UNIVERSIDAD TÉCNICA DE COTOPAXI

DIRECCIÓN DE POSGRADO
MAESTRIA EN CIENCIAS VETERINARIAS

Consulta

Transferencia de embriones en bovinos

ASIGNATURA:
Reproducción animal
INTEGRANTES:
Alfonso Zapata
Gabriela Espín
Jorge Arellano
Hector Herrera
Profesor:
Msc. Eduardo Sambache

2020- 2021
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I. INTRODUCCIÓN
Con la necesidad de mejorar y buscar técnicas innovadoras que cambien y mejoren los
aspectos reproductivos en los animales de granja, la implementación de nuevas técnicas en
la biotecnología han considerado como la mejor alternativa para cambiar los resultados
productivos y reproductivos que demuestren el crecimiento de los sistemas pecuarios es por
eso que tanto la inseminación artificial y el uso de la transferencia de embriones (ET) en el
ganado es muy importante para la rentabilidad y la mejora de las ganancias genéticas. La
aparición de la industria comercial de recolección y transferencia de embriones ha dado
lugar a avances en múltiples técnicas y prácticas. Sin embargo, las variables específicas han
afectado históricamente las tasas de preñez, pero la comprensión de la magnitud de estos
efectos en la industria actual es limitada.
La transferencia de embriones de ovulación múltiple de hoy en día es una herramienta
reproductiva ampliamente utilizada en muchas granjas y es realizada por veterinarios de
todo el mundo. La propagación de los genomas femeninos de donantes seleccionadas, a
través de la transferencia de embriones, ha permitido una rápida progresión de la ganancia
genética en muchas razas, muy similar a lo que sucedió con la inseminación artificial desde
la década de 1940. El avance de esta tecnología está migrando a la tecnología de
fertilización in vitro en la actualidad, lo que permite producir un mayor volumen de
descendencia con la selección del sexo en el laboratorio.(1)
II. DESARROLLO

1. GENERALIDADES
La biotecnología en nuestro país en cuanto a la aplicación a la reproducción en el ganado
bovino a evolucionado de manera significativa en la última década. Lo que a permitido
tener un gran número de ovocito por cada hembra donante mediante el uso de la
transferencia lo que se conoce como superovulación, he implantar en las receptoras
seleccionadas, mejorando la capacidad reproductiva y lo que permite el mejoramiento
genético del ganado bovino, en tiempos relativamente cortos (2).
La técnica de transferencia de embriones es usada cada vez con mayor frecuencia ya que
permite optimizar la recolección de em briones de las hembras donantes y multiplicar la
buena genética en la población. En cuanto a la herramienta de la inseminación artificial se
la utiliza con el fin de aumentar la descendencia de un toro de gran valor, los embriones son
transferidos a las mejores vacas con la finalidad de obtener una buena producción de
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ternero. Se puede utilizar con para inducir gestaciones gemelares, exportación de animales
y eliminar problemas de adaptación a diferentes pisos climáticos (3).
Entre 1940 y 1950 la técnica de ovulación múltiple y ET en ganado tuvo un gran desarrollo,
sin embargo; estas no se introdujeron en gran escala en América del Norte si no hasta la
década de 1970, en cuanto a Europa se dio hasta 1980 y en América del Sur se dio inicio en
1990 (4).
2. ETAPAS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES
La transferencia de embriones envuelve algunas etapas las cuales son:

a. Características y Selección de la Hembra Bovina Donadora

Para ver si un animal es idóneo o no para ser donante para la trasferencia de embriones se
establece por su valor genético y su capacidad para lograr un nivel alto en sus resultados,
mismo que podrían ser óptimos si se puede seleccionar un animal que ya ha ofrecido
buenos resultados en la transferencia. Se debe tener en cuenta que un tercio de las vacas
donantes no producen embriones transferibles (5). Estudios han demostrado ciertos criterios
claves para la selección de una hembra donante, mismo que se detallan a continuación:
haber presentado ciclos regulares desde temprana edad, no requerir más de dos servicios
por concepción, no presentar defectos de conformación o genéticos detectables, tener de 3-
10 años de edad, debe tener un promedio de día entre calores entre 17 y 24 días, no deben
existir alteraciones en su aparato reproductor (quistes, adherencias, infecciones, etc.), las
vacas deben de ser de alto valor genético, deben ser animales libres de parásitos internos y
externos, buena condición corporal de 3- 3.5 en escala del 1 al 5 (6). Las novillas en
determinados momentos no pueden ser donantes óptimos, debido a que el paso del catéter
de lavado a través del cérvix entraña una mayor dificultad en comparación con las vacas.
Años atrás la calidad embrionaria en novillas superovuladas también era inferior a la de
vacas adultas. Pero este problema se ve compensado por los últimos productos de FSH
Ovagen y Follitropin. Con esto novillas con una buena genealogía y un valor productivo
estimado alto aceleran la mejora genética mucho más como donante (7).
¿Cuándo son vacas donadoras?
Para esto se debe tomar en consideración que se necesitan dos vacas para el desarrollo del
proceso de transferencia de embriones, así que tenderemos por un lado las donantes o
dadoras de genética, que serán vacas que han pasado un proceso de selección y son
consideradas optimas y de alto nivel, sin embargo hay que tomar en consideración que el
proceso de selección es uno de los más importantes debido a que no importa si la vaca es la
mejor juzgada o la mejor productora de leche si no responde al procedimiento hormonal
que permite la recolección de óvulos no se será útil (8).
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Con la selección de la hembra donante se procede a realizar un chequeo reproductivo,

ginecológico, ecografía de útero y ovarios que permita visualizar si procede el tratamiento.
estas vacas, deben de cumplir con los siguientes requisitos:
a. No presentar enfermedades hereditarias.
b. Tener excelente historial reproductivo y salud.
c. Alto valor en el mercado.
d. Ciclos estrales regulares.
e. No tener enfermedades que afecten la fertilidad.
f. No presentar anomalías reproductivas.
g. Tener una buena condición corporal.

b. Características y Selección de la Hembra Bovina Donadora

El otro grupo serán aquellas vacas que servirán como receptoras mismas que no aportan
nada genéticamente, sin embargo; estas deben estar en condiciones óptimas para recibir el
ovulo fecundado, sanas sin ningún tipo de enfermedad que sea transferible tanto en el
proceso de preñez como en el amamantamiento y destete (9), además, la hembra receptora
debe cumplir con ciertas características fisiológicas como:

 Raza a ser utilizada, que posea un sistema mamario apto para la producción de
leche.
 El canal del parto del animal, deberá ser ancho y nivelado, para la facilidad del
parto.
 Las vacas receptoras, deben haber tenido 1 a 2 partos y estar dentro de un
período postparto no menor de 90 días, con involución uterina completa y no
estar en amamantamiento.
 Las receptoras deben pesar en promedio 400kg o más, con una condición
corporal igual o mayor a 3, esto en una escala del 1 al 5.
 Ausencia de preñez, cíclicas y ausencia de enfermedades clínicas aparentes. Las
evaluaciones ginecológicas deben realizarse por ecografía.
 Si el hato a ser evaluado no cuenta con la certificación de libre de enfermedades
reproductivas, se debe realizar la toma de muestras y remisión al laboratorio,
para el diagnóstico de las principales enfermedades reproductivas del bovino.
 Las receptoras deben estar desparasitadas, poseer una buena mineralización de
con sales minerales o soluciones inyectables de compuestos a base de cobre,
zinc, manganeso y selenio. (10)
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c. Inducción de la superovulación (donadora)

La superovulación es un tratamiento o proceso endocrino en el ciclo estral (sucesos que
inician en un celo y termina con otro), cuyo objetivo es el incremento de oleadas de
crecimiento folicular generando ovocitos fértiles.
El saber de la ovulación, desarrollo folicular, función lútea ayuda a la aplicación de
protocolos de sincronización de celo, así como el tratamiento aplicado a en la
superovulación (11).
Este estimulación hormonal se presenta en el diestro entre el día 8 y 14 del ciclo estral
mediante la implementación de hormonas gonadotropinas como el HCG o PMSG y el FSH
(12).
d. Sincronización del ciclo estral (receptoras)
La sincronización de celo en reproducción bovina es de gran interés en el área reproductiva,
existiendo protocolos para la sincronización de celo a tiempo fijo, esto se realiza con la
utilización de hormonas y se basa en modificar los ciclos en las hembras para que se
produzcan celos fértiles en días programados.

Existen algunas hormonas que son utilizados en protocolos reproductivos las cuales son:
Hormona luteinizante (LH): induce la ovulación y mantiene el cuerpo lúteo.

Hormona foliculoestimulante (FSH): interviene en el crecimiento y maduración de los

folículos ováricos.
Estas hormonas la LH y FSH generan secreción de esteroides, la FSH necesita de la LH
para la fabricación de estrógenos en el folículo maduro.

El benzoato y Cipionato de Estradiol: son muy utilizados en la inseminación artificial

Prostaglandina F2α (PGF2a): participa en el control del ciclo estral en conjunto con la
GnRH y la progesterona, con el objetivo de mejorar la fertilidad (13)
La aplicación de dispositivos tiene la finalidad de inducir la producción de cuerpos lúteos
de buen tamaño, por ende, buena producción de progesterona. Considerado los siguientes
pasos:
1. Sincronización de celo: Con la aplicación de dispositivo intravaginal bovino (DIB) con
0,5 gr de progesterona (P4) y benzoato de estradiol (BE) 2 mg en el día 0.
2. Retiro de dispositivo intravaginal bovino y aplicación de 150 µg D+cloprostenol sódico
(PGF2α) en el día 08.
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3. Estimulación del desarrollo folicular con la aplicación de gonadotropina coriónica equina

(ECG), con una dosis de 1000 UI en el día 08 (10).
La aplicación de otro método con la utilización del CIRD consiste en la metodología que se
describe en el grafico 1.
Figura 1. Utilización del CIRD para la transferencia de embriones

Fuente: Ponce, N (2015)

e. Recolección de los embriones (donadora)

Existen técnicas de recolección de embriones que pueden ser quirúrgicas y no quirúrgicas,

como son:

Recolección quirúrgica: es un método en el que se requiere de médicos veterinarios,

personal especializado en el cual el animal es sometido con anestesia general, siendo una
técnica que no se puede desarrollar en campo y actualmente ha quedado en desuso.

Este método consistía en realizar una corte de 15 cm, delante de la glándula mamaria se
extraía los ovarios y cuernos uterinos, se procedía con el lavado introduciendo catéteres de
goma por la pared dorsal del cuerno uterino y del oviducto, utilizando una solución buffer
con un volumen entre 40 y 60 ml (14)

Recolección no quirúrgica

La aspiración folicular guiada por ultrasonografía es la técnica más utilizada para la

recolección de ovocitos de una hembra viva. esta técnica permite que a partir de los
ovocitos extraídos estos sean fecundados en un laboratorio, cultivados in vitro en un tiempo
de 7 días, y poder realizar una selección de los embriones para implementar en las hembras
receptoras o conservarlos a través de la congelación (15).
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f. Clasificación de los embriones

A Los embriones se los ha clasificado tomando en consideración el grado de desarrollo y

calidad (14).

Por el grado de desarrollo:

1. Ovocito sin fecundar: se observa una célula en un espacio embrionario, con todas
sus estructuras completas: zona pelúcida, citoplasma uniforme, membrana vitelina
completa, espacio vitelino claro.

2. Células de 2 a 12: presentes en el oviducto en aquellas hembras donde ya se ha

llevado la recolección 5 días tras el celo, si la recogida ha sido a los 6 u 8 días es un
indicador de degeneración y muerte, estas estructuras no son viables.
3.
Mórula joven: Sus blastómeros están unidos alrededor de 16 ocupa una gran parte
del espacio perivitelino, no se los puede diferenciar.

4. Mórula compacta: Sus blastómeros están unidos y constituyen una masa compacta
que ocupa sólo el 60-70% del espacio perivitelino, no se los puede diferenciar.

5. Blastocisto temprano o joven: Se caracteriza por el comienzo del transporte de

fluido en las células trofoectodérmicas y por la formación de una cavidad
(blastocele), los trofoblastos son muy visibles entre la zona pelúcida y el blastocele.
Las células del embrión, ocupa 70-80% del espacio perivitelino.

6. Blastocisto: Existe una marcada diferenciación entre las células del trofoblasto, que
constituyen una pared -que se adosa a la zona pelúcida y la masa celular interna (o
disco embrionario) más oscura.

7. Blastocisto expandido: en este estadio es el primero en aumentar su tamaño, el

blastocele ocupa una gran parte del espacio interno y el espacio perivitelino
desaparece, la zona pelúcida disminuye su grosor a un tercio de su grosor inicial

8. Blastocisto eclosionado: Los embriones han abandonado la zona pelúcida. Su forma

puede ser esférica, con un blastocele bien definido ("burbuja").

9. Blastocisto expandido eclosionado: el blastocito es parecido al estadio anterior, a

excepción de su tamaño (16).
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Figura 2. Esquema gráfico de todos los estadios embrionarios

Fuente: Ponce, N (2015)

A los embriones También se los puede clasificar por grados:

Grado 1 - Excelente: contornos celulares definidos, no existe dispersión – destrucción de

los blastómeros.

Grado 2 - Bueno: los embriones presentan signos de degeneración y presencia de

granulaciones atípicas.

Grado 3 - Regular: blastómeros asimétricos con degeneración alta muy dispersos, una
partee de la masa celular se mantiene viable.
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Grado 4 - Malo: Degeneración total del embrión que impide la determinación del grado de
desarrollo.

Tomando estas características se puede considerar si pueden ser transferible o no a la

hembra receptora considerando las características de embriones colectados que se expresa
en el siguiente cuadro 1.

Cuadro 1. Clasificación de los Oocitos colectados entre los días 5-9 después del estro

Fuente: Marcelo, R (1984)

g. Criopreservación

Es el proceso de conservar tejidos vivos y células con el uso de temperaturas ultra bajas -
133°C a -196ºC, con la finalidad de mantener el metabolismo celular durante el
almacenamiento utilizando crioprotectores (moléculas que se utilizan para impedir lesiones
en las células por el enfriamiento).

Este proceso presenta dos técnicas:

Congelación lenta: es una técnica que utiliza bajas concentraciones de crioprotectores, con
temperaturas entre 80 y - 196°C
Los crioprotectores utilizados son el glicerol y etilenglicol (presenta una baja toxicidad y
penetración alta).
Una desventaja es el tiempo de congelación del embrión (2 horas) y la utilización de un
congelador celular programable.

Vitrificación: es una técnica de solidificación de una solución utilizando altas

concentraciones de crioprotectores y una disminución de temperatura a -196°C, esta técnica
evita la formación de cristales de hielo manteniendo membranas y estructura intracelular,
presenta una congelación rápida.
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Los crioprotectores utilizados son el glicerol, polietilenglicol y dimetil sulfoxido (DMSO)

La vitrificación tiene puntos importantes: volumen de muestra, altas concentraciones de
crioprotectores, velocidad de enfriamiento (17).

Los crioprotectores se han clasificado en 2 tipos:

Crioprotectores penetrantes son sustancias con un peso molecular bajo, tienen la capacidad
de ingresar a la célula por su estructura polar, provocando deshidratación parcial.

Crioprotectores no penetrantes son sustancias con un peso molecular alto, no poseen la

capacidad de traspasar la membrana celular, afectando la osmolaridad del agente congelante
y brindando estabilidad a la membrana celular (16).

h. Técnicas de Transferencia de Embriones

Para la extracción de gametos de hembras bovinas existe técnicas tanto quirúrgicas y no
quirúrgicas, como laparoscopias basadas en la ultrasonografía como la aspiración de
folículos (OPU en inglés), así esta técnica también permiten la obtención de gameto
inmaduros (complejo cúmulos- avocito COC’s), obteniendo de esta manera mayor numero
y homogeneidad con el trabajo de extracción, tomando en cuenta que el material extraído
tenga las características de calidad del cumulus adyacente de la células y de su citoplasma,
que den eficiencia en la fertilización in vitro (18).

Para la implantación del embrión la hembra bovina receptora debe ser sincronizada entre el
donante y los receptores de ± 1 día (19), ingresan previo un chequeo ovárico mediante
ecografía para determinar ubicación, tamaño y cantidad de los cuerpos lúteos producto
después de la ovulación, proceso donde existe la hormona progesterona alta desde el día 10
al 16 del ciclo estral. (10)
Método quirúrgico
Uno de las técnicas para la transferencia de embriones es mediante laparotomía considerado
un método quirúrgico realizado por la fosa paralumbar llegando directamente al útero del
animal con una posición directa (20), siendo las laparotomías ventrales o laterales (21).
Garantizando en un 70 % los estados de preñez en las hembras bovinas con embriones
frescos y del 60% en congelados(19), pero las transferencias por el flanco del animal, no
fueron las recomendadas por la acción quirúrgica en la región paralumbar, la utilización de
un anestésico local, abrir quirúrgicamente el flanco, exteriorizar el cuerno uterino en
condiciones asépticas, transferir el embrión a través de una punción del cuerno uterino, y
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luego suturar la incisión significan el aumento del método en términos monetarios (4), para
este procedimiento después de la incisión y detección el cuerno es punzado cerca de la
unión útero-tubárica con una aguja roma o estilete (sonda de pezón) hasta alcanzar el
lumen. El estilete es retirado, y el embrión es depositado en el lumen uterino utilizando un
catéter intravenoso, presionando cuidadosamente el émbolo de la jeringa. El catéter es
retirado lentamente y el útero es devuelto a la cavidad abdominal, para después proceder al
cierre de la incisión(22)
Método no quirúrgico
Para la técnica se utilizan como receptoras vaquillas con estro previamente y con CL mayor
de 15 mm en el ovario. La transferencia de embriones se realiza durante la anestesia
epidural superior (4 ml de solución de lidocaína al 2%) con una tasa de preñes después de
la transferencia de embriones con 44,66% (19), también se puede usar anestesia epidural
baja (xilocaína al 2%) con una limpieza con jabón desinfectante de la región perineal y
vulva y dejar seca. Se hace una palpación vía rectal del aparato reproductivo, con la
colocación del embrión en la pajuela de 0,25 ml y con un catéter de transferencia el cual
lleva una apertura en la parte lateral final, con una pistola de cámara profunda para T.E.
el cual realiza una deposición a la mitad del cuerno ipsilateral al cuerpo lúteo (23)
identificado en el gráfico 1. Siendo factores de evaluación el sitio de deposición del
embrión ya sea en la parte craneal del útero, el tercio medio y caudal del útero pues influye
directamente en el éxito de la preñez (24).
Figura 3 . Lugar de deposición del embrión en el útero bovino

Fuente: Robertson (2015)

Este proceso de transferencia de embriones expone el endocérvix y el endometrio a una

posible irritación o trauma causado por el instrumento de transferencia. Además, se
introduce un pequeño volumen de un líquido extraño en la luz uterina coincidiendo con la
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expulsión del embrión. Otra posible consecuencia de la transferencia no quirúrgica es la

liberación uterina de prostaglandina F 2α causada por la manipulación del útero por el recto
pudiendo evitar esto con la aplicación de El tratamiento de los receptores con flunixina
meglumina, un inhibidor de la síntesis de prostaglandina F 2α (25).
Figura 4 . Esquema de preparación de la pajuela esterilizada (0,25ml)

Fuente: Valladares (2010)

Hay que considerar que La colocación de un gran volumen de líquido (30 ml) puede
aumentar la acumulación de proteínas en la luz uterina y comprometer la supervivencia del
embrión. Se desconoce si un volumen más pequeño de líquido como el de una pajita ET de
0.25 mL también causa cambios deletéreos en la composición del líquido uterino. Algunos
medios también contienen antioxidantes, tampones, suero alogénico y antibióticos que
posiblemente podrían causar cambios locales en la función endometrial. Tampoco se sabe
si la supervivencia embrionaria se ve comprometida por la cotransferencia de agentes
infecciosos (25).
i. Diagnóstico de Preñez
Los métodos más utilizados para determinación de la preñes de puede ser mediante
ecografía rectal a los 28 días después de la transferencia realizada con 35 días de gestación
con un traductor lineal de 7,5 MHz de frecuencia (23). Existe criterios que pueden
determinarse la preñez a los 30 días después de la transferencia y confirmación la gestación
a los 90 días (10)
Además se puede aplicar pruebas de progesterona para determinar gestación las cuales se
basan el cambio característicos y presentes de esa hormona durante el ciclo reproductivo y
la preñez, los cuales pueden determinar niveles hormonales de progesterona tanto a nivel
sanguíneo como en la leche (1).
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el porcentaje de vacas preñadas después de la transferencia de embriones ( P / ET ) es

generalmente el mismo que el porcentaje de vacas preñadas después de la inseminación
artificial ( P / AI) o solo un poco más alto (24), por aspecto técnico una receptora es
descartada del programa de transferencia de embriones luego de haber transcurrido de dos a
tres congruencias de quedar gestante (26).

III. CONCLUSIONES

Después del análisis bibliográfico de determinar las metodologías aplicables a la

transferencia de embriones a nivel de campo, podemos determinar:

 Superovulación en la donante: Diversos estudios han mostrado que las hormonas

Folículo Estimulantes aportan mejores resultados en la superovulación. Por lo tanto, el
empleo de estas parece ser el más adecuado para una buena obtención de óvulos.
 Selección de hembras donadoras y receptoras : para una buena selección las hembras
deben ser sometidas a una evaluación y ginecológica cumpliendo con requerimientos
fisiológicos y sanitarios apropiados.

 Conservación de los embriones: A vistas de futuro, vitrificar sería la mejor opción, pero
aún no están disponibles las técnicas necesarias para evitar el largo proceso de
descongelado, por lo que actualmente se sigue manteniendo la transferencia de
embriones congelados, o en fresco si disponemos de los medios necesarios en la
granja.

 De preferencia para el proceso de transferencia de embriones es aconsejable la

utilización de métodos no quirúrgicos de manera adecuada e higiénica los cuales no
necesitan la inversión de capital que se puede utilizar para mejorar las características
genéticas y reproductivas.

BIBLIOGRAFÍA
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 UNIVERSIDAD TÉCNICA DE COTOPAXI
DIRECCIÓN DE POSGRADO
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