Master Spécialisé

Biotechnologie Appliquée à la production Végétale et

Industrie Agroalimentaire (BAVIA)
Module : Biotechnologie Végétale

Présenté par : Proposé par :

KHABCHA Mohamed Pr. FAIZE Mohamed
ELHOUARI Ayoub
AIT BOUCHIREB Mohcine
2022/2023
 Introduction

Problématique
PLAN
Objectif

Méthodologie

Résultats

Discussion

Conclusion
 Introduction

Problématique

Objectif

Introduction
PLAN

Méthodologie

Résultats

Discussion

Conclusion
 Introduction

Problématique

Objectif

Problématique: La régénération de P. santalinus est

difficile. Les méthodes conventionnelles ont échoué.
PLAN

Méthodologie

L'embryogenèse somatique est une alternative pour

Résultats
propager cette espèce menacée.

Discussion

Conclusion
 Introduction

Problématique

Objectif

Objectif: Etablir l'embryogenèse somatique et la

PLAN

Méthodologie

régénération de plantules à partir d'explants de

Résultats
cotylédons de P. santalinus.

Discussion

Conclusion
 Introduction
Matériel végétal

Problématique

Objectif Plante : le santal rouge (Pterocarpus santalinus)

Lieu de collecte : L’Inde
PLAN

Méthodologie

Résultats

Discussion

Conclusion
 Introduction
Stérilisation du matériel végétal et des surfaces
Préparation de matériel végétale
Problématique

Collecte des gousses sur une

plante de 15 ans dans la
Objectif forêt de bois de santal rouge Origine des Souches
de l'Andhra Pradesh.
PLAN

Méthodologie
Retrait des ailes des gousses et
Rinçage désinfection avec une solution de
Résultats Désinfection Savlon et de Tween 20 gt

Discussion

Stérilisation des surfaces de

travail avec de l'éthanol à Stérilisation
70% et du HgCl2 . de Surface
Conclusion
 Introduction
Milieux de culture et conditions de culture

• Culture des explants dans des tubes à essai contenant le milieu

Problématique
Cultu de base MS (Murashige et Skoog) ajusté à un pH de 5,8 avant
re autoclavage..
Objectif
d’exp
lants
PLAN

Méthodologie

Résultats • Placement des explants dans des tubes à essai contenant un

milieu de culture avec différents régulateurs de croissance(BAP, le
Ajout des 2,4-D et le NAA) à différentes concentrations.
Discussion
régulateurs de
croissance
Conclusion
 Introduction
Matériel et méthode
Acclimatation
Problématique • Extraction des plantules du milieu gélosé => éviter la casse de leurs
racines ou leurs poils absorbants.

Objectif

• Nettoyage des racines des plantules sous l'eau du robinet =>

élimination de tout support attaché.
PLAN

Méthodologie • Traitement des racines avec un antifongique (Bavistine) =>

élimination de contamination fongique.

Résultats
• Déplacement des plantules dans un verre en plastique transparent
(combinaison de terre de jardin et de tourbe).
• Arrosage des plantules (eau bidistillée stérilisée) et placement dans
une chambre de culture (température ambiante + photopériode de 16/8
Discussion h

• Acclimatation des plantules à des conditions stériles.

Conclusion • Sélection des plantules bien acclimatées pour une acclimatation
supplémentaire, déplacement dans les conditions de laboratoire (4
semaines).
 Introduction
Agents de lutte biologique

Problématique
Mesure de croissance

Mesure de croissance des cals et des embryons somatiques en fonction de la fréquence

Objectif callogénique et embryogène, respectivement.
PLAN

Méthodologie Fréquence allogénique (%) =

(Nb d'explants ayant produit des cals/Nombre total d'explants)×100

Résultats

Fréquence embryogène (%) =

Discussion
(Nb d'explants produisant des cals embryogènes/Nombre total d'explants)×100

Conclusion
 Problématique
Introduction

Objectif

Induction d’embryogenèse
PLAN

Méthodologie

Résultats
somatique
Discussion

Conclusion
 Problématique
Introduction

Objectif
PLAN

Méthodologie

Résultats
Graphe 1 : Influence de BAP sur la fréquence de callogénèse
Discussion

BAP seul (0,1 mg/l) :

• Pas d’effet dans la formation d’embryon somatique.
Conclusion • Effectif dans la formation de calle.
• de BAP : Fréquence maximale de callogénèse.
 Problématique
Introduction

Objectif
PLAN

Méthodologie

Résultats Graphe 2 : Influence du 2,4-D sur la fréquence de la callogénèse et de

l'embryogenèse somatique

Discussion 2,4-D seul :

• 1 mg/l de 2,4-D : Fréquence callogénique maximale - Fréquence de formation de cals

embryogéniques minimale.
Conclusion
• 4 mg/l de 2,4-D : Fréquence callogénique minimale - Fréquence de formation de cals
embryogéniques maximale.
 Problématique
Introduction

Objectif
PLAN

Méthodologie

Résultats

Discussion Graphe 3 : Effet du 2,4-D sur la formation du nombre moyen d'embryons

somatiques à l'étape globulaire et à l'étape cotylédonaire

2,4-D seul (4 mg/l) :

Conclusion

• Nombre moyen d'embryons cotylédonaires maximal.

 Problématique
Introduction

Objectif
PLAN

Méthodologie

Résultats
Graphe 4 : Influence du NAA sur la fréquence de la callogénèse et de l'embryogenèse
somatique
Discussion

NAA seul (4 mg/l):

Conclusion • Fréquence callogénique maximale.
• Fréquence de formation de cals embryogéniques maximale.
 Problématique
Introduction

Objectif
PLAN

Méthodologie

Résultats

Discussion Graphe 5 : Effet du NAA sur la formation du nombre moyen d'embryons

somatiques à l'étape globulaire et à l'étape cotylédonaire

Conclusion NAA seul (4 mg/l):

• Nombre moyen d'embryons cotylédonaires maximal.

BAP + 2,4-D (0.1 mg/l + 2 mg/l ) :
• Fréquence callogénique maximale
• Fréquence de formation de cals embryogéniques maximale
• Nombre d'embryons somatiques à l'étape cotylédonaire maximal
BAP + NAA (0.1 mg/l + 2 mg/l) :
• Fréquence callogénique significative.
• Fréquence de formation de cals embryogéniques significative.
 • Traitement individuel avec des auxines (2,4-D ou NAA) =>
Problématique
efficace pour l'induction de l'embryogenèse somatique.
Introduction

Objectif
PLAN

Méthodologie

Résultats

Discussion

• Explant en milieu MS non réactif en absence de régulateurs de

croissance.
Conclusion
Forme globulaire Forme de cœur Forme de torpédo Forme cotylédonaire

Formation et développement de l’embryon somatique a travers différentes étapes

 Problématique
Introduction

Objectif

Conversion des
embryons somatiques
PLAN

Méthodologie

en plantules
Résultats

Discussion

Conclusion
 Embryon cotylédonaire Embryon somatique isolé à
montrant l’apex de la pousse l'étape cotylédonaire
et racine
Nouvelles feuilles obtenues Formation de plantules de P. santalinus, avec le développement
à partir de la conversion simultané d'une pousse et d'une racine
d'un embryon somatique
 Problématique
Introduction

Objectif

Acclimatation des
PLAN

Méthodologie

Résultats plantules
Discussion

Conclusion
 Problématique
Introduction

Objectif

Plantule en période Développement de la plantule dans des

PLAN

Méthodologie d'acclimatation (18 semaines) conditions de laboratoire (20 semaines)

Résultats

Discussion

Plante en conditions de serre

Conclusion
 Problématique
Introduction

Objectif

Etudes histologiques
PLAN

Méthodologie

Résultats

Discussion

Conclusion
 Problématique
Introduction

Objectif

Cytoplasme dense de la cellule

PLAN

Méthodologie Présence de protoderme et de

embryonnaire entouré de
cellules méristématiques
cellules non embryonnaires
accumulées
Résultats

Discussion

Embryon globulaire sous

microscope
Conclusion
 Problématique
Introduction

Objectif
PLAN

Méthodologie

Résultats

Transition de l'embryon de stade Mouvement polaire des cellules

Discussion
globulaire à stade en forme de cœur embryogènes (polar-auxin transport)

Conclusion
 Introduction

Problématique
Les résultats de cette étude montrent que la régénération de plantules de Pterocarpus

Objectif santalinus à partir d'embryons somatiques est possible en utilisant des segments cotylédons

immatures comme explants.

PLAN

Méthodologie
Les chercheurs ont optimisé les combinaisons de régulateurs de croissance pour l'induction

de callus et la formation d'embryons somatiques.

Résultats
Ils ont constaté que la combinaison de 0,1 mg/l de BAP et 2 mg/l de 2,4-D ou de 0,1 mg/l de

BAP et 4 mg/l de 2,4-D a donné les meilleurs résultats en termes de fréquence embryogène.
Discussion

Conclusion
 Introduction

• Les auxines, en particulier le 2,4-D, ont été confirmées comme étant efficaces pour
Problématique l'embryogenèse somatique dans d'autres espèces ligneuses telles que les arbres ligneux et
légumineux. Les chercheurs ont également constaté que le 2,4-D était efficace pour
Objectif l'embryogenèse somatique chez P. marsupium et P. santalinus (Mehta et al., 2011) ; (Nunes
et al., 2018) ; (Han et Park, 1999); (Trigiano et al., 1999); (Buendia-González et al., 2012);
(Husain et al., 2010)
PLAN

Méthodologie

L'utilisation combinée de cytokinines et d'auxines a entraîné une meilleure embryogenèse

Résultats somatique par rapport à l'utilisation individuelle de ces hormones chez P. santalinus.
Ce résultat est similaire chez le caroubier où l'utilisation combinée de BAP et d'IAA a montré
Discussion une embryogenèse somatique efficace, alors que l'utilisation individuelle des hormones s'est
avérée inefficace (Canhoto et al., 2006)

Conclusion
 Introduction

Cette étude a montré aussi que que la période d'induction de l'embryogenèse somatique varie
Problématique
selon les espèces végétales et peut nécessiter une période d'induction prolongée.
La réussite de la micropropagation par la formation d'embryons somatiques dépend de son
Objectif développement et de sa conversion finale en plantules, ce qui reste difficile pour de
nombreuses espèces ligneuses. (Isah, 2019).
PLAN

Méthodologie
L'analyse histologique permet de différencier les cals embryogènes et non embryogènes formés
simultanément à partir du même explant et de suivre le mouvement polaire du cal
Résultats
embryonnaire vers la pointe.

Discussion L'utilisation de l'acétocarmine permet de différencier les tissus pro-embryonnaires,

embryonnaires et non embryonnaires (Fráterová et al., 2013); (Hazubska-Przybył et al., 2020).

Conclusion
 Introduction

Problématique
Les résultats de cette étude peuvent être utiles pour la conservation et la propagation de P.

santalinus, une espèce menacée et précieuse.

Objectif

La régénération de plantules à partir d'embryons somatiques peut être une alternative efficace
PLAN

Méthodologie

à la propagation végétative traditionnelle pour la production de plants de qualité supérieure.

Résultats

Cette méthode peut être utilisée pour la production de plantes résistantes aux maladies et pour
Discussion
la conservation de la diversité génétique de l'espèce.

Conclusion
 Introduction

Problématique

Objectif

Conclusion
PLAN

Méthodologie

Résultats

Discussion

Conclusion
 MERCI DE
VOTRE
ATTENTION