UNIVERSITAS PANCASILA

FAKULTAS FARMASI

SKRIPSI

ISOLASI SENYAWA ANTIOKSIDAN DAN

ANTIBAKTERI DARI KAPANG ENDOFIT
(48 BtSi-1.1) TANAMAN PANDAN HUTAN
(Freycinetia rigidifolia Hemsl.)

Oleh:

Alvina Santy
NPM: 2017210019

Dibuat untuk memperoleh

Gelar Sarjana Farmasi pada
Universitas Pancasila

JAKARTA
2022

2
 PERNYATAAN SKRIPSI DAN SUMBER INFORMASI

Saya yang bertanda tangan di bawah ini menyatakan bahwa skripsi

dengan judul “ISOLASI SENYAWA ANTIOKSIDAN DAN
ANTIBAKTERI DARI KAPANG ENDOFIT (48 BtSi-1.1)
TANAMAN PANDAN HUTAN (Freycinetia rigidifolia Hemsl.)“
adalah karya saya sendiri dan belum dianjurkan untuk publikasi dalam
bentuk apapun kepada pihak manapun. Informasi yang berasal atau
dikutip dari karya yang diterbitkan maupun tidak diterbitkan dari
penulis lain telah dicantumkan dalam daftar rujukan di bagian akhir
skripsi ini.

Jakarta, Juni 2022

Alvina Santy
NPM: 2017210019

i
UNIVERSITAS PANCASILA
FAKULTAS FARMASI
JAKARTA

PERSETUJUAN SKRIPSI

NAMA : ALVINA SANTY

NPM : 2017210019

PEMINATAN : FARMASI SAINS DAN TEKNOLOGI

JUDUL : ISOLASI SENYAWA ANTIOKSIDAN DAN

ANTIBAKTERI DARI KAPANG ENDOFIT
(48 BtSi-1.1) TANAMAN PANDAN HUTAN
(Freycinetia rigidifolia Hemsl.)

Disetujui oleh:

Pembimbing I Pembimbing II

(Apt. Dra. Hindra Rahmawati, M. Si) (Prof. ris. Dr. Partomuan Simanjuntak, M.Sc.)
Tanggal: Tanggal:

ii
 KATA PENGANTAR

Alhamdulillah, segala puji serta ucapan syukur penulis persembahkan kepada Allah
Subhanahu Wa Ta’ala, karena berkat ridho dan hidayahnya, penulis dapat diberikan
kekuatan serta kesabaran untuk menyelesaikan skripsi yang berjudul “Isolasi
senyawa antioksidan dan antibakteri dari kapang endofit (48 BtSi-1.1) tanaman
pandan hutan (Freycinetia rigidifolia, Hemsl.)“ tepat pada waktunya dengan
kesulitan yang masih dalam batas kemampuan penulis.
Adapun pengajuan skripsi ini ditujukan untuk memenuhi standar kelulusan pada
jenjang perkuliahan Strata I (S1) Universitas Pancasila. Lewat penyusunan skripsi
ini, penulis sadar akan beberapa kekurangan dan keterbatasan yang terdapat dalam
skripsi ini, agar skripsi ini dapat terus menjadi lebih baik, penulis terbuka atas segala
kritik dan saran yang membangun.
Tentunya dalam penyusunan skripsi ini tidak terlepas peran dari segenap pihak yang
telah memberikan banyak bantuan, baik itu berupa doa, motivasi, sumbangan ilmu
selama proses penyelesaian skripsi ini. Dengan hormat penulis ucapkan terima kasih
kepada Apt. Dra. Hindra Rahmawati, M. Si selaku dosen pembimbing skripsi 1
dan Prof. ris. Dr. Partomuan Simanjuntak, M. Sc. selaku dosen pembimbing
skripsi 2 yang senantiasa meluangkan waktunya untuk membimbing, mengarahkan,
dan memberikan saran selama penyusunan skripsi ini. Atas segala bantuan yang
diberikan, penulis juga mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada
segenap pihak yang terlibat:
1. Prof. Dr. apt. Shirly Kumala, M. Biomed. selaku Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Pancasila.
2. Prof. Dr. Andria Agusta selaku Kepala Laboratorium Kemoprospeksi. Pusat
Riset Bahan Baku Obat dan Obat Tradisional (BBO OT), Badan Riset dan
Inovasi (BRIN) Cibinong, telah mengizinkan melakukan penelitian skripsi.
3. Seluruh staff di Laboratorium Kemoprospeksi. Pusat Riset BBOT yang telah
membantu selama proses penelitian.

iii
 4. Orang tua serta adik penulis yang telah menemani, mendukung, dan
mendoakan penulis dalam menyelesaikan skripsi ini.
5. Seluruh teman-teman serta pihak-pihak yang tidak dapat disebutkan satu
persatu, yang telah memberi berbagai macam bantuan, yang mana tanpa
bantuan mereka, penulis tidak bisa menyelesaikan skripsi hingga sampai di
titik ini.

Penulis berharap setiap bantuan yang diberikan oleh segenap pihak yang telah
disebutkan maupun yang tidak disebutkan dapat menjadi ladang kebaikan dan
segala bantuan yang diberikan dapat dibalas dengan kebaikan di kemudian
hari. Tidak lupa juga penulis berharap agar skripsi ini dapat memberikan
manfaat dan berguna bagi kemajuan pendidikan.

Jakarta, Juni
2022

Penulis

iv
 DAFTAR ISI

PERNYATAAN SKRIPSI DAN SUMBER INFORMASI

PERSETUJUAN SKRIPSI........................................................................................ii

KATA PENGANTAR...............................................................................................iii

DAFTAR ISI...............................................................................................................v

DAFTAR GAMBAR...............................................................................................viii

DAFTAR TABEL.......................................................................................................x

DAFTAR LAMPIRAN..............................................................................................xi

ABSTRAK.................................................................................................................xii

ABSTRACT.............................................................................................................xiii

BAB I PENDAHULUAN...........................................................................................1

A. LATAR BELAKANG.................................................................................1

B. PERUMUSAN MASALAH........................................................................3

C. MANFAAT PENELITIAN..........................................................................3

D. TUJUAN PENELITIAN..............................................................................3

BAB II TINJAUAN PUSTAKA................................................................................6

A. KLASIFIKASI TANAMAN Freycinetia rigidifolia Hemsl........................6

B. KANDUNGAN DAN MANFAAT.............................................................5

C. KAPANG ENDOFIT...................................................................................5

D. EKSTRAKSI................................................................................................6

E. UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI..............................................................6

v
 F. MIKROBA UJI............................................................................................7

G. UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DENGAN PEREDAMAN RADIKAL

BEBAS 1,1-DIFENIL-2 PIKRILHIDRAZIL (DPPH)................................9

H. KROMATOGRAFI....................................................................................12

I. IDENTIFIKASI..........................................................................................14

J. LANDASAN TEORI.................................................................................17

K. HIPOTESIS................................................................................................17

BAB III RANCANGAN PENELITIAN.................................................................18

A. PRINSIP PENELITIAN.............................................................................18

B. TEMPAT PENELITIAN...........................................................................18

C. BAHAN PENELITIAN.............................................................................18

D. TAHAPAN PENELITIAN........................................................................18

BAB IV BAHAN, ALAT, DAN METODE PENELITIAN...................................20

A. BAHAN......................................................................................................20

B. ALAT.........................................................................................................20

C. METODOLOGI PENELITIAN.................................................................20

BAB V HASIL DAN PEMBAHASAN....................................................................18

A. BIOPRODUKSI SKALA LABORATORIUM KAPANG ENDOFIT 48

BTSI-1.1.....................................................................................................18

B. HASIL FRAKSINASI ETIL ASETAT KAPANG ENDOFIT 48 BTSI-1.1

DENGAN KROMATOGRAFI KOLOM..................................................18

C. HASIL UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN PADA TIAP FRAKSI.........18

D. HASIL UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI PADA TIAP FRAKSI..........18

vi
BAB VI SIMPULAN DAN SARAN........................................................................35

A. SIMPULAN...............................................................................................35

B. SARAN......................................................................................................35

DAFTAR PUSTAKA................................................................................................24

LAMPIRAN..............................................................................................................27

vii
 DAFTAR GAMBAR

Gambar II.1 Freycinetia rigidifolia Hemsl…...............................................................4

Gambar II.2 Staphylococcus aureus….........................................................................8

Gambar II.3 Escherichia coli…....................................................................................9

Gambar II.4 Struktur DPPH…....................................................................................11

Gambar II.5 Reaksi Peluruhan DPPH….....................................................................12

Gambar V.1 Analisis Fase Gerak KLT untuk Kromatografi Kolom…......................23

Gambar V.2 Kromatogram KLT Fraksi Gabungan…................................................24

Gambar V.3 Uji Antioksidan secara Kualitatif pada tiap Fraksi Hasil

Kromatografi Kolom……………………..….......................................25

Gambar V.4 Uji Aktivitas Antioksidan menggunakan microplate….........................26

Gambar V.5 Grafik Hubungan antara Konsentrasi dan Persen Inhibisi Uji

Aktivitas Antioksidan dengan Metode Peredaman Radikal Bebas

DPPH Fraksi 1………………...............................................................28

Gambar V.6 Grafik Hubungan antara Konsentrasi dan Persen Inhibisi Uji

Aktivitas Antioksidan dengan metodr Peredaman Radikal Bebas

DPPH Fraksi 3…...................................................................................28

Gambar V.7 Grafik Hubungan antara Konsentrasi dan Persen Inhibisi Uji

Aktivitas Antioksidan dengan metodr Peredaman Radikal Bebas

DPPH Fraksi 4…...................................................................................29

viii
Gambar V.8 Grafik Hubungan antara Konsentrasi dan Persen Inhibisi Uji

Aktivitas Antioksidan dengan metodr Peredaman Radikal Bebas

DPPH Katekin…...................................................................................29

Gambar V.9 Hasi; Uji Skrining Antibakteri dengan Bakteri Gram

Positif Staphylococcus aureus…...........................................................30

Gambar V.10 Hasil Uji Skrining Antibakteri dengan Bakteri Gram

Negatif Escherichia coli…....................................................................31

ix
 DAFTAR TABEL

Tabel II.1 Intensitas Antioksidan................................................................................12

Tabel V.1 Hasil Fraksinasi Fase Etil Asetat dengan Kromatografi Kolom................24

Tabel V.2 Hasil Uji Aktivitas Antioksidan secara Kuantitatif...................................27

x
 DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Skema Prosedur Kerja............................................................................36

Lampiran 2. Perhitungan Konsentrasi dan Nilai IC50................................................37

Lampiran 3. Gambar Bahan Penelitian dan Alat Instrument yang digunakan...........39

xi
 ABSTRAK

(A) ALVINA SANTY (2017210019)

(B) ISOLASI SENYAWA ANTIOKSIDAN DAN ANTIBAKTERI DARI

KAPANG ENDOFIT (48 BtSi-1.1) TANAMAN PANDAN HUTAN
(Freycinetia rigidifolia Hemsl.)

(C) xiii + 36 Halaman; 3 Tabel, 14 Gambar, 3 Lampiran

(D) Kata kunci: Kapang Endofit 48 BtSi-1.1 (Freycinetia rigidifolia, Hemsl.),

pandan hutan, antibakteri, antioksidan, Bioautografi, 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil
(DPPH)

(E) Kapang endofit 48 BtSi-1.1 merupakan kapang yang diisolasi dari tanaman
pandan hutan (Freycinetia rigidifolia, Hemsl.). Tanaman ini bisa ditemukan
penyebarannya mulai dari Semenanjung Malaya, Sumatera, dan Kalimantan.
Senyawa fenolik utama pada ekstrak daun pandan hutan adalah golongan
flavonoid. Flavonoid memiliki khasiat sebagai antioksidan dan antibakteri, oleh
karena itu penelitian ini bertujuan untuk menguji aktivitas antioksidan dan
antibakteri dari kapang endofit 48 BtSi-1.1 dimana kapang endofit tersebut
memiliki metabolit sekunder yang menyerupai tanaman inangnya walaupun
bagian tanaman yang dipakai berbeda. Uji aktivitas antibakteri dilakukan
dengan metode Skrining Bioautografi-Kromatografi Lapis Tipis, kemudian
dilanjutkan dengan uji kuantitatif antioksidan dengan metode peredaman
radikal bebas 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH). Berdasarkan hasil uji nilai
IC50 dapat disimpulkan bahwa ekstrak kapang endofit 48 BtSi-1.1 memiliki
aktivitas antioksidan yang sangat kuat dengan nilai IC50 pada fraksi 1 sebanyak
41,92 dan sangat lemah pada fraksi 3 sebanyak 433,83, fraksi 4 sebanyak
740,27. Hasil uji antibakteri secara kualitatif dengan bioautografi tidak
ditemukan aktivitas antibakteri. Hasil penelitian menunjukkan bahwa kapang
endofit 48 BtSi-1.1 dari tanaman pandan hutan (Freycinetia rigidifolia,
Hemsl.) memiliki aktivitas antioksidan yang sangat rendah dan tidak memiliki
aktivitas sebagai antibakteri.

(F) Daftar Pustaka: 26 buah (1982-2021)

(G) Apt. Dra. Hindra Rahmawati, M. Si.;

Prof. ris. Dr. Partomuan Simanjuntak, M.Sc.

(H) 2022

xii
 ABSTRACT

(A) ALVINA SANTY (2017210019)

(B) ISOLATION OF ANTIOXIDANT AND ANTIBACTERIAL COMPOUNDS

FROM ENDOPHYTIC FUNGI (48 BtSi-1.1) OF PANDAN HUTAN PLANT
(Freycinetia rigidifolia Hemsl.)

(C) xiii + 36 Pages; 3 Tables, 14 Figures, 3 Appendices

(D) K ey w ords : Endophytic fungi 48 BtS i- 1.1 (Fr eycinet ia

r igidifolia , H ems l.), P andan H utan, antibact erial, antioxidan t,
1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (D PP H )

(E) The endophytic fungi 48 BtSi-1.1 was isolated from the forest pandanus
plant (Freycinetia rigidifolia, Hemsl.). This plant can be found spreading
from the Malay Peninsula, Sumatra, and Kalimantan. The main phenolic
compounds in forest pandan leaf extract are flavonoids. Flavonoids have
antioxidant and antibacterial properties, therefore this study aimed to test
the antioxidant and antibacterial activity of the endophytic fungi 48 BtSi-1.1
where the endophytic fungi has secondary metabolites that resemble the
host plant although the plant parts used are different. The antibacterial
activity test was carried out using the Bioautography Screening-Thin Layer
Chromatography method, followed by quantitative antioxidant testing using
the 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) free radical scavenging method.
Based on the results of the IC50 value test, it can be concluded that the
endophytic fungi extract 48 BtSi-1.1 has very strong antioxidant activity
with IC50 values in fraction 1 as much as 41.92 and very weak in fraction 3
as much as 433.83, fraction 4 as much as 740.27. The results of the
qualitative antibacterial test with bioautography did not find antibacterial
activity. The results showed that the endophytic fungi 48 BtSi-1.1 from the
forest pandan plant (Freycinetia rigidifolia, Hemsl.) had very low
antioxidant activity and had no antibacterial activity.

(F) Bibliography: 26 pieces (1982-2021)

(G) Apt. Dra. Hindra Rahmawati, M. Si.;

Prof. ris. Dr. Partomuan Simanjuntak, M.Sc.

(H) 2022

xiii
 BAB I
PENDAHULUAN

A. LATAR BELAKANG
Penyakit infeksi merupakan salah satu penyakit yang banyak diderita
masyarakat Indonesia sejak dahulu. Penyebab penyakit infeksi ini adalah
mikroba patogen dan dapat ditanggulangi menggunakan obat modern seperti
antibiotik (1). Penggunaan antibiotik yang luas dan tidak rasional dapat
menimbulkan permasalahan yaitu munculnya mikroba patogen yang resisten
terhadap antibiotik. Meningkatnya resistensi antibiotik akan meningkatkan
lama perawatan penderita, biaya kesehatan, serta angka kematian (2).
Sebagai solusi resistensi antibiotik, telah banyak dikembangkan
penggunaan tanaman tradisional sebagai obat (2). Indonesia penuh dengan
keanekaragaman hayati yang memiliki beragam spesies tanaman dan
diantaranya berpotensi sebagai tanaman obat (2). Kondisi ini menunjukkan
bahwa diperlukan jumlah tanaman yang banyak dan waktu panen yang
memadai. Hal ini dapat diatasi dengan penggunaan mikroba endofit yang
menghasilkan metabolit sekunder menyerupai khasiat dari tanaman inangnya.
Mikroba tumbuh lebih cepat dan membutuhkan ruang jauh lebih kecil serta
akan mengurangi pemakaian tanaman dalam jumlah besar sehingga proses
produksi lebih mudah dan kelestarian lingkungan tetap terjaga (3).
Mikroba endofit yang umum diisolasi dari suatu spesies tanaman adalah
kapang. Kriteria yang dapat menghasilkan kapang endofit adalah tanaman yang
digunakan dalam pengobatan tradisonal (3). Salah satu tanaman obat yang
dapat dimanfaatkan secara tradisional oleh masyarakat Indonesia adalah
tanaman pandan hutan (Freycinetia rigidifolia, Hemsl). Freycinetia memiliki
senyawa metabolit sekunder yaitu golongan senyawa alkaloid, flavonoid,
saponin, dan tanin. Sejumlah tanaman yang mengandung flavonoid telah

1
 3

dilaporkan memiliki aktivitas antioksidan, antibakteri, antivirus, antiradang,

antialergi, dan antikanker (4).
 2

Penelitian sebelumnya, menghasilkan bahwa ekstrak etanol daun pandan

hutan memiliki daya hambat terhadap bakteri Escherichia coli dan
Staphylococcus aureus (1,5). Adanya pengujian aktivitas antibakteri pada daun
pandan hutan (Freycinetia sesiliflora) ini mendorong penulis melakukan
penelitian dengan melakukan pengujian kualitatif bioautografi dari isolat
kapang endofit dari tanaman pandan hutan (Freycinetia rigidifolia, Hemsl.).
bioautografi adalah suatu metode pendeteksian untuk mememukan suatu
senyawa antimikroba yang belum teridentifikasi dengan cara melokalisir
aktivitas antimikroba tersebut pada suatu kromatogram. Metode ini
memanfaatkan pengerjaan Kromatografi Lapis Tipis (KLT). Pada bioautogafi
ini didasarkan atas efek biologi berupa antibakteri, antiprotozoa, antitumor dan
lain-lain dari substansi yang diteliti (6).
Selain uji aktivitas antibakteri, dilakukan pengujian lain yaitu uji
aktivitas antioksidan. Antioksidan dapat melindungi tubuh manusia dari
berbagai penyakit yang disebabkan oleh radikal bebas. Tanaman pandan hutan
berpotensi menjadi antioksidan alami karena mengandung senyawa fenolik
yang diyakini sebagai fitokimia utama yang bertanggung jawab untuk aktivitas
antioksidan bahan tanaman. Senyawa fenolik utama pada daun pandan hutan
dan ekstraknya adalah golongan flavonoid. Hal tersebut menjadi landasan
penulis untuk menguji aktivitas antioksidan kapang endofit dari tanaman
pandan hutan (Freycinetia rigidifolia, Hemsl.) dimana kapang endofit memiliki
metabolit sekunder yang menyerupai tanaman inangnya, walaupun bagian
tanaman yang digunakan berbeda (4).
Berdasarkan uraian diatas, maka penulis melakukan pengembangan dari
penelitian sebelumnya dengan melanjutkan uji aktivitas antibakteri secara
kualitatif dan menguji aktivitas lainnya yaitu aktivitas antioksidan dari isolat
kapang endofit dari tanaman pandan hutan (Freycinetia rigidifolia, Hemsl.).
 3

B. PERUMUSAN MASALAH
Apakah isolat kapang endofit 48 BtSi-1.1 yang diisolasi dari tanaman pandan
hutan Freycinatia rigidifolia, Hemsl dapat menghasilkan senyawa kimia yang
berkhasiat sebagai antioksidan dan antibakteri.

C. MANFAAT PENELITIAN
1. Secara umum, hasil penelitian ini diharapkan mampu mengoptimalisasikan
pemanfaatan tanaman dalam menghasilkan senyawa kimia yang berguna
dalam bidang kefarmasian.
2. Secara khusus, hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi
terkait senyawa kimia yang bersifat bioaktif hasil bioproduksi kapang
endofit 48 BtSi-1.1 dari tanaman pandan hutan berikut potensinya sebagai
antioksidan dan sebagai antibakteri.

D. TUJUAN PENELITIAN
Tujuan penelitian ini adalah :
1. Untuk menentukan aktivitas antioksidan isolat dari kapang endofit tanaman
pandan hutan (Freycinatia rigidifolia, Hemsl.).
2. Untuk mengetahui aktivitas antibakteri yang terdapat pada isolat dari
kapang endofit tanaman pandan hutan (Freycinetia rigidifolia, Hemsl.)
terhadap bakteri Gram positif dan Gram negatif.
 BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

A. KLASIFIKASI TANAMAN Freycinetia Rigidifolia Hemsl.

Gambar II.1. Freycinetia rigidifolia Hemsl (7)

Klasifikasi tanaman pandan hutan (7,8):
Kingdom : Plantae
Divisi : Magnoliophyta
Kelas : Liliopsida
Ordo : Pandanales
Famili : Pandanaceae
Genus : Freycinetia
Spesies : Freycinetia rigidifolia Hemsl.
Freycinetia rigidifolia, Hemsl. atau pandan hutan telah lama dikenal dan digunakan bukan saja
oleh masyarakat Indonesia tetapi juga masyarakat di dunia karena
keistimewaannya baik sebagai tanaman hias maupun penghasil serat dan fungsi
lainya. Freycinetia rigidifolia, Hemsl. langsung dapat dikenali di lapangan
dengan tampilan morfologi perawakan sedang (diameter batang 1, 2 sampai 5
cm), daun yang berbentuk sabuk (lanceolate-elongate), dan cuping rata dengan
duri-duri yang sangat jelas di tepiannya. Daun muda seringkali memiliki
cuping berwarna ungu. Jenis ini diketahui memiliki penyebaran mulai dari
Semenanjung Malaya, Sumatera, dan Kalimantan. Meski begitu, jenis ini
belum pernah diketahui keberadaannya di bagian selatan pulau sumatera.

4
 5

Freycinatia rigidifolia ditemukan sepanjang eksplorasi di setiap lokasi, mulai

dari Semende Darat Laut hingga Ulu, mulai dari ketinggian 500 hingga 2000
mdpl (7,8).

B. KANDUNGAN DAN MANFAAT

Tumbuhan dari genus Freycinetia, termasuk dalam famili Pandanaceae, terdiri dari sekitar 180 spesies
dan didistribusikan terutama di daerah tropis dan subtropis. Namun, tidak ada
studi fitokimia tanaman dari genus ini telah dipelajari sampai saat ini. Sebagai
bagian dari studi fitokimia pada tanaman Pandanaceae, (9).
Pada penelitian yang telah dilakukan sebelumnya ditemukan kandungan
kimia flavonoid, tanin, terpenoid, dan saponin. Sejumlah tanaman mengandung
flavonoid telah dilaporkan memiliki aktivitas antioksidan, antibakteri,
antivirus, antiradang, antialergi, dan antikanker. sejumlah tanaman obat yang
mengandung flavonoid telah dilaporkan memiliki aktivitas antioksidan,
antibakteri, antivirus, antiradang, antialergi, dan antikanker. Senyawa flavonoid
adalah senyawa yang mengandung C15 terdiri atas 2 inti fenolat yang
dihubungkan dengan 3 satuan karbon. mekanisme kerja dari flavonoid dalam
menghambat pertumbuhan bakteri antara lain bahwa flavonoid dalam
menghambat pertumbuhan bakteri antara lain bahwa flavonoid menyebabkan
terjadinya kerusakan permeabilitas dinding sel bakteri dan mampu
menghambat motilitas bakteri (7,8).
Pada ekstrak etanol pandan hutan spesies baru Freycinetia sessiliflora
ditemukan mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, terpenoid-steroid,
saponin, fenol dan tannin. Sejumlah tanaman mengandung flavonoid telah
dilaporkan memiliki aktivitas antioksidan, antibakteri, antivirus, antiradang,
antialergi, dan antikanker. Artanti, et al (2006) menyatakan bahwa sejumlah
tanaman obat yang mengandung flavonoid telah dilaporkan memiliki aktivitas
antioksidan, antibakteri, antivirus, antiradang, antialergi, dan antikanker (8).

C. KAPANG ENDOFIT
 6

Kapang merupakan fungi yang berfilamen, multiseluler dan termasuk organisme aerob sejati. Tubuh
kapang dibedakan atas dua bagian yaitu miselium dan spora. Miselium
merupakan kumpulan beberapa filamen yang disebut hifa. Spora fungi
dibentuk dari hifa udara dan dapat berupa spora seksual (askopora,
basidiospore, zigospora, oospore) dan aseksual (konidiospora, sporangiospore,
arthrospora, klamidospora, blastospora) (10).
Kapang dapat dibiakkan dalam substrat atau medium dengan konsentrasi
gula yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri secara umum. Kebanyakan
kapang dapat berkembangbiak dengan baik pada media yang mengandung
karbohidrat dengan pH 3,4-5,6. Pada umumnya kapang lebih suka
oligosakarida. Kebutuhan nutrisi untuk setiap kapang berbeda-beda. Beberapa
kapang dapat tumbuh dengan baik pada media yang mengandung sumber
makanan makronutrien (karbohidrat, lemak, protein) dan mikronutrien
(mineral). Konsentrasi media dapat dibuat bermacam-macam tergantung
kepada keperluannya. Media padat umumnya digunakan untuk mengamati
penampilan morfologi koloni dan mengisolasi biakan murni (11).

D. EKSTRAKSI
Ekstraksi adalah kegiatan penarikan kandungan kimia yang dapat larut sehingga terpisah dari bahan yang
tidak dapat larut sehingga terpisah dari bahan yang tidak dapat larut dengan
pelarut cair. Senyawa aktif yang terdapat dalam sebagai simplisia dapat
digolongkan ke dalam golongan minyak atsiri, alkaloid, flavonoid, dan lain-
lain. Dengan diketahuinya senyawa aktif yang dikandung simplisia akan
mempermudah pemilihan pelarut dan cara ekstraksi yang tepat.
Untuk menyari hampir semua yang terkandung dalam ekstrak harus
mempertimbangkan factor selektivitas, ekonomis, kemudahan bekerja dengan
cairan pelarut tersebut, ramah lingkungan dan aman digunakan (12).

E. UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI

 7

Uji aktivitas antibakteri dilakukan, dengan maksud untuk menentukan potensi zat antibakteri,
konsentrasinya dalam cairan tubuh dan jaringan, serta kepekaan
mikroorganisme terhadap zat antibakteri pada konsentrasi tertentu.
Metode bioautografi adalah suatu metode untuk menunjukkan ada tidaknya aktivitas biologi dari
senyawa hasil pemisahan dengan KLT terhadap aktivitas tertentu. (13).
bioautografi adalah suatu metode pendeteksian untuk mememukan suatu senyawa antimikroba yang
belum teridentifikasi dengan cara melokalisir aktivitas antimikroba tersebut
pada suatu kromatogram. Metode ini memanfaatkan pengerjaan
Kromatografi Lapis Tipis (KLT). Pada bioautogafi ini didasarkan atas efek
biologi berupa antibakteri, antiprotozoa, antitumor dan lain-lain dari
substansi yang diteliti.
Biautografi dapat dipertimbangkan karena paling efisien untuk mendetekski komponen antimikroba,
sebab dapat melokalisir aktivitas meskipun dalam senyawa aktif tersebut
terdapat dalam bentuk senyawa kompleks dan dapat pula diisolasi langsung
dari komponen yang aktif.
Bioautografi dapat dibagi atas tiga kelompok, yaitu:
1. Bioautografi langsung
Bioautografi langsung, yaitu dimana mikroorganismenya tumbuh secara langsung di atas lempeng
Kromatografi Lapis Tipis (KLT). Prinsip kerja dari metode ini adalah
suspensi mikroorganisme uji yang peka dalam medium cair
disemprotkan pada permukaan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) yang
telah dihilangkan sisa-sisa eluen yang menempel pada lempeng
kromatogram. Setelah itu dilakukan inkubasi pada suhu dan waktu
tertentu.
2. Bioautografi kontak
Metode ini didasarkan atas difusi dari senyawa yang telah dipisahkan dengan Kromatogafi Lapis
Tipis (KLT) atau kromatografi kertas. Lempeng kromatografi tersebut
ditempatkan di atas permukaan Nutrien Agar yang telah diinokulasikan
dengan mikroorganisme yang sensitif terhadap senyawa antimikroba
yang dianalisis. Setelah 15-30 menit, lempeng kromatografi tersebut
dipindahkan dari permukaan medium. Senyawa antimikroba yang telah
 8

berdifusi dari lempeng kromatogram ke dalam media agar akan

menghambat pertumbuhan bakteri setelah diinkubasi pada waktu dan
suhu yang tepat sampai 27 noda yang menghambat pertumbuhan
mikroorganisme uji tampak pada permukaan membentuk zona yang
jernih. Untuk memperjelas digunakan indicator aktivitas dehidrogenase.
3. Bioautografi celup
Bioautografi pencelupan, dimana medium agar telah diinokulasikan dengan suspensi bakteri
dituang di atas lempeng Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Pasa
prakteknya metode ini dilakukan sebagai berikut yaitu bahwa lempeng
kromatografi yang telah dielusi diletakkan dalam cawan petri, sehingga
permukaan tertutup oleh medium agar yang berfungsi sebagai base
layer. Setelah base layernya memadat, dituangkan medium yang telah
disuspensikan mikroba uji yang berfungsi sebagai seed layer.
Kemudian diinkubasi pada suhu dan waktu yang sesuai (6).

F. MIKROBA UJI
1. Staphylococcus aureus

Gambar II.2 Staphylococcus aureus (14)

Kingdom : Monera
Kelas : Bacilli
Ordo : Micrococaceae
Famili : Bacillales
Genus : Staphylococcus
Spesies : Staphylococcus aureus
 9

Morfologi
Staphylococcus aureus merupakan bakteri Gram positif dinding selnya terdiri dari peptidoglikan yang
sangat tebal dan memberi kekakuan untuk mempertahankan keutuhan sel.
Bakteri ini berbentuk bulat berdiameter 0,7-1,2 m, tersusun tidak beraturan
seperti buah anggur, bersifat fakultatif anaerob, tidak membentuk spora dan
tidak bergerak. Staphylococcus aureus tumbuh pada suhu optimum 37 C,
tetapi membentuk pigmen paling baik pada suhu kamar yaitu 20-25 C (14).

2. Escherichia coli

Gambar II.3 Escherichia coli (15)

Kingdom : Prokaryotae
Kelas : Schzommycetes
Ordo : Enterobacteriales
Famili : Enterobacteriaceae
Genus : Escherichia
Spesies : Escherichia coli
Morfologi
Escherichia coli merupakan bakteri Gram negatif berbentuk batang pendek yang memiliki Panjang
sekitar 2 m, diameter 0,7 m, lebar 0,4 m, dinding sel bakteri Gram negatif
tersusun atas membran luar, peptidoglikan dan membran dalam.
Peptidoglikan yang terkandung dalam bakteri Gram negatif memiliki
struktur yang lebih kompleks dibandingkan Gram positif. Membran luarnya
terdiri dari lipid, liposakarida, dan protein. Peptidoglikan berfungsi
mencegah sel lisis, menyebabkan sel kaku dan memberi bentuk kepada sel.
 10

Bakteri ini bersifat aerob dan dapat juga bersifat anaerob fakultatif.
Escherichia coli membentuk koloni yang bundar, cembung dan halus
dengan tepi yang nyata. Termasuk golongan mesofilik dengan suhu
pertumbuhan optimum 15-45°C, diatas suhu tersebut bakteri akan
mengalami inaktivasi (15).

G. UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DENGAN PEREDAMAN RADIKAL

BEBAS 1,1-DIFENIL-2 PIKRILHIDRAZIL (DPPH)
Antioksidan dipercaya mempunyai peran yang penting dalam tubuh untuk
melawan radikal bebas. Antioksidan adalah substansi yang dapat menunda,
melawan, atau meniadakan kerusakan oksidatif pada molekul target.
Antioksidan merupakan inhibitor bagi proses oksidasi bahkan dalam
konsentrasi yang relatif kecil dan memiliki fungsi fisiologis yang berbeda
dalam tubuh. Antioksidan merupakan first line dalam melawan kerusakan
akibat radikal bebas, dan sangat penting untuk menjaga kesehatan tubuh dalam
kondisi yang prima. (16)
Antioksidan melawan radikal bebas dengan jalan menyumbangkan satu
elektron kepada radikal bebas sehingga menjadi non radikal. Sebagian
senyawa antioksidan merupakan senyawa fenolik dan polifenolik seperti
flavonoid. Antioksidan dibagi menjadi beberapa kelompok, diantaranya:
1. Antioksidan enzimatis dan antioksidan non enzimatis
a. Antioksidan enzimatis misalnya enzim superoksida dismutase (SOD),
katalase, dan glutation peroksidase
b. Antioksidan non enzimatis dibagi menjadi 2 kelompok:
1) Antioksidan larut lemak, seperti tokoferol, karotenoid, flavonoid,
quinon, dan bilirubin
2) Antioksidan larut air, seperti asam askorbat, protein pengikat logam.
2. Berdasarkan fungsi dan mekanisme kerjanya, antioksidan dibagi menjadi
antioksidan primer, sekunder, dan tersier
a. Antioksidan Primer
 11

Antioksidan primer bekerja untuk mencegah pembentukan senyawa radikal baru dan mengikuti
mekanisme pemutusan rantai reaksi radikal dengan mendonorkan atom
Hidrogen secara cepat pada suatu lipid yang radikal, produk yang
dihasilkan lebih stabil dari produk awal. Contoh : Superoksida Dismutase
(SOD), Glutation peroksidase (GPx)
b. Antioksidan Sekunder
Antioksidan sekunder bekerja dengan cara mengkelat logam β yang bertindak sebagai pro-oksidan,
menangkap radikal, dan mencegah terjadinya reaksi berantai. Contoh :
vitamin E, vitamin C, β-caroten, isoflavon, bilirubin dan albumin.
c. Antioksidan Tersier
Antioksidan tersier bekerja memperbaiki kerusakan biomolekul yang disebabkan radikal bebas.
Contoh: metionin sulfide reduktase
3. Antioksidan alami
Antioksidan alami adalah antioksidan yang diperoleh dari hasil ekstraksi bahan alami. Contohnya :
vitamin A, vitamin E, vitamin C, karotenoid
4. Antioksidan sintetik
Antioksidan sintetik adalah antioksidan yang diperoleh dari hasil sintesa reaksi kimia. Contohnya:
Butylated Hydroxyanisol (BHA), Butylated Hydroxytoluena (BHT)

Gambar II.1. Struktur DPPH (16)

Radikal DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil) merupakan senyawa organik

yang mengandung nitrogen tidak stabil dengan absorbansi yang kuat pada
panjang gelombang maksimum 517 nm serta berwarna ungu gelap. DPPH
adalah radikal bebas yang stabil dan tidak membentuk dimer karena delokasi
elektron bebas. Sifat radikal bebas yang stabil pada DPPH menyebabkan
 12

DPPH sering dijadikan pereaksi dalam peredaman radikal bebas. Penggunaan

DPPH sebagai pereaksi peredaman radikal bebas juga dapat berlangsung
dengan cepat dengan proses yang sederhana (17).
Mekanisme kerja DPPH pada uji aktivitas antioksidan ialah terjadinya
peluruhan warna dari warna ungu menjadi kuning (stabil) karena antioksidan
mereduksi DPPH. Absorbansi yang kuat pada DPPH yang memiliki elektron
tidak berpasangan akan membuat antioksidan akan mendonorkan elektronnya
sehingga. Nilai persen inhibisi yang didapat setelah pengujian dengan
spektrofotometer UV-Vis akan diinterpretasikan sebagai IC50, yaitu jumlah
antioksidan yang diperlukan untuk menurunkan konsentrasi awal DPPH
sebesar 50% (17,18).

Gambar II 5. Reaksi peluruhan DPPH (17)

Prinsip kerja antioksidan dengan metode DPPH adalah senyawa DPPH

akan mengambil hidrogen dari antioksidan sehingga radikal bebas tersebut
berubah menjadi suatu senyawa yang non radikal. Hasil dari reaksi ini adalah
terjadinya perubahan warna dari warna ungu menjadi warna kuning yang dapat
diukur dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 517 nm.
Senyawa yang diukur akan menghasilkan nilai IC50 atau konsentrasi hambatan
50% yaitu konsentrasi yang diperlukan untuk menghambat 50% proses
oksidatif dari radikal bebas secara in vivo. Senyawa antioksidan memiliki
intensitas yang berbeda-beda yang dapat dipengaruhi oleh berbagai faktor
seperti cahaya, suhu tinggi, pengeringan dan lain sebagainya. Intensitas
antioksidan dapat dibagi menjadi beberapa kelompok seperti yang tertera
dalam tabel berikut
 13

Tabel II.1. Intensitas Antioksidan (19)

Intensitas Antioksidan Nilai IC50 (ppm)

1. Sangat kuat <50

2. Kuat 50-100

3. Sedang 100-150

4. Lemah 150-200

5. Sangat Lemah >200

H. KROMATOGRAFI
Kromatografi didefinisikan sebagai prosedur pemisahan zat terlarut oleh suatu proses migrasi diferensial
dinamis dalam sistem yang terdiri dari 2 fase atau lebih, salah satu diantaranya
bergerak secara berkesinambungan dalam arah tertentu dan didalamnya zat-zat
itu menunjukan perbedaan mobilitas disebabkan adanya perbedaan dalam
absorbs, partisi, kelarutan, tekanan uap, ukuran molekul, atau kerapatan muatan
ion. Dengan demikian masing-masing zat dapat diidentifikasikan atau
ditetapkan dengan metode analitik (20).
Teknik kromatografi pada umumnya membutuhkan zat terlarut
terdistribusi diantara 2 fase yeitu, fase diam dan fase gerak. Fase gerak
membawa zat terlaur melalui media hingga terpisah dari zat terlarut lainnya,
yang tereluasi lebih awal atau lebih akhir. Umumnya zat terlaut dibawa melalui
media pemisah oleh aliran suatu pelarut berbentuk cairan atau gas yang disebut
eluen. Fase diam dapat bertindak sebagai penjerap, seperti halnya penjerap
alumunium yang diaktifkan, silika gel, dan resin penukar ion atau dapat
bertindak melarutkan zat sehingga terjadi partisi antara fase diam dan fase
gerak.
1. Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
 14

Kromatografi lapis tipis merupakan metode pemisahan fitokimia. Lapisan yang memisahkan, yang
terdiri dari beberapa butir (fasa diam), ditempatkan pada penyangga berupa
pelat gelas, logam atau lapisan yang cocok. Campuran yang akan dipisah,
berupa larutan, ditotolkan bercak atau pita (awal). Setelah pelat atau lapisan
ditaruh didalam bejana tertutup rapat yang berisi larutan pengembang yag
cocok (fase gerak). Selanjutnya senyawa tidak berwarna harus dideteksi.
2. Kromatografi Kolom
Kromatografi kolom merupakan metode pemisahan yang cukup baik untuk sampel lebih dari 1g. Pada
kromatografi kolom, sampel yang akan dilakukan pemisahan diletakkan
didalam tabung kaca berbentuk silinder, pada bagian bawah terdapat
penutup berupa katup atau keran. Fase gerak dibiarkan mengalir ke bawah
melalui fase diam pada kolom. Senyawa yang tidak tertahan oleh fase diam
akan keluar terlebih dahulu, lalu diikuti senyawa lainnya kemudian
dikumpulkan menjadi beberapa fraksi.
Bagian-bagian penting dalam kromatografi kolom, yaitu:
a. Kolom kromatografi
Kolom biasanya dibuat dengan cara menuangkan fase diam dalam pelarut yang cocok di dalam
kolom dan dibiarkan mampat. Ukuran kolom beragam, tetapi pada
umumnya mempunyai Panjang minimal 10-100 kali diameternya.
Ukuran kolom dan jumlah fase diam yang digunakan tergantung pada
bobot sampel yang akan dipisahkan.
b. Penjerap
Sifat, derajat atau tingkat keaktifan penjerap dan ukuran partikel penting dalam pengembangan
sistem kromatografi. Ukuran partikel penjerap untuk kolom berkisar
antara 63-250 microm. Apabila ukuran partikel penjerap lebih kecil dari
40-63 microm memerlukan kolom dengan tekanan yang berasal dari
pompa atau vakum. Ada beberapa jenis penjerap yang biasanya
dilakukan yaitu silika gel, alumina, poliamida, selulosa, arang aktif, dan
gula tepung. Penjerap yang paling efektif dan mudah didapat adalah
alumina dan silika gel.
c. Pelarut pengelusi
 15

Pemilihan pelarut pengelusi merupakan hal penting. Kolom memerlukan waktu yang lama dan
bahan yang banyak dan perlu memastikan pelarut atau campuran
pelarut yang diinginkan, yaitu penelusuran Pustaka, mencoba
menerapkan data KLT pada pemisahan dengan kolom dan pemakaian
pelarut yang tidak menggerakkan sampel sampai pelarut yang lebih
polar.

I. LANDASAN TEORI
Pandan hutan (Freycinetia rigidifolia, Hemsl.) memiliki senyawa metabolit sekunder yaitu golongan
senyawa alkaloid, flavonoid, saponin, dan tannin. Sejumlah tanaman
mengandung flavonoid telah dilaporkan memiliki aktivitas antioksidan dan
antibakteri (4). Untuk menghemat sumber daya tanaman pandan hutan maka
kapang endofit dari tanaman tersebut dimanfaatkan untuk dapat menghasilkan
metabolit sekunder yang menyerupai metabolit sekunder yang dihasilkan
tanaman inangnya. Kapang endofit ini dapat tumbuh lebih cepat,
membutuhkan ruang jauh lebih kecil, serta akan mengurangi pemakaian
tanaman dalam jumlah besar sehingga proses produksi lebih mudah dan
kelestarian lingkungan tetap terjaga (3). Untuk menguji aktivitas antioksidan
dari metabolit sekunder dari kapang endofit pandan hutan dapat dilakukan
dengan metode pengujian peredaman radikal bebas DPPH. Selain pengujian
aktivitas antioksidan, dilakukan juga pengujian kualitatif aktivitas antibakteri
dengan melakukan skrining Bioautografi-Kromatografi Lapis Tipis. Sebagai
bakteri uji digunakan Staphylococcus aureus yang mewakili bakteri gram
positif dan Escherichia coli yang mewakili bakteri gram negatif.

J. HIPOTESIS
1. Kapang endofit hasil isolasi dari tanaman Pandan Hutan (Freycinetia
rigidifolia, Hemsl.) dapat menghasilkan senyawa bioaktif dan metabolit
sekunder yang berkhasiat sebagai antioksidan.
 16

2. Senyawa kimia hasil dari hasil ekstraksi kapang endofit tanaman pandan
hutan (Freycinetia rigidifolia, Hemsl.) dapat menghasilkan metabolit
sekunder yang berkhasiat sebagai antibakteri terhadap bakteri uji gram
positif S.aureus dan bakteri gram negatif E.coli.
 BAB III
RANCANGAN PENELITIAN

A. PRINSIP PENELITIAN
Isolat kapang endofit diremajakan dengan PDA (Potato Dextrose Agar) dan dibioproduksi dengan media
PDB (Potato Dextrose Broth). Setelah itu, dilakukan seleksi dengan melihat
bercak secara Kromatografi Lapis Tipis adanya produksi senyawa kimia yang
diduga mempunyai aktivitas biologi. Isolat yang terpilih diproduksi dalam
skala besar (1L). Ekstrak isolat tersebut dilakukan pengamatan secara
Kromatografi Lapis Tipis, penapisan senyawa kimia, dan diamati kurva
pertumbuhannya. Kemudian diisolasi dengan Kromatografi Kolom. Sebelum
isolasi dilakukan uji aktifitas antioksidan dan antibakteri. Hasil isolasi
diidentifikasi secara KLT, serta diuji aktivitas antibakteri yaitu bakteri
S.aureus (gram positif), E.Coli (gram negatif) dan antioksidan dengan metode
DPPH. ). Fraksi yang didapatkan akan di uji aktivitas bakterinya dengan
metode mikrodilusi kemudian dipilih fraksi dengan hasil terbaik untuk
dilanjutkan pada tahap identifikasi senyawa menggunakan Fourier Transform
Spektroscopy Infrared (FTIR), Liquid Chromatography dengan Mass
Spectrometer (LC-MS) dan Spektrofotometri UV-vis.

B. TEMPAT PENELITIAN
Laboratorium Kimia Bahan Alam, Pusat Riset Kimia, Badan Riset dan Inovasi Nasional (BRIN). Jalan
Raya Bogor km 46, Cibinong.

C. BAHAN PENELITIAN
Bahan penelitian adalah kapang endofit hasil isolasi dari tanaman pandan hutan (Freycinetia rigidifolia,
Hemsl.) 48BtSi-1.1.

17
18
D. TAHAPAN PENELITIAN
1. Skrining Isolat Kapang Endofit
a. Alat yang akan digunakan di siapkan dalam keadaan bersih dan steril.
b. Media Potato Dextrose Agar (PDA) dan media untuk fermentasi Potato
Dextrose Broth (PDB) di siapkan.
c. Inokulasi mikroba endofit 48BtSi-1.1 pada PDA lalu bioproduksi
dengan PDB lalu ditunggu hingga 3 minggu.
d. Hasil inokulasi pada PDB disaring, filtrat dan biomassa dipisahkan.
e. ekstraksi hasil filtrat dan biomassa dengan pelarut etil asetat.
f. uji aktivitas antibakteri dengan metode dilusi
2. Uji Pendahuluan
a. Kurva pertumbuhan kapang endofit.
b. Ekstraksi hasil filtrat dan biomassa dengan pelarut etil asetat
c. Uji antibakteri dengan metode dilusi
d. Analisis Kromatografi Lapis Tipis (KLT) untuk mengetahui profil
senyawa kimia yang kemudian disemprotkan dengan larutan penampak
bercak Serium Sulfat.
3. Isolasi menggunakan Metode Kromatografi Kolom
Isolasi ini bertujuan untuk mendapatkan waktu kemurnian hasil bioproduksi
kapang endofit. yang kemudian akan dilanjutkan untuk menguji aktivitas
antibakteri. Isolasi dilakukan dengan fase gerak berdasarkan hasil dari KLT
yaitu etil asetat.
4. Uji Antioksidan dengan Metode Peredaman Radikal Bebas
Uji ini dilakukan untuk mengetahui fraksi yang paling tingi aktivitasnya sebagai
antioksidan dengan metode peredaman radikal bebas DPPH.

19
 BAB IV
BAHAN, ALAT, DAN METODE PENELITIAN

A. BAHAN
Isolat kapang endofit dari tanaman pandan hutan (Freycinetia rigifolia Hemsl.), PDA (Potato Dextrose
Agar), PDB (Potato Dextrose Broth), Metanol, etil asetat, n-heksan, Serium II
sulfat, Celite 545, Silika gel 60 (70-230 mesh), pasir laut (sea sand B), kapas,
Katekin, DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil), Staphylococcus aureus,
Escherchia coli,

B. ALAT
Pinset, Jarum Ose, Timbangan analitik, Cawan Petri, Alat-alat gelas, Mikro pipet, Autoklaf, Pengaduk
magnetik, Lampu spiritus, Laminar air flow (LAF), Vakum rotavapor, Vortex
mixer, Pipa kapiler, Lempeng silica gel GF254, Kolom kromatograf.

C. METODOLOGI PENELITIAN
1. Persiapan media
a. Media regenerasi PDA (Potato Dextrose Agar)
Lebih kurang 39 gram PDA dilarutkan dalam 1L air suling dalam labu erlenmeyer, kemudian
dipanaskan dan dihomogenkan menggunakan pengaduk magnetik
sampai larut. Sejumlah volume dituangkan dalam cawan petri steril,
dikerjakan secara aseptis di dalam LAF (Laminar Air Flow)
b. Media fermentasi PDB (Potato Dextrose Broth)
Lebih kurang 24 gram PDB dilarutkan dalam 1L air suling dalam labu Erlenmeyer, kemudian
dipanaskan dan dihomogenkan menggunakan pengaduk magnetik
sampai larut. Media disterilkan di autoklaf pada suhu 1210C selama 15
menit.

20
 21

2. Inokulasi isolat kapang endofit

a. Pada media PDA
Media yang berada dalam cawan petri diinokulasikan dengan isolat
kapang, kemudian kapang diinokulasikan selama satu minggu pada
suhu ruang yaitu kurang lebih 25oC didalam inkubator
b. Pada media PDB
Isolat kapang yang telah tumbuh di cawan petri dipotong kotak
berukuran 1 cm dan diinokulasikan kedalam PDB (Potato Dextrose
Broth). Kemudian isolat tersebut dibioproduksi ditunggu selama 3
minggu.

3. Ekstraksi hasil bioproduksi

a. Ekstraksi
Hasil fermentasi sebanyak 20 mL diekstraksi dengan 20 mL etil asetat
sebanyak 3 kali menggunakan corong pisah dan dikocok lalu
didiamkan hingga memisah antara fase etil asetat dan fase air.
b. Identifikasi dengan KLT (Kromatografi Lapis Tipis)
Fase kloroform diidentifikasikan dengan KLT menggunakan fase
diam lempeng silika gel GF254. Eluen yang digunakan adalah n-
heksan-etil asetat (2:1) bercak yang timbul pada lempeng KLT
diamati dengan penampak bercak UV 254 nm, lalu disemprotkan
serium (II) sulfat 1%, dan dipanaskan pada suhu 110 ºC selama 5
menit. Bercak yang diperoleh dibandingkan dengan bercak blangko.
Sampel yang menghasilkan bercak baru selain bercak blangko dipilih
untuk diteliti lebih lanjut. Eluen yang dapat menunjukkan profil
bercak pemisahan pada lempeng KLT, akan digunakan sebagai eluen
dalam penelitian lebih lanjut dengan komposisi perbandingan yang
berbeda.
c. Pembuatan Kurva Pertumbuhan
Isolat kapang yang terpilih diinokulasi ke dalam media PDB
diinkubasikan pada suhu 20 ℃ dengan kecepatan 120 rpm diatas
 22

shaker selama 20 hari, lalu dilakukan sampling setiap 2 hari sekali

untuk mengetahui pertembuhan dari isolat kapang tersebut. Hasil
fermentasi kapang disaring dan ditimbang bobot biomassanya
kemudian dibuat kurva pertmbuhan antara waktu sampling dengan
bobot biomassa.

4. Isolasi dengan Metode Kromatografi Kolom

Ekstrak kemudian dimurnikan dengan Kromatografi Kolom
menggunakan fase gerak yang sesuai seperti yang digunakan pada
identifikasi pada KLT. Gelas kolom yang telah bersih, diletakkan tegak
lurus dengan statif, lalu dibilas dengan fase gerak yang akan digunakan,
kemudian dikeringkan. Kolom diberi kapas dan pasir laut. Silika gel
sebagai absorban disuspensikan sebanyak 10-30 kali berat sampel dengan
eluen dalam gelas piala. Campuran dimasukkan sedikit demi sedikit
kedalam gelas kolom sampai seluruhnya masuk dan eluen dibiarkan
mengalir sampai rata dengan permukaan absorben. Kolom digetarkan
perlahan secara merata agar silika gel memadat. Sejumlah ekstrak yang
mengandung metabolit sekunder yang akan dipisahkan ditambahkan
celite untuk menghomogenkan ekstrak, lalu dimasukkan kedalam kolom.
Pemisahan berdasarkan eluesi kromatografi dengan cara menaikkan
polaritas pelarut tahap demi tahap menggunakan campuran eluen yang
sesuai. Eluat masing-masing 10 ml fraksi yang ditampung dalam vial,
diuapkan dan diidentifikasi dengan KLT. Fraksi yang mempunyai
kromatogram yang sama digabungkan dan diuji aktivitas antibakterinya.

5. Pengujian aktivitas antioksidan menggunakan metode peredaman

radikal bebas.
a. Deteksi antioksidan dengan KLT
Diambil 10 µL ekstrak dipindahkan pada plat KLT dan katekin yang
digunakan sebagai kontrol positif juga dipindahkan pada plat KLT.
Plat dikeringkan dan disemprot dengan DPPH 0,02% dalam metanol.
 23

Bintik kuning pada latar belakang ungu menunjukkan aktivitas

antioksidan.. Setelah kering, plat disemprot dengan DPPH 0,02%
dalam MeOH.
b. Penentuan ekstrak aktif
Penentuan ekstrak aktif ditentukan oleh microplate serial di 96-sumur
mikro. Sumur pada kolom A diisi dengan 195 µL MeOH dan 5 µL
ekstrak (10240 µg/mL) dan dihomogenkan. Kolom B sampai H diisi
dengan 100 µL MeOH. Pengenceran serial dilakukan dengan
konsentrasi yang sesuai (256 µg/mL). Setelah proses pengenceran
selesai, masing-masing well ditambahkan 100 µl DPPH (61,50
g/mL). Metanol digunakan sebagai kontrol negatif, sedangkan
katekin digunakan sebagai kontrol positif. Microplate diinkubasi
dalam kondisi gelap pada suhu kamar selama 90 menit. Absorbansi
sampel diukur pada 517 nm. Konsentrasi penghambatan 50%
dihitung dengan persamaan regresi linier

6. Pengujian skrining aktivitas antibakteri

Skrining aktivitas antibakteri dilakukan menggunakan metode
kromatografi lapis tipis (KLT) bioautografi (dot-blot dan elusi) Metode
Dot-Blot: sebanyak 10uL sampel (10mg/mL) ditotolkan pada pelat silika
gel GF254. Sedangkan untuk metode elusi pelat yang telah ditotol dielusi
menggunakan pelarut n-heksan: etil asetat dengan perbandingan 5:1.
Pelat yang telah ditotolkan kemudian dicelupkan kedalam suspensi
bakteri yang telah diinkubasi dalam kondisi lembab pada suhu 37ºC
selama 24 jam, lalu disemprot dengan INT 4 mg/mL. Pada media bakteri
Escherichia coli ditunggu selama 30 menit setelah penyemprotan
sedangkan pada media bakteri Staphylococcus aureus ditunggu selama
15 menit setelah penyemprotan.
 24

BAB V
HASIL DAN PEMBAHASAN

A. BIOPRODUKSI SKALA LABORATORIUM KAPANG ENDOFIT

48 BtSi-1.1
Isolat kapang endofit 48 BtSi-1.1 yang sebelumnya telah diremajakan
dalam media PDA dan diinokulasikan dalam 100 mL media PDB selama 3
minggu fermentasi. Hasil fermentasi kemudian disaring untuk memisahkan
filtrat dan biomassa, masing-masing diekstraksi dengan etil asetat. Ekstrak
etil asetat yang diperoleh kemudian dipekatkan. Bobot ekstrak diperoleh
sebanyak 0,73g.

B. ANALISIS FASE GERAK DENGAN KROMATOGRAFI LAPIS

TIPIS
Ekstrak yang diperoleh dianalisis dengan Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
menggunakan fase gerak n-heksan – etil asetat (10:1), (7:1), (5:1), (1:1).
Analisis ini bertujuan untuk mengetahui pola bercak (spot) yang terdapat
dalam ekstrak dan mencari fase gerak yang sesuai untuk pemisahan pada
kromatografi kolom. Pemisahan ini dilakukan dengan cara menotolkan
ekstrak yang telah dilarutkan dengan etil asetat pada plat KLT dan
diletakkan pada bejana tertutup rapat yang berisikan fase gerak yang telah
dijenuhkan. Fase gerak merambat pada fase diam hingga batas rambat.
Pola kromatogram dibawah sinar UV dengan Panjang gelombang 254 nm
dapat dilihat pada Gambar V.1
 25

1 2 3 4

n-heksan :etil n-heksan :etil asetat n-heksan :etil n-heksan :etil asetat
asetat (7:1) asetat (1:1)
(10:1) (5:1)
Gambar V.1 Analisis Fase Gerak KLT untuk Kromatografi Kolom

Pada Gambar V.1 menunjukan bahwa n-heksan - etil asetat (5:1)

memberikan pemisahan paling baik dibandingkan n-heksan – etil asetat
(10:1), (7:1), dan (1:1).

C. HASIL FRAKSINASI FASE ETIL ASETAT KAPANG ENDOFIT 48

BtSi-1.1 DENGAN KROMATOGRAFI KOLOM
Sejumlah kurang lebih 0,6 g dari hasil ekstraksi fase etil asetat kapang
endofit pandan hutan difraksinasi dengan kromatografi kolom. Fraksinasi
bertujuan untuk memperoleh senyawa yang lebih sederhana dengan cara
memisahkan senyawa berdasarkan kepolarannya. Fase diam yang
digunakan adalah silika gel GF254 dan fase gerak yang digunakan adalah n-
heksan - etil asetat dengan perbandingan (10:1), (8:1), (6:1), (4:1), (2:1),
(1:1). Pemurnian dengan kromatografi kolom dilakukan secara gradient
dimana komposisi n-heksan – etil asetat berubah-ubah secara bertahap
untuk dapat memisahkan senyawa kimia dalam fase asetat kapang endofit
pandan hutan dengan baik. Fraksinasi fase etil asetat didapatkan 84 vial.
kemudian vial tersebut dianalisis kembali menggunakan KLT. Vial dengan
 26

pola kromatogram yang sama digabungkan sehingga diperoleh 6 fraksi.

Hasil fraksinasi fase etil asetat kapang endofit pandan hutan dapat dilihat
pada Tabel V.2 dan hasil KLT fraksi yang telah digabungkan dapat dilihat
pada Gambar V.2.

Tabel V.2 Hasil Fraksinasi Fase Etil Asetat dengan Kromatografi Kolom
No. Fraksi Gabungan Botol Bobot Fraksi (mg)
1. I 1-4 16,3

2. II 5-14 16,1
3. III 15-25 10,8
4. IV 26-49 11,4

5. V 50-74 22,1
6. VI 80-84 19,3

(A) (B)

Gambar V.2 Kromatogram KLT Fraksi Gabungan

Fase gerak : n-heksan – etil asetat (5:1)

Fase diam : Silika gel GF254
Jarak rambat : 5 cm
Tinggi : 6,5 cm
Lebar : 5 cm
Penampak bercak : Serium sulfat
 27

Keterangan :
(A) Kromatogram di bawah sinar UV pada Panjang gelombang 254 nm
(sebelum disemprot dengan serium sulfat).
(B) Kromatogram disemprot dengan serium sulfat kemudian dikeringkan
dan dipanaskan hingga timbul bercak.

D. HASIL UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN SECARA KUALITATIF

Skrining aktivitas antioksidan secara kualitatif dilakukan pada keenam
fraksi hasil kromatografi kolom. Pada uji kualitatif digunakan metode dot-
blot dengan menotolkan ekstrak sebanyak 10 µL sampel (10 mg/mL)
dengan pipet kapiler pada pelat silika gel GF254. Pelat disemprot
menggunakan 2% diphenyl-picrylhydrazyl (DPPH) yang dilarutkan dalam
methanol. Perubahan warna terjadi kuning pada titik totol menunjukkan
adanya aktivitas antioksidan. Katekin digunakan sebagai pembanding/
kontrol positif dan methanol sebagai kontrol negatif. dan metode elusi
yang ditotolkan kemudian dielusi dengan pelarut n-heksan-etil asetat (5:1)
setelah dielusi pelat tersebut disemprotkan dengan 2% DPPH.

(A) (B)
Gambar V.3 Uji antioksidan secara kualitatif pada tiap fraksi hasil kromatografi kolom
 28

Keterangan :
(A) Aktivitas antioksidan menggunakan metode dot-blot yang disemprot
dengan DPPH
(B) Aktivitas antioksidan menggunakan metode elusi yang disemprot
dengan DPPH
Uji aktivitas antioksidan secara kuantitatif dengan katekin sebagai kontrol
positif digunakan untuk membandingkan aktivitas antioksidannya dengan
Pada Gambar V.3 fraksi yang memiliki warna kuning yang agak pekat
yaitu fraksi 1, 3, dan 4. Hal ini disebabkan adanya senyawa yang berperan
sebagai antioksidan mendonorkan elektron bebas pada atom oksigen
didalam gugus hidroksil atau atom hydrogen senyawa radikal bebas,
sehingga mampu mereduksi reaktivitas senyawa radikal bebas menjadi
stabil. Fraksi nomor 1, 3, dan 4 kemudian akan dilanjutkan pengujian
secara kuantitatif dengan metode peredaman radikal bebas.

E. HASIL UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN SECARA KUANTITATIF

Pengujian aktivitas antioksidan secara kuantitatif dengan metode
peredaman radikal bebas DPPH menggunakan alat microplate yang
kemudian dilihat abrobansinya menggunakan alat Varioskan LUX
microplate reading pada panjang gelombang 517 nm. Microplate dapat
dilihat pada Gambar V.4.

Gambar V.4 uji aktivitas antioksidan menggunakan microplate

Hasil pengujian aktivitas antioksidan dengan metode peredaman radikal

bebas terhadap ekstrak kapang endofit 48 BtSi-1.1 serta Katekin sebagai
kontrol positif dapat dilihat pada tabel V.3
 29

Tabel V.3 Hasil uji aktivitas antioksidan secara kuantitatif

Absorban Absorba Rata-rata Absorban Konsentrasi IC IC50 Kategori
1 n2 Absorban Sampel
Fraksi 1. 0,0966 0,0856 0,0911 0,0585 512 89,51049 41,92 Sangat
1 2. 0,1784 0,1698 0,1741 0,1415 256 74,62794 Kuat
3. 0,2910 0,2901 0,2906 0,2580 128 53,74753
4. 0,4018 0,3983 0,4001 0,3675 64 34,11332
5. 0,4698 0,4693 0,4696 0,4370 32 21,65143
6. 0,5334 0,5309 0,5322 0,4996 16 10,42675
7. 0,5473 0,5508 0,5491 0,5165 8 7,39645
8. 0,5711 0,5702 0,5707 0,5381 4 3,5234
Fraksi 1. 0,2505 0,2613 0,2559 0,2233 512 59,96055 433,83 Sangat
3 2. 0,4449 0,4410 0,4430 0,4104 256 26,42101 Lemah
3. 0,4926 0,5012 0,4969 0,4643 128 16,74736
4. 0,5434 0,5454 0,5444 0,5118 64 8,230231
5. 0,5595 0,5352 0,5474 0,5148 32 7,701273
6. 0,5632 0,5459 0,5546 0,5220 16 6,410256
7. 0,5738 0,5388 0,5563 0,5237 8 6,096468
8. 0,5623 0,5518 0,5571 0,5245 4 5,961987
Fraksi 1. 0,3614 0,4079 0,3847 0,3521 512 36,87466 740,27 Sangat
4 2. 0,4556 0,4741 0,4649 0,4323 256 22,49417 Lemah
3. 0,4978 0,5172 0,5075 0,4749 128 14,84669
4. 0,5286 0,5433 0,5360 0,5034 64 9,745383
5. 0,5353 0,5528 0,5441 0,5115 32 8,292989
6. 0,5581 0,5838 0,5710 0,5384 16 3,469607
7. 0,5596 0,5683 0,5640 0,5314 8 4,724762
8. 0,5474 0,5711 0,5593 0,5267 4 5,567509
Kateki 1. 0,0807 0,0789 0,0798 0,0472 256 91,53667 1,93 Sangat
n 2. 0,0775 0,0731 0,0753 0,0427 128 92,34355 Kuat
3. 0,0791 0,0710 0,0751 0,0425 64 92,38838
4. 0,0711 0,0661 0,0686 0,0360 32 93,54492
5. 0,0746 0,0659 0,0703 0,0377 16 93,24906
6. 0,0710 0,0634 0,0672 0,0346 8 93,79595
7. 0,2475 0,0773 0,1624 0,1298 4 76,72584
8. 0,4248 0,2710 0,3479 0,3153 2 43,46423
Dpph 100 0,5893 0,5942 0,5903
Dpph 0 0,0329 0,0322 0,0326
Delta dpph 0,5577

Konsentrasi penghambatan 50% diperoleh dengan memasukkan

konsentrasi sebagai sumbu x dan persen inhibisi sebagai sumbu y ke dalam
 30

regresi linier. Grafik tiap fraksi dapat dilihat pada Gambar V.5, V.6, V.7,
dan grafik katekin dapat dilihat pada Gambar V.8.

Fraksi 1
100
80 f(x) = 0.0881330208253285 x + 46.3062578447194
IC (%)
60 R² = 0.920056288601864

40
20
0
100 150 200 250 300 350 400 450 500 550

Konsentrasi (µg/mL)

Gambar V.5 Grafik Hubungan antara Konsentrasi dan Persen Inhibisi Uji Aktivitas
Antioksidan dengan Metode Peredama Radikal Bebas Fraksi 1

Fraksi 3
80

60
Axis Title

f(x) = 0.115174288852174 x − 0.0224134839519508

40R² = 0.986013229250677

20

0
100 150 200 250 300 350 400 450 500 550
Konsentrasi (µg/mL)

Gambar V.6 Grafik Hubungan antara Konsentrasi dan Persen Inhibisi Uji Aktivitas
Antioksidan dengan Metode Peredama Radikal Bebas Fraksi 3

Fraksi 4
40
35 f(x) = 0.0571944081559465 x + 7.65644611798459
30 R² = 0.999761233463704
25
IC (%)

20
15
10
5
0
100 150 200 250 300 350 400 450 500 550
 Konsentrasi (µg/mL)

31

Gambar V.7 Grafik Hubungan antara Konsentrasi dan Persen Inhibisi Uji Aktivitas
Antioksidan dengan Metode Peredama Radikal Bebas Fraksi 4

Katekin
100
Persen inhibisi (%)

80 f(x) = 7.79989241527703 x + 34.9291733907118

R² = 0.866685674438097
60
40
20
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9
Konsentrasi (ug/mL)

Gambar V.8 Grafik Hubungan antara Konsentrasi dan Persen Inhibisi Uji Aktivitas
Antioksidan dengan Metode Peredama Radikal Bebas DPPH Vitamin C

Nilai IC50 yang diperoleh dari katekin dan tiap-tiap fraksi yaitu :
Fraksi 1 : 41,92 µg/mL
Fraksi 3 : 433,83 µg/mL
Fraksi 4 : 740,27 µg/mL
Katekin : 1,93 µg/mL
Nilai tersebut menunjukkan bahwa aktivitas antioksidan yang sangat kuat
terdapat pada fraksi 1 dan fraksi lainnya termasuk ke dalam kategori
sangat lemah dimana semakin kecil nilai IC50 maka semakin tinggi
aktivitas antioksidannya. Perhitungan uji aktivitas antioksidan dengan
metode peredaman radikal bebas DPPH dapat dilihat pada Lampiran 2.
F. HASIL UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI
Uji antibakteri untuk mengetahui apakah senyawa hasil bioproduksi
 32

kapang endofit 48 BtSi-1.1 memiliki aktivitas antibakteri atau tidak.

Bakteri uji yang digunakan dari golongan bakteri Staphylococcus aureus
yang mewakili gram positif dan Escherichia coli yang mewakili bakteri
gram negative. Kedua bakteri baik Staphylococcus aureus maupun
Escherichia coli merupakan bakteri yang peka terhadap kloramfenikol.
Karenanya antibakteri yang digunakan adalah kloramfenikol.
Kloramfenikol merupakan penghambat sintesis protein yang kuat pada
mikroorganisme. Antibiotic ini memiliki spektrum yang luas yakni
meliputi bakteri gram positif, bakteri gram negative, bakteri aerob, dan
bakteri anaerob.
Skrining aktivitas antibakteri dilakukan menggunakan metode
kromatografi lapis tipis (KLT) bioautografi (dot-blot dan elusi). Metode
Dot-Blot: sebanyak 10 µL sampel (10 mg/mL) ditotolkan pada pelat silika
gel GF254. Sedangkan untuk metode elusi pelat yang telah ditotol dielusi
menggunakan pelarut n-heksan: etil asetat dengan perbandingan 5:1. Pelat
yang telah ditotolkan kemudian dicelupkan kedalam suspensi bakteri yang
telah diinkubasi dalam kondisi lembab pada suhu 37ºC selama 24 jam, lalu
disemprot dengan INT 4 mg/mL. Pada media bakteri Escherichia coli
ditunggu selama 30 menit setelah penyemprotan sedangkan pada media
bakteri Staphylococcus aureus ditunggu selama 15 menit setelah
penyemprotan.

(A) (B)
Gambar V.9 Hasil uji skrining antibakteri dengan bakteri gram positif Staphylococcus
aureus
 33

(C) (D)
Gambar V.10 Hasil uji skrining antibakteri dengan bakteri gram negatif Escherichia coli

Penampak bercak : INT

Keterangan :

(A)Aktivitas antibakteri terhadap bakteri Escherichia coli menggunakan

metode dot-blot

(B) Aktivitas antibakteri terhadap bakteri Escherichia coli menggunakan

metode elusi dengan pelarut n-heksan:etil asetat (5:1)

(C)Aktivitas antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus aureus

menggunakan metode dot-blot

(D) Aktivitas antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus aureus

menggunakan metode elusi dengan pelarut n-heksan:etil asetat (5:1)

Pada Gambar V.9 dan Gambar V.10 tidak memperlihatkan adanya zona
hambat berwarna putih disekitar ekstrak yang mengindikasikan bahwa
ekstrak tidak memiliki aktivitas penghambatan pertumbuhan terhadap
bakteri E.coli dan S. aureus dengan latar berwarna merah keunguan.
Warna merah menandakan bahwa bakteri masih hidup. Warna tersebut
terbentuk karena adanya reaksi enzim dehidrokinase yang dihasilkan oleh
bakteri hidup dengan garam tetrazolium membentuk formazan.
 BAB VI
SIMPULAN DAN SARAN

A. SIMPULAN
1. Ekstrak kapang endofit 48 BtSi-1.1 memiliki aktivitas antioksidan yang
sangat kuat pada fraksi 3 dengan nilai IC50 yaitu 41,92 dan sangat lemah
pada fraksi 1 yaitu 433,83, fraksi 4 yaitu 740,27 .
2. Ekstrak kapang endofit 48 BtSi-1.1 tidak memiliki aktivitas antibakteri
karna tidak menunjukkan hasil positif pada uji skrining antibakteri pada
bakteri gram positif Staphylococcus aureus dan bakteri gram negatif
Escherichia coli.

B. SARAN
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut pada ekstrak kapang endofit 48 BtSi-
1.1

34
 35

DAFTAR PUSTAKA

1. Rizki FS, Ferdinan A. Uji daya hambat ekstrak etanol daun pandan hutan
(Freycinetia Sessiliflora, Rizki.) terhadap pertumbuhan bakteri Escherichia
Coli dan Streptococcus Mutans. Jurnal Ilmiah Farmasi dan Ilmu Kesehatan.
2020 Sep 2;1(1):28-40.
2. Mardiastuti HW, Karuniawati A, Kiranasari A, Kadarsih R. Emerging
Resistance Pathogen: Situasi terkini di Asia, Eropa, Amerika Serikat, Timur
Tengah dan Indonesia. Majalah Kedokteran Indonesia. 2007;57(3):75-9.
3. Kumala S. Mikroba Endofit: Pemanfaatan mikroba endofit dalam bidang
farmasi. PT. ISFI Penerbitan. 2014;11:15-23.
4. Rizki FS, Ferdinand A. Isolasi dan identifikasi senyawa flavanoid ekstrak
etanol pandan hutan jenis baru Freycinatia sessiliflora. Jurnal Insan Farmasi
Indonesia. 2021 Jun 1;4(1):1-6.
5. Rizki FS, Ferdinan A. Uji aktivitas ekstrak kental etanol pandan hutan jenis
baru (Freycinetia Sessiliflora Rizki) terhadap pertumbuhan bakteri
Staphylococcus Aureus. Jurnal Ilmiah Ibnu Sina. 2020 Mar 30;5(1):128-36.
6. Betina V. Antibiotic dalam Pharmaceutical Applications of Thin layer and
Paper Chromatography. Edisi ke III, Karel Macek (ed), Amsterdam; Elsevier
Publishing Company. 1972; h. 503-505.
7. Keim AP. Flora pandan kawasan Semende, Muara Enim, Sumatera Selatan.
Indonesian Journal of Biotechnology and Biodiversity. 2017;1(2).
8. Rizki FS, Ferdinand A. Isolasi dan identifikasi senyawa flavanoid ekstrak
etanol pandan hutan jenis baru Freycinetia sessiliflora, Rizki. Jurnal Insan
Farmasi Indonesia. 2021 Jun 1;4(1):1-6..
9. Aththorick TA, Siregar ES, Widjaja EA. Distribusi Freycinetia spp. Di
Sumatra Utara. 2008.
10. Pratiwi ST. Mikrobiologi farmasi. Jakarta: Penerbit Erlangga; 2008. h. 38-
118.

35
11. Pelczar MJ, Chan ECS. Dasar-dasar Mikrobiologi. Jilid I. Diterjemahkan oleh
Hadioetomo RS, Imas T, Tjitrosomo SS, Angka SL. Jakarta: Universitas
Indonesia Press; 1986. h. 131-52, 189-99.

36
 37

12. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Parameter standar umum ekstrak

tumbuhan obat. Jakarta: Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan;
2000. h. 9-12.
13. Ganjar I, Sjamsurdzal W, Ariyanti. Mikologi Dasar dan Terapi. Jakarta:
Yayasan Obor Indonesia; 2006. h. 25-60.
14. Fessenden R J, Fessenden J S. Kimia organic. Ed ketiga; Jilid 1. Jakarta:
Erlangga; 1982.
15. Badan Standarisasi Nasional. Standar mutu sabun mandi. Jakarta: Dewan
Standarisasi Nasional; 1996.
16. Yadav A, Kumari R, Yadav A, Mishra JP, Srivatva S, Prabha S. Antioxidants
and its functions in human body-A Review. Res. Environ. Life Sci. 2016
Nov;9(11):1328-31
17. Erlindawati, Safrida, Mukhlis. Potensi antioksidan sebagai antidiabetes: Buku
untuk mahasiswa. Banda Aceh: Syiah Kuala University Press; 2018. h. 25-6.
18. Sastrawan IN, Sangi M, Kamu V. Skrining fitokimia dan uji aktivitas
antioksidan ekstrak biji adas (Foeniculum vulgare) menggunakan metode
DPPH. Jurnal Ilmiah Sains; 2013 Oct 30. h.13(2):110-5.
19. Molyneux P. The use of the stable free radical diphenylpicrylhydrazyl
(DPPH) for estimating antioxidant activity. Songklanakarin J. sci. technol;
2004 Dec. h. 26(2):211-9.
20. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Farmakope Indonesia Edisi IV.
Jakarta: Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan; 1995. h.1002.
21. Day RA, Underwood AL. Analisis kimia kuantitatif. ed VI. Diterjemahkan
oleh Iis Sophyan. Jakarta: Erlangga; 2002.
22. Watson DG. Analisis farmasi, Buku Ajar untuk mahasiswa farmasi dan
praktisi kimia Farmasi Ed II. Diterjemahkan oleh Syarief W.R, Hadinata A.H.
Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC; 2007. h.105-23, 223-39, 367-373.
23. Khopkar SM, Saptorahardjo A. Konsep dasar kimia analitik. Penerbit
Universitas Indonesia (UI-Press); 2003.
24. Willard HH, Merritt Jr LL, Dean JA, Settle Jr FA. Instrumental methods of
analysis. 1988.
 38

25. Apriani N. Karakterisasi dan uji aktivitas antioksidan ekstrak etil asetat kulit
batang gaharu (aquilaria malaccensis) (tesis). Jakarta: Fakultas Sains dan
Teknologi UIN Syarif Hidayatullah. 2020.
26. Vogeser M, Parhofer KG. Liquid chromatography tandem-mass spectrometry
(LC-MS/MS)-technique and applications in endocrinology. Experimental and
clinical endocrinology & diabetes; 2007 Oct. h.115(09):559-70.
 39

LAMPIRAN
Lampiran 1. Skema Prosedur Kerja

Isolat kapang endofit

Diremajakan ke dalam PDA

Diinkubasi pada suhu ± 25ºC selama 1 minggu

Isolat segar

Diinokulasikan ke dalam media PDB skala 200 ml

diinkubasi di gojog dengan kecepatan 120 rpm pada
suhu 25ºC selama 3-4 hari

Isolat prekultur

Diinokulasikan beberapa L ke dalam PDB

diinkubasi selama 3 minggu dalam suhu ruang dan
gelap

Kultur Sampel

Biomassa Filtrat

Diekstraksi dengan etil asetat

Ekstrak etil asetat Ekstrak etil Ekstrak air

biomassa asetat

Kromatografi Kolom
Diperoleh 84 vial
Vial dengan profil KLT yang sama digabung

Fraksi 1 Fraksi 2 Fraksi 3 Fraksi 4 Fraksi 5 Fraksi 6

Uji aktivitas antioksidan Uji aktivitas antibakteri

 40

Lampiran 2. Perhitungan Komsentrasi dan Nilai IC50

Perhitungan konsentrasi
1. Konsentrasi pada fraksi Keterangan :
V1 . M1 = V2 . M2 V1 = volume pada mikropipet
V2 = volume total pada microplate
100 . 1024 = 200 . M2 M1 = konsentrasi pada tube
M2 = 512 M2 = konsentrasi pada tabel
2. Konsentrasi pada katekin
V1 . M1 = V2 . M2
10 . 5120 = 200 . M2
M2 = 256
Perhitungan nilai persen hambatan
delta dpph−absorban sampel
Rumus = x 100%
delta dpph
Absorban sampel diambil dari angka yang mendekati nilai 50
1. Fraksi 1
0,5577−0,0585
% hambatan absorban 1 = x 100% = 89,51%
0,5577
0,5577−0 ,1415
% hambatan absorban 2 = x 100% = 74,62%
0,5577
0,5577−0 ,2580
% hambatan absorban 3 = x 100% = 53,74%
0,5577
2. Fraksi 3
0,5577−0 ,2233
% hambatan absorban 1 = x 100% = 59,96%
0,5577
0,5577−0 , 4104
% hambatan absorban 2 = x 100% = 26,42%
0,5577
0,5577−0,4643
% hambatan absorban 3 = x 100% = 16,74%
0,5577
3. Fraksi 4
0,5577−0 ,3521
% hambatan absorban 1 = x 100% = 36,87%
0,5577
0,5577−0 , 4323
% hambatan absorban 2 = x 100% = 22,49%
0,5577
0,5577−0 , 4749
% hambatan absorban 3 = x 100% = 14,84%
0,5577
4. Katekin
0,5577−0 ,0346
% hambatan absorban 6 = x 100% = 93,79%
0,5577
0,5577−0 ,1298
% hambatan absorban 7 = x 100% = 76,72%
0,5577
 41

0,5577−0 ,3153
% hambatan absorban 8 = x 100% = 43,46%
0,5577

Perhitungan nilai IC50

Nilai IC50 diperoleh dengan memasukkan konsentrasi sebagai sumbu x dan
persen hambatan sebagai sumbu y kedalam regresi linear dan didapat persamaan
garis : y = a + bx
1. Fraksi 1
50 = 46,306 + 0,0881x
x = 41,92 µg/ mL

2. Fraksi 2
50 = 0,0224 + 0,1152x
x = 433,83 µg/ mL

3. Fraksi 3
50 = 7,6564 + 0,0572x
x = 740,27 µg/ mL

4. Katekin
50 = 34,929 + 7,7999x
x = 1,92 µg/ mL
 42

Lampiran 3. Gambar bahan penelitian dan alat instrument yang digunakan

Fermentasi kapang endofit 48

Isolat kapang endofit 48 Btsi-1.1
Btsi-1.1 dalam media PDB
dalam media PDA

Hasil ekstraksi kapang Vakum rotavapor

endofit 48 BtSi-1.1