Inserto de T.Kodaka

L001242(0603)_EFIGS.
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Controllo di qualità a cura dell’utente

Specifiche di identità – Soluzione
di colore porpora scuro con un Microrganismo ATCC Pattern flagelli
leggero precipitato in una fiala
di vetro all’interno di un Klebsiella pneumoniae 13883 nessun flagello
contenitore di plastica.
Proteus vulgaris 13315 peritricoso*
Esito della coltura – Testare la
performance dei Flagella Stain Pseudomonas aeruginosa 27853 monotricoso**
Droppers adottando la
procedura di colorazione sopra * Flagelli diffusi su tutta la superficie cellulare.
descritta. Esaminare con ** Flagello polare singolo
microscopio ottico usando un
obiettivo a immersione in olio.
Le procedure prescritte per il controllo di qualità devono essere effettuate in conformità alle
norme vigenti o ai requisiti di accreditazione e alla prassi di controllo di qualità del laboratorio
specifico. Per una guida alla prassi di controllo di qualità appropriata, si consiglia di consultare
le norme CLIA e la documentazione NCCLS in merito.
RISULTATI
I batteri e i relativi flagelli devono assumere una colorazione porpora. Comparare la
morfologia a disegni, foto o descrizioni di riferimento.
LIMITAZIONI DELLA PROCEDURA

La colorazione Flagelli è usata per facilitare l’identificazione di batteri. Ai fini di
un’identificazione completa, si raccomanda l’esecuzione di altri test biochimici.
È stato dimostrato che la formazione di flagelli è influenzata da numerosi fattori quali età della
coltura, temperatura di incubazione e presenza di sostanze fermentanti nel terreno di coltura.4
I flagelli possono essere facilmente dislocati dalla cellula e pertanto si raccomanda di trasferire
i microrganismi nella goccia di acqua sul vetrino con estrema cura.
La durata della colorazione può influenzarne la qualità. Regolare la durata della colorazione
in modo da ottenere risultati ottimali.
PERFORMANCE2
Kodaka, et al. hanno sviluppato una procedura semplice e rapida per colorare i flagelli batterici
con la colorazione Flagelli concepita da E. Ryu. In un periodo di 18 mesi, oltre 100 ceppi di
batteri mobili e non mobili testati usando la procedura di colorazione, hanno dato risultati
soddisfacenti. I batteri testati comprendevano membri dei generi Anaerobiospirillium, Bacillus,
Bacteroides, Campylobacter, Clostridium, Escherichia, Fusobacterium, Listeria, Proteus,
Pseudomonas, Serratia e Wolinella.
DISPONIBILITÀ
N. di cat. Descrizione
261206 BBL Flagella Stain Droppers, 50 x 0,5 mL
BIBLIOGRAFIA: Vedere “References” nel testo inglese.
BBL ™
0Flagella Stain Droppers

Español
USO PREVISTO
Flagella Stain Droppers (colorante para flagelos [droppers]) se utilizan para mostrar los
flagelos bacterianos y su disposición en la célula.
RESUMEN Y EXPLICACION
Debido a su diámetro pequeño, los flagelos bacterianos no pueden verse con el microscopio
de luz sin usar colorantes especiales. La presencia de flagelos bacterianos, la longitud, forma,
curvatura, número por célula y disposición de los flagelos en la célula son datos útiles para la
identificación de las bacterias móviles. El colorante para flagelos se fundamenta en la fórmula
de ácido tánico y violeta cristal que fue descrita por primera vez por Ryu1 y luego por Kodaka,
Armfield, Lombard y Dowell2.
La presencia de flagelos es especialmente útil para la identificación de bacilos gramnegativos
no fermentadores3-5 y bacterias anaerobias2.
PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO

La solución alcohólica de violeta cristal actúa como el colorante primario. A medida que se
evapora el alcohol durante el proceso de tinción, el violeta cristal forma un precipitado
alrededor de los flagelos que aumenta su tamaño aparente. El ácido tánico y el sulfato
potásico de aluminio actúan como mordientes. El fenol retrasa el crecimiento de hongos.
REACTIVOS
Flagella Stain Droppers contienen: 0,6% de violeta cristal en etanol, 2,0% de ácido tánico,
2,5% de fenol y 5,7% de sulfato potásico de aluminio.
Advertencias y precauciones:
Para uso diagnóstico in vitro.
Perjudicial al entrar en contacto con la piel y por ingestión. Irritante para los ojos y la piel.
Mantener el envase bien cerrado. No respirar los gases/humos/vapores/aerosoles. Evitar el
contacto con los ojos y la piel.
Seguir el procedimiento de laboratorio que ha sido establecido para la manipulación y desecho
de materiales infecciosos.
Instrucciones para el almacenamiento: Conservar los Flagella Stain Droppers a 15 – 30 ºC. El
colorante para flagelos es fotosensible. Proteger de la luz. Flagella Stain Droppers están listos
para su empleo inmediato.
La fecha de caducidad se aplica al producto conservado en su envase intacto de la forma
indicada.
Deterioro del producto: No utilizar un producto si no cumple las especificaciones de identidad
y rendimiento.
RECOGIDA Y PREPARACION DE LAS MUESTRAS

Recoger las muestras en recipientes estériles o con torundas estériles y transportarlas
inmediatamente al laboratorio según las pautas recomendadas3-5.
Preparar cada muestra utilizando los procedimientos apropiados para ella3-5.
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PROCEDIMIENTO
Materiales suministrados: Flagella Stain Droppers y rompeampollas .
Materiales necesarios pero no suministrados: Portaobjetos de vidrio para microscopio, asa de
inoculación, mechero de Bunsen o incinerador, lápiz de cera y organismos para control de
calidad.
Procedimiento del análisis:
Preparación del frotis
1. Obtener un cultivo puro del organismo de prueba. Dejar crecer el organismo de prueba en
agar sangre durante 18 – 48 h3.
2. Dibujar una línea alrededor de la parte transparente del portaobjetos de microscopio con
un lápiz de cera.
3. Colocar una gota de agua destilada o desionizada en el portaobjetos, aproximadamente a
1 cm del borde esmerilado.
4. Tocar suavemente una colonia del cultivo de prueba con un asa de inoculación y después
tocar ligeramente la gota de agua sin tocar el portaobjetos. No mezclar.
5. Inclinar el portaobjetos un poco para que la gota resbale hasta el lado opuesto del
portaobjetos.
6. Dejar que el portaobjetos se seque al aire a temperatura ambiente. No fijarlo al calor.
Procedimiento de tinción
1. Manteniendo el dispensador del colorante para flagelos en posición vertical y con la punta
dirigida hacia afuera, apretarlo suavemente para romper la ampolla de vidrio dentro del
dispensador.
2. Invertir y apretarlo suavemente para inundar el portaobjetos con el colorante para
flagelos.
3. Dejar el colorante sobre el portaobjetos durante aproximadamente 4 minutos.
4. Quitar cuidadosamente el colorante del portaobjetos dejando correr agua sobre éste. No
inclinar el portaobjetos.
5. Cuando se haya terminado de enjuagar el portaobjetos, inclinarlo un poco para dejar
escurrir el agua sobrante. Dejar que el portaobjetos se seque al aire a temperatura
ambiente.
6. Examinar el portaobjetos al microscopio con el objetivo de inmersión de aceite.
Control de calidad del usuario:
Especificaciones de la identidad:
Solución de color morado oscuro Microorganismo ATCC Disposición
con un ligero precipitado de flageloslos
contenida en una ampolla de
vidrio envasada en un recipiente Klebsiella pneumoniae 13883 sin flagelos
plástico. Poteus vulgaris 13315 peritrica*
Respuesta del cultivo:
Comprobar el rendimiento de los Pseudomonas aeruginosa 27853 monotrica**
Flagella Stain Droppers
mediante el procedimiento de * Flagelos en toda la superficie celular.
tinción descrito anteriormente. ** Flagelo único polar.
Examinar con microscopio
utilizando el objetivo de
inmersión de aceite de un microscopio de luz.
El control de calidad debe llevarse a cabo conforme a la normativa local y/o nacional, a los
requisitos de los organismos de acreditación y a los procedimientos estándar de control de
calidad del laboratorio. Se recomienda consultar las instrucciones de NCCLS y normativas de
CLIA correspondientes para obtener información acerca de las prácticas adecuadas de control
de calidad.
RESULTADOS
Las bacterias y sus flagelos deben teñirse de color morado. Comparar su morfología con
descripciones, dibujos o fotografías de referencia.
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

La tinción de flagelos se utiliza para ayudar en la identificación de bacterias. Se recomienda
realizar estudios bioquímicos adicionales para la identificación completa.
Se ha demostrado que muchos factores, incluidas la edad del cultivo, la temperatura de
incubación y la presencia de sustancias fermentables en el medio de crecimiento, afectan la
flagelación4.
Los flagelos se desprenden fácilmente de las células. Se recomienda, por lo tanto, tener
cuidado al transferir los organismos a la gota de agua en el portaobjetos.
La calidad de la tinción puede resultar afectada por la duración del tiempo de tinción. Ajustar
el tiempo de tinción para lograr los resultados óptimos.
CARACTERISTICAS DE RENDIMIENTO2
Kodaka y cols. desarrollaron un procedimiento sencillo y rápido para la tinción de flagelos
bacterianos mediante el colorante para flagelos desarrollado por E. Ryu. En un período de 18
meses, más de 100 cepas de bacterias móviles y no móviles analizadas con el procedimiento de
tinción dieron resultados satisfactorios. Dichas cepas incluían miembros de los géneros
Anaerobiospirillium, Bacillus, Bacteroides, Campylobacter, Clostridium, Escherichia,
Fusobacterium, Listeria, Proteus, Pseudomonas, Serratia y Wolinella.
DISPONIBILIDAD
N.º cat. Descripción
261206 BBL Flagella Stain Droppers, 50 x 0,5 mL.
REFERENCIAS: Véase la sección “References” en el texto inglés.
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BIBLIOGRAFIA: Vedere “References” nel testo inglese.

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LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

REFERENCIAS: Véase la sección “References” en el texto inglés.

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