de patogenicidad y estudio de la
histopatología de los insectos vectores. Los resultados obtenidos hasta el momento
permiten considerar a ambas especies fúngicas como una herramienta eficiente
para ser incorporada dentro de un manejo integrado no sólo debido a que son
organismos de fácil producción masiva y aplicación, sino que además numerosos
estudios indican la compatibilidad de los mismos con diferentes fungicidas y
pesticidas utilizados en la agroindustria.
Con el fin de incorporar a estos agentes de control biológico dentro de un
manejo integrado de las plagas del maíz, consideramos necesario no sólo contar
con aislamientos caracterizados fenotípica y genotípicamente sino también conocer
algunos aspectos de su ecología. En este sentido, el objetivo del presente proyecto
es estudiar las interacciones entre los hongos entomopatógenos y otros
microorganismos presentes en los cultivos de maíz, haciendo referencia a que si
bien los hongos prometen ser efectivos contra estas plagas, ocasionalmente fallan
al penetrar e invadir al hospedador, no sólo debido a la presencia de sustancias
antimicrobianas asociadas a la cutícula del insecto, sino también a la presencia de
otros hongos y bacterias que se encuentran sobre la misma y que pueden inhibir la
germinación de los conidios. Con respecto a esta temática los resultados recientes
de nuestras investigaciones demostraron que la población bacteriana alojada sobre
la superficie corporal de D. maidis y D. kuscheli se encuentra representada
principalmente por bacilos Gram positivos formadores de esporas. A partir de los
hospedadores se aislaron 155 cepas bacterianas las cuales fueron caracterizadas
morfológica y bioquímicamente. Con el total de las cepas se realizó un screening
previo y se seleccionaron las 10 que presentaron mayor porcentaje de inhibición del
crecimiento micelial y de la germinación de los conidios de B. bassiana CEP147.
Estas 10 cepas fueron caracterizadas molecularmente por medio de la
secuenciación del gen 16S ADNr, identificadas como Bacillus sp (2), B.
amyloliquefaciens (1), B. pumilus (3) y B. subtilis (4) y evaluadas frente a 40
aislamientos de B. bassiana y 20 de M. anisopliae para seleccionar aislamientos
fúngicos resistentes al antagonismo bacteriano. Debido a que estas bacterias son
habitantes comunes del suelo y que microorganismos tales como B. subtilis son
utilizados en los cultivos como promotores del crecimiento vegetal, consideramos
necesario profundizar los estudios de interacción microbiana a los fines de que
tanto los hongos entomopatógenos como las bacterias promotoras del crecimiento
puedan accionar de manera óptima en los cultivos de maíz sin la presencia de
interferencias negativas. En el marco de este proyecto se continuará con la
caracterización de los metabolitos producidos por ambos microorganismos durante
la interacción in vitro y con los estudios de correlación in vivo entre la resistencia al
antagonismo bacteriano por parte de los asilamientos fúngicos y la virulencia de los
mismos frente a los insectos plaga.
Los estudios en curso son financiados por el CONICET (PIP
11220130100533CO).

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