UNIVERSIDAD DE CUENCA

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE ANÁLISIS DE ALIMENTOS

LABORATORIO DE BROMATOLOGÍA

Director: PhD. Ing. Andrés Haro. MSc

Periodo: Marzo – Agosto, 2024

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INDICE DE CONTENIDO

DETERMINACIÓN DE MATERIA SECA ..................................................... 3

DETERMINACIÓN DE LA MATERIA SECA EN CARNE .......................... 4

DETERMINACIÓN DE CENIZAS .................................................................. 6

DETERMINACIÓN DE FIBRA BRUTA ........................................................ 7

DETERMINACIÓN DE PROTEINA BRUTA (METODO KJELDAHL) .... 12

PROCEDIMIENTO DE HIDROLISIS ACIDA ............................................. 17

DETERMINAIÓN DE EXTRACTO ETEREO .............................................. 19

DETERMINACIÓN DE ENERGÍA BRUTA ................................................ 21

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 DETERMINACIÓN DE MATERIA SECA

MATERIALES

1. Crisoles de porcelana
2. Balanza analítica de precisión.
3. Desecadores con tapón para vacío provistos de gel de sílice con indicador de
humedad.
4. Estufa de desecación de 65 a103 °C
5. Bandejas

PROCEDIMIENTO

1. Calentar los crisoles previamente limpios en la estufa a 103 °C, durante 30 min
2. Retirar a un desecador, dejar enfriar durante 30 min
3. Pesar cada crisol, anotar el peso y poner la balanza en cero (Tarar)
4. Añadir la muestra*, 2 a 3 g, anotar los gramos de la muestra
5. Introducir los crisoles más la muestra en la estufa a 103 °C, mínimo 6 h o 65 °C
por 24 o 72 h**
6. Retirar los crisoles más la muestra a un desecador durante 30 min
7. Pesar los crisoles + muestra seca, anotando el peso como “peso crisol + residuo”

Fórmula para obtener la materia seca de la muestra:

(𝑃𝑒𝑠𝑜 𝑐𝑟𝑖𝑠𝑜𝑙+𝑟𝑒𝑠𝑖𝑑𝑢𝑜)−𝑃𝑒𝑠𝑜 𝑐𝑟𝑖𝑠𝑜𝑙
(%) 𝑀𝑎𝑡𝑒𝑟𝑖𝑎 𝑆𝑒𝑐𝑎 = x 100
𝑃𝑒𝑠𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 (𝑔)
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Matriz para registro de Datos
N° muestra N° crisol P. Crisol P. muestra (Peso crisol + muestra seca) % MS Med % MS

*Se recomienda duplicar el análisis de las muestras y determinar el promedio de las dos.
**Para la determinación de MS en pastos, la muestra recomendada es de 250 g de materia húmeda y secar
durante 72 h en la estufa

DETERMINACIÓN DE LA MATERIA SECA EN CARNE

MATERIALES

1. Crisoles de porcelana
2. Varillas de vidrio pequeñas
3. Balanza de precisión
4. Bandeja
5. Estufa a 103 °C
6. Arena lavada de grano fino
7. Etanol al 96%
PROCEDIMIENTO

1. Pesar 20 g de arena de mar en el crisol e incluir la varilla de vidrio, repetir cuatro

veces por cada muestra
2. Llevar a la estufa a 103 °C durante 30 min
3. Retirar los crisoles (con la varilla de vidrio + la arena de mar), a un desecador y
dejar enfriar por unos 30 min
4. Pesar los crisoles (con la varilla de vidrio + la arena de mar), se obtendrá un peso
P0, poner la balanza en cero (tarar) e introducir 5 g de la muestra de carne
5. Pesar el conjunto: crisol con la varilla de vidrio, arena de mar y la muestra, se
obtiene el peso P1
6. Añadir 5 ml de etanol (alcohol etílico) y mezclar con la varilla de vidrio, sin
retirarla
7. Desecar en la estufa a 103°C al menos 4 h o 24 h

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 8. Retirar los crisoles a un desecador hasta temperatura ambiente durante 30 min
9. Pesar los crisoles (con la varilla de vidrio + la arena de mar y la muestra seca)
obtendremos un peso P2.

Fórmula para obtener la humedad de la carne:

𝑃1 − 𝑃2
%𝐻𝑢𝑚𝑒𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑐𝑎𝑟𝑛𝑒 = 𝑋100
𝑃1 − 𝑃0

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 DETERMINACIÓN DE CENIZAS

MATERIAL NECESARIO

1. Crisoles de porcelana resistentes a 600 °C, con capacidad de 2 a 3 g

2. Balanza analítica de precisión
3. Estufa
4. Desecadores
5. Horno de mufla a 600 °C
6. Pinzas de metal
7. Guantes resistentes al calor
PROCEDIMIENTO

1. Precalentar un crisol a 100 °C en la estufa para eliminar la humedad o residuos

imperceptibles con el objetivo de conseguir una masa sin variación
2. Enfriar en un desecador y tomar su peso en la balanza analítica de precisión
3. Tarar la balanza e introducir 1 a 2 g de la muestra (en base MS) en el crisol
4. Llevar a la mufla y posteriormente cerrar la puerta del horno, dejando un centímetro
abierto para permitir que salga el humo poner a 250 °C y estabilizar (E). Aumentar
la temperatura progresivamente, por ejemplo, a 400° C, al cabo de unos 20 min,
cerrar la puerta con seguro y subir a 600 °C
5. Después de 4 h como mínimo o dejarla 24 horas, apagar la mufla y dejar enfriar
6. Retirar el crisol con pinzas de metal, depositar en el desecador hasta que se enfríe
7. Pesar los crisoles y anotar el peso " peso crisol + cenizas"

Fórmula para obtener las cenizas.

(𝑃𝑒𝑠𝑜 𝑐𝑟𝑖𝑠𝑜𝑙+𝑐𝑒𝑛𝑖𝑧𝑎𝑠)−𝑃𝑒𝑠𝑜 𝑐𝑟𝑖𝑠𝑜𝑙

1. (%) 𝐶𝑒𝑛𝑖𝑧𝑎𝑠 = x 100
𝑃𝑒𝑠𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 (𝑔)

8. Referir el resultado en % de cenizas a materia seca: % cenizas / MS /100

Matriz para registro de datos:

N° muestra N° crisol P. Crisol P. muestra (MS) (Peso crisol + ceniza) % Cenizas Med % Cenizas
*Se pueden utilizar las cápsulas que se determinó la MS

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 DETERMINACIÓN DE FIBRA BRUTA

El procedimiento incluye someter una muestra a la acción simulada del sistema digestivo.
Las muestras se hierven en ácido y se lavan, luego se hiervan en álcali y se lavan de nuevo.
Los sólidos restantes se aíslan y se denominan fibra insoluble o fibra bruta, como son la
celulosa y otros materiales agrícolas indigeribles.

REACTIVOS

1. 200 mL de Ácido Sulfúrico (H2SO4) 1,25%

2. 200 mL Hidróxido de Sodio (NaOH) 1,25%
3. 1g de asbesto
4. 1 a 2 g de muestra (puede estar desengrasada o no)
5. 1 L dH20
6. 25 mL Etanol

MATERIALES

1. Aparato de Fibra (LABCONCO)

2. Vasos para digestión de 600 mL (MVL-VPA600)
3. Tela de lino como filtro
4. Embudo
5. Tira de pH o pHchimetro
6. Matraz para filtración al vacío
7. Bomba de aspiración al vacío
8. Estufa
9. Crisol
10. Mufla
11. Balanza analítica

MONTAJE DEL EQUIPO

1. Identificación de componentes

Montaje del colector: El capó cuenta con una conexión de escape moldeada de 6 “de
diámetro dimensionada para permitir un mínimo de pérdida de presión estática a través de

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la estructura del capó y una que aún puede proporcionar una buena velocidad de transporte
a través del sistema de escape.

Sistema de cabezal de condensador

Estas cabezas en forma de cono ubicadas sobre cada calentador proporcionan una parte
esencial del proceso de digestión. Los vapores del medio de digestión hirviendo se
condensan en las cabezas del condensador y se devuelven al medio lavando continuamente
los lados de los vasos de precipitados en el proceso.

Sistema de calentamiento

Cada calentador de resorte ajustable de 350 vatios proporciona una distribución uniforme
del calor mediante el uso de cables de calentador en espiral incrustados en un material
cerámico.

o Interruptor de control de calor variable

o Proporciona una entrada variable desde el 20 a 100% de la capacidad a cada
calentador
o Perilla de control de elevación
o Ajusta las posiciones de los vasos de precipitación.
o Interruptor de alimentación principal

Enciende y apaga el aparato sin necesidad de cambiar los interruptores de control de calor
variable.

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 2. Funcionamiento normal

Pasos necesarios para realizar la determinación de fibra bruta. El método correspondiente,

la preparación de la muestra, las opciones de disolventes, etc., se determinan mediante
métodos oficiales del AOAC y deben mencionarse en todos los casos.

1. Abrir el suministro de agua fría, compruebe el flujo visual en el área de drenaje. El

calentador y los caudales de agua pueden ajustarse para variar las tasas de reflujo
según la preferencia del operador
2. Preparar muestras por método estándar para la muestra (procedimiento)
3. Colocar la cantidad requerida de muestra en el vaso de precipitación. Las muestras y
el reactivo se colocan en un vaso de digestión de 600 ml (MVL-VPA600).
4. Colocar el medio de digestión del tipo y cantidad adecuados en el vaso de
precipitación
5. Colocar el vaso de precipitación en el calentador y mientras sostiene la perilla, girar
1/4 a la izquierda y lentamente dejar que el vaso de precipitados suba a la cabeza del
condensador. NO soltar la perilla hasta que el vaso de precipitación esté en posición
contra la cabeza del condensador
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 6. Girar el interruptor de encendido principal, ubicado en el lado derecho, a la posición
"ON". Los controles en el panel regulan de forma independiente un calentador de
350 vatios. Las luces piloto indican el ciclo "ON" del calentador
7. El residuo restante se seca, enfría, pesa y registra como fibra bruta (procedimiento)
8. Siga el método y el procedimiento de AOAC para la determinación del contenido de
fibra.

PROCEDIMIETO

1. Adicionar en el vaso de digestión 1g de asbesto (opcional) junto con la muestra

(PM) más los 200 mL de H2SO4 al 1,25%
2. Colocar en el vaso en el aparato de fibra
3. Dejar por un periodo de 30 min a intensidad media para que se proceda con la
digestión de la muestra
4. Se coloca la tela de lino en el embudo para proceder con la filtración de la muestra
que estuvo en el digestor
5. Se coloca el embudo en el matraz para colectar el líquido filtrado y se enciende la
bomba de aspiración
6. Con agua dH20 se procede a realizar enjuagues en la muestra hasta permitir que su
pH sea neutro
7. Una vez terminada la fase de enjuague se comprobará con la tira de pH que esté
efectivamente en un pH neutro
8. Posteriormente se adicionará 25 mL de etanol para deshidratar y favorecer el secado
de la muestra en la estufa
9. Colocar la muestra filtrada en la estufa hasta que esté completamente seca (103 °C)
10. Nuevamente colocar la muestra seca en el vaso de digestión más la adición 200 mL
de NaOH al 1,25%
11. Volver a colocar el vaso en digestor por 30 min en el aparato de fibra
12. Repetir los pasos de filtración y secado mencionados anteriormente
13. Una vez secada la muestra por segunda vez, se colocará en crisoles como el
procedimiento para determinar cenizas, se obtendrá el peso del crisol y el peso de la
muestra (P1).

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14. El crisol se coloca en una mufla por 2 h a 600 °C, luego dejar enfriar por 2 h y
ponerlo a enfriar completamente en el desecador
15. Una vez frio el crisol con la ceniza, tomar su peso (P2).

Fórmula para el cálculo en % de Fibra bruta:

𝑃1−𝑃2
(%) 𝐹𝑖𝑏𝑟𝑎 𝐵𝑟𝑢𝑡𝑎 = X 100
𝑃𝑀

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 DETERMINACIÓN DE PROTEINA BRUTA (METODO KJELDAHL)

El método Kjeldahl se basa en la determinación del nitrógeno, el cual es recogido en ácido

bórico y valorándolo con una disolución de ácido clorhídrico o sulfúrico. Es un método
oficial descrito en múltiples normativas: AOAC, USEPA, ISO. Este método puede ser
dividido, básicamente en 3 etapas: digestión o mineralización, destilación y valoración.

REACTIVOS

Digestión

1. 50 ml de agua destilada
2. 20 ml de Ácido sulfúrico (H2SO4) concentrado
3. 0,04 g de Sulfato de cobre (CuSO4)
4. 15 g de Sulfato de potasio (K2SO4)
5. 0,25 – 1,0 g de muestra

Destilación

6. 50 ml de Hidróxido de sodio (NaOH) al 45% (38% en el equipo RAYPA)

7. 50 ml Ácido Bórico (H3BO3)
8. 3 ml de Indicador de coloración (0,75g de Rojo de metilo y 0,5 g Azulo de metileno
en 300 ml de 95% de etanol) *
9. 25 ml de Ácido Sulfúrico estandarizado a una solución de 0,02N o ácido clorhídrico
0,1 N

MATERIALES

Digestión

1. Aparato Kjeldahl, unidad de digestión (EQ-003)

2. Neutralizador de gases RAYPA- SCRUBBER
3. Matraces de digestión de 500 ml (MLV-MD500)
4. Balanza Analítica

Destilación

5. Unidad de destilación, RAYPA DNP-1500TS

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 6. Vaso de precipitación de 100 ml

Titulación

7. Bureta de precisión

PROCEDIMIENTO

Digestión

1. Tomar en consideración que las muestras deben ser realizadas en duplicado y un

blanco.
2. Introducir la muestra previamente pesada (precisión de 0,1mg/mL) en el matraz de
digestión, para el blanco no se adiciona la muestra.
3. Adicionar al matraz 20 mL de H2SO4, 0,04 g de CuSO4 y 15 g de K2S04
4. Colocar el matraz en la unidad de digestión del aparato Kjeldahl en posición
inclinada para promover el reflujo del ácido y con dirección al sistema de remoción
de gases.
5. Encender el quemador con el matraz conjunto con la muestra hasta que empiece el
punto de ebullición, si la ebullición genera mucha espuma hasta el cuello del matraz
de digestión, disminuir al mínimo el quemador.
6. Dejar que se produzca la ebullición hasta que se aclare la muestra (aprox 2 h) es
decir de un color verde claro.
7. Dejar que la mezcla de digestión se enfríe y agregar cuidadosamente 50 mL de
dH2O destilada para evitar que se formen sales de K2SO4
8. Todos los cristales que se hayan formado, deben disolverse antes de continuar con el
siguiente paso, si es necesario recalentar parcialmente la muestra para disolver los
cristales

Destilación

1. Antes de iniciar la destilación comprobar que los bidones contienen suficiente

reactivo (NaOH) y agua destilada

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 2. Colocar el tubo con la muestra en el soporte del equipo de destilación y un Matraz
Erlenmeyer de 250 mL con la solución de ácido bórico con indicador en la salida
del destilado (50 mL), comprobando que el tubo de silicona llegue hasta el fondo
del Matraz
3. Cerrar la puerta de seguridad para desactivar la alerta de puerta abierta en el equipo
4. Abrir ligeramente el grifo de agua
5. Seleccionar el programa de destilación adecuado en la pantalla táctil del equipo
6. Una vez seleccionado el programa pulsar la tecla START 2 veces (con intervalo de
4 seg) para iniciar el ciclo de destilación

Indicaciones de funcionamiento del equipo: Antes de iniciar la destilación propiamente

dicha, el generador de vapor se calentará a la temperatura adecuada para iniciar la
destilación y se podrá ver en la pantalla la temperatura del generador de vapor en la fase de
calentamiento. Cuando el generador de vapor tiene la temperatura adecuada, se inicia el
ciclo automático de adición de reactivos, destilación y fin del programa.

Al inicio de la destilación se abre automáticamente el circuito de agua de

refrigeración, comprobar a la salida del tubo el caudal necesario para la refrigeración.
70l/h. Se puede también comprobar mediante la mano, la temperatura de salida del agua,
que tiene que salir fría o ligeramente templada. Si sale muy fría es que se está utilizando
demasiado caudal de agua, cerrar ligeramente el grifo de la red de agua. Si sale templad o
caliente, hay poco caudal de agua, abrir ligeramente el grifo de la red de agua.

Cuando termine el ciclo de destilación el grifo parará automáticamente.

Nota: Antes de iniciar una rutina de destilación hay que preparar el destilador para que
tenga un rendimiento eficaz en la destilación. Por lo que se debe efectuar un
precalentamiento inicial.

o Poner un tubo de muestra vacío en el soporte y un Matráz Erlenmeyer a la salida del

tubo de destilado.
o Cerrar la puerta para desactivar la alerta de puerta abierta en el equipo
o Ir al programa 1 (PRECALENTAMIENTO) y ejecutar.

Tomar en cuenta:
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o Para parar el ciclo de destilación pulsar la tecla START/STOP
o Si se interrumpe el proceso de destilación antes de que finalice el ciclo
automáticamente, quedará restos no neutralizados que afectarían a la muestra
siguiente. Se tendrá que efectuar pues un proceso de lavado antes de proceder al
análisis de otras muestras.
o Si durante la ejecución de un programa se abre la puerta, el programa quedará
abortado
7. Tubo de colecta del aparato de destilación, y abrir la llave para permitir la entrada al
bulbo interior del equipo
8. Previo a encender el equipo asegurarse que las llaves estén completamente cerradas
y abrir el paso de agua como refrigerante a un flujo continuo
9. En la porción de condensación en la salida colocar en un vaso de precipitación una
mezcla de 50 ml de H3BO3 más el indicador de coloración (en un litro de H 3BO3
añadir 3 mL del indicador) el cual será una tonalidad purpura
10. Encender el equipo
11. Adicionar 100 mL de NaOH al 45% en el bulbo de colecta, e ir incorporando poco a
poco con la solución de digestión
12. Esperar a obtener entre 80 y 100 ml de destilado, el cual cambiará de tonalidad entre
la escala de verde (entre 8 y 10 minutos de destilación)
13. Apagar el equipo, quitar el destilado y proceder a la titulación

Titulación

1. Adicionar entre 15 y 20 mL de la solución de H2SO4 0,02 N o HCL 0,1 N en la

bureta
2. Titular la solución estandarizada en H3BO3 más el destilado hasta que regrese la
tonalidad purpura
3. Medir la cantidad de solución utilizada de al menos 0,05 ml
4. Hacer coincidir el punto final con un espacio en blanco de muestra que contenga el
mismo volumen de dH2O y solución H3BO3

Cálculos

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% 𝑁𝑖𝑡𝑟ó𝑔𝑒𝑛𝑜
(𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 − 𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑒𝑛 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜) ∗ 𝑁𝑜𝑟𝑚𝑎𝑙𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 ∗ 1400,7
=
𝑝𝑒𝑠𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 (𝑔)

Donde:

1400,7 = Único factor que se toma en cuenta del peso molecular del nitrógeno, la
conversión de mili-equivalente resulta de V*N y la conversión a %.

% 𝑃𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎 𝐶𝑟𝑢𝑑𝑎 = % 𝑑𝑒 𝑁𝑖𝑡𝑟ó𝑔𝑒𝑛𝑜 ∗ 6,25

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 PROCEDIMIENTO DE HIDROLISIS ACIDA

Objetivo del procedimiento: romper enlaces para que la grasa quede disponible para la
extracción posterior.

MATERIAL NECESARIO

1. Balanza de precisión
2. Tubos cilíndricos grandes en gradilla de 20 (Kjeldahl)
3. Papel filtro de tamaño grande Whatman # 4 o papel endurecido
4. Vasos de precipitado de 200 ml y 50 ml
5. Bandejas grandes y papel filtro
6. Bandejas pequeñas
7. Placas calefactoras
8. Jarras metálicas
9. Digestor Kjeldahl
10. Aparato filtrador conectado a vacío
11. Estufa a 70° C
12. 5 L de Ácido clorhídrico 3N (Ácido clorhídrico 37% - 1478,11g + dH2O)
13. Agua destilada
PROCEDIMIENTO

1. Encender la unidad de digestión del aparato Kjeldahl a 120 °C, comprobar con el
termómetro y encender el grifo extractor de vacío para evacuar los vapores que van a
producirse
2. Pesar 2,5 g demuestra y echar a los tubos
3. Añadir 50 mL de ácido clorhídrico 3N a cada tubo
4. Llevar la gradilla con los tubos al digestor y a partir de que todos los tubos comiencen a
hervir mantener en ebullición durante 30 min
5. Poner a calentar en calefactores unos 4 L de dH2O
6. Después de hervir 30 min, añadir 100 mL de dH2O hirviendo a cada tubo y dejar 5 min
7. Abrir la llave del vacío de los embudos de filtración
8. Colocar el papel filtro Whatman # 4, a cada embudo e ir filtrando cada tubo

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9. Añadir 250-300 mL de dH2O hirviendo, remover agitando cuidadosamente, para lavar
cada muestra
10. Filtrar el contenido de cada tubo, de forma que se retenga el residuo hidrolizado y se
filtre y evacue el efluente ácido
11. Cuando el filtro ya no tenga agua y quede el residuo de la muestra, retirar y colocar el
papel filtro sobre las bandejas, no perder el orden
12. Dejar secar un poco a temperatura ambiente, enrollar el papel filtro con la muestra
haciendo un canutillo, colocar en la bandeja blanca en la estufa de 70 °C, 24 h o más
hasta que este completamente seco

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 DETERMINAIÓN DE EXTRACTO ETEREO

Extraer en un tiempo reducido parte de la grasa de la muestra generalmente grasa libre

REACTIVOS

1. 1 a 2 g de muestra
2. 50 ml de éter etílico (C2H5) o 150 a 200 mL de éter de petróleo (C2H2N+2)

MATERIAL
1. Canutillos con la muestra completamente seca
2. Matraz esférico de extracción (MVL-ME-250)
3. Extractor (EQ-010)
4. Desecador
5. Balanza Analítica
6. Cazoletas de metal
7. Dedales
8. Anillos metálicos
9. Algodón
10. Pequeña gradilla para los dedales
11. Estufa

PROCEDIMIENTO

1. Conectar la unidad de extracción, que debe estar a 100 °C, con el objeto de que la placa
calefactora esté a unos 70 °C, el doble de la temperatura de ebullición del éter etílico
2. Tras enfriar en el desecador, pesar los matraces de extracción y registrar sus datos
3. Colocar los adaptadores en los dedales cuidadosamente para que estos no se rajen
4. Situar, los dedales en las columnas de extracción del extractor
5. Abrir el grifo de refrigeración
6. Añadir 50 mL de éter etílico o 150 mL de éter de petróleo en cada matraz de extracción.
Situarlos en orden, sobre la placa calefactor y colocar la unidad de extracción con el
matraz completamente unido
7. Esperar a que exista circulación de éter en las columnas de extracción por 3 h aprox

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8. Cerrar las llaves
9. Terminado el proceso de extracción, llevar el matraz de extracción a una estufa, luego
dejar enfriar y pesar la muestra extraida

Fórmula para obtener extracto etéreo:

(𝑃𝑒𝑠𝑜 𝑑𝑒𝑙 𝑚𝑎𝑡𝑟𝑎𝑧 + 𝑒𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 𝑒𝑡é𝑟𝑒𝑜) − 𝑃𝑒𝑠𝑜 𝑑𝑒𝑙 𝑚𝑎𝑡𝑟𝑎𝑧 𝑥100

%𝐸𝐸 =
𝑃𝑒𝑠𝑜 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 (𝑔)

10. Referir el resultado de extracto etéreo a materia seca: % EE/MS/100

11. Hoja de cálculo
N° N° Peso N° Peso Peso cazoleta + %EE med % Ref a
muestra tubo muestra cazoleta cazoleta grasa EE MS

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 DETERMINACIÓN DE ENERGÍA BRUTA
MATERIAL

1. Calorímetro y Bomba Calorimétrica (EQ-007)

2. Cápsula metálicas para combustión de las muestras
3. Hilo de ignición
4. Ácido benzoico para el cálculo de la energía equivalente
5. Tanque de oxígeno
6. CO3Na2 (3,68 g/L)

FUNDAMENTO

La cantidad de calor, medida en términos de calorías, que se produce cuando se oxida una
substancia totalmente en un calorímetro de bomba, se denomina la energía bruta (EB) de la
muestra.

Una muestra cuyo contenido energético se va a medir, se coloca en una cápsula de

combustión y a la vez se deposita en una bomba de oxígeno con un contenido de 25 a 30
atmósferas de oxígeno. La bomba se cubre con 2 L de agua un calorímetro adiabático.
Luego de haber ajustado la bomba y el calorímetro a la misma temperatura, la muestra se
quema mediante un hilo de ignición por el que hace pasar una corriente eléctrica que
produce una chispa que quema totalmente la muestra. El calor producido por la combustión
pasa al agua que registrará un incremento de temperatura, antes y después de quemar la
muestra; incremento que nos servirá para determinar el calor.

NOTA: Antes de empezar con una prueba de calorimetría verificar que cada una de las
partes que conforman la bomba calorimétrica.

PROCEDIMIENTO

Operar la bomba de oxígeno

La combustión con oxigeno en una bomba de oxígeno es muy efectivo y confiable método
para liberar toda la energía liberada de una muestra, sin embargo, siempre debe ser
observado cuando se va a usar el equipo:

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 1. No sobrecargar la bomba con mucha cantidad de muestra o una muestra que puede
que podría reaccionar con una explosión violenta.
2. No sobrecargar la bomba con mucho oxígeno, La carga inicial de presión no debería
exceder las 40 atmósferas
3. No realizar una ignición en la bomba sola en un lugar abierto sin proporcionar un
medio protector de enfriamiento
4. No realizar una ignición en la bomba si existen burbujas de gas liberadas de
cualquier punto de la bomba cuando ha sido sumergida en agua
5. Mantenerse lejos de la bomba durante la ignición y no manejar por al menos 20
segundos después de la ignición
6. Mantener la bomba en buena condición todo el tiempo. Cualquier parte que muestre
signos de desgaste, debe ser remplazada inmediatamente

Tamaño de la muestra: Para permanecer dentro de límites de seguridad, la bomba nunca

debe ser cargada con una muestra la cual libera más de 8000 calorías cuando es
combustionada con oxígeno y la presión inicial de oxígeno nunca debe exceder 40 atm de
presión. El límite general de la carga de la muestra no debe ser más de 1,1 gramo.

Colocar el fusible: Cortar el alambre y cortar a 10 cm de largo y colocarlo entre los dos
electrodos como se muestra en la figura:

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1. Pesar 1 g aprox de ácido benzoico y colocar en una cápsula limpia de combustión
(para la estandarización)
2. Colocar un trozo de 10 cm de longitud de alambre fusible entre los electrodos del
calorímetro y coloque la cápsula de combustión conteniendo la muestra, en el
electrodo del lazo. Ajustar el alambre fusible de manera que entre en contacto con la
muestra
3. Colocar 1 ml de agua en el cilindro del calorímetro y rotar a manera de humedecer
las paredes internas
4. Ensamblar la bomba, ajustando la tapa de rosca, cerrando la válvula de escape de
presión y llenándola con oxígeno a 15 atmósferas de presión
5. Colocar el balde en el calorímetro y poner la bomba dentro del balde, ajustar los
electrodos correspondientes
6. Colocar 2 litros de agua destilada en el balde del calorímetro. Hay que tener mucho
cuidado de no derramar nada
7. Cerrar la tapa y bajar el termómetro, para posteriormente poner a funcionar el motor
de circulación de agua
8. Ajustar la temperatura del agua en la cámara para que sea aproximadamente igual a
la del calorímetro
9. Leer y registrar la temperatura inicial con una aproximación de 0,0002 °C y luego
incinerar la muestra
10. Inmediatamente leer los aumentos de temperatura hasta su estabilización
considerando esta la temperatura final (La lectura y recolección de temperatura debe
realizarse a intervalos de un minuto en 5 min)

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 11. La temperatura del balde comenzará a subir dentro de los 20 seg después de la
ignición. Esta elevación de temperatura será rápida durante los primeros minutos
12. Medir el momento en el cual se alcanza el 60% de la elevación total de la
temperatura, si no puede ser estimado antes de la ignición, tomar la temperatura a
los 45, 60, 75, 90 y 105 seg después de la ignición
13. Después de este periodo rápido de elevación de temperatura (4 – 5 min) medir la
temperatura en intervalos de un minuto hasta que la temperatura sea constante
14. Levantar la tapa del calorímetro y extraer la bomba. Abrir la válvula de escape y
dejar escapar el oxígeno totalmente
15. Aflojar la tapa de la bomba y con cuidado tomar los trozos de alambre fusible que
no se fundieron y medir su longitud para los cálculos finales, teniendo presente su
equivalencia en la escala
16. Proceder a la titulación del ácido liberado en la combustión para lo cual se extrae
con cuidado la cápsula y se enjagua el contenido de la bomba y de la cápsula con
agua destilada
17. Recoger todo el ácido liberado en un vaso de 100 mL y adicionar 2 gotas de
indicador y proceder a su titulación con CO3Na2
18. Registrar el volumen consumido en la titulación y calcular la EB en cal/g

𝑐𝑎𝑙
(T. final − T. inicial) ∗ 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑡𝑎𝑛𝑡𝑒 ℎ𝑖𝑑𝑟𝑜𝑡é𝑟𝑚𝑖𝑐𝑎 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑏𝑜𝑚𝑏𝑎 − (𝑐𝑚 𝑎𝑙𝑎𝑚𝑏𝑟𝑒 𝑓𝑢𝑛𝑑𝑖𝑑𝑜 ∗
EB = 𝑐𝑚) − 𝑚𝑙 𝐶𝑂3𝑁𝑎2
𝑃𝑒𝑠𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎

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BIBLIOGRAFÍA
Association of Official Analytical Chemists (AOAC). Official Methods of Analysis, 18th
ed.; AOAC International: Gaithersburg, MD, USA, 2005.
Van Soest, P.J.; Robertson, J.B.; Lewis, B.A. Methods for dietary fiber, neutral detergent
fiber and nonstarch polysaccharides in relation to animal nutrition. J. Dairy Sci. 1991,
74, 3583–3597. [CrossRef]
Robertson, J.B.; Van Soest, P.J. The detergent system of analysis and its application to
human foods. In The Analysis of Dietary Fiber in Food; James, W.P.T., Theander, O.,
Eds.; Marcel Dekker Inc.: New York, NY, USA, 1981; pp. 123–142.

PhD. Ing. Andrés Haro Haro. MSc.

DIRECTOR

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