CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO INDUSTRIAL

Y DE SERVICIOS No. 228

Submódulo: Cuantifica Microorganismos

Docente: Q.B.P Claudia Alejandra Bastardo Márquez

Especialidad: Técnico Laboratorista Químico

Integrantes:

Benavente Ontiveros Miriam Nayeli

De la O Molina Jesús Manuel

García Rubio Yael Alejandro

Gardea Casas Cesar Giovanny

Garibay Valenzuela Giovanna Dennis

Grupo y Semestre: 4°J

Abril del 2023
Índice I. Resumen:..............................................................................................1
II. Justificación:..................................................................................................... 1
III. Objetivo:............................................................................................................1
IV. Introducción:.................................................................................................... 1
V. Marco teórico:...................................................................................................2
VI. Técnica:............................................................................................................4
VII. Materiales:.....................................................................................................10
VIII. Observaciones:............................................................................................10
IX. Conclusión:....................................................................................................11
 I. Resumen:
Esta práctica fue elaborada en tiempos, pero como primero medimos el pH, para
esto preparamos una solución de fosfato de sodio monobásico, luego le
agregamos 10 gotas NaOH, inclusive más si es necesario hasta que el pH se
acerque a 7.2, y finalmente vertemos toda la solución. Embotellamos,
esterilizamos y luego a refrigerar. Para el segundo tiempo ya después de
esterilizar la solución concentrada de fosfato, prepare la sol’n reguladora de
fosfatos de trabajo, dividimos y echamos 9 ml en 4 tubos de ensayo y finalmente
etiquetamos.

II. Justificación:
Esta práctica de llevo a cabo para que los alumnos supieran cómo realizar o
preparar una solución reguladora de fosfatos, el para que sirve, entre otras cosas,
como lo es su importancia y su uso.

III. Objetivo:
Preparar el material y los reactivos necesarios para prácticas posteriores según lo
marca la NOM-110-SSA1-1994

IV. Introducción:
En esta práctica vamos a desarrollar la preparación de una solución reguladora de
fosfató, y como primer tiempo se tiene la preparación del Fosfató de Sodio
Monobásico.

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 V. Marco teórico:
Para esta práctica nos basamos en la norma NOM-110-SSA1-1994. Esta Norma Oficial
Mexicana establece el procedimiento para la preparación de diluciones para el análisis
microbiológico de productos alimenticios, siendo de observancia obligatoria en el territorio
nacional para las personas físicas o morales que se dedican a efectuar este método en
alimentos nacionales o de importación, para fines oficiales. El método se basa en la
preparación de diluciones primarias, para obtener una distribución lo más uniforme
posible de los microorganismos presentes en la porción de muestra. La presente Norma
está orientada a proporcionar las guías generales para la preparación de diluciones para
el examen microbiológico de alimentos; en vista de la gran cantidad de productos en este
campo de aplicación, estas guías pueden ser inapropiadas para todos ellos en forma
detallada y para otros requerirse otros métodos diferentes.
La dilución primaria tiene por objeto obtener una distribución lo más uniforme posible de
los microorganismos contenidos en la muestra destinada para el análisis. La preparación
de diluciones decimales adicionales, si son necesarias, tiene como objetivo reducir el
número de microorganismos por unidad de volumen, para permitir, después de la
incubación, la observación de la prueba en el caso de tubos o matraces y la cuenta de
colonias en el caso de placas.
Para esta práctica se realizó una solución reguladora de fosfatos, bien, La Solución
Salina Amortiguada por Fosfatos (PBS) constituye una solución amortiguadora de pH
comúnmente empleada para procedimientos bioquímicos. Su osmolaridad y
concentración de iones (Cl-, Na+ y K+) es muy semejante a la del líquido extracelular de
los mamíferos. Esta solución se prepara a partir de Cloruro de Sodio, Fosfato de Sodio y,
en algunas formulaciones, con Fosfato de Potasio. Esta solución es isotónica y no-tóxica
para las células de los mamíferos. El PBS se emplea como vehículo neutro para células,
ya que no modifica el perfil de expresión y funcionamiento celular normal. Esta solución
es empleada comúnmente para lavar células a través de centrifugación. El PBS puede
ser empleado como diluyente para métodos de desecación de biomoléculas, ya que las
moléculas de agua presentes en el PBS se adhieren alrededor de la biomolécula
permitiendo inmovilizarla a una superficie sólida. Esta monocapa de agua evita que la
biomolécula sea desnaturalizada (o sufra modificaciones conformacionales) en el

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proceso de desecación. Los amortiguadores a base de carbonatos también son
empleados para este procedimiento, aunque con menor éxito. El PBS también es
empleado como referencia espectral para procedimientos de elipsometría por absorción
proteica El PBS puede ser complementado con aditivos para procedimientos específicos.
La adición de EDTA, por ejemplo, permite disgregar células cuando estas forman
agregados. La incorporación de Zinc, no obstante, no es recomendada ya que provoca la
precipitación de otras sales constituyentes.
ahora bien, se utilizaron las tiras que miden el pH, pero ¿qué hace el pH? La escala de
pH se usa para clasificar soluciones en términos de lo ácidas o básicas que son. Indica la
concentración de iones hidrógeno (H+) e iones hidróxido (OH-) en una solución. Estas
concentraciones iónicas son iguales en el agua pura, que tiene un pH de 7.
Escala de pH que muestra la lejía (12.6), polvo para hornear (9), sangre (7.3) y jugo de
limón (2)
Este valor de 7 en la escala de pH es importante porque indica una solución neutra.
Todas las demás sustancias se comparan con este punto neutro. Cualquier solución que
tiene un pH menor a 7 se considera ácida, y cualquier cosa con un pH arriba de 7 es
básica.
¿Qué es la esterilización?
El proceso de esterilización de material de laboratorio tiene como fin eliminar cualquier
carga microbiana, ya sea patógena o no, de los productos que por su uso lo requieran.
Dentro de este tipo de productos podemos encontrar puntas de micropipeta, medios de
cultivo, productos para cultivo celular, entre muchos otros. Siempre que se desee
esterilizar un producto o superficie, estos deben estar limpios y se deben seguir unas
pautas definidas según el método de esterilización escogido.
El objetivo de la esterilización no es otro que el de evitar la contaminación cruzada de
muestras o el crecimiento de microorganismos no deseados. En muchos ensayos
clínicos o de investigación científica se utilizan productos que están en contacto con
muestras biológicas o superficies para el crecimiento de una determinada especie o
especies de microorganismos. En caso de no haber esterilizado los productos o medios
de cultivo, podrían aparecer microrganismos no deseados que alterarían las condiciones
del ensayo y, por ende, invalidarían los resultados obtenidos.

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También, para esta práctica se usaron materiales como el matraz de aforación.
Los matraces aforados se emplean comúnmente en la preparación de soluciones
valoradas. Es decir, soluciones en las que se conocen las cantidades precisas de soluto
y de solvente a ser mezclados. Para esto, se mide el volumen del solvente en el matraz
aforado, mientras que el peso del soluto se determina con una balanza de precisión o
con una balanza analítica. Posteriormente, se le coloca el tapón al matraz. De este modo,
se puede agitar el recipiente para integrar los componentes de la solución sin temor a
que se derramen.

VI. Técnica:
Antes de comenzar deberán:
1. Lavarse las manos con agua y jabón, y limpiar su mesa de trabajo con la solución de
cloro que se encuentra previamente preparada.
2. Lavar todo el material de vidrio con jabón líquido, enjuagar con abundante agua de la
llave y al final con agua destilada, escurrir el exceso de agua y secarlo papel de estraza.
Primer tiempo:

Realizar los cálculos necesarios para preparar 25 ml de solución reguladora de fosfatos

concentrada según los requerimientos de la norma.
Pesar los gramos requeridos de Fosfato de Sodio Monobásico en un papel estraza

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 Colocar la mitad del volumen en el matraz de aforación de 25 ml (aproximadamente) y
agregar el Fosfato de Sodio con ayuda del papel donde lo peso haciendo un cono.

Una vez que el reactivo esté completamente disuelto, medir pH y si no se encuentra en

7.2 agregar 10 gotas de NaOH

Completar el aforo procurando no pasar de la marca de aforación (de pasar se dé la

marca tendrá que volver a realizar la solución)

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Cuando la solución se encuentre aforada, cada equipo deberá vaciar su reactivo en un
matraz Erlenmeyer de 100ml (que está en el escritorio de la maestra).
• Esterilizar durante 15 minutos a 121o ‡ 1,0°C.
• Conservar en refrigeración (solución concentrada).
SEGUNDO TIEMPO:
• Una vez que la solución de fosfatos concentrada esta estéril, a partir de ella elabore la
solución reguladora de Fosfatos de Trabajo.
• Realizar cálculos para preparar 100ml de solución reguladora de fosfatos de trabajo.

Colocar la mitad del volumen en el matraz de aforación de 100 ml, tomar los mililitros
calculados de la solución concentrada y con cuidado procurando no tocar las paredes
agregarlos a la solución.

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Aforar a 100ml y homogenizar

Distribuir 9ml en cada tubo de ensaye (4 tubos) y tapar con algodón y papel aluminio
Etiquetar tubos con grupo y mesa de trabajo.

• Esterilizar durante 15 minutos a 121o # 1,0°C.

• Conservar en refrigeración (solución de trabajo).
• No olvides tomar evidencia fotográfica durante toda la práctica.

VII. MATERIAL, EQUIPO Y REACTIVOS NECESARIOS

 4 tubos de ensaye
 Pipeta de 1 ml y 10 ml Espátula (Docente)
 Matraz de aforacion de 25 ml
 Matraz de aforación de 100ml
 Propipetero
 Piceta
 Gradilla
 4 tubos de ensaye
 Pipeta de 1 ml y 10 ml Espátula (Docente)
 Matraz de aforacion de 25 ml
 Matraz de aforación de 100ml
 Propipetero
 Piceta
 Balanza digital

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 Tiras de pH
 Hidróxido de Sodio 1 N
 Fosfato de Sodio Monobásico
 Autoclave

VIII. Observaciones:
 Logramos observar que, al medir el pH no nos daba el que necesitábamos,
tuvimos que echarle un aproximado de bastantes gotas

IX. Conclusión:
Al implementar todos los métodos y procedimientos correctos descritos en la
NOM-110-SSA1-1994, logramos obtener los resultados correctos, a pesar de
cometer varios errores en la práctica al tratar de ajustar el pH porque no lo
tomamos. Logramos la dilución para dispensar 9 ml en cada tubo (4 tubos), los
cubrimos con algodón, los marcamos para esterilizar por 15 minutos, logramos
el objetivo práctico de preparar el materiales y reactivos necesarios para su
posterior práctica de acuerdo a la NOM-110-SSA1-1994.

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