UNIVERSIDAD DEL VALLE DE MÉXICO

Determinación de la sencibilidad de extractos

Frente a Microorganismo y evaluación de Toxicidad en Artemia sp.

Castruita Sánchez Francisco Javier,Gutierrez Jasso Ana Karen,Sánchez Galicia Lisa

Fernanda. Torres Jasso Laura Lili, Tinoco Santos Sandra Paulina, Hernández Lazo Edgar

Asignatura: Laboratorio de Farmacognosia.

Docente: De la Rosa Sierra Roberto

Fecha: 23 de noviembre del 2022

Introducción echan raíces al tener contacto con la

Hierbabuena (Mentha spicata) (MS) es humedad. Tiene flores pequeñas de
una planta nativa del Viejo Mundo, la color rosa a lila, o a veces blancas.
cual se cultiva en toda la isla. Las Como se trata de una planta estéril, no
partes empleadas son las hojas y las posee frutos. Es un cultivo muy
ramas. La hierbabuena es una hierba adaptable a distintos tipos de suelos.
de olor y un condimento muy Prefiere los más fértiles, profundos y
apreciado por el aroma y el contenido sin encharcamientos, especialmente
de aceite de sus hojas. La de textura franca. Aguanta los climas
hierbabuena dura todo el año; es una extremos; es resistente a las heladas,
planta perenne de alrededor de por lo que puede crecer hasta los tres
cincuenta centímetros de altura. Las mil seiscientos metros sobre el nivel
hojas son pecioladas, ovales, del mar. Los mejores rendimientos se
redondeadas por su base, más o obtienen en climas templados. La falta
menos vellosas por ambos lados. La de agua afecta a la planta y hace que
base de la hierba es un rizoma del que en algunos casos las hojas adultas se
salen varios tallos subterráneos de pongan amarillas. (Gobierno de
color violeta oscuro, que crecen en México, 2020) El principio activo
todas direcciones. A partir del rizoma, fundamental de la planta es un aceite
se reproduce por medio de brotes que
esencial que contiene mentol (50-86 forma lanceolada, y están adheridas
%), mentona, felandreno y limoneno. directamente al tallo subterráneo.
Desde el punto de vista toxicológico Desde el centro de la roseta, emerge
puede provocar irritaciones un tallo redondeado y piloso que
gastrointestinal y del tracto urinario, en concluye en uno a tres tallos florales
caso de sobredosis por vía oral; que terminan en una inflorescencia
tópicamente puede provocar daños en hermafrodita con forma de cabezuela,
las pieles sensibles. (García de siete a ocho cm de diámetro y, por
Navarrete, 2014) excepción, de uno a tres pares de
cabezuelas menores, en sendas
Tabaco (Nicotiana tabacum) es una ramitas laterales, cada una de las
planta herbácea perenne. Se cuales está constituida por una serie
encuentra únicamente en cultivo, de flores periféricas, liguladas,
alcanza alturas de 1 a 2 metros. compuestas por un cáliz, representado
N. tabacum es nativo de América por cerdas erizadas y de puntas finas,
tropical y subtropical, pero ahora se con una corola zigomorfa, formada por
cultiva comercialmente en todo el una lámina de tres dientes y un ovario
mundo. terminado en un apéndice bifurcado
La hoja de tabaco contiene varios en la punta. Hacia el centro de la
alcaloides de piridina, siendo el cabezuela se encuentran las flores
principal un alcaloide líquido, la centrales, con la corola tubulosa o
nicotina. Otros alcaloides presentes quinquedentada y cinco estambres
incluyen nicoteína, nicotimina, soldados en un tubo, por la parte
anabaína, anatalina y nornicotina. superior. Las flores son de color
También contiene un alto porcentaje amarillo-naranja. (Waizel-Bucay &
de ácidos orgánicos. Las hojas Cruz-Juárez, 2014)
también contienen glucósidos,
tahacinina, tahacilina e El apio es una planta procedente del
isoquercitrina, ácidos 1-quínico, Mediterráneo, existiendo otros centros
clorogénico, cafeico y oxálico. secundarios como el Caúcaso y la
También contienen sustancias zona del Himalaya. Se conocía en el
terpénicas y cancerígenas. (Rawat, antiguo Egipto. Su uso como hortaliza
Roshan Mali, 2013) se desarrolló en la Edad Media y
actualmente es consumido tanto en
Arnica montana es una hierba Europa como en América del Norte.
perenne, de 20 a 60 cm de altura, con Tiene raíz pivotante, potente y
hojas inferiores (basales) enteras profunda, con raíces secundarias
situadas a ras del suelo, de color superficiales. Del cuello de la raíz
verde brillante, ligeramente vellosas brotan tallos herbáceos que alcanzan
en la superficie superior, agrupadas en de 30 a 80 cm de altura. Las hojas son
racimos (rosetas planas), grandes que brotan en forma de
ovado-ciliadas y con puntas corona; el pecíolo es una penca muy
redondeadas. Las hojas superiores gruesa y carnosa que se prolonga en
son más pequeñas, opuestas, de gran parte del limbo. Y la semilla tiene
una facultad germinativa media de 5
años; en un gramo de semilla entran Propiedades rubefacientes:
aproximadamente 2,500 unidades. Su aplicación en la piel produce un
Desde que se planta hasta que se aumento del calor y estimula la
recolecta tiene una duración circulación de la sangre en la zona en
aproximadamente de unos 4 meses. cuestión, lo que mejora el estado de
Apio (Apium Graveolens) como una hematomas e incluso puede evitar que
hortaliza que permitiría bloquear el aparezcan moretones.
efecto tóxico de ciertas sustancias Propiedades analgésicas y
tóxicas como el tetracloruro de antiinflamatorias:
carbono, debido a los efectos Se considera que algunos de sus
protectores sobre las células componentes, como la helenalina, uno
hepáticas. (Cun G.,León F.& García de sus principios amargos, ayudan a
H., 2007) reducir la inflamación a la vez que
El apio contiene flavonoides, alivian el dolor proveniente de
compuestos con actividad antioxidante esguinces u otras lesiones.
y funciones biológicas diversas Propiedades antibacterianas:
(vasodilatadores, anti carcinogénicos, Su riqueza en algunos ácidos, como el
antiinflamatorios, antibacterianos, cafeico o el clorogénico, y en un aceite
inmunoestimulantes, antivirales, etc.), esencial llamado timol, le otorga un
entre los que cabe citar la miricetina, poder antibacteriano que evita
quercetina y kaempferol (flavonoles), y infecciones e irritaciones en heridas,
la luteolina y apigenina (flavonas). úlceras y eccemas (medineplus. S.f)
(Tavico López, 2014)
● Apio
Efectos farmacológicos de las
plantas: Este vegetal es uno de los principales
diuréticos. Esta propiedad le viene
● Hierbabuena conferida por su enorme riqueza en
Esta planta tiene propiedades aceites esenciales, especialmente
analgesicas; es capaz de aliviar abundantes en la semillas,
dolores musculares y de cabeza, fundamentalmente limoneno y
antisépticas; ya que posee una selineno y en la raíz -asparagina, el
actividad bactericida y estimulante cual funciona para aliviar la retención
digestivo de líquidos
Las investigaciones etnobotánicas
sobre Mentha viridishan sugerido sus Acción bactericida:
posibles aplicaciones médicas en El aceite esencial tiene propiedades
diferentes trastornos, tiene efectos antibacterianas con lo que, al mismo
beneficiosos sobre la diabetes, los tiempo que aumenta la micción,ayuda
trastornos digestivos, cutáneos y a combatir las infecciones de los
respiratorios(NCB.Diagnostic, s. f.) riñones causadas por virus o bacterias
(infecciones genitourinarias).
● Arnica
Las hojas de apio se utilizan para
tratar afecciones como el asma por su Resultados
contenido en apigenina, un flavonoide
con efectos vasodilatadores que
ayudan a oxigenar las células, por lo
que también resultan muy adecuadas
en el tratamiento del epoc o
enfermedad pulmonar obstructiva
crónica (Editorial, 2021)

Metodología
Primero se realizó la extracción de
metabolitos secundarios de las plantas
Romero, Árnica, Hierbabuena, Apio y
Tabaco. Esto se extrajo con Se
comenzó con la recolecta de un total Figura no. 1 Tinción de Gram de colonias
de 100 artemisas, divididas entre la amarillas grandes, de la muestra de la mejilla
por sus características morfológicas y
mitad machos y la otra midas
coloniales en agar Nutritivo se determinó que
hembras. En 5 vasos se dividieron en son Cocos en racimos Gram positivos del
cada uno 10 artemisas machos para género Staphylococcus sp.
así completar las 50 y de igual manera
se hizo lo mismo con las hembras.
Figura no 2. Tinción de Gram de colonia
blanca mucoide, muestra proveniente de la
mejilla, por sus características morfológicas y
coloniales en agar Nutritivo se determinó que
son Bacilos Gram negativa del género
Klebsiella sp.
Ya seleccionados tanto los machos
como las hembras, se realizó una
solución de acetato de metilo a
distintas concentraciones las cuales
fueron al 15%, 30%, 45% y 60%, y se
fueron colocando en cada vaso donde
se encontraban las artemisas por un
lapso de 5 minutos, esto para saber a
qué concentración causaba la muerte
de la artemisa.
Figura no 3. Agar nutritivo, incubado a 37°C
,presenta dos tipos de colonias distinta.La Figura no . 5 La Artemia spp. son camarones
primer colonia es de aspecto mucoide, minúsculos de cuerpo blando, de color
mediana y blanca que corresponde a carmelita y transparentes a la luz.El género
Klebsiella pneumoniae y las colonias amarillas Artemia está compuesto por varias especies,
grandes brillantes y lisas, corresponden a entre ellas Artemia salina Leach, Artemia
Staphylococcus aureus. persimilis Piccinelli y Prosdocimi, Artemia
franciscana Kellogg (bisexuales) y Artemia
partenogenetica Bowen y Sterling.Se utilizaron
machos y hembras separandolas,evaluando la
toxicidad del Etanol frente a estos
Arthropodos.

Figura no.6 Extractos de Árnica,Tabaco

Hierbabuena y apio.Para posteriormente
diluirlos con concentraciones de etanol y
agregar las Artesanías spp ya sea machos o
Figura no. 4 Agar nutritivo con antibiogramas de los
hembras .
extractos de Romero,Árnica,Tabaco, Apio y
Hierbabuena; se sembró la colonia de Klebsiella
pneumoniae y como se muestra en los sensidisco
sólo el Árnica presenta un halo de sensibilidad de
1mm de diámetro.
 Como se muestran en los resultados
se realizó la extracción de las plantas
Romero, Árnica, Hierbabuena, Apio y
Tabaco y se evaluó su efecto
bactericida frente a Klebsiella sp. o en
general las Gram negativas y como se
muestra en los sensidiscos sólo el
tabaco presenta un halo de
sensibilidad de 1mm de diámetro, esto
Gráfica 1.Se grafico el Bioensayo de toxicidad debido a que el tabaco presenta
del Etanol con concentraciones de 15%, 30%, actividad antimicrobiana frente a
45% y 60%, en donde se observa que a partir cepas como Pseudomonas aeruginosa
de la concentración de 45% va aumentando la
y Staphylococcus aureus. (Pino, 2008)
mortalidad de las Artemias spp.Y a su
máxima concentración de mortalidad fue en Los metabolitos secundarios que tiene
60 % mientras que ya para 75% se mantuvo la el tabaco que le da el efecto
mortalidad constante.Al realizar la ecuacion de antimicrobiano es la berberina,
la recta tenemos que, y = 0.2x - 4.6 R² = palmatina y la sanginarina son
0.8396. alcaloides isoquinoléicos tóxicos a
insectos y vertebrados, pero también
Tabla no.1 Medidas de las orejas derecha e inhiben el crecimiento de bacterias,
izquierda ,provocando una inflamación de los hongos y virus.
lobulo.Se midio antes y despues, Estos alcaloides reaccionan con
posteriormente se midió el tiempo agregando grupos aniónicos y grupos
diclofenaco y en la otra un extracto.
nucleofílicos de aminoácidos o de
otras moléculas como receptores y
enzimas, inhibiendo su función. Los
receptores adrenérgicos,
nicotinérgicos, muscarinérgicos y de la
serotonina son blancos de unión de
estos compuestos.
La interacción de estos alcaloides con
Análisis de resultados el DNA, las proteínas y enzimas de la
Los aceites esenciales de algunas transcripción, contribuye a los efectos
especies de plantas presentan efecto aleloquímicos y tóxicos contra
antimicrobiano, tienen un amplio bacterias, hongos, virus, insectos,
campo de aplicación para el control vertebrados y otras plantas.
del crecimiento de microorganismos El árnica a pesar de sus propiedades
en alimentos por lo que se emplea antimicrobianas no generó ningún tipo
como método de preservación. Se ha de inhibición porque el árnica
retribuido que el efecto antimicrobiano contiene 'Helenalin', en las hojas y
se debe a los terpenoides y flores, el cual es una lactona
compuestos fenólicos en los aceites. sesquiterpénica que es un ingrediente
(Canabal, 2017) importante en las preparaciones
antiinflamatorias. Es un compuesto
altamente tóxico, con tejidos hepáticos sabe tiene actividad antimicrobiana
y linfáticos también causa toxicidad e frente a este extracto.
irritación en la piel. Tiene actividad También realizamos la prueba de
antitripanosoma y es tóxico para toxicidad utilizando artemias y sólo se
Plasmodium falciparum . Además, presentó toxicidad frente al árnica y
también retarda el crecimiento de frente al etanol al ser tóxico en
Staphylococcus ureus y reduce la grandes cantidades por el
gravedad de S. aureus infección en formaldehído y el ácido fórmico
humanos. (Saeed, 2014) Al probar la Por último se evaluó el efecto
toxicidad de las artemias fue inflamatorio de extractos de Lima,
realmente tóxico al tener una Haba, Jamaica y cáscara sagrada,
concentración del 15% como la dosis como se puede ver en los resultados
letal en artemias esto por contener la cáscara sagrada tiene efectos
acetato de etilo . Los demás extractos desinflamatorios muy importantes al
no presentaron actividad causar una desinflamación
antimicrobiana ni toxicidad en las considerable en la oreja a la que se le
artemias a pesar de que el romero provocó inflamación esto en un lapso
tiene actividad antimicrobiana contra de 10 minutos y la Jamaica y la Lima
las especies patógenas tuvieron efectos desinflamatorios muy
Staphylococcus aureus, Candida bajos o casi nulos por lo que se puede
albicans, Pseudomonas aeruginosa y considerar que la cáscara sagrada
Escherichia coli. (Estreada, 2011) La inhibe a COX-2 ya que estos frenan la
hierbabuena presenta actividad inflamación y reducen el dolor
antimicrobiana frente al Conclusión
microorganismo patógeno E. coli. Se sacaron diferentes tipos de aceites
(Morales, 2020) Por parte del apio esenciales con diferentes tipos de
este presenta inhibición de crecimiento plantas como el apio, árnica, Romero,
bacteriano frente a la bacteria E. coli. ( hierbabuena y tabaco. El único aceite
Aucapiña, 2019) A pesar de esta esencial que demostró actividad
actividad antimicrobiana encontrada antimicrobiana fue el del árnica ya que
en otras referencias, en nuestros al hacer la prueba con el sensidisco
resultados no hubo inhibiciones, esto está tuvo un halo de sensibilidad en
es debido a que no aislamos las las bacterias Klebsiella o Gram
bacterias que tienen inhibición hacia negativas, esto se debe al compuesto
estos extractos, también se aisló una del árnica Helenalin ya que este puede
bacteria de la cara la cual tiene varios matar o impedir el crecimiento
tipos de especies que forman parte de antimicrobiano.
la microbiota de la piel y sólo se Para ver la toxicidad de cada aceite
identificó que la bacteria que aislamos esencial se trabajó con las artemias
pertenece al género Staphylococcus machos, al administrarle los aceites
por lo que al ver que sólo tuvo esenciales solo se morían con el de el
inhibición en árnica se puede árnica ya que tenía un porcentaje muy
demostrar que la bacteria es alto de helenalin mezclado con
Staphylococcus ureus que como ya se solvente de acetato de etilo. Si se le
administra en dosis altas a las Extractos de Romero
artemias puede ser letal, esto produce (Rosmarinus officinalis y
neurotoxinas y el solvente con acetato Tomilla) y Tomillo (Thymus
de etilo puede afectar directamente al vulgaris) (Bachelor's thesis).
sistema nervioso central, es por esta ● Morales Castro, J. M., (2020)
razón que las artemias se morían o se Efecto antimicrobiano,
quedaban estáticas. Por lo tanto se fisicoquímico y sensorial del
concluye que el árnica tiene efectos aceite esencial de Mentha
antimicrobianos por lo que es posible Spicata (Hierbabuena)
que podría ser considerado como una incorporado en la formulación
alternativa ante la resistencia de del queso Dip.
antibióticos ● Pino Robles, J. D. D. (2008).
Acción antimicrobiana de los
metabolitos secundarios de
Referencias hojas y flores de Nicotiana
● -Saeed, A. (2014). A paniculata (tabaco cimarrón),
pharmacological study of arnica extraídos de las Lomas de
plant. Lachay.
https://www.indianjournals.com/i ● Aucapiña Maza, V. M., (2019)
jor.aspx?target=ijor:jfeb&volume Formulación de polímeros
=4&issue=2&article=001 biodegradables con adición de
● NCBI - WWW.Diagnostic. (s. aceites esenciales con efecto
f.-b). antibacteriano.
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pm
c/articles/PMC9019422/
● Árnica: MedlinePlus
suplementos. (s.
f.).https://medlineplus.gov/spani
sh/druginfo/natural/721.html
● Editorial. (2021, 19 noviembre).
Propiedades y beneficios del. . .
Botanical-online.https://www.bot
anical-online.com/plantas-medic
inales/apio
● Canabal, A. (2017). Evaluación
in vitro de la actividad
antimicrobiana de aceites
esenciales y de bacterias
endófitas extraidas de lippia
alba y lippia origanoides contra
bulkholderia glumae.
● Estrada Orozco, S. P. (2011).
Determinación de la Actividad
Antibacteriana in vtro de los