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    Actividad Evaluativa

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    María Victoria Navarro croswhite
    Gracias por compartir este interesante material. A continuación respondo tus preguntas: 1. El objetivo de la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) es amplificar una región específica de ADN de manera masiva. 2. La PCR tiene múltiples aplicaciones en biología molecular, como por ejemplo la detección de enfermedades genéticas, identificación de microorganismos, análisis de ADN antiguo, entre otras. 3. Los elementos y reactivos necesarios para una PCR son: ADN molde, cebadores (primers

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    Actividad Evaluativa

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    María Victoria Navarro croswhite
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    Gracias por compartir este interesante material. A continuación respondo tus preguntas: 1. El objetivo de la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) es amplificar una región específica de ADN de manera masiva. 2. La PCR tiene múltiples aplicaciones en biología molecular, como por ejemplo la detección de enfermedades genéticas, identificación de microorganismos, análisis de ADN antiguo, entre otras. 3. Los elementos y reactivos necesarios para una PCR son: ADN molde, cebadores (primers

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    Gracias por compartir este interesante material. A continuación respondo tus preguntas: 1. El objetivo de la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) es amplificar una región específica de ADN de manera masiva. 2. La PCR tiene múltiples aplicaciones en biología molecular, como por ejemplo la detección de enfermedades genéticas, identificación de microorganismos, análisis de ADN antiguo, entre otras. 3. Los elementos y reactivos necesarios para una PCR son: ADN molde, cebadores (primers

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    Técnicas para el análisis,

    estudio e identificación de
    Biomoléculas
    Técnicas
    Carbohidratos Proteínas Lípidos Ac. Nucleicos
    Reacciones de Técnicas para evaluar Técnicas para evaluar
    Identificación expresión y cantidad Técnicas que la expresión, separar e
    de estudian la identificar moléculas
    azúcares Cuantificación de solubilidad en de ARN y ADN.
    proteínas (Biuret, solventes orgánicos
    Test Barfoed Lowry, Bradford)
    (monosacáridos) Electroforesis en gel
    Separación de Trigliceridos en suero de agarosa
    Prueba Benedict proteínas (métodos
    (azúcares reductores) (electroforesis, enzimáticos
    cromatografía, colorimétricos) Reacción en Cadena
    Test Seliwanoff turbidimetría, de la polimerasa (PCR)
    (cetosas vs aldosas) inmunodifusión)
    Expresión de proteínas
    (Western-blot, ARN,
    Espectrometría de
    masas)
    Métodos de cuantificación de proteínas

    Hay varios métodos colorimétricos para determinar la


    concentración de proteínas en una muestra, teniendo en cuenta
    el tipo de proteína

    • Método de Biuret
    En una solución alcalina el Cu+2 (CuSO4) reacciona con el enlace
    peptídico de las proteínas dando un color purpúreo que se
    cuantifica espectrofotométricamente (540 nm)

    Reacción positiva: Violeta


    Reacción negativa: Azul
    Para tener en cuenta:
    El reactivo de Biuret detecta la presencia de proteínas, péptidos
    cortos y otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en
    sustancias de composición desconocida.

    Explicación: Está hecho de hidróxido potásico (KOH) y sulfato


    cúprico (CuSO4). El reactivo, de color azul, cambia a violeta en
    presencia de proteínas, y a rosa cuando se combina con
    polipéptidos de cadena corta.
    Métodos de cuantificación de proteínas

    • Método de Lowry - ácido bicinconínico (BCA)


    1 etapa (Biuret) – Complejo [Cu+2 – Proteína]
    La proteína se desnaturaliza y deja expuestos tirosina y
    triptófano
    2 etapa (Folin) - reacciona con el enlace peptídico de las
    proteínas dando un color purpúreo que se cuantifica
    espectrofotométricamente (540 nm)
    Métodos de cuantificación de proteínas

    • Método de Bradford
    En una solución alcalina el Cu+2 reacciona con el enlace peptídico
    de las proteínas dando un color purpúreo que se cuantifica
    espectrofotométricamente (540 nm)
    Procedimientos generales en la cuantificación de
    proteínas
    1. Curva de calibración

    Comparación de la Abs de
    la muestra frente a la
    curva
    Espectrofotometría
    Es un método de análisis óptico que cuantifica color.
    Proyecta una luz monocromática sobre una muestra y evalúa la
    cantidad de luz que es absorbida y la transmitida por ella.
    La espectrofotometría utiliza rangos de
    longitud de onda

    Rango del espectro en el que realiza mediciones un


    espectrofotómetro de luz visible
    Métodos de cuantificación de proteínas

    • Absorción UV

    Los aminoácidos aromáticos tirosina y triptófano confieren a las proteínas su


    característico espectro de absorción ultravioleta (UV) a 280 nm.

    Requiere volúmenes de muestra muy pequeños – 1 uL


    Resumen ensayos cuantificación proteínas
    Electroforesis
    Es una de las técnicas más sencillas para la
    separación de proteínas.

    Consiste en el desplazamiento de partículas


    cargadas a través de un medio aplicando un
    campo eléctrico

    partícula proteica
    Anodo (polo +) cargada negativamente Catodo (polo - )
    Electroforesis de proteínas

    gel de Velocidad
    poliacrilamida de corrida
    depende
    de la
    forma y el
    tamaño de
    las
    proteínas
    Electroforesis de proteínas
    Western blot (immunoblotting)
    Detecta proteínas específicas
    Las proteínas son transferidas del gel a una membrana
    ACTIVIDAD EVALUATIVA
    DE REFUERZO

    (PARCIAL 3 CORTE)

    Nota: Este es un trabajo individual y va a ser la nota del parcial del tercer corte
    (10%). Responder en este ppt y subir en formato ppt en el moodle.
    Link de ingreso

     https://vlab.amrita.edu/

    El registro es gratuito
    Crear un Login
    Primera Actividad
    Van a observar que ingresan como invitados (Guest)… e
    ingresan al link de “Chemical Sciences”
    Seleccionar Espectrofotometría
    Pueden utilizar la herramienta de traducción de Google
    Chrome para que puedan leer la información en
    español
    Utilizar la barra para desplazarse por las
    diferentes herramientas de aprendizaje.
    Actividades a realizar
    Una vez realizada la lectura de la teoría contestar las siguientes
    preguntas:

    ① Mencione una aplicación de la espectrofotometría?

    ② Qué tipo de luz (que se hace incidir sobre la muestra) se usa


    en esta técnica?

    ③ Si toda la luz pasa a través de una solución sin absorción,


    entonces el valor de absorbancia es _______ y ​el porcentaje
    de transmitancia es _______.
    Segunda Actividad
    Laboratorio en casa
    Tomar fotografías de las evidencias para adjuntar al trabajo.
    RECONOZCAMOS PROTEÍNAS EN LA LECHE
    PASO 1. En una pequeña vasija, colocar al fuego ¼ litro (250 cm3) de leche
    entera. Calentar, sin que llegue a hervir.

    PASO 2. Retirar del fuego y agregarle el jugo de medio limón. Se observará la


    aparición de grumos blancos, debido a la coagulación de una de las proteínas
    de la leche “la caseína”.

    PASO 3. Separa este solido del líquido (suero), utilizando un dispositivo de


    filtración (colador). Este suero obtenido, dividelo en dos porciones (1 porción
    de suero testigo, 2 porción – paso 4)

    ¿Sabías que la película que se forma en la superficie de la leche hervida la denominamos


    nata y, está formada por lacto albúminas y lacto globulinas (que son las proteínas de la
    leche coaguladas por el calor?
    • PASO 4. Colocar la 2 porción de suero en otra vasija y
    colocarla a hervir unos 5 -10 min. Observarás la precipitación
    (coagulación) de otras proteínas presentes en la leche: lacto
    albúminas y lacto globulinas.

    ① Registrar lo observado

    Observaciones

    Jugo de limón

    Suero (testigo)

    Suero
    Responder

    ② Qué agentes coagularon las proteínas de la leche?

    ③ Después de lo observado, porqué creen que la leche, quita la


    sensación de hambre?

    ④ Las proteínas así coaguladas podrían dar la reacción de


    Biuret?
    Si realizaras separación de estas proteínas por electroforesis:

    ④ Cuál es el medio de
    transporte más empleado
    en la electroforesis?

    ⑤ El gráfico corresponde a la
    separación de las
    proteínas de la leche. De
    qué factores dependió la
    movilización de sus
    proteínas?
    Tercera Actividad
    Electroforesis de ácidos nucleicos

    https://www.youtube.com/watch?v=SWicw3NyI68

    Una vez visualizado el video acerca del fundamento de la


    electroforesis de ADN, responder
    ① Cuál es la aplicación/utilidad de esta técnica
    ② De donde se obtiene la agarosa que se utiliza como medio
    para la corrida de los ácidos nucleicos?
    ③ Cuál es la función del EDTA dentro del Buffer TBE utilizado
    en la preparación del gel de agarosa?
    ④ De qué depende la separación de las moléculas de ADN?
    ⑤ Ingrese al labVirtual en el link aquí señalado.
    Observe la animación y el simulador y responda acerca del
    Bromuro de etidio: En qué momento se adiciona durante la
    electroforesis, cuál es su función y de qué color le permite
    observar las bandas de DNA?
    Setee las siguientes condiciones en el
    simulador

    Inicie la corrida
    Cuarta Actividad
    Van a ingresar al link de “Biotecnología e ingeniería
    biomédica” y seguimos esta ruta
    y mira el siguiente video: https://www.youtube.com/watch?
    v=mslMRgxbdOA
    Responder:

    ①Cuál es el objetivo de una Reacción en


    cadena de la polimerasa (PCR)
    ②Cuál es la aplicación de esta técnica?
    ③Cuáles son los elementos y/o reactivos que
    debe tener la PCR?
    ④Qué hace un termociclador?
    ⑤A qué corresponde un ciclo, en la PCR?

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