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Descripción del diagrama de flujo descrita por Cornejo (2011)
 Recolección de materia prima: flores de mastuerzo de colores anaranjado, rojo

y amarillo
 Troceado: De forma manual; se separaron todos los pétalos del tálamo y demás
estructuras de las flores.
 Secado: Se realizó un secado a temperatura ambiente (14 - 16 °C) por 5 días y
en ausencia de luz; distribuyendo los pétalos en una superficie lo más amplia
posible, (figura 15).
 Pulverizado: Se pulverizó en una licuadora Waring blender de acero inoxidable.
 Almacenamiento; Este material se almacenó en bolsas de polietileno con cierre
hermético previamente se remplazó el oxígeno con gas nitrógeno.
 Pesaje; Para la extracción de carotenos se pesó 1 g ± 0.01 de cada muestra,
que luego son colocados en botellas de vidrio color ámbar.
 Extracción: Se adicionó 20 mL de solvente de extracción; tabla 7, se dejó
macerar en oscuridad por 24 h. a T° ambiente (14 – 16 °C).
Tabla 7: solventes de extracción

SOLVENTE
1 Éter de petróleo
2 Cloroformo
3 Éter de petróleo – cloroformo (50:50)
 Filtrado: Con papel wathman N° 4 en tubos de ensayo debidamente forradas con
cinta aislante, se realizó cambio de solvente a la parte sólida y se dejó en
maceración por 48 horas más, adicionando la misma cantidad de solvente de
extracción del inicio. Al finalizar se recolecto ambos extractos para su posterior
uso.
 Concentrado: En un rota evaporador a 30 °C con 400 rpm a 600 mbar por 1 min
hasta obtener 2 mL de extracto concentrado, luego se adicionó 10 mL de
solvente de extracción.
 Mezclado 1: Se enrazó a 12,5 mL con el mismo solvente de extracción
representado como V (volumen inicial)
 Mezclado 2: se adicionó V/2 de solvente en una fiola debidamente acondicionada
y se dejó reposar por 30 min.
 Mezclado 3: se adicionó agua V/2, se agito en un bortex
 Decantado: se decantó las muestras con la finalidad de separar los carotenoides
de otras sustancias dejando en reposo por 20 min.
37
 Cuantificación: Se cogió una alícuota de 0.01 mL y se diluyo con 2 mL del mismo
solvente de extracción, se lectura en espectrofotómetro a una longitud de onda
de 470 nm y se determinó el mejor solvente de extracción. Las absorbancias
obtenidas son reemplazadas en la ecuación de la curva estándar del β caroteno
el cual se obtuvo por el método descrito por Talcott y Howard (1999) mencionado
en Benjammou, N. et al, (2013)
Elaboración de la curva estándar del β caroteno:
Se basa en la extracción en medio apolar y con un antioxidante (BHT), de tal

forma que la concentración pueda ser determinada por medición
espectrofotométrica. El procedimiento es el siguiente:
En condiciones de oscuridad, se pesó 2g de estándar (β caroteno) y se adiciono
20 mL de una solución de acetona-etanol en la proporción 1:1, que contiene
además 200 mg/L de solución de BHT, hasta una consistencia uniforme. Se usó
el vaso con la menor cantidad posible de solvente.
Se filtró la mezcla usando papel whatman Nº1 y se lavó el filtro con el solvente
hasta que no se aprecie cambio de color.
Se enrasó el filtrado a un volumen conocido con el solvente (V). Se transfirió la
solución a un Erlenmeyer y se adicionó un volumen conocido de hexano
(V1=V/2) luego de lo cual se agitó vigorosamente. Se dejó que la solución se
estabilice por 30 minutos, se añadió agua destilada y se agitó. Luego se dejó
reposar por 20 minutos para que se produzca la separación de fases.
Se tomó una alícuota de la fase de hexano y se leyó al espectrofotómetro a 470
nm, usando como blanco el hexano. Si la absorbancia fue mayor a 0,7, se diluyó
la muestra con hexano y se procedió a leer nuevamente.
El contenido de carotenoides se calculó utilizando una curva estándar de b-
caroteno/100 g de tejido. La curva estándar obtenida fue:
𝑌 = (0,8939𝑋) + 0,0131
El contenido de carotenoides se calculó con la ecuación:
𝑉1
𝑌 = ((0,8939(𝐴470 𝑛𝑚 )) + 0,0131) (100)(10)𝐹𝑑
𝑊
Donde:
W: gramos de muestra.
V1: volumen (4 en mL) de hexano
38
peróxidos, entre otros. Cornejo (2011) indica que debido a estos factores es
recomendable realizar la extracción de carotenoides en ausencia de luz,
oxígeno (en una atmósfera artificial de nitrógeno u otro gas inerte) y a
temperatura ambiente o menor.
B. Identificación de carotenos, cromatografía de capa fina
Para la identificación de carotenoides se realizó pruebas del tipo de solvente a

usar como el mejor eluyente, para ello se realizaron las mezclas que se describe
en la tabla 27, encontrando a éter de petróleo y benceno en la proporción de
0.4:3.6 respectivamente; como mejor eluyente
Tabla 27: Mezclas para eluyente
N° Solventes Proporción
1 Éter de petróleo; acetona 2.8 – 1.2
2 Éter de petróleo; acetona 2–2
3 Hexano; acetona 2.8 – 1.2
4 Acetona; metanol 2–2
5 Acetona; metanol 2.67 – 1.33
7 Acetona; metanol; agua 2.66 – 0.95 – 0.19
8 Éter de petróleo; acetona 3–1
9 Éter de petróleo; hexano; acetona 2-1–1
10 Éter de petróleo; hexano; acetona 1 – 2.5 – 1
11 Éter de petróleo; benceno 0.4 – 3.6
Figura 35: Muestras eluidas con éter de petróleo y benceno (0.4 – 3.6)
60
Tabla 29: Carotenos encontradas en pétalos de color anaranjado.
CAROTENOS ENCONTRADOS
PLACA
α-caroteno β-caroteno ϒ-caroteno ε-caroteno Licopeno
A X X
Cloroformo
B X
A X X
Éter de petróleo
B X X
Cloroformo: éter A X X
de petróleo B X
Tabla 30: Carotenos encontradas en pétalos de color amarillo.
PLACA
A X X X
Cloroformo
B X X X
A X X X
Éter de petróleo
B X X
Cloroformo: A X X X
éter de petróleo B X
Tabla 31: Carotenos encontradas en pétalos de color rojas.
PLACA
A X
Cloroformo
B X
Éter de A X X X X
petróleo B X X X X
Cloroformo: A X X
éter de petróleo B X X
1 2
Figura 36: Placas con extracto; cloroformo A (1) visto con luz blanca y A (2)
con uv-visible
62

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 Recolección de materia prima: flores de mastuerzo de colores anaranjado, rojo

Tabla 7: solventes de extracción

Elaboración de la curva estándar del β caroteno:

Se basa en la extracción en medio apolar y con un antioxidante (BHT), de tal

El contenido de carotenoides se calculó con la ecuación:

B. Identificación de carotenos, cromatografía de capa fina

Para la identificación de carotenoides se realizó pruebas del tipo de solvente a

Tabla 27: Mezclas para eluyente

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