ESCUELA SUPERIOR POLTÉCNICA DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS – CARRERA DE BIOQUIMICA y FARMACIA

MANUAL DEL LABORATORIO DE BIOLOGIA
DOCENTE: Dra. NELLY I. GUANANGA D.

PRÁCTICA No. 3.- IDENTIFICACION DE BIOMOLECULAS

1. DATOS GENERALES:

NIVEL: PRIMERO “A” PERÍODO: octubre 2023 - marzo 2024

GRUPO No. 4
NOMBRES DE ESTUDIANTES CODIGO

FECHA DE REALIZACIÓN: dd/mm/aa FECHA DE ENTREGA: dd/mm/aa

2. OBJETIVOS.

2.1 OBETIVO GENERAL

Conocer y ejecutar pruebas básicas de identificación para hidratos de carbono, lípidos y

proteínas

2.2. OBJETIVOS ESPECIFICOS

 Determinar la presencia de distintas biomoléculas como azúcares reductores, almidón, proteínas
y lípidos en diversas muestras biológicas.
 Demostrar la reactividad de diferentes reactivos con las biomoléculas presentes en muestras
seleccionadas.
 Asociar las características químicas de las biomoléculas con su función en diversos tejidos o
alimentos.
3. INSTRUCCIONES.

Familiarizarse con las instrucciones de la guía, en caso de alguna inquietud debe

preguntar a la docente o la técnica del laboratorio, asegurar la correcta preparación de las
soluciones, y anotar debidamente los reactivos con los que se desarrollara esta práctica.

Es importante que los materiales y envases estén debidamente codificados para cada
prueba, los errores en el etiquetado llevaran a la confusión de los resultados.

Identificar las biomoléculas a través de las reacciones químicas que se producen con los
reactivos preparados, las estructuras y componentes moleculares de las sustancias, y/o
tejidos que, como ya se ha estudiado, están compuestos de biomoléculas.

Observar y anotar para una correcta elaboración del informe confirmando siempre con la
consulta bibliográfica los resultados obtenidos y su análisis.

4. ACTIVIDADES A DESARROLLAR

4.1 MATERIALES Y REACTIVOS.

 Reactivo de Benedict (Femling 7%)  Franela

 Lugol  Cajas petri
 Reactivo de Sudán III  Tubos de ensayo
 Reactivo de Biuret (o TOTAL  Pinzas para tubos de ensayo
 Gradilla
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PROTEIN PLUB REF PROB-5700)  Baño María (o 2 vasos de 1000 mL

Agua destilada
 y 250 mL)
 Glucosa  Pipetas, propipeta
 Sacarosa  Marcador permanente
 Cebolla perla  Mortero y pistilo
 Leche  Estilete y espátula
 Almidón  Detergente
 Huevo  Cepillo para tubo de ensayo
 Papel filtro  Pipetas de pasteur
4.2 PROCEDIMIENTO

Preparar una solución de cada una de las siguientes muestras: agua destilada, glucosa,
sacarosa, cebolla, leche, almidón, albumina.

Test de Benedict

a. Rotular 5 tubos de ensayo (B, G, S, C, L)

b. Con la ayuda de una pipeta, colocar en cada tubo, 2mL de la muestra correspondiente,
según indica la tabla:
TUB MUESTR
O A
B Agua
destilada
G Glucosa
S Sacarosa
C Cebolla
L Leche

c. Agregar 0.5 mL del reactivo de Benedict. Anotar las observaciones respectivas en la tabla
de resultados.
d. Colocar los tubos de ensayo en baño María a 100° C durante dos minutos. Dejar
enfriar y observar la coloración en cada uno de los tubos. Anotar los resultados en la
tabla.

Test del lugol

a. Rotular 6 tubos de ensayo (B, G, A, C, L, P)
b. Con la ayuda de una pipeta, colocar en cada tubo, 1mL de la muestra correspondiente,
según indica la tabla:
TUB MUESTRA
O
B Agua
destilada
G Glucosa
A Almidón
C Cebolla
L Leche
P Pedazo de
papel

c. Agregar 5 gotas de lugol. Anotar las observaciones respectivas en la tabla de resultados

d. Colocar los tubos de ensayo en baño María a 100° C durante dos minutos. Dejar
enfriar y observar la coloración en cada uno de los tubos. Anotar los resultados en
la tabla.

Test de Biuret
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a. Rotular 5 tubos de ensayo (B, G, A, C, L)

b. Con la ayuda de una pipeta, colocar en cada tubo, 1,5mL de la muestra
correspondiente, según indica la tabla:

TUB MUESTRA
O
B Agua destilada
G Glucosa
A Albúmina (clara de
huevo)
C Cebolla
L Leche

c. Añadir 1mL de reactivo de Biuret a cada tubo

d. Observar la coloración en cada uno de los tubos. Anotar los resultados en la tabla.

Test de Sudan III

a. Cortar 6 cuadrados de papel filtro de aproximadamente 5cm x 5cm. El papel debe

encontrarse limpio y seco.
b. Rotular con lápiz los 6 pedazos de papel (B, A, M, C, L y H)
c. Con la ayuda de una pipeta, colocar en cada papel, 1,0 mL de la muestra
correspondiente, según indica la tabla:

TUB MUESTRA
O
B Agua destilada
A Aceite de
cocina
M Mezcla agua y
aceite
C Cebolla
L Leche
H Yema de huevo

d. Poner cada papel sobre una caja petri y añadir unas 4 gotas del reactivo de Sudan III.
e. Esperar 2 minutos y lavar el exceso de colorante con agua. El colorante tiñe de
forma estable y no se elimina por lavado con agua si existe una grasa.
f. Anotar los resultados en la tabla correspondiente

4. RESULTADOS OBTENIDOS

TEST DE BENEDICT
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TUBO MUESTRA DISTRIBUCIÓN RESULTADO

DEL COLOR
CON RELACIÓN
A LA MUESTRA
B AGUA DESTILADA Al añadir leche al
benedict y calentarlo a
cien grados
centígrados su color se
tornó a celeste.

G GLUCOSA Al mezclar glucosa

con el benedict y
calentarlo a cien
grados centígrados se
tornó un color verde
claro.
S SACAROSA Al mezclar sacarosa
con el benedict y
calentarlo a los cien
grados centígrados tu
color fue de color
verde claro.
C CEBOLLA Al mezclar cebolla con
el benedict y
calentarlo a los cien
grados centígrados y
torno un color verde
obscuro.
L LECHE Al mezclar leche con
el benedict y
calentarlo a cien
grados centígrados se
obtuvo un color
blanco.

ANÁLISIS DE RESULTADOS
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PRUEBA DE BENEDICT
La solución de Benedict se utiliza para detectar azúcares reductores, normalmente monosacáridos o
disacáridos. Proporcionará un resultado positivo para los azúcares reductores como la glucosa, la
fructosa, la lactosa, la maltosa y la galactosa.
En química, la reacción o prueba de Benedict identifica azúcares reductores (aquellos que tienen su OH
anomérico libre), como el lactosa, la glucosa, la maltosa, y celobiosa. En soluciones alcalinas, pueden
reducir el Cu2+ que tiene color azul a Cu+, que precipita de la solución alcalina como Cu2O de color
rojo-naranja.

AGUA DESTILADA
Al realizar la combinación de agua destilada y benedict y calentarlo a los cien grados centígrados nos
podemos dar cuenta que su color cambio a celeste, esto nos quiere decir que la reacción fue negativa
indicándonos que no hay presencia de azucares reductores ya que la prueba del benedict nos ayuda a
identificar presencia de azucares reductores.

GLUCOSA
Al realizar la combinación de glucosa y benedict y calentarlo a los cien grados centígrados nos podemos
dar cuenta que su color cambio a verde claro, dando nos cuenta que la reacción fue positiva ya que
cuando se añade el reactivo de Benedict al azúcar reductor, y se aplica calor, el color de la mezcla
cambia a naranja o verde intenso esto no dice que hay abundancia de azúcares reductores.

SACARASA
Al realizar la combinación de sacarosa y benedict y calentarlo a los cien grados centígrados nos
podemos dar cuenta que su color cambio a un verde claro, esto significa que la reacción fue positiva,
aunque en poca cantidad, pero fue positiva ya que el resultado obtenido indica la presencia de menos
azúcares reductores.

CEBOLLA
La mezcla de cebolla y el benedict a los cien grados centígrados nos da una coloración de color verde
escuro dándonos una reacción positiva esto quiere decir que hay presencia azucares reductores aun que
una poca cantidad.

LECHE
Al realizar la combinación de leche y benedict y calentarlo a los cien grados centígrados nos podemos
dar cuenta que su color no cambio mucho ya que fue blanco con un poco de color celeste, esto significa
que la reacción fue negativa ya que la leche no es un carbohidrato.

TEST DEL LUGOL

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ANTES LUGOL LUGOL RESULTAD
TUBO MUESTRA DEL SIN CON O
LUGOL TEMPER TEMPERAT
ATURA URA
B Agua Sustancia Sustancia de un Sustancia de un color
destilada
transparente y color amarillenta amarilla rojiza.
de anaranjada.
consistencia
liquida.
G Glucosa Sustancia Sustancia de un Sustancia de un color
transparente y color amarillenta amarillenta
con una anaranjada. anaranjada.
consistencia
un poco más
densa que el
agua.

A Almidón Sustancia de un Sustancia de un color

Sustancia color café con marron o ocre.
transparente y rojizo.
de
consistencia
liquida.

C Cebolla Sustancia de Sustancia de color

Sustancia color marrón con marrón con un poco
transparente un poco de tintes de tintes
con algunas amarillentos. amarillentos.
partículas de
la cebolla
molida(mínim
os).
L Leche Sustancia
blanquecina Sustancia de Sustancia de color
un poco más color café claro café claro un poco
densa que el un poco anaranjado.
agua. anaranjado.

Pedazo de Sustancia Agua con un Sustancia cambio de

P papel
transparente tinte amarillo color a un amarillo
con el papel claro y el papel anaranjado oscuro y
dentro de la de color ´papel el papel tomo un tono
sustancia. en el agua con un oscuro casi de color
tono un poco negro.
azul oscuro

Reactivo Lugol
El lugol o solución de Lugol es una solución de I2 (1%) en equilibrio con KI (2%) en agua
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destilada. Fue nombrada en honor al físico francés J. G. A. Lugol.

En microbiología, es empleado en la tinción de Gram para retener el colorante cristal violeta. El

I2 entra en las células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta.

Este reactivo reacciona con algunos polisacáridos como los almidones, glucógeno y ciertas
dextrinas, formando un complejo de inclusión termolábil que se caracteriza por ser colorido,
dando color diferente según las ramificaciones que presente la molécula.

El yoduro de potasio es agregado para aumentar la solubilidad del yodo diatómico por formación
del anión triatómico I3-.

Además, se utiliza como antiséptico y en determinación de algunos polisacáridos, como el

almidón o el glucógeno. Frente a la presencia de estos, vira al color negro-morado. (Lugol, s/f)

Prueba del yodo o lugol

La prueba del yodo, es la reacción entre el yodo (presente en el reactivo lugol) y el almidón, que
nos permite detectar la presencia de almidón en algunos alimentos. Esta reacción es el resultado
de la formación de cadenas de poliyoduro (generalmente triyoduro, I3–) que se enlazan con el
almidón en las hélices del polímero. En concreto, es la amilosadel almidón la que se une a las
moléculas de yodo, que se visualiza con un color azul oscuro (púrpura) a veces prácticamente
negro. La amilopectina no reacciona apenas con el yodo. No es por tanto, una verdadera reacción
química, sino que se forma un “compuesto de inclusión” que modifica las propiedades físicas de
esta molécula, apareciendo la coloración azul violeta. En lugar del lugol se puede emplear como
reactivo la povidina yodada, o más comúnmente conocido como “betadine” que se emplea como
antiséptico. Se debe diluir 1/10 (1 gota de betadine por 10 gotas de agua). (Lourdes & Núñez, s/f)

Análisis de resultados

 Almidón: El reactivo de Lugol es una solución de yodo en agua que se utiliza para
detectar la presencia de almidón en alimentos o en experimentos de laboratorio. Cuando
se agrega a una muestra que contiene almidón, se produce un cambio de color
característico que indica la presencia de este polisacárido. Por eso el cambio de color en
la nuestra muestra.

 Papel: Si un papel está impregnado con almidón y se le aplica reactivo de Lugol, se

producirá un cambio de color característico, en este caso el papel contenía almidón por lo
que reaccionó con el reactivo lugol.

 El agua, la leche, la glucosa y la cebolla: Estas muestras no contienen cantidades

significativas de almidón, por lo que no reaccionan con el reactivo de Lugol. En cambio,
adquieren una coloración amarillenta debido al reactivo específico utilizado, que es el
yodo. Conservan el color que se forma al aplicar el reactivo y no presentan cambios.

TEST DE BIURET
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TUBO MUESTRA ANTES DE BIURET DESPUÉS DE BIURET RESULTADO

No posee ningún color Posee una tonalidad celeste

B Agua destilada aparente, la sustancia es claro muy parecido al color
fluida, es transparente y se del Reactivo Biuret, no hay
puede ver a través de ella cambios en su fluidez y posee
un poco de transparencia

No posee color, su Tuvo un cambio de color a un

G Glucosa consistencia es más espesa durazno anaranjado, ya no
en comparación al agua y posee transparencia y su
se puede observar a través consistencia se mantiene
de la sustancia igual
Posee un tono ligeramente Tuvo un cambio de color a
A Albúmina amarillento, su consistencia violeta intenso solo en la
es pesad y posee burbujas parte superior, mientras que
de aire en su superficie la parte inferior conserva su
color original

No posee color visible, su Tuvo un cambio de color a

C Cebolla consistencia es fluida muy uno amarillo intenso, ya no
parecida al del agua posee transparencia y su
destilado y posee consistencia no presenta
transparencia variación
De un color blanquecino, Tuvo un cambio de color a
L Leche no posee transparencia y su uno violeta pálido, pero se
consistencia es un poco más puede apreciar de forma clara
pesada que la del agua toques blancos en toda la
sustancia, sobre todo en su
superficie y su parte inferior
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DOCENTE: Dra. NELLY I. GUANANGA D.

TEST DE SUDAN
TUBO MUESTRA DISTRIBUCIÓN DEL
COLOR CON RELACIÓN A RESULTADO
LA MUESTRA
B Agua Su coloración se dio de tono
Destilada rosado pálido no hay muestra de
ninguna burbuja lo cual llega a
ser característico de una muestra
negativa
A Aceite de Su coloración es un rojo intenso
cocina pero no homogénea y se observó
que presenta burbujas lo cual
indica que es una prueba
positiva
M Mezcla de Presenta un color rojo disperso
agua y aceite con la presencia de burbujas a
causa de la mezcla del agua y
aceite.

C Cebolla Su coloración es un rojo pálido,

se encuentra casi homogéneo la
muestra.

L Leche Se observa un color rojo pálido,

he indica la presencia de lípidos

H Yema de Su coloración es café pálido y

Huevo en cuanto a su mezcla con el
reactivo se encuentra seca

Análisis de resultados
El Sudán III es un colorante que se utiliza para detectar específicamente las grasas,
porque es insoluble en agua y en cambio es soluble en las grasas. Al ser de color rojo,
cuando se disuelve tiñe las grasas de color rojo anaranjado. (Castañeda, 2021)
 Agua destilada: En este caso es muy especial ya que el agua no tiene la presencia de
lípidos ni grasas es por ello que el sudan no actúan en el agua destilada
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 Aceite de cocina: El Sudán III es un colorante lipófilo es decir soluble en grasas, Se

trata de un colorante rojo que tiene una alta afinidad por lípidos, grasas, triglicéridos y
ceras, por eso este reactivo tiñe el aceite. (Jáuregui, 2012)
 Mezcla de agua y aceite: el sudan actúa por separado ya que es una mezcla heterogénea
y cuando removemos el agua y el aceite, se forman burbujas
 Cebolla: No contiene grasa ni colesterol. Destaca la cantidad y la calidad de la fibra
dietética en un 2% aproximadamente. Se trata de fibra soluble, por lo que el sudan no
tiene ninguna reacción. (Sant, 2019)
 Leche: El sudan III tiene una alta afinidad por lo cual se une a este tipo de sustancias
químicas de forma no covalente (Castañeda, 2021)
 Yema de Huevo: Este si contiene grasas saturadas, su aporte graso es fundamentalmente
de ácidos grasos insaturados.

5. CONCLUSIONES

 Confirmación de la presencia de azúcares reductores (glucosa, sacarosa) en algunas muestras

como cebolla y leche.
 Evidencia de la presencia de almidón en muestras de almidón puro y papel, contrastando con
muestras como agua, leche y glucosa que carecen de esta biomolécula.
 La prueba de Biuret permitió identificar la presencia de proteínas en albúmina (clara de huevo) y
cebolla.
 El test con Sudan III reveló la presencia de lípidos en muestras como aceite de cocina, yema de
huevo, y leche.

6. RECOMENDACIONES

 Realizar pruebas adicionales para confirmar los resultados obtenidos, especialmente en muestras
con resultados mixtos o poco claros.
 Incluir estándares conocidos de las biomoléculas para comparar y validar los resultados
experimentales.
 Mantener un registro minucioso y detallado de las condiciones experimentales y las
observaciones para una mayor precisión en los análisis.
 Complementar los resultados con información de fuentes científicas para una interpretación más
sólida y amplia de los hallazgos.

7. BIBLIOGRAFIA

Lugol. (s/f). Quimica.es. Recuperado el 26 de noviembre de 2023, de

https://www.quimica.es/enciclopedia/Lugol.html
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MANUAL DEL LABORATORIO DE BIOLOGIA
DOCENTE: Dra. NELLY I. GUANANGA D.

Lourdes, D., & Núñez, A. (s/f). PRÁCTICAS DE LABORATORIO. Uca.es. Recuperado el 26 de

noviembre de 2023, dehttps://rodin.uca.es/bitstream/handle/10498/20933/PR%C3%81CTICAS
%20DE%20LABORATORIO.pdf?sequence=1&isAllowed=y

Castañeda, A. (2021). Fundación Universitaria de Ciencias de la Salud. Obtenido de

COMPARACIÓN DE LAS COLORACIONES NILE-RED Y SUDÁN III PARA LÍPIDOS :
https://repositorio.fucsalud.edu.co/bitstream/handle/001/1947/Comparaci%C3%B3n%20de%20las
%20coloraciones%20NILE-RED%20Y%20SUD%C3%81N%20III%20para%20l%C3%ADpidos
%20en%20Caenorhabditis%20elegans.pdf?sequence=1&isAllowed=y

Jáuregui, Y. (2012). Redalyc.org. Obtenido de VALORES NORMALES DE LA PRUEBA

SUDAN III: https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=367937043005

Sant, J. (01 de Marzo de 2019). barcelona Hospital de barcelona . Obtenido de Composición

nutricional de la cebolla: https://metabolicas.sjdhospitalbarcelona.org/consejo/cebolla

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DRA. NELLY GUANANGA D.
DOCENTE DE BIOLOGIA