Transaminasas 200

Para la determinación de Transaminasa Glutámico Oxalacética

(GOT(AST) y Transaminasa Glutámico Pirúvica
(GPT/ALT)

SIGNIFICACION CLINICA
Reactivo B: listo para usar.
Las transaminasas GOT y GPT son enzimas ampliamente
Reactivo C diluido (0,40 mol/l); preparación:
difundidas en el organismo con elevada concentración en
- Trasvasar el contenido del frasco a un matraz de l litro.
corazón, hígado, músculo esquelético, riñón y eritrocitos. La
- Lavar el frasco con un pequeño volumen de agua destilada y
actividad sérica en condiciones normales es baja o nula. Un daño
pasar el líquido de lavado al matraz. Repetir esta operación 3-4
o enfermedad en cualquiera de estos tejidos con- duce a un
veces.
aumento en los niveles séricos. Así, luego de un infarto de
- Diluir con agua destilada hasta el aforo. Tapar y mezclar bien
miocardio se produce en suero un marcado aumen- to de la
por inversión.
actividad de GOT (abundante en músculo cardíaco). En hepatitis
- Envasar en un frasco de plástico de buen cierre (no utilizar
virales y otras formas de enfermedad hepática que involucren
frasco de vidrio).
necrosis tisular, predominará la actividad sérica de GPT
Standard: listo para usar en la curva de GPT. Diluir 1:2 con
(abundante en tejido hepático).
Reactivo A para la curva de GOT.
Una elevada actividad de transaminasas puede detectarse
también en traumas accidentales o quirúrgicos y en distrofias
PRECAUCIONES
musculares o miositis.
Los reactivos son para uso diagnóstico "in vitro".
Reactivo B y C: corrosivos. H315 + H320: Provoca irritación
FUNDAMENTOS DEL METODO
cutánea y ocular. H314: Provoca quemaduras graves en la piel y
La GOT cataliza la siguiente reacción:
lesiones oculares graves. P262: Evitar el contacto con los ojos, la
GOT
piel o la ropa. P305 + P351 + P338: EN CASO DE CONTACTO
l-aspartato + -cetoglutarato glutamato + oxalacetato CON LOS OJOS: Enjuagar cuidadosamente con agua durante
La GPT cataliza la siguiente reacción: varios minutos. Quitar las lentes de contacto, si lleva y resulta
fácil. Seguir enjuagando. P302 + P352: EN CASO DE
GPT CONTACTO CON LA PIEL: Lavar con agua
l-alanina + -cetoglutarato glutamato + piruvato
y jabón abundantes. P280: Llevar guantes/prendas/gafas/ máscara
El piruvato formado (el oxalacetato es inestable y se trans- de protección.
forma en piruvato), reacciona con la 2,4-dinitrofenilhidracina Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales de
produciéndose, en medio alcalino, un compuesto coloreado que trabajo en el laboratorio de análisis clínicos.
se mide a 505 nm. Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de acuerdo
a la normativa local vigente.
REACTIVOS PROVISTOS
- Transaminasas 200 GOT provee: ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES
A. Reactivo A: solución con 100 mM de l-aspartato y 2 mM de DE ALMACENAMIENTO
-cetoglutarato en buffer fosfatos 100 mM, pH 7,4. Reactivos Provistos: estables a temperatura ambiente (< 25oC)
- Transaminasas 200 GPT provee: hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja.
A. Reactivo A: solución con 200 mM de dl-alanina y 2 mM de
-cetoglutarato en buffer fosfatos 100 mM, pH 7,4. Además, INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS
ambos equipos proveen: REACTIVOS
B. Reactivo B: solución conteniendo 1 mmol de 2,4-di- Cuando el espectrofotómetro ha sido llevado a cero con agua
nitrofenilhidracina (2,4-DNFH) en ácido clorhídrico 1 mol/l. destilada, lecturas del Blanco inferiores a 0,270 D.O. a 505 nm
C. Reactivo C: solución de hidróxido de sodio 4 mol/l. son indicio de deterioro del mismo. También indica deterioro la
S. Standard: solución de piruvato de sodio 2 mmol/l. Para aparición de turbidez.
efectuar la curva de calibración.
MUESTRA
REACTIVOS NO PROVISTOS Suero
Agua destilada. a) Recolección: se debe obtener suero de la manera usual. No
es necesario que el paciente esté en ayunas para la extracción de
INSTRUCCIONES PARA SU USO sangre.
Reactivo A (GOT o GPT): listo para usar. b) Aditivos: no se requieren.

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c) Sustancias interferentes conocidas: los sueros hemo- los valores de actividad enzimática pueden deducirse de las
lizados producen resultados falsamente elevados ya que los
tablas de conversión obtenidas por comparación con el método
glóbulos rojos contienen 3 a 5 veces más enzimas que el suero. UV convencional, siempre que las lecturas se efectúen en las
Referirse a la bibliografía de Young para los efectos de las
siguientes condiciones de medida: cubetas de caras paralelas de
drogas en el presente método. 1 cm de espesor, semiancho de banda
d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: en  8 nm y longitud de onda 505 nm o Hg 546.
caso de no efectuarse la determinación en el día, puede
conservarse el suero refrigerado a 4oC durante no más de 5 GOT (30 min):
días.
Método UV
MATERIAL REQUERIDO (no provisto) Hg 546 convencional 505 nm
- Espectrofotómetro o fotocolorímetro. (U/l)
- Material volumétrico adecuado.
0,020 5 0,034
- Baño de agua a 37oC.
0,030 7 0,047
- Reloj o timer.
0,040 10 0,061
0,050 14 0,080
CONDICIONES DE REACCION
0,060 19 0,100
- Longitud de onda: 505 nm en espectrofotómetro, Hg 546 o en
0,070 23 0,115
fotocolorímetro con filtro verde (500-550 nm).
0,080 26 0,129
- Temperatura de reacción: 37oC
0,090 31 0,146
- Tiempo de reacción: 40 minutos
0,100 36 0,164
- Volumen de muestra: 100 ul
0,110 41 0,180
- Volumen final de reacción: 6,1 ml
0,120 46 0,196
Alternativamente pueden disminuirse los volúmenes de Muestra
0,130 50 0,210
y Reactivos a la mitad.
0,140 55 0,224
0,150 61 0,239
ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCION FINAL 0,160 67 0,254
El PROCEDIMIENTO
color de la reacción es estable durante 30 minutos por lo 0,170 74 0,269
queEn
la dos tubos marcados
absorbancia debe serBleída
(Blanco)
dentroy de
D (Desconocido),
ese lapso.
colocar: GPT:
CALCULO DE LOS RESULTADOS B D
a) Empleando tablas de conversión: Método UV
Reactivo A (GOT o GPT) 0,5 ml 0,5 ml
Este cálculo se basa en la absortividad del cromógeno y Hg 546 convencional 505 nm
Colocar en baño de agua a 37oC  0,5oC unos minutos. (U/l)
Suero - 100 ul 0,020 5 0,034
0,040 9 0,061
Agua destilada 100 ul -
0,060 14 0,100
Mezclar por agitación suave e incubar exactamente 30 0,080 18 0,129
minutos y agregar: 0,100 23 0,164
Reactivo B 0,5 ml 0,5 ml 0,120 27 0,196
0,140 32 0,224
Mezclar. Dejar 10 minutos a 37oC. Luego agregar: 0,160 37 0,254
Reactivo C diluido 5 ml 5 ml 0,180 42 0,284
0,200 47 0,314
Mezclar por inversión y retirar del baño. Después de 2 0,220 52 0,340
minutos leer la absorbancia en fotocolorímetro con filtro 0,240 57 0,364
verde (500-550 nm); en espectrofotómetro a 505 nm o Hg
0,260 62 0,389
546, llevando el aparato a cero D.O. con agua destilada.
0,280 68 0,415
0,300 74 0,442
0,320 80 0,468
0,340 87 0,494
0,360 96 0,524
0,380 104 0,552

b) Empleando curva de calibración:

Emplear el Standard como se indicó en INSTRUCCIONES
PARA SU USO. En 9 tubos colocar:

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 ros (sin incubar o agregando el suero después del Reactivo B)
Tubo Standard Reactivo A Aguadest. GPT GOT cuando se trabaja con muestras hemolizadas, muy ictéricas o
(ml) (ml) (ml) (U/l) (U/l) cuando se sospecha la presencia de cetosis.
1 0,00 1,00 0,2 - -
2 0,05 0,95 0,2 9 7 PERFORMANCE
3 0,10 0,90 0,2 18 12 a) Reproducibilidad: procesando replicados de las mismas
4 0,15 0,85 0,2 25 20 muestras en un mismo día, se obtuvieron los siguientes datos:
5 0,20 0,80 0,2 37 28 GOT:
6 0,25 0,75 0,2 46 37
Nivel D.S. C.V.
7 0,30 0,70 0,2 56 48
19,3 U/l  1,50 U/l 7,77 %
8 0,40 0,60 0,2 79 81
49,0 U/l  2,19 U/l 4,47 %
9 0,50 0,50 0,2 113 -
Mezclar y agregar a cada tubo, con intervalos de 1/2 minuto 66,5 U/l  3,44 U/l 5,17 %
entre uno y otro, 1 ml de Reactivo B. Mezclar. Incubar 10
minutos a 37oC (contados desde el agregado del Reactivo B al GPT:
primer tubo). Luego agregar 10 ml de Reactivo C pre- parado a Nivel D.S. C.V.
cada tubo, manteniendo el intervalo de 1/2 minuto. Mezclar cada 16,5 U/l  0,79 U/l 4,79 %
tubo inmediatamente por inversión y retirar del Baño. Diez 23,3 U/l  1,16 U/l 4,98 %
minutos después, leer absorbancia con filtro verde (500-550 nm) 44,8 U/l  2,35 U/l 5,25 %
o en espectrofotómetro a 505 nm, llevando el aparato a cero b) Límite de detección: depende del fotómetro empleado. En
D.O. con agua destilada. El color es estable 30 minutos. espectrofotómetro a 505 nm (con cubetas de caras paralelas de
Restar a cada lectura la obtenida con el tubo Nº 1, obtenién- dose 1 cm de espesor, reproducibilidad  2 nm, luz espuria  0,5
las Lecturas Corregidas. %, semiancho de banda  8 nm) para un cambio mínimo de
En un papel milimetrado, trazar un sistema de coordenadas 0,001 D.O. el mínimo cambio de actividad detectable será de 0,5
colocando en el eje vertical las Lecturas Corregidas y en el U/l para un nivel de GOT de 88 U/l y 0,2 U/l para un nivel de
horizontal las actividades para GPT y GOT. Determinar en el GPT de 64 U/l.
gráfico los puntos correspondientes a cada tubo. Uniéndolos se c) Rango dinámico: si la actividad de la muestra es mayor de
obtienen las curvas respectivas para GOT y GPT. Tener en 80 U/l de GOT o GPT, debe repetirse la determinación
cuenta que para cada técnica debe utilizarse el gráfico diluyendo previamente la muestra con solución fisiológica o
correspondiente. empleando menor cantidad de suero.

CONVERSION DE UNIDADES PRESENTACION

Los resultados pueden ser expresados en U/l o en las an- tiguas GOT: equipo para 200-400 determinaciones (Cód. 1751002).
unidades del método (Karmen o Wroblesky), para lo que deben GPT: equipo para 200-400 determinaciones (Cód. 1761002).
utilizarse las siguientes equivalencias:
U/l = UKarmen/ml (o Wroblesky/ml) x 0,482 BIBLIOGRAFIA
UKarmen/ml (o Wroblesky/ml) = U/l x 2,07 - Reitman, S. & Frankel, F. - Am. J. Clin. Path. 28:56 (1957).
- Frankel, S. - Gradwohl's Clinical laboratory methods and
No obstante debe tenerse en cuenta que en sueros patoló- gicos la diagnostic Vol. 1 pág. 123 - Ed. por Frankel, Reitman y
conversión no siempre es exacta. Sonnenwirth - (7ª Ed., 1970).
- Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",
VALORES DE REFERENCIA AACC Press, 4th ed., 2001.
Se consideran valores normales de transaminasas (GOT y GPT)
hasta 12 U/l. Si bien se han hallado individuos norma- les con
valores hasta 18 U/l, los niveles de transaminasas que se
encuentren entre 12 y 18 U/l deben considerarse sospechosos.
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios
valores de referencia.

LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA.
- La temperatura ambiente y el tiempo de incubación son
críticos. Por cada grado de temperatura, la variación es
aproximadamente del 7%.
- El autor del método recomienda procesar un blanco de sue-

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Símbolos
Los siguientes símbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagnóstico de Wiener lab.

Este producto cumple con los requerimientos

C previstos por la Directiva Europea 98/79 CE de

productos sanitarios para el diagnóstico "in vitro"
M Elaborado por:

Nocivo
P Representante autorizado en la Comunidad Europea

V Uso diagnóstico "in vitro"

Corrosivo / Cáustico

X Contenido suficiente para <n> ensayos

Irritante

H Fecha de caducidad

i Consultar instrucciones de uso

l Límite de temperatura (conservar a)

Calibr. Calibrador

❄ No congelar

b b
Control

F Riesgo biológico

Control Positivo c
Volumen después de la reconstitución Control Negativo

Contenido
Con

g Número de lote h Número de catálogo

M Wiener Laboratorios S.A.I.C.

Riobamba 2944
2000 - Rosario - Argentina
http://www.wiener-lab.com.ar
Dir. Téc.: Viviana E. Cétola
Bioquímica
Producto Autorizado A.N.M.A.T.
Wiener lab.
Disp. Nº: 252/75-5231/98 2000 Rosario - Argentina

UR161
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