Staphylococcus

 Colque Espejo Araceli
 Hurtado Ancalle Luz Andrea

INTEGRANTES:  Mamani Endara Salma Jhasmine
 Mendoza Perez Paulette
 Paricollo Ancasi Carla Irene
PARALELO: A2
FECHA: 06/09/2022
TITULO
STAPHYLOCOCCUS AUERUS
1. OBJETIVOS
1.1. Objetivo general
 Determinar la presencia o ausencia de Staphylococcus eureus en la
muestra pertinente
1.2. Objetivos específicos

 Controlar y verificar la efectividad de los procedimientos de limpieza y
desinfección, que se hizo para tener resultados efectivos.
 Utilizar distintos metodos, entre estos el uso de pruebas coagulasa y
catalsa para corroborar los resultados obtenidos.
 Interpretar los resultados obtenidos a traves de la observacion de
colonias existentes en el cultivo.
2. MARCO TEÓRICO
Staphylococcus aureus es una especie bacteriana integrada por cocos (de 0,8-1,0 mm
de diámetro) Gram positivos que se dividen en más de un plano, por lo que se agrupan
irregularmente en racimos. Son inmóviles y no forman esporas. Anaerobios
facultativos y catalasa positivos.
Algunas cepas de S. aureus son patógenas para el hombre. Puede producir
infecciones generalizadas además de lo que se conoce como intoxicación
estafilocócica. Ésta es una intoxicación alimentaria resultados del consumo de
alimentos en los que S. aureus se ha multiplicado y producido enterotoxina/as.
La dosis infectiva es alta ya que es necesario un número de al menos 106 UFC/g para
producir cantidad suficiente de enterotoxina para producir la enfermedad en el
consumidor. Es común referirse a las cepas de estafilococos Coagulasa positivas y
DNAsa termoestable positivas como potencialemente productores de enterotoxinas,
aunque no todas las cepas con estas propiedades las producen realmente, sino sólo
un porcentaje de ella, variable con su origen. (Ramos, 2012)
Dado que es un microorganismo presente en la flora normal de los animales de sangre
caliente (más del 50 % de las personas son portadoras de S. aureus en fosas nasales,
garganta, manos, pelo, etc.) y se trata de una especie muy sensible a la acción del
calor y de los desinfectantes, su presencia en determinados niveles en los alimentos
indica higiene defectuosa por mala manipulación. Si, además, los S. aureus aislados
son cepas enterotoxigénicas, suponen un riesgo para la salud.
En esta práctica de laboratorio veremos el método para el recuento en placa de
Staphylococcus aureus Coagulasa positivos basado en la norma ISO 6888.
MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS
 Diluyente: Generalmente, agua de peptona o triptona al 0,1%. Aunque pueden
usarse otros diluyentes dependiendo de las características de la muestra, tal y
como recogen las distintas partes de la norma ISO 6887
 Agar Baird Parker (BP).
Medio altamente nutritivo, en el cual la peptona de caseína y el extracto de
carne constituyen la fuente de carbono y nitrógeno, el extracto de levadura
aporta vitaminas del complejo B, la glicina y el piruvato estimulan el crecimiento
de los estafilococos.
 Caldo cerebro corazón (Brain Heart Infusión: BHI).
 Plasma de conejo con ácido etilendiamino tetraacético (EDTA)
 Plasma de conejo, desecado y titulado, que evita reacciones falsas en la
prueba de la Coagulasa. Este producto se adquiere en casas comerciales.
(PABLO & MARIA, 2018)
CRECIMIENTO TÍPICO DE S. AUREUS EN AGAR BAIRD PARKER
Las colonias típicas de Staphylococcus aureus sobre agar Baird-Parker son redondas,

de bordes lisos, convexas, de 2-3 mm de diámetro, húmedas, brillantes, negras, con
un borde blanco fino, rodeadas de una zona opaca y de un halo claro de 2-5 mm.
FUNDAMENTO
El cloruro de litio y el telurito potásico que forman parte del medio inhiben el desarrollo
de la flora competitiva; el piruvato sódico y la glicocola favorecen el crecimiento de los
estafilococos.
El medio de cultivo es opaco, debido a que se le incorpora emulsión de yema de
huevo. S. aureus sintetiza una lipasa que, al actuar sobre la lipoproteina de la yema de
huevo, produce un aclaramiento alrededor de las colonias. Alrededor de las colonias
se forma también una zona opaca como consecuencia de la formación de un
precipitado de sales de calcio y magnesio, insoluble en ácidos grasos. Esta zona
opaca se hace más visible a partir de las 24 horas de incubación.
El aclaramiento del medio que rodea a las colonias junto con el color negro brillante de
las mismas, son las características típicas más visibles de las colonias típicas.
Las colonias que no presentan ese color negro brillante o que no tienen alrededor un
halo claro de lipolisis son consideradas atípicas y desechadas.
RECUENTO DE COLONIAS SOSPECHOSAS

Después del periodo de incubación, examinar las placas y seleccionar las placas que
contengan hasta 150 colonias típicas de S. aureus (y hasta 300 colonias totales típicas
y no típicas). Para realizar el cálculo se eligen las placas de dos diluciones sucesivas
donde al menos una placa de las seleccionadas contenga un mínimo de 10 colonias
típicas.
A continuación, debemos hacer confirmación/identificación de las colonias
sospechosas contadas.
Fuente: (Cuesta, 2015)

CONFIRMACIÓN DE COLONIAS SOSPECHOSAS
Para confirmar las colonias contadas como S. aureus es necesario
comprobar que un número representativo de ellas (un 10% o un mínimo de 5) son
Coagulasa positivas (es decir que dan un resultado positivo en la prueba de la
Coagulasa) y catalasa positiva.
La Coagulasa es un enzima capaz de desnaturalizar la fibrina del plasma. La mayoría
de las cepas de Staphylococcus aureus patógenas (enterotoxigénicas) producen esta
enzima.
a) PRUEBA DE LA COAGULASA EN TUBO
Constituye la principal prueba que se realiza en los laboratorios microbiológicos

para la identificación de este germen. Es capaz de detectar ambas coagulasas.
Se realiza directamente de una colonia obtenida en la placa de aislamiento,
pero es mejor utilizar un crecimiento de 18-24 h en medio líquido enriquecido
como (BP). La determinación se evidencia mediante la aparición de un coágulo
en el substrato empleado para la identificación, que consiste en plasma animal
o humano.
 Coagulasa positiva. La reacción es positiva cuando el coágulo formado es

firme.
 Coagulasa negativa. La reacción es negativa cuando no se coagula el
plasma.
b) PRUEBA CATALASA
Es una prueba de rutina de la catalasa a temperatura ambiente. En un
portaobjetos se depositan una o dos gotas de agua oxigenada al 30% y se
pone en contacto con ella una colonia de los microorganismos a estudiar.
 Catalasa positiva. La reacción es positiva cuando existe formación de
burbujas.
CÁLCULO Y EXPRESIÓN DE RESULTADOS, MÉTODO DE RECUENTO EN
PLACA
Del número de colonias características/sospechosas que se resiembran, las colonias
que han dado positivo en la prueba de la Coagulasa son las colonias que responden a
los criterios de identificación y, por tanto, se confirman como S. aureus. (Betancourt,
2005)
A partir de los resultados de la confirmación/identificación, se calcula el número de
colonias después de la identificación/confirmación (Σa), según la siguiente expresión:
Finalmente, se calcula el número de Unidades Formadoras de Colonias por gramo o

mililitro (N), según la siguiente expresión:
3. MATERIALES Y EQUIPOS:
TUBOS DE ENSAYO
CAJAS PETRI
GRADILLA
BOLSA ZIPLOC
PIPETA Y PROPIPETA
ASA BACTERIOLOGICA
25g DE MUESTRA DE QUEQUE
AGAR BAIRD PARKER
CALDO PEPTONADO
BALANZA
JERINGA, ALGODON Y ALCOHOL
CENTRIFUGADORA
ESTUFA
4. PROCEDIMIENTO:
PROCEDIMIENTO DE PREPARACION DE LA MUESTRA
Colocar en 2 Pesar 25g Añadir a la

tubos 9 ml de de muestra muestra en la
agua de en una bolsa 225 ml de
peptonada bolsa ziploc agua peptonada
Sacar 1ml del Tomar 1ml de la

Sembrar en 2
tubo 1/100 y mezcla de la
cajas con agar
colocar en el muestra con
baird parker las
segundo tubo agua peptonada
muestras del tubo
1/1000 y y colocarlo en el
1/100 y 1/1000
mezclar tubo marcado
respectivamente
con /100
Revisar los
Llevar las cajas
resultados y
a la estufa a
realizar las
35°C por 48
colonias
hrs
formadas
PROCEDIMIENTO DE OBTENCION DE PLASMA
Retirar el
Realizar la Llevar el tubo plasma del tubo
toma de recolector a la con una
muestra de centrifugadora micropipeta y
sangre por 5min ponerla en un
tubo a refrigerar
5. RESULTADOS
Como no obtuvimos resultados, no hubo recuento de colonias (Nº COLONIAS 0)

Recuento presuntivo x Numero de colonias confirmadas
Recuento S aureus = =0
numero colonias someidas a confirmacion
 Como se dijo no obtuvimos resultados; debido a que no se encontraban las

cajas designadas en el lugar de incubación.
 Debido a la perdida, no vimos si hubo crecimiento o no.
 Pero la mayoría de los grupos que trabajaron este laboratorio (A-1);
tampoco hallaron crecimiento como tal de Staphylococcus aureus en sus
medios.
 Entonces debido a estos pequeños problemas no pudimos observar en si
ningún crecimiento de Staphylococcus aureus.
 Ni tampoco hacer las diferentes pruebas, para asegurar que sean bacterias
Staphylococcus aureus.
6. CONCLUSIONES
Habiendo concluido los procedimientos necesarios para saber si la muestra usada, en

este caso una masa común, no existió ningún tipo de crecimiento en el cultivo por lo
cual determinamos que no hay presencia de Staphylococcus aureus en la muestra
procesada.
7. CUESTIONARIO
1. Qué tipo de alimentos se ven implicados con la presencia de St.
aureus.
Los alimentos más frecuentemente implicados
en toxiinfecciones por. El Staphylococcus
aureus enterotoxigénico es un
microorganismo que se encuentra
frecuentemente en alimentos crudos o cocidos
de origen animal, especialmente en aquellos
que requieren manipulación directa para su
preparación, como es el caso de los alimentos preparados no industriales.
2. Por qué se determina la presencia de la termonucleasa
Las cepas de S. aureus producen una termonucleasa extracelular (TNasa) con
una frecuencia similar a las cepas que producen Coagulasa. El gen nucA que
codifica a la termonucleasa es producido por casi todas las cepas de S.
aureus y es usado como criterio de diagnóstico de esta especie
3. Cuáles son las características de las colonias de St. aureus en el
agar Baird Parker
Las colonias típicas de Staphylococcus
aureus sobre agar Baird-Parker
son redondas, de bordes lisos, convexas, de
2-3 mm de diámetro, húmedas, brillantes,
negras, con un borde blanco fino, rodeadas de una zona opaca y de un halo
claro de 2-5 mm.
4. Por qué adicionamos la emulsión de telurito y yema de huevo al

agar Baird Parker
La glicina, el cloruro de litio y el telurito potásico
actúan como agentes selectivos.
La yema de huevo constituye el sustrato para
determinar la producción de lecitinasa y, además, la
actividad de lipasa.
Los estafilococos producen colonias de color de
gris oscuro a negro debido a la reducción del
telurito; los estafilococos que producen lecitinasa
descomponen la yema de huevo y crean zonas transparentes alrededor de las
colonias correspondientes. Es posible que se forme una zona de precipitación
debido a la actividad de lipasa.
El medio no debe utilizarse para el aislamiento de estafilococos diferentes de S.
aureus.
8. BIBLIOGRIA
BIBLIOGRAFÍA
Betancourt, D. O. (2005). Staphylococcus aureus y su identificación en los laboratorios

microbiológicos. Instituto Superior de Ciencias Médicas Carlos J. Finlay. Centro de
Inmunología y Productos Biológicos CENIPBI. Camagüey, Cuba.
Cuesta, Y. U. (2015). Recuento de Staphylococcus aureus Método de recuento en placa.

http://coli.usal.es/web/demos/demo_microali/Saureus/SaureusPlaca.html.
PABLO, A. P., & MARIA, E. S. (2018). Comparación de tres métodos de recuento de. Instituto de
Servicios de Laboratorios de Diagnóstico e Investigación en Salud, Facultad de Ciencias
Farmacéuticas y Bioquímicas, Universidad Mayor de San Andrés, Av. Saavedra 2224.
Ramos, J. G. (2012). Recuento de Staphylococcus aureus y detección de enterotoxinas

estafilocócicas en queso blanco venezolano artesanal tipo telita expendido en
mercados de la ciudad de Caracas. Caracas Venezuela: Cátedra de Microbiología.
Escuela de Nutrición y Dietética. Universidad Central de Venezuela. Caracas,
Venezuela.

Staphylococcus

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Staphylococcus

Cargado por

Información del documento

Descripción original:

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Staphylococcus

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

 Colque Espejo Araceli

 Hurtado Ancalle Luz Andrea

1.2. Objetivos específicos

Las colonias típicas de Staphylococcus aureus sobre agar Baird-Parker son redondas,

RECUENTO DE COLONIAS SOSPECHOSAS

Fuente: (Cuesta, 2015)

Constituye la principal prueba que se realiza en los laboratorios microbiológicos

 Coagulasa positiva. La reacción es positiva cuando el coágulo formado es

Finalmente, se calcula el número de Unidades Formadoras de Colonias por gramo o

25g DE MUESTRA DE QUEQUE

AGAR BAIRD PARKER

JERINGA, ALGODON Y ALCOHOL

PROCEDIMIENTO DE PREPARACION DE LA MUESTRA

Colocar en 2 Pesar 25g Añadir a la

Sacar 1ml del Tomar 1ml de la

Como no obtuvimos resultados, no hubo recuento de colonias (Nº COLONIAS 0)

 Como se dijo no obtuvimos resultados; debido a que no se encontraban las

Habiendo concluido los procedimientos necesarios para saber si la muestra usada, en

4. Por qué adicionamos la emulsión de telurito y yema de huevo al

Betancourt, D. O. (2005). Staphylococcus aureus y su identificación en los laboratorios

Cuesta, Y. U. (2015). Recuento de Staphylococcus aureus Método de recuento en placa.

Ramos, J. G. (2012). Recuento de Staphylococcus aureus y detección de enterotoxinas

También podría gustarte

Pfad - The Proxy pFad of © 2024 Garber Painting. All rights reserved.