Tatiana Chantada Torres Enero-2024

EJERCICIOS MICROBIOLOGÍA TEMA 5

1. Explica en qué se basan las pruebas bioquímicas y di qué características

principales debe cumplir un cultivo al que se van a practicar este tipo de pruebas.

Las pruebas bioquímicas permiten determinar características metabólicas de las bacterias.

Existe una gran variedad de pruebas químicas que pueden valorar aspectos diversos del
metabolismo bacteriano y que son claves para la identificación fenotípica.

Para llevar a cabo pruebas bioquímicas es necesario utilizar un cultivo puro y fresco que no
tenga más de 18-24 h, tanto en pruebas manuales como cuando se usan las galerías
comerciales. Debemos utilizar también cultivos indicados para las pruebas a realizar y
trabajar siempre en condiciones de asepsia, para evitar contaminaciones que puedan
falsear los resultados aplicando métodos conocidos y reproducidos para que los resultados
se puedan considerar válidos.

2. Hay dos pruebas rápidas que valoran la presencia de enzimas relacionadas con la
respiración. Di cuáles son y explica cómo se hacen y qué significan los positivos y
negativos en estas pruebas.

Las dos pruebas rápidas que valoran la presencia de enzimas relacionadas con la
respiración son la prueba de la catalasa y la prueba de la oxidasa.

Prueba de la catalasa
Las bacterias aerobias y anaerobias facultativas sintetizan catalasa. La catalasa hidroliza el
peróxido de hidrógeno formando agua y oxígeno gaseoso; la liberación del oxígeno
gaseoso hace que se formen burbujas. La prueba consiste en añadir peróxido de hidrógeno
a una colonia bacteriana y observar si se forman burbujas.

- Procedimiento: Depositar una colonia sobre un portaobjetos, añadir una gota de

solución de peróxido de hidrógeno al 30% y esperar 5 segundos, hacer una lectura:
● Si se forman burbujas las bacterias catalasa positiva.
● Si no se forman burbujas la bacteria catalasa negativa.

Prueba de la oxidasa
Las bacterias aerobias y algunas anaerobias facultativas sintetizan citocromooxidasa. Para
detectar si lo hacen se usa fenilenendiamina, un compuesto que la enzima, en presencia de
oxígeno, oxida para formar indofenol que es un compuesto de color violeta.
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- Procedimiento: Disponer del reactivo que se presenta en tiras de papel absorbente

con una zona reactiva y depositar una colonia sobre dicha zona. Frotar la colonia
sobre la zona reactiva con un asa. Esperar 10-30 segundos y hacer la lectura:
● Zona de reacción de color azul violeta azulado: la bacteria es oxidasa
positiva.
● Zona de reacción de color rosado o si cambio de color: la bacterias oxidasa
negativa.

3. Di qué información aporta las siguientes pruebas sobre el metabolismo bacteriano:

a) Prueba de oxidación-fermentación: Se valora si la bacteria tiene un metabolismo

oxidativo o fermentativo.
b) Prueba de la ONPG: Permite saber si la bacteria es capaz de fermentar la lactosa.
Se valora si la bacteria sintetiza la enzima beta-galactosidasa, que hidroliza la
lactosa para formar galactosa y glucosa.
c) Prueba de Voges Proskauer: Se determina la capacidad de una bacteria para
fermentar la glucosa por vía butanodiólica.
d) Prueba del rojo de metilo: Determinar la capacidad de una bacteria de fermentar la
glucosa por la vía ácido-mixta, que provoca la fermentación de ácido.

4. ¿Qué función tiene el azul de bromotimol en la prueba of?

Añadimos el azul de bromotinol, que es un indicador de pH, para verificar si vira el medio
de verde a amarillo lo que nos indicaría que ha aumentado la acidez del medio.

5. Explica cómo se hace la prueba del rojo metilo y cómo se interpretan los
resultados.

Para realizar la prueba de rojo de metilo debemos suspender un inóculo en el medio de

cultivo MRVP (caldo rojo de metilo) y mezclar por rotación. Después deberemos incubar
durante 24-48 horas a 35 más o menos 2ºC en aerobiosis. Transferimos 5ml de cultivo a un
tubo y añadimos 5 gotas de solución indicadora de rojo de metilo y realizamos la lectura:
● Si es un medio de color rojizo: la bacteria es positiva a fermentación de glucosa por
la vía ácido-mixta.
● Si es un medio de colores amarillento: la bacteria es negativa a fermentación de
glucosa por la vía ácido-mixta.
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6. ¿Por qué la prueba de fermentación de azúcares al medio se vuelve amarillo en

caso de haber fermentación?

El medio se vuelve amarillo cuando se produce fermentación porque la bacteria fermenta el

carbohidrato que contenía el tubo y esta produce gas.

7. Explica que se debe observar para obtener los resultados de una prueba tsi y qué
información aporta cada observación.

● Si el pico es rojo y el fondo es amarillo quiere decir que la bacteria solo fermenta la
glucosa.
● Si el pico es amarillo y el fondo es amarillo quiere decir que la bacteria fermenta
glucosa, lactosa y/o sacarosa.
● Si el pico es rojo y el fondo es rojo la bacteria no es fermentadora.
● Si se produce una división del medio la bacteria produce gas.
● Si se produce un precipitado negro en la base del tubo la bacteria produce ácido
sulfhídrico.

8. ¿Para qué prueba se usa agar citrato de simmons? ¿Cómo se realiza esta prueba y
qué información proporciona?

Utilizamos agar citrato de Simmons en la prueba de utilización de citrato. Para realizar esta
prueba debemos realizar una siembra por agotamiento en la superficie de haber citrato de
Simmons inclinado. Este medio contiene citrato de sodio y azul de bromotimol como
indicador de pH. después incubamos durante 24 horas a 35 más o menos 2ºC en aerobiosis
y realizaremos una lectura:
- Si se presenta un color azul intenso quiere decir que la bacteria es citrato positiva.
- Si no se produce ningún cambio de color y e medio permanece de color azul
grisáceo: la bacteria es citrato negativa.

9. Di qué valoran las pruebas de la hidrólisis del hipurato, de la hidrólisis de la

esculina y del camp, y qué utilidad tienen estas pruebas.

1. Prueba de hidrólisis del Hipurato: Valora si la bacteria sintetiza la enzima hipuricasa.

La hipuricasa hidroliza el hipurato de sodio a ácido benzoico y glicina. Para
determinar si se produce esta hidrólisis se utiliza un indicador de la reacción, la
nihidrina, que cambia de color en presencia de glicina.
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2. Prueba de la hidrólisis de la Esculina: Se utiliza para la identificación presuntiva de

estreptococos del Grupo D.
3. Prueba del CAMP: Se usa para determinar la capacidad de una bacteria de
sintetizar una proteína conocida como factor CAMP, una sustancia extracelular
producida por estreptococos del grupo B y algunas cepas de Listeria, que aumenta
la lisis de los glóbulos rojos por beta-lisina estafilocócica en cultivos en agar sangre,
lo cual hace que se forme un halo transparente alrededor de las colonias.

10. Describe el procedimiento que se aplica en la prueba de la ureasa. ¿Por qué se

produce un cambio de color en los resultados positivos?

En primer lugar debemos inocular una o dos colonias en un medio con urea e indicador de
pH. Los medios más utilizados son el caldo urea de Stuart y el agar urea de Christensen en
un tubo inclinado. Incubar durante cuatro cuarenta y ocho horas y realizar una lectura:

- El color fucsia significa que la bacteria es ureasa positiva.

- Sin cambio de color la bacteria es ureasa negativa.

Se produce un cambio de color en los resultados positivos porque la ureasa degrada la urea
liberando amoniaco, este último alcaliniza el medio y para detectar esta reacción utilizamos
un indicador de pH que vira a rosa intenso cuando el pH aumenta.

11. ¿Por qué la prueba de la descarboxilasa requiere el uso de dos indicadores? ¿Qué
detecta cada uno de ellos?

La descarboxilación es una reacción anaeróbica catalizada por descarboxilasas. La

detección de la reacción se produce a partir de los cambios de pH que se producen pero en
este caso requerimos dos indicadores:

1. Un indicador que vire en valores ácidos de pH (rojo de cresol), ya que lo primero que
ocurre es una fermentación de la glucosa que produce una acidificación del medio.

2. Un indicador que vire en valores básicos de pH (púrpura de bromocresol), ya que la

acidificación del medio activa las descarboxilasas, lo que provoca la formación de
aminas, que elevan el pH.
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12. ¿Qué permite detectar la prueba de la coagulasa? ¿Cómo se manifiesta el

resultado positivo en esta prueba?

Esta prueba permite determinar la capacidad de la bacteria para coagular el plasma por la
acción de la coagulasa.

El resultado positivo en esta prueba se manifiesta cuando se observa un coágulo visible si

no se observa un coágulo la bacteria es coagulasa negativa, en este caso deberíamos
volver incubar hasta las 24 horas pero a 22.25 grados centígrados y repetir la lectura.

13. Di qué tipo de hemólisis se pueden detectar con la prueba de la hemolisina y

describe la forma en que se visualizan.

Con la prueba de la hemolisina, se pueden detectar los siguientes tipos de hemólisis:

1. Hemólisis alfa: las colonias quedan rodeadas por un halo de color verdoso. Se debe
a una hemólisis parcial.
2. Hemólisis beta: las colonias quedan rodeadas por un halo transparente. se debe a
una hemólisis total.
3. Hemólisis gamma (no hemólisis): no se observan cambios en el agar.

14. Cita dos pruebas de sensibilidad que se pueden aplicar a muestras de

hemocultivo en la que se observan cocos grampositivos.

Dos pruebas de sensibilidad que se pueden aplicar a muestras de hemocultivo en la que se

observan cocos grampositivos son la prueba de solubilidad en bilis y la prueba de
crecimiento en caldo hipersalino.

15. Di si las siguientes afirmaciones son verdaderas o falsas y explica tu respuesta

A) Una bacteria anaerobia facultativa puede dar positivo a catalasa.

Verdadero.

B) Las bacterias anaerobias estrictas sintetizan citocromoxidasa. Falso.

Son las aerobias y algunas anaerobias facultativas.
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C) La prueba OF permite saber si la bacteria es aerobia o anaerobia.

Verdadero. Dependiendo del color que se produzca o mantenga tanto en el
tubo sin cubrir como el tubo cubierto, diferenciamos entre aerobia estricta,
anaerobia facultativa, anaerobia estricta…

D) La prueba de la ONPG permite saber si la bacteria es capaz de

fermentar la glucosa. Falso. Nos permite identificar si la bacteria es capaz
de fermentar lactosa.

E) Para probar si la bacteria es capaz de fermentar varios carbohidratos se

puede usar la prueba de la ONPG. Falso. Permite saber si la bacteria es
capaz de fermentar la lactosa.

F) La prueba del agar de Kligler es una prueba combinada que se usa para
la diferenciación de las enterobacterias. Verdadero.

G) Para identificar el tipo de respiración anaerobia que tienen las bacterias

se puede usar la prueba de reducción de nitratos. Verdadero.

16. Explica en qué consiste las galerías de pruebas bioquímicas comerciales.

Estos sistemas consisten en una placa con celdillas identificadas según la prueba que se
desarrolle en ellas y que contienen un sustrato específico para esta prueba. Consiste en
inocular cada celdilla e incubar el tiempo indicado, en las condiciones que correspondan.
Los resultados de las pruebas se expresan de forma numérica siguiendo las instrucciones,
y con todos ellos se obtiene un código numérico. utilizando este código se identifica la
bacteria.

17. Di que es un serotipo o serovar.

Es un microorganismo infeccioso que se puede clasificar a partir de los antígenos que

presentan su superficie celular.
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18. Explica brevemente en qué consisten las pruebas serológicas aplicadas a la

identificación de microorganismos.

En este caso se habla de diagnósticos serológicos: Basados en la detección en el suero del

paciente de anticuerpos específicos para los antígenos de un determinado microorganismo
patógeno, lo cual permite identificarlo.

19. Se produce una infección por una bacteria que no había sido identificada
anteriormente se podrá hacer un diagnóstico mediante métodos genotípicos explica
tu respuesta.

La técnica genotípica se basa en secuenciar el genoma o una parte de él que sea

significativa y comparar la secuencia obtenida con las que están almacenadas en bases de
datos válidas, para detectar coincidencias que permitan identificar a qué microorganismos
pertenecen. Por lo tanto, al tratarse de una bacteria que no había sido identificada
anteriormente no podríamos realizar un diagnóstico mediante métodos genotípicos ya que
no existiría ninguna secuencia obtenida almacenada en las bases de datos válidas.

20. ¿Qué valoran los equipos maldi-tof? ¿Cómo expresan los resultados?

Estos equipos son un tipo de espectrofotómetros de masas puntos por lo tanto, emiten un
rayo láser sobre la muestra, lo que provoca que esta emita partículas, que son captadas por
un detector. El patrón de dispersión de las partículas es característico de cada
microorganismo, así como logramos comparar el espectro obtenido con los espectros de
referencia que tienen almacenado el equipo y se puede saber en pocos minutos que
microorganismo está presente en dicha muestra.

El software muestra en una tabla el resumen que contiene la información de todos los
pocillos que componen el proyecto. Puesto que cada pocillo se ha asociado previamente a
una muestra, el resultado se presenta con la denominación que se haya dado a cada
muestra. Para cada pocillo aparece una puntuación que indica el grado de correlación que
hay entre el espectro obtenido y un espectro almacenado en la biblioteca que se relaciona
con dicho microorganismo.
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21. ¿Alguno de los mecanismos de acción de los antibióticos es ineficaz frente a los
micoplasmas? ¿Por qué?

La carencia de pared hace que sean resistentes a todos los antibióticos que actúan
bloqueando la síntesis de la pared celular, como los betalactámicos.

22. Muchas bacterias son capaces de sintetizar betalactamasas ¿Sobre qué

antibióticos actúa esta enzima? ¿Qué mecanismo de acción tiene estos antibióticos?

Inactivan a los antibióticos betalactámicos. Los antibióticos betalactámicos inhiben la

síntesis de la pared celular y constituyen la familia más numerosa de antibióticos. Destacan
entre ellos los derivados de la penicilina, las cefalosporinas y los carbapenémicos.

23. Las tres bacterias que la oms incluye dentro del grupo de prioridad crítica en
cuanto a su resistencia a antibióticos son gramnegativas ¿Las bacterias
gramnegativas tienen alguna característica que haga que de forma general sea menos
sensibles a la actuación de ciertos antibióticos?

La mayoría de las bacterias multirresistentes son gramnegativas, ya que la estructura de su

pared dificulta que los antibióticos puedan atravesarla.

24. Si una persona se automedica con un antiinflamatorio o con un somnífero puede

sufrir de forma individual efectos negativos. Si se automedica con un antibiótico está
grabando un problema colectivo. Explica estas afirmaciones.

La automedicación con antiinflamatorios o somníferos puede tener consecuencias

principalmente a nivel individual, mientras que la automedicación con antibióticos puede
tener implicaciones más amplias y afectar a la salud pública en general al contribuir a la
resistencia bacteriana.

25. Explica en qué consiste el método de difusión en disco y di cómo se expresan los
resultados.

Este método se basa en colocar uno o varios discos de papel de filtros impregnado con
concentraciones conocidas de antibióticos sobre una placa previamente inoculada con el
microorganismo objeto de estudio.
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Al entrar en contacto con la superficie húmeda de agar, el antibiótico se difunde radialmente.

A medida que la distancia al disco incrementa, la concentración de antibióticos disminuye,
formándose así un gradiente de concentración.

Un diámetro de inhibición de 25-30 mm corresponde a una cepa sensible al antibiótico

testado, en cambio, los diámetros de inhibición inferiores a 15 mm corresponden a cepas
resistentes.

26. Di qué es la concentración mínima inhibidora y cita los métodos por los cuales se
puede obtener este parámetro.

La concentración mínima inhibidora es la concentración mínima de antibiótico que, en

condiciones normalizadas, es capaz de impedir el crecimiento de una determinada cepa
bacteriana.

Los principales métodos fenotípicos cuantitativos por los cuales se puede obtener este
parámetro, son los métodos de difusión y los métodos de dilución.