Cinética enzimática

Sofia Parra-Gutiérrez (1), Katterin L. Rodríguez-Garzón (1), Luisa F. Sánchez-Santos (2)

(1) Facultad de Ciencias, Programa Microbiología industrial, Pontificia Universidad, Bogotá,
Colombia. (e-mail: parrags@javeriana.edu.co; ro.katterin@javeriana.edu.co).
(2) Facultad de Ciencias, Programa Bacteriología, Pontificia Universidad, Bogotá, Colombia.
(e-mail: Lf_sanchezs@javeriana.edu.co).

Elaborado oct., 2023; Versión final nov., 2023

Resumen

Las enzimas son proteínas especializadas que actúan como catalizadores biológicos, como la
peroxidasa que cataliza reacciones de oxido-reducción (EC1) la cual se trabajara en este
laboratorio. Para esto se empezó preparando la extracción de la enzima que se encuentra en el
nabo, después se agregó esta enzima en un tubo junto a 6mL de agua, después se preparó otro tubo
que contenía agua, Guayacol y H2O2 al 0.1%, después se mezclaron los dos tubos y se contabiliza
el tiempo, visualizando los colores que se den a 0, 1, 2, 3, 4 y 5 minutos a partir de una escala de
colores. Después se repite el proceso con diferentes tipos de pH 3, 4 5, 6, 7 y 8 nuevamente
asignando un valor a partir de la escala de colores. Por último, se repitió el proceso, pero esta vez
a distintas temperaturas, 0° C (hielo), 40 °C, 60 °C y se le asigno un valor según la coloración que
presentaba la enzima.

Palabras clave: pH, temperatura, catalizar, oxido-reducción, tiempo.

Abstract:
Enzymes are specialized proteins that act as biological catalysts, such as peroxidase that catalyzes
oxide-reduction reactions (EC1) which will be worked on in this laboratory. To do this, we began
by preparing the extraction of the enzyme found in the turnip, This enzyme was then added in a
tube with 6mL of water, then another tube containing water, Guaiacol and 0.1% H2O2 was
prepared, then the two tubes were mixed and the time is counted, displaying the colors given at 0,
1, 2, 3, 4 and 5 minutes from a color scale. The process is then repeated with different types of pH
4, 5, 6, 7 and 8, again assigning a value based on the color scale. Finally, the process was repeated,
but this time at different temperatures, ice, 40°, 60° and a value was assigned to determine its color.

Keywords: pH, temperature, catalyze, oxide-reduction, time.

Introducción
La cinética enzimática es una rama de la bioquímica que nos permite comprender el
comportamiento de las enzimas, las cuales son las catalizadoras biológicas que tienen un gran
papel como reguladoras en procesos metabólicos en los seres vivos. En el laboratorio se llevó a
cabo el experimento para examinar la actividad enzimática, que en este caso fue la enzima
peroxidasa específicamente se hizo la extracción de esta del nabo. La peroxidasa cataliza la
descomposición del peróxido de hidrogeno (H2O2) en agua (H2O) y oxigeno (O2), por lo tanto,
la peroxidasa actúa como un catalizador en esta reacción, acelerando significativamente la
velocidad a la que el peróxido de hidrogeno se descompone en agua y oxígeno. Por otro lado, la
actividad enzimática es influenciada por una serie de factores que pueden afectar tanto la velocidad
como la eficiencia de las reacciones catalizadas por las enzimas, alguno de los factores que suelen
influenciar la actividad de la enzima son, la temperatura, ya que las enzimas suelen tener una
temperatura optima a la cual funcionan con mayor eficiencia, y cambiar su temperatura hará que
la actividad enzimática desnaturalice la enzima, el pH es otro factor que influencia la actividad
enzimática ya que este es el entorno en el que opera la enzima, y cada enzima tiene un rango de
pH optimo con el que funciona mejor, la concentración del sustrato es un factor que determina la
actividad en la enzima ya que este cada que aumenta la concentración la velocidad de la reacción
enzimática también aumenta, también los activadores son un factor importante ya que estos son
compuestos que pueden cambiar la forma de la enzima y hacer que esta se vuelva más activa, y las
coenzimas son compuestos que a veces las enzimas las requieren para funcionar de manera correcta
ya que pueden llegar a ser necesarios para la catálisis enzimática, entre otros factores que
influencian en la actividad enzimática. (Jeremy M. Berg et al., 2007)

Desarrollo experimental

En la primera sección del laboratorio de cinética enzimática se comenzó por la extracción de la

enzima, para esto se preparó un buffer de extracción con 150 ml de Fosfato monobásico de sodio 0.1
M y 150 ml de fosfato dibásico de sodio 0.1M, después se mide el pH del buffer de extracción con un papel
indicador, asegurando que el pH esté dentro del rango de 6.0-7.2. Se prosiguió pelando y cortando los nabos
en cubos de 2 cm, se llevaron a Licuar con 300 ml de buffer durante 15 segundos a máxima velocidad,
repitiendo el proceso tres veces, se pasó a filtrar el líquido resultante primero con una gasa y luego con un
filtro para café, se marcó el filtrado como "extracto de enzima" y se dejó en un baño de hielo.

Lo siguiente fue la determinación de la línea de base de la reacción enzimática en el que se comienzo

etiquetando dos tubos de ensayo como "S" (sustrato) y "E" (enzima). En el tubo “S” se añadieron 7 ml de
agua, luego se agregó 0,2 ml de guayacol y 0,3 ml de H2O2 al 0,1% y lo mezclamos, para el tubo “E” se
agregó 6mL de agua y se añadieron 1,5 ml del extracto de la enzima previamente obtenida, después se
mezclaron en 6 tubos aparte, con 3mL del tubo de Enzima y el tubo de sustrato, en cada tubo se agregan
diferentes pH (3,4,5,6,7,8) y se prosiguió a realizar la observación del cambio de color en el tiempo 0, 1,
2, 3, 4 y 5 minutos y se anotó según la escala de colores. Para la segunda parte del laboratorio de cinética
enzimática se realizó el mismo experimento su diferencia radico en que se implementó sólo un pH (7), y la
enzima con el sustrato se sometió a distintas temperaturas entre ellas 0 °C (baño de hielo), 40°C y 60°C,
para esto se dejó los tubos en hielo, y en dos baños termostato uno a 40 °C y otro a 60 ° C respectivamente,
finalmente se anotó los cambios de color en cada tiempo según la escala de color.

Resultados
El laboratorio se dividió en dos secciones, en ambas se implemento una escala de color como referencia.

1 2 3 4 5 6 7

Grafica 1. Escala de colores referencia

Imagen 1. Escala de colores referencia

La primera sección consistió en la determinación de la actividad enzimática en cuanto a distintos valores

de pH, los cuales se muestran a continuación:

Tiempo Observaciones
(minutos) Concentración de pH
3 4 5 6 7 8
1 Sin color Color 2 Sin color Color 1 Color 1 Color 1
2 Sin color Color 3 Color 1 Color 2 Color 2 Color 2
3 Sin color Color 4 Color 2 Color 3 Color 3 Color 2
4 Sin color Color 5 Color 3 Color 4 Color 3 Color 3
5 Sin color Color 5 Color 3 Color 5 Color 4 Color 3
6 Sin color Color 5 Color 4 Color 5 Color 4 Color 4
7 Sin color Color 6 Color 4 Color 5 Color 4 Color 5
Tabla 1. Efecto de distintos pH en la reacción de una enzima.

Tiempo Temperatura
(minutos) Observaciones
0 °C (Hielo) 40° C 60 °C
1 Color 1 Color 1 Color 2
2 Color 1 Color 2 Color 3
 3 Color 2 Color 3 Color 4
4 Color 3 Color 4 Color 4
5 Color 3 Color 5 Color 5
6 Color 4 Color 6 Color 5
7 Color 4 Color 6 Color 6
Tabla 2. Efecto de la temperatura en el progreso de una reacción enzimática.

.
Curva para los diferentes valores de pH

Imagen 1. curva pH 4

Imagen 2. curva pH 5
Imagen 3. curva pH 6

Imagen 4. curva pH 7
 Imagen 5. curva pH 8

Una curva para las diferentes temperaturas analizadas

Imagen 6. curva temperatura Hielo

 Imagen 7. curva temperatura 40°

Imagen 8. curva temperatura 60°

Discusión

Cinética enzimática

En el presente estudio, investigamos los efectos de variar del pH en la actividad de la enzima

peroxidasa a partir de extractos de Brassica napus, se comenzó sometiendo a la enzima a un pH 3
(un pH extremadamente acido), los resultados de este pH fueron: o minuto sin color, 1 minuto sin
color, al 2 minuto sin color, 3 minuto sin color, 4 minuto sin color, 5 minuto sin color, 6 minuto
sin color, 7 minuto sin color, teniendo presente estos resultados se podría decir que el pH3 produjo
una disminución de la actividad enzimática, esto se debe a que la enzima peroxidasa tiene un rango
de pH optimo en el cual funciona con mayor eficiencia, este pH optimo suele estar cerca del pH
neutro casi ligeramente acido, los efectos que posiblemente se produjeron al colocar a la enzima
en este pH, es que hubo desnaturalización de la enzima ya que altero su estructura, hubo cambio
en la carga de la enzima ya que el pH afecta la carga de los grupos funcionales en la enzima en su
sustrato lo que genera dificultad en la unión efectiva de estos y la catálisis de la reacción, también
puede haber perdida de actividad ya que esta enzima es sensible al pH por lo tanto se vio reducida
su actividad, en este caso fue detenida por completo. (Jeremy M. Berg et al., 2007)
Luego se hizo la segunda prueba donde la enzima se sometió a un pH 4, los resultados obtenidos
fueron: 0 minuto sin color, 1 minuto color 2, 2 minuto color 3, 3 minuto color 4, 4 minuto color 5,
5 minuto color 5, 6 minuto color 5, 7 minuto color 6, teniendo presente los resultados se podría
decir que someter a la enzima a un pH 4, la enzima experimentó una disminución de su actividad
a pesar de que no es un pH extremadamente acido, sigue siendo acido a comparación del pH optimo
en el que esta enzima actúa, lo que pudo haber pasado fue un cambio de carga neta lo que genera
dificultad en la unión del sustrato y de la enzima, también pudo hacer una disminución de la
velocidad de reacción enzimática por lo que la enzima no tuvo la suficiente eficiencia para catalizar
la reacción en estas condiciones acidas. En la tercera prueba se sometió a la enzima a un pH 5, lo
que arrojo los siguientes resultados: 0 minuto sin color, 1 minuto sin color, 2 minuto color 1, 3
minuto color 2, 4 minuto color 3, 5 minuto color 3, 6 minuto color 4, 7 minuto color 4, teniendo
presente los resultados se podría decir que a la enzima se vio afectada muy superficialmente ya
que este pH no es tan acido como un pH de 3 o 4, sigue estando por debajo del rango óptimo de
pH para la peroxidasa, alguno de los efectos que pudieron ocurrir al someter la enzima a este pH
de 5 pueden ser similares a los anteriores resultados, desestabilización de la estructura
tridimensional por la alteración de las interacciones electrostáticas, cambios en la carga neta y
disminución de la velocidad de reacción. En la cuarta prueba se sometió la enzima un pH de 6, el
cual en este pH la enzima funciono de manera más eficiente en comparación a los otros pH más
bajos, los resultados de esta prueba fueron: 0 minuto sin color, 1 minuto color 1, 2 minuto color 2,
3 minuto color 3, 4 minuto color 4, 5 minuto color 5, 6 minuto color 5, 7 minuto color 5, teniendo
en cuenta los resultados hubo una mejora en la actividad de la enzima ya que en este entorno la
enzima mantiene mejor su estabilidad y funciona de manera eficaz, por otro lado la enzima tiene
una aproximación al pH optimo por lo tanto que se encuentre más cerca de su pH optimo tendrá
su máximo potencial. En la quinta prueba la enzima se sometió a un pH de 7, en la que la enzima
se vio con mejor eficiencia, los resultados que arrojo esta prueba fueron: 0 minuto sin color, 1
minuto color 1, 2 minuto color 2, 3 minuto color 3, 4 minuto color 3, 5 minuto color 4, 6 minuto
color 4, 7 minuto color 5, teniendo en cuenta estos resultados se podría decir que la enzima tuvo
varios factores diferentes a comparación de los otros pH, inicialmente tuvo una actividad
enzimática máxima donde actuó con mayor eficiencia así logrando unirse al sustrato, tuvo mayor
velocidad de reacción donde la enzima pudo catalizar la reacción de manera más eficiente y por
ultimo sus condiciones óptimas reflejan un pH neutro, donde es el típico entorno fisiológico en el
que la peroxidasa actual y realiza sus funciones, En la última prueba la enzima se sometió a un pH
de 8, lo que probablemente la enzima haya experimentado fue una disminución en su actividad
enzimática en comparación a su pH optimo, sin embargo, estos fueron los resultados: 0 minuto sin
color, 1 minuto color 1, 2 minuto color 2, 3 minuto color 2, 4 minuto color 3, 5 minuto color 4, 6
minuto color 4 y 7 minuto color 5, con los resultados se podría decir que sucedió algo parecido a
los pH ácidos donde hubo menor eficiencia de la reacción de la enzima, lo que genero
desestabilización de la estructura, cambio en la carga neta y disminución de la velocidad de
reacción. (Halvor N. Christensen & Graham A. Palmer, 2000)

Factores que afectan la actividad enzimática

En el experimento de factores que afectan la actividad enzimática se comenzó por bajas

temperaturas, en el primer experimento se colocó la enzima con el sustrato en hielo, esto causo
que al primer minuto diera el color 1, al segundo minuto permaneciera en el color 1, al minuto 3
subió al color 2, al minuto 4 subió al color 3, al minuto 5 permaneció en el color 3 y al minuto 6 y
7 quedo en el color 4, se podría decir que la enzima no obtuvo un color notorio de acuerdo con la
paleta de colores
La enzima trabajada fue la peroxidasa de Brassica napus extraída del nabo, al colocar la
peroxidasa en bajas temperaturas generalmente se produce una disminución significativa en su
actividad enzimática, esto se debe a que las bajas temperaturas afectan la cinética enzimática de
varias maneras, comenzando por los cambios de estructura de la enzima, donde se pueden causar
cambios en la estructura tridimensional, ya que las enzimas a estas bajas temperaturas sufren
congelación o desnaturalización parcial que afecta negativamente su capacidad para unirse al
sustrato y catalizar la reacción correctamente, en cuanto a la disminución de la velocidad de
reacción, afecta a la enzima causando que las moléculas tengan menos energía cinética lo que
causa la reducción de la velocidad y genera que la reacción enzimática se vuelva más lenta y así
causa que esta enzima sufra una disminución sustancial en su actividad y que su estructura se
vuelva menos funcional.

A temperaturas bajas, las moléculas tienen menos energía cinética, lo que resulta en una menor
frecuencia de colisiones efectivas entre enzimas y sustratos, y por ende, una tasa de reacción más
lenta (Kumar, S., & Pandey, A. K., 2018). A medida que la temperatura aumenta, la tasa de
reacción se incrementa hasta un punto óptimo; típicamente, para muchas enzimas, este punto
óptimo está en torno a los 37°C, que es la temperatura corporal normal en los humanos (Nelson,
D. L., & Cox, M. M., 2017).
Hay que tener en cuenta que si la temperatura se eleva demasiado, la estructura de la enzima puede
desnaturalizarse debido a la ruptura de enlaces que mantienen su estructura terciaria, lo que resulta
en una disminución de la actividad enzimática y eventualmente en la inactivación de la enzima
(Berg, J. M., Tymoczko, J. L., & Stryer, L., 2015).

En la segunda prueba se colocó la enzima a una temperatura de 40 grados, en la que el resultado

al primer minuto fue el color 1, al segundo minuto fue el color 2, al minuto 3 fue el color 4, en el
cuarto minuto permaneció en el color 4, en el minuto 5 el color fue 5, y en el minuto 6 y 7 fue
color 6, se podría decir que la enzima tuvo una reacción rápida de acuerdo con la paleta de colores.
Cuando se coloca la enzima peroxidasa (Brassica napus) a una temperatura de 40 grados, se puede
observar un aumento de actividad enzimática. Esto se debe a que las enzimas suelen tener una
temperatura optima a la cual funciona con mayor eficiencia, y a menudo esta temperatura es mayor
que la temperatura ambiente, en este caso la enzima funciono más rápido que en la mayoría de
otros casos, ya que ese aumento de temperatura proporciona más energía cinética a las moléculas,
lo que genera un aumento de frecuencia de colisiones efectivas entre la enzima y el sustrato lo que
resulta en una aceleración de la velocidad de la reacción enzimática.

En el tercer experimento se colocó la enzima a 60 grados, lo que los resultados fueron que al primer
minuto su color fuera 2, al minuto 2 su color fuera 3, al minuto 3 su color fuera 4, al minuto 4 su
color permaneció en 4, al minuto 5 y 6 su color fuera 5, y por último al minuto 7 su color fuera 6,
se podría decir que en este caso la reacción enzimática fue bastante elevada según la paleta de
colores. En el caso de este último experimento de los factores que afectan la actividad enzimática,
ocurre que al colocar la enzima peroxidasa en altas temperaturas es probable que ocurra una
desnaturalización de la enzima, lo que llevara a una perdida significativa de su actividad.

Las altas temperaturas, que en este caso fueron 60 grados, suelen estar por encima de la
temperatura optima de la mayoría de las enzimas, lo que puede con llevar a varios efecto adversos;
la desnaturalización de la proteína, esto ocurre cuando las enzimas pierden su estructura
tridimensional lo que conduce a una perdida actividad lo que significa que la enzima pierda la
capacidad de unirse a su sustrato y no catalice la reacción de manera correcta, también puede
ocurrir la ruptura de enlaces débiles esto lo causa las altas temperaturas a las que fue sometida la
enzima y rompa estos enlaces como los enlaces de hidrogeno que son las que mantienen la
estructura de la enzima, y por ultimo puede ocurrir la perdida de especificidad de la enzima que
ocurre cuando la enzima se desnaturaliza y no podrá reconocer el sustrato lo que ocasiona que no
se dé, de una manera efectiva a este.

El pH puede alterar la carga y la forma de la enzima y su sustrato, lo que afecta la formación del
complejo enzima-sustrato. Cada enzima tiene un pH óptimo en el cual presenta una actividad
máxima. Desviaciones de este pH óptimo pueden resultar en cambios conformacionales de la
enzima o en la ionización del sitio activo, lo que puede reducir la afinidad de la enzima por el
sustrato y disminuir la tasa de reacción (Voet, D., Voet, J. G., & Pratt, C. W., 2016).

El pH óptimo para una enzima en particular depende de su entorno natural y su función biológica.
Por ejemplo, la pepsina, que actúa en el estómago, tiene un pH óptimo de alrededor de 2, mientras
que la tripsina, que actúa en el intestino delgado, tiene un pH óptimo de alrededor de 8 (Berg, J.
M., et al., 2015).

La temperatura y el pH son factores cruciales que afectan la cinética enzimática, influenciando la

velocidad y eficiencia de las reacciones catalizadas por enzimas. Las enzimas son proteínas
sensibles a su entorno, y su actividad puede verse significativamente afectada por cambios en la
temperatura y el pH.

Conclusiones

De acuerdo con los resultados obtenidos, se puede inferir que la enzima implementada para el
desarrollo experimental presenta un pH óptimo de entre 6 a 7, según la escala de acidez-
alcalinidad, pues se puede observar de acuerdo con los datos que la enzima presenta una mayor
afinidad por el sustrato cuando el medio en el que se encuentra presenta el pH mencionado, lo que
indica que la velocidad máxima de la enzima y su afinidad aumentan en este grado de pH.

Por otro lado, uno de los factores que también pueden afectar la actividad de una enzima es la
temperatura, ya que dependiendo de ésta puede generar cambios en la velocidad de reacción de la
enzima, según los datos del desarrollo experimental la temperatura que mejores resultados presento
fue a 60 °C siendo la temperatura optima de la enzima implementada.

Bibliografia

Berg, J. M., Tymoczko, J. L., & Stryer, L. (2015). Biochemistry. W.H. Freeman and Company.
Halvor N. Christensen, & Graham A. Palmer. (2000). CINETICA ENZIMATICA, curso programado para
estudiantes de medicina y ciencias biologicas.
Jeremy M. Berg, John L. Tymoczko, & Lubert Stryer. (2007). Bioquimica
Kumar, S., & Pandey, A. K. (2018). Chemistry and Biology of Essential Oils of Genus Boswellia. Evidence-
Based Complementary and Alternative Medicine, 2018.
Nelson, D. L., & Cox, M. M. (2017). Lehninger Principles of Biochemistry. W.H. Freeman and Company.
Voet, D., Voet, J. G., & Pratt, C. W. (2016). Fundamentals of Biochemistry: Life at the Molecular Level.
Wiley.