GUÍA DE LABORATORIO DE PARÁSITOS

LABORATORIO 2: PROTOZOOS DE IMPORTANCIA VETERINARIA

Guía elaborada por Dra. Daniela Doussang Ortiz
Modificada por Dr. Elfego Cuevas Domínguez

Objetivos:
 Revisar ciclos parasitarios.
 Identificar principales estructuras de Protozoos a través de observación
microscópica.

Muestras para observación en el práctico

 Protozoos: 1. - Giardia lamblia (trofozoito y quiste) en heces

2. - Sarcocystis (quiste) en músculo estriado
3. - Trypanosoma cruzi- frotis sanguíneo
- Trypanosoma cruzi- en músculo cardiaco
4. - Babesia bigemina- frotis sanguíneo

1. PROTOZOOS

Los protozoos son organismos unicelulares, eucariotas, que poseen uno o más núcleos. La mayoría de las
especies son de vida libre, algunas son parásitas de vegetales y animales. No todos los que parasitan al hombre
y animales son patógenos. Poseen distintos órganos de locomoción, tales como flagelos, pseudópodos y cilios.
La mayoría son heterótrofos e ingieren nutrientes a través de una boca temporaria o permanente (citostoma), los
alimentos son englobados en una vacuola e incorporados al citoplasma, el material no digerible puede ser
eliminado por un orificio permanente (citopigio). Poseen reproducción asexual (fisión binaria, gemación,
esporogonia, endodiogenia, esquizogonia) y/o sexual (conjugación y gametogonia) dependiendo de la especie.
Características generales de los protozoos de importancia veterinaria:
 Organismos unicelulares eucariontes, pequeños (4-300µm), 50.000 especies aprox.
 Mayoría anaerobios facultativos.
 Cosmopolitas, la mayor causa de infecciones globales.
 Locomoción por medio de flagelos, pseudópodos, cilios o deslizamiento.
 De vida libre, comensales, mutualismo o parásitos.
 Heterótrofos (mayoría), Saprófitos, Saprozoicos, Autótrofos.
 Presentan núcleo(s), diversos organelos y citoesqueleto.
 El número de protozoos que se transmiten en forma natural entre humanos y otros vertebrados
(zoonosis) es importante.
 Su reproducción, asexual o sexual, puede ser sencilla (división binaria) o compleja (esquizogonia o
merogonia, gametogonia, esporogonia).

- Reproducción asexual:
División binaria, se presenta en flagelados, amebas y ciliados. Es la división de un individuo por mitosis en dos
células iguales.
Gemación: División desigual del organismo. El nuevo individuo se origina a partir de un bulto (yema).
Originalmente la célula hija es muy pequeña y luego crece (algunos protozoos ciliados).
Esporogonia: La célula madre es de origen sexual, es decir, proviene de un cigoto que originó un ooquiste. El
núcleo se divide varias veces antes de la división del citoplasma.
Endodiogenia: Se generan dos células hijas en el interior de la célula madre y sólo cuando aquellas han
completado su maduración la célula madre se destruye.
Esquizogonia: El núcleo se divide repetidamente en gran número de núcleos secundarios que se rodean por
protoplasma. El protozoo en división se conoce como esquizonte y las células hijas como merozoitos. Se
observa en el ciclo de la generación alternante de los esporozoos.

-Reproducción sexual:
Conjugación: Unión temporal de dos individuos sexualmente maduros que intercambian material genético. Se
presenta solo en protozoos ciliados.
El micronúcleo se divide en “núcleos haploides” intercambian su material genético con otro
individuo para luego reorganizarse un “núcleo diploide”.
Gametogonia: Se forman 2 gametos haploides (microgametocito y macrogametocito) que se fusionan para dar
origen a un cigoto.
 - Los Protozoos se presentan bajo 2 formas de desarrollo:
Trofozoitos: o forma vegetativa, ellos realizan actividad fisiológica normal. Son lábiles y se destruyen
rápidamente en las condiciones del medio ambiente externo.
Quistes: es una forma de resistencia a las condiciones ambientales externas. Su actividad metabólica es baja.
Son los responsables de mantener y propagar las parasitosis.

- Se clasifican en Phylum:
Sarcomastigophora: agrupa protozoos que poseen flagelos o pseudópodos. Poseen un solo tipo de núcleo.
Apicomplexa: agrupa a protozoos que poseen complejo apical. Todos parásitos intracelulares con tipo de
reproducción alternante.
Ciliophora: incluye protozoos que poseen cilios, dos tipos diferentes de núcleos. La mayoría de vida libre.

1.- Giardia lamblia (syn. G. intestinalis, G. duodenalis)

Este protozoo infecta a un amplio rango de vertebrados; perro, gato, rumiantes, incluyendo animales silvestres
(ej. castores). Posee un ciclo biológico directo, con la formación asexual de trofozoitos (forma activa móvil).
Los trofozoitos de Giardia están adaptados para adherirse a las células epiteliales de la mucosa del intestino
delgado gracias a las lectinas que corresponden a proteínas parasitarias que se unen a azúcares de la membrana
superficial de los enterocitos. El trofozoito de Giardia tiene forma de lágrima. Dentro de la célula hay dos
núcleos, cada uno con un endosoma grande. Hay otras estructuras subcelulares como dos axonemas delgados,
cuatro pares de flagelos y un par de cuerpos medios. Todos los demás flagelados intestinales se encuentran en el
ciego y colon, pero Giardia parasita el intestino delgado, donde los trofozoitos se adhieren a las células de la
mucosa mediante los discos de succión. Los trofozoitos suelen transformarse en quistes infectantes antes de
salir con las heces. El quiste maduro que contiene dos trofozoitos potenciales es la forma que se suele encontrar
en las heces de los hospedadores infectados. Aunque los trofozoitos también se pueden excretar, principalmente
en las heces diarreicas, son incapaces de producir infección y mueren al poco tiempo (lábiles); si se encuentran
en agua dulce se lisan debido a su incapacidad para osmorregular. El periodo de prepatencia es de 4-16 días y el
periodo de patencia suele ser de varias semanas incluso meses.
Figura 1. Aspecto microscópico de los diferentes estadios de Giardia sp. A, B, C) Quiste de Giardia al
microscopio de luz, contraste de fase y tinción de Giemsa, respectivamente. Tamaño promedio: 10-14
μm. D, E, F) Trofozoíto de Giardia al microscopio de luz, contraste de fase y tinción de Hematoxilina-
eosina, respectivamente. Se pueden observar su forma de pera con dos núcleos, 4 pares de flagelos y
cuerpos mediales. Tamaño promedio: 10-20 μm.

Ciclo biológico

Figura 2-3. Ciclo biológico Giardia spp.

 Observación de Giardia lamblia, visualización de trofozoitos y quistes en heces. Identificar, dibujar
y rotular principales estructuras morfológicas.
Trofozoitos: de aspecto piriforme, dividido en mitades por un espaciamiento del citoplasma axostilo
(compuesto por microtúbulos) que actúa como esqueleto axial. Perpendiculares al axostilo se encuentran los
cuerpos parabasales. Posee dos núcleos. A diversas alturas del cuerpo celular emergen 4 pares de flagelos que
permiten movilidad. Presenta una placa suctora (adhesiva) que actúa como ventosa permitiéndole adherirse a la
mucosa del intestino delgado.
Quistes: poseen doble membrana y son refringentes cuando se observan en preparaciones en fresco. En su
interior se observan 4 núcleos y una serie de filamentos que son restos flagelares y cuerpos parabasales.

Figura 4. Estructura de trofozoito y quiste de Giardia spp.

Figura 5-6. Foto 100X. Identifique las formas (quistes, trofozoitos) y estructuras celulares (núcleos,
flagelos) de Giardia lamblia y describa sus observaciones.
Actividad práctica #1: Observación microscópica de preparados completos de Giardia lamblia.
Identifique las formas parasitarias y dibújelas.

Actividad de reforzamiento #1:

Complete: Tipo de Ciclo: ________________________

Vía de transmisión: ________________________
Hospedador intermediario:_______________________
Hospedador definitivo:__________________________
Estado infectante para hospedador definitivo: ____________________
¿Cuál es la principal forma diagnóstica e infectante? ___________________
¿Este parásito es zoonótico? ____________
2.- Sarcocystis sp.

Es un protozoo intracelular del Phyllum Apicomplexa, con un ciclo de vida indirecto, que oscila entre un
hospedador definitivo y uno intermediario. Las infecciones intestinales se producen en el hospedador definitivo,
y la invasión tisular, en el intermedio. Más 100 especies de Sarcocystis son parásitos en animales domésticos y
salvajes. Muchas de estas infecciones son asintomáticas, particularmente en el hospedador definitivo. Los
humanos son hospedadores definitivos de S. suihominis, que se encuentra en la carne de cerdo y S. hominis que
se detecta en la carne de vacuno. Los humanos pueden convertirse en hospedadores intermediarios de una
variedad de otras especies de Sarcocystis.
El hospedador definitivo se infecta al ingerir parásitos enquistados (sarcoquistes) en el tejido muscular. Los
sarcoquistes son quistes blanquecinos ovalados, cuyo tamaño varía de microscópico a visible. Están repletos de
cientos a miles de bradizoitos. Los bradizoitos se liberan en el intestino del hospedador definitivo, donde
ingresan a la lámina propia y experimentan la gametogonia y forman ooquistes. No existe replicación asexuada
en el hospedador definitivo. Los ooquistes maduran dentro de las células del hospedador y luego son excretados
en las heces. Estos ooquistes ya contienen dos esporoquistes, cada uno de los cuales contiene cuatro
esporozoitos. Es posible que los ooquistes se desintegren y se encuentren esporoquistes en las heces. Los
hospedadores intermediarios contraen la infección a través de la ingesta de ooquistes o esporoquistes. Los
esporozoitos se liberan en los intestinos e ingresan en el torrente sanguíneo. En muchos casos, se multiplican
asexuadamente en las paredes de pequeños vasos sanguíneos antes de invadir el músculo esquelético o cardíaco
o el tejido neuronal, donde forman la pared del sarcoquiste y se multiplican como merozoitos durante varias
generaciones. Los merozoitos finalmente se convierten en bradizoitos dentro de los sarcoquistes. Solamente la
etapa del bradizoito es infecciosa.

Figura 7. Esófago de ovino con macroquistes de Sarcocystis spp.

 Observación Sarcocystis sp. (quiste) en músculo estriado. Dibuje y rotule.
Esporoquistes: elemento ovoide de 10 a 15µm de diámetro. Contiene 4 esporozoitos. Es infectante para
hospedador intermediario.
Quistes: estructura fusiforme o esferoidal, que mide entre 60 µm a varios mm de diámetro. Se ubica en los
tejidos del hospedador intermediario. Son infectantes para el humano. Son designados específicamente como
sarcoquistes y contienen gran cantidad de bradizoitos.

Figura 8-9. Foto en tejido vivo y Foto 10X H-E.

Actividad práctica #2: Identifique las formas parasitarias y la respuesta inmune asociada a los quistes y
describa sus observaciones.
 Actividad de reforzamiento #2:

Complete: Tipo de Ciclo: ________________________

Hospedador intermediario:_______________________
Hospedador definitivo:__________________________
Estado infectante para hospedador intermediario: ____________________
Estado infectante para hospedador definitivo: ____________________
¿Cuál es la principal forma diagnóstica e infectante? ___________________
¿Este parásito es zoonótico? ____________

3.- Trypanosoma cruzi

T. cruzi es un protozoo hemoflagelado, agente etiológico de tripanosomiasis americana (enfermedad de Chagas)
en el humano y animales. Se transmite por chinches del género Triatoma, Rhodnius y Panstrongylus en
América Central y del Sur y en los estados de Texas, Arizona, Nuevo México, California y Oklahoma.
Zarigüeyas, armadillos, ratas, cobayas, gatos, mapaches y monos sirven como reservorios de la infección
natural. En los hospedadores vertebrados, los amastigotes de T. cruzi se multiplican por fisión binaria en las
células del retículo endotelial, células neuronales y células de la glía, y lo que es más importante, en células de
musculatura lisa y cardíaca.
 Figura 10. Ciclo biológico Trypanosoma cruzi
Los amastigotes liberados por la rotura de la célula hospedadora se transforman en tripomastigotes que pasan
a la sangre circulante para invadir otras células o para ser ingeridos por las vinchucas (Triatoma infestans)
cuando éstas se alimentan.

Figura 11. Formas celulares definidas de Trypanosoma cruzi.

Amastigote: es redondeado, de 2µm de diámetro, con un corto flagelo, no emergente. Es la forma de

multiplicación intracelular en los mamíferos.

Trypomastigote: de aspecto fusiforme, mide 20µm de largo. Núcleo central y kinetoplasto ubicado
posterior al núcleo. Del kinetoplasto emerge un flagelo envuelto en una membrana ondulante, que
recorre el parásito y emerge por el extremo anterior.

Los tripomastigotes se multiplican y sufren una metamorfosis en el intestino grueso de las vinchucas
transformándose en epimastigotes que comienzan a multiplicarse y posteriormente se transforman en
tripomastigote metacíclico ubicándose en intestino posterior para ser eliminados finalmente con las heces de la
vinchuca casi a la vez que se alimenta de su hospedador. Los tripomastigotes metacíclicos entran en el
organismo a través de la mucosa oral, nasal o conjuntival, o cuando las heces infectantes de la vinchuca
contaminan las lesiones cutáneas por rascado o rozamiento. Una vez ingresado al hospedero es fagocitado por
macrófagos regionales. También se puede producir la infección a través de la placenta o por transfusiones de
sangre, auto inoculación accidental y alimentaria. La vía lacto génica aún es discutida. En Chile, existen 4
especies de triatominos que pueden infectarse con Trypanosoma cruzi, correspondientes a: Triatoma infestans,
Mepraia spinolai, Mepraia gajardoi, Mepraia parapatrica.
 Figura 12. Vectores triatominos presentes en Chile: Triatoma infestans, Mepraia spinolai, Mepraia gajardoi y
Mepraia parapatrica.

 Observación de Trypanososma cruzi (trypomastigote) en frotis sanguíneo. Identificar, dibujar y

rotular principales estructuras.

Figura 13. Trypanosoma cruzi en frotis sanguíneo y esquema con estructuras morfológicas.

 Observación de Trypanososma cruzi (epimastigotes de cultivo) y amastigotes en músculo cardíaco.

Identificar y rotular.

Figura 14-15. Foto 40X de formas parasitarias cultivadas (izquierda) y en tejido cardiaco (derecha) 100X
H-E.
Actividad práctica #3: Identifique las formas parasitarias y estructuras celulares (núcleo y flagelo).
Describa sus observaciones

Epimastigotes Amastigotes en tejido cardiaco

Actividad de reforzamiento #3:

Complete:
Tipo de Ciclo: ________________________

Formas parasitarias presentes en el artrópodo:

- Forma replicativa ___________________________________________

- Forma infectante ___________________________________________

Formas parasitarias presentes en el mamífero:

- Forma replicativa ___________________________________________
- Forma infectante ___________________________________________

Vías de transmisión: ______________________________________________

_______________________________________________________________

Vectores: _______________________________________________________

Nombre de la enfermedad que produce este parásito:

INVESTIGUE: ¿En qué regiones de Chile podemos detectar esta enfermedad?

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4.- Babesia bigemina
Las especies de Babesia son Apicomplexa que parasitan los eritrocitos de los hospedadores vertebrados,
correspondiente a la única célula infectada de estos hospedadores. La reproducción sexual de estas especies
tiene lugar en el intestino de las garrapatas, y la
esporogonia ocurre en el epitelio de la pared intestinal de la garrapata. La esporogonia se
produce en el hemocele de la garrapata. Los esporozoítos se multiplican en el ovario de la
garrapata desde donde se infectan las larvas a partir de los huevos que eclosionan. Los
esporozoítos se encuentran en un número elevado en las glándulas salivales de las
garrapatas y son inoculados al hospedador cuando éstas se prenden para alimentarse. Este protozoo corresponde
al agente causal de Babesiosis o Piroplasmosis bovina (Fiebre de Texas), una enfermedad caracterizada en su
fase aguda por pirexia (hasta 42 °C), hemoglobinuria, anemia, ictericia y esplenomegalia. Los piroplasmas se
encuentran en parejas en los eritrocitos, que terminan destruyéndose y liberando hemoglobina en el proceso y
dando lugar a las manifestaciones clínicas características. La transmisión de la infección en el ganado vacuno se
produce por la picadura de las garrapatas de un único hospedador, Rhipicephalus (Boophilus) annulatus y
Rhipicephalus (Boophilus) microplus.

Figura 16. Ciclo parasitario de Babesia bigemina.

Los terneros son mucho menos sensibles que el ganado adulto. La mayor susceptibilidad a la infección por las
diferentes especies de Babesia se incrementa con la edad y mucho más tras una esplenectomía. Otros mamíferos
pueden servir como hospedadores, pero la mayoría de las garrapatas de R. annulatus se encuentran en el ganado
bovino. Por otro lado, R. microplus infesta a un amplio abanico de hospedadores. Cuando se trata de R.
microplus, la erradicación de la piroplasmosis es prácticamente imposible con los métodos actuales disponibles.

 Observación de Babesia bigemina (trofozoítos) en frotis sanguíneo. Identificar, dibujar y rotular.

Figura 17. Babesia bigemina en frotis sanguíneo (100X) de bovino.

Actividad práctica #4: Identifique las formas

parasitarias y estructuras celulares.
Describa sus observaciones.
 Actividad de reforzamiento #4:

Complete:
Tipo de Ciclo: ____________________________________________
Hospedador intermediario:___________________________________
Hospedador definitivo:______________________________________
Estadio infectante para hospedador definitivo: ____________________
Patología que causa: ________________________________________
¿Este parásito está presente en Chile?: __________________________