Minicursos 2012 Analise Instrumental

CONSELHO REGIONAL DE QUMICA - IV REGIO (SP)
Anlise instrumental: da amostragem validao

Ministrante: Thais Vitria da Silva Reis Doutora em Qumica Analtica Contatos: thais.vitoria@oswaldocruz.br
Apoio
So Paulo, 21 de julho de 2012

Observao: A verso original desta apresentao, com slides coloridos, no formato PDF, est disponvel na seo downloads do site do CRQ-IV (www.crq4.org.br)
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Conselho Regional de Qumica IV Regio (SP) Apoio: Caixa Econmica Federal
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1-Utilizao de Mtodos Instrumentais; 2-Classificao dos Principais Mtodos analticos Quantitativos; 3-Desenvolvimento de Metodologia; 4-Fototransduo e Processamento de Informaes na retina; 5-Fundamentos da espectroscopia Molecular nas Regies de Visvel e Ultra Violeta; 6-Aplicaes da Espectrofotometria de Visvel e ultra Violeta/Estudo de Casos. Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.02
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CLSSICOS
QUANTITATIVOS MTODOS ANALTICOS QUALITATIVOS MODERNOS ou INSTRUMENTAIS
Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.03

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FOTOMTRICOS E ESPECTROFOTOMTRICOS
Validao
Eletromtricos e Eletroanalticos
QUIMIOMTRICOS
Mtodos de separao

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Definir os objetivos da Qualidade dos Dados Que graus de preciso e exatido so necessrios? Qual a qualidade das Informaes Desejadas? Pode-se selecionar o mtodo analticos para satisfazer os critrios: Qualidade dos resultados Limites de custo e disponibilidade de equipamentos Escolhido o Mtodo, em geral otimizam-se os parmetros de Operao: Planejamento Fatorial(Quimiometria)

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Validao do Mtodo: Processo que prova que um mtodo analtico aceitvel para os propsitos a que se destina. Figuras de Mrito da Validao: 1-Especificidade :capacidade do mtodo de distinguir o anaito de todo o resto que se encontra na amostra;adiciona-se deliberadamente impurezas para testar a especificidade; d lib d t i t t ifi id d 2-Linearidade :mede o quanto o grfico da resposta analtica contra a concentrao(ou quantidade do analito segue uma linha reta(quadrado do coeficiente de correlao acima de 0,995); Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.07
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3-Exatido: a proximidade do valor verdadeiro.pode ser verificada por anlise de um material de referncia padro;por anlise de dois ou mais mtodos analticos diferentes que so comparados dentro da p preciso de cada um;por anlise de um branco q ;p que propositadamente contaminado com quantidade de analito conhecida;por adies de padrode analito amostra. 4-Preciso: a reprodutibilidade de um resultado. Preciso Intrnseca do Ensaio:uma pessoa analisa vrias alquotas de um material homogneo no mesmo dia de trabalho.cada anlise independente e assim a preciso intrnseca do ensaio expressa o quo reprodutvel pode ser o mtodo.

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Preciso Intermediria ou Robustez;diferentes pessoas,em dias diferentes,em instrumentos diferentes analisam a mesma amostra, no mesmo laboratrio(cada anlise pode usar reativos diferentes , preparados independentemente;
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Preciso Interlaboratorial:alquotas da mesma amostra so analisadas em diferentes dias, com equipamentos diferentes,com reagentes de cada laboratrio por diferentes pessoas (medida laboratrio, pessoas.(medida mais geral da reprodutibilidade); Coeficiente de variao(CV): o desvio padro de um conjunto de medidas dividido por sua mdia,CV(%)=100 x s/ 5-Faixa:Intervalo de Concentraes onde Linearidade, preciso e Exatido so aceitveis. Testes Utilizados: 1-Determinao do Limite de Confiana da Mdia (teste t-Student) = t. s/ N Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.09
Valore do Parmetro t-Student em funo do Nmero de Determinaes para 95% e 99% de probabilidade
Graus de Liberdade(N-1)
95% de Probabilidade 12,71 4,30 , 3,18 2,78 2,57 2,45 2,37 2,31 2,26 2,23 2,20 2,18 2,16 1,96
99% de Probabilidade 63,66 9,93 5,84 , 4,60 4,03 3,71 3,50 3,36 3,25 3,17 3,11 3,06 3,01 2,58 Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.10
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1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
infinito
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Rejeio de Resultados (teste Q) Caso Q calc>Q tab o valor rejeitado
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Valores Crticos do quociente Q parra diferentes Limites de Confiana Nmero de Observaes(N) 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Q 95% 0,970 0,829 0,710 0,625 0,568 0,526 0,493 0,466 Q 99% 0,994 0,926 0,821 0,740 0,680 0,634 0,598 0,568

Teste F (para Comparar conjunto de dados) Por conveno o maior valor de varincia colocado no numerador. F= s2 x / s2y
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Quando F exp>F tab, a diferena em varincia(ou preciso) tida como significante Valores Crticos de F para o Nvel de 95%
Graus de Liberdade (denomina dor)
3 9,28 6,56 5,41 4,76 4 76 3,49 3,10 2,60
4 9,12 6,39 5,19 4,53 4 53 3,26 2,87 2,37
Graus de Liberdade (Numerador) 5 6 12 20
infinito
3 4 5 6 12 20
infinito
9,01 6,26 5,05 4,39 4 39 3,11 2,71 2,21
8,94 6,16 4,95 4,28 4 28 3,00 2,60 2,10
8,74 5,91 4,68 4,00 4 00 2,69 2,28 1,75
8,64 5,80 4,56 3,87 3 87 2,54 2,12 1,57
8,53 5,63 4,36 3,67 3 67 2,30 1,84 1,00

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Rastreabilidade Propriedade de um resultado de medio ou valor de padro estar relacionado grandezas estabelecidas(padres internacionais) atravs de cadeia contnua de comparaes tendo todas as incertezas estabelecidas 1-Calibrao do Equipamento rastreada com padres apropriados (material de referncia=subst. Pura /SI); 2-Mtodo Primrio de Medio (rastrevel diretamente ao SI ...menor incerteza com respeito referncia; 3-Utilizando 3 Utilizando Materiais de Referncia (MR) da subst Pura(adio de subst. padro); 4-Medio de Material de Referncia Certificado(MRC) ..comparase os resultados vs. uma matriz certificada(reduz incerteza); 5-Medio usando procedimento aceito (baseado em norma nacional ou Internacional). Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.13
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11-cisretinal
Escotopsina rodopsina Luz
Metarodopsina(rodopsina ativa) 11trans Retinol 11trans Retinal( vitamina A) 11cis Retinol Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.16
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Fenmenos Ondulatrios:natureza da luz; Comparadores de Cor:deteco visual e fotoeltrica; Radiao Eletromagntica :relao entre cor e Comprimentos de Onda; Interao entre REM e matria; Eleito fotoeltrico - teoria do quantum; Tratamento de dados espectrofotomtricos Lei de Lambert-Beer - desvios aparentes e verdadeiros Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.20
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Sistemas de mltiplos componentes:resoluo matricial Instrumentao I Aplicaes:titulaes espectrofotomtricas;determinao de pK de indicadores;anlises industriais;mtodo da adio de padro.

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Nas interfaces: ar/parede;parede /soluo; Como resultado de espalhamento por molculas grandes;por absoro d paredes d clula d b das d da l l

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Io
soluo 0,001 g L-1
IT
Io
soluo 0,002 g L-1
IT

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Io
1 cm
IT
Io
5 cm
IT
Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p25

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0.1 M 0.2 M
0.3 M
0.4 M
0,5 M

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Aplicaes do Mtodo 1-determinao de uma espcie absorvente 2-determinao Simultnea de ons Exerccios Estudo de caso: Otimizao e validao de Princpio Ativo em Antinflamatorio por Espectrofotometria de Ultra Violeta

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Aplicaes dos testes T,Q e F 1-Na determinao de cobalto em uma amostra,por mtodo espectrofotomtrico, obtiveram-se as seguintes porcentagens do elemento :21,44;21,42;21.36;21,39;21,7;22,9 Verifique se haver rejeio de resultados para um nvel de 95% de confiana e aps calcular o desvio padro apresente o intervalo onde deve estar a mdia da populao com um grau de confiana de 95%. 2-Ao avaliar a qualidade de um novo laboratrio de analises,foram feitas no mesmo, 6 determinaes de cobalto em Sulfato de Cobalto, tendo-se encontrado uma mdia de , 35,25% m/v de Co com desvio padro de 0,34%. O laboratrio de referncia obteve uma mdia de 35,35% de Co com desvio padro de 0,25% em 5 determinaes. H diferena significativa entre os resultados dos laboratrios envolvidos a um nvel de 95% ? Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.28
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Aplicaes da Espectrofotometria de Visvel e Ultra Violeta 1-Determinado composto apresentou absortividade molar de 2,17.103 L cm-1 mol-1.Que concentrao do composto ser necessria para produzir uma soluo em clula de 2,5 cm? 2-Uma soluo contendo um complexo de tiouria e Bi(III) apresentou absortividade molar de 9,32.103 L cm-1 mol-1 a 472 nm. a)qual a absorbncia de soluo de 6,24 .10-5 mol L-1 do complexo 472 nm em clula de 1 cm de espessura? b)qual a %T descrita em (a) ? c)qual a concentrao molar do complexo na soluo que tem absorbncia descrita em (a) quando medida em clula de 3 cm? 3-Uma alquota de 25 mL de soluo aquosa de quinino foi diluda a 50 mL e encontrou-se a 348 nm uma absorbncia de 0,832, quando medida em clula de 2 cm cm. Uma segunda alquota de 25 mL foi misturada a 10 mL de soluo contendo 28 ppm de quinino.Aps diluio 50 mL a soluo apresentou Absorbncia de 1,22 , em clula de 2,00 cm.Qual a concentrao de quinino na amostra?
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4-Ti e V formam complexos coloridos com gua oxigenada.Solues separadas destes metais, contendo 5 mg dos mesmos, foram tratadas com cido perclrico e gua oxigenada e diludas a 100 mL. Uma terceira soluo foi preparada dissolvendo-se 10 mg de uma liga( que contem apenas Ti e V )e tratada de mesma forma que os V.)e padres. As absorbncias das trs solues foram medidas em 410 e 460 nm.Calcule as %T de Ti e de V na liga.
soluo Ti V Liga
A 410 nm 0,760 0 760 0,185 0,715
A 460 nm 0,513 0 513 0,250 0,657

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Otimizao e validao de Princpio Ativo em Antinflamatorio por Espectrofotometria de Ultra Violeta (Artigo em anexo)
1-SKOOG,D.A.;Holler,F,J, and Nieman,T.A. Principles of Instrumental Analysis . .5Th Ed.Harcourt. Brace & Company.USA, 1998. 2 HARRIS,D.C. Anlise Qumica Quantitativa.6 Ed.LTC Ed.Rio de 2-HARRIS,D.C. Quantitativa.6 Janeiro,2005. 3-BASSET,J.;Denney,R.C.;Jeffery,G.H.;Mendham,J. Vogel-Anlise Inorgnica Qualitativa Ed. Guanabara II,.Rio de Janeiro 1978. 4.OHLWEILLER,O.A.Fundamentos de Anlise Instrumental.Rio de Janeiro, LTC Ed.,1981.

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5-GONALVES,M.L.S.S.MTODOS Instrumentais para Anlise Solues.3 Ed.FUNDAO CALOUSTE Gulbenkian,Lisboa,1996.
de
6-DOQ-CGCRE-008 rev03,fev 2010-Orientao sobre validao de Mtodos Analticos.INMETRO. 7-Resoluo .Res n 899,29/05/2003Guia para Validao de mtodos analticos e Bioanalticos.ANVISA. 8-PINTO,T.J.;FERRARINI,M.;GATTI,R.M.Proposta para Roteiro Prtico para Validao de Mtodos Analticos. Farm e Qum SP v 36 p26-36 2003 Farm. Qum.SP,v.36.p26 36,2003. 9-Acta Farm.Bonaerense 25(2): 262-6(2006)

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Acta Farm. Bonaerense 25 (2): 262-6 (2006)

Recibido el 20 de noviembre de 2004 Aceptado el 13 de noviembre de 2005
Notas tcnicas
Determinao Quantitativa de Tenoxicam em Comprimidos por Espectrofotometria no Ultravioleta

Simone Gonalves CARDOSO*, Clarice Madalena Bueno ROLIM, Ana Laura ESCARRONE, Carine Viana Silva IEGGLI, Cludia CAVALETT, Daniele Carvalho de OLIVEIRA, Erico Silva de LORETO, Gabriela Cristina SCHMITT, Iara Peruffo CARLOSSO, Keli CMERA, Lisiane BAJERSKI, Marcelo Donadel MALESUIK & Tnia Maria BER Programa de Ps-Graduao em Cincias Farmacuticas, Universidade Federal de Santa Maria, Santa Maria - RS, Brasil
RESUMO. Diferentes condies experimentais foram otimizadas e validadas para rpida determinao quantitativa de tenoxicam em comprimidos. Os solventes utilizados foram: hidrxido de sdio 0,1 M (M1), metanol (M2) e metanol/cido clordrico 0,1 M (M3). A validao dos mtodos incluiu parmetros como linearidade, limite de quantificao e deteco, preciso, exatido e especificidade. Houve linearidade no intervalo de concentrao de 6,0 a 16,0 g/mL para todas as condies testadas. Os mtodos M1, M2 e M3 apresentaram preciso e exatido comparveis ao mtodo oficial, no havendo interferncias dos excipientes dos comprimidos. SUMMARY. Quantitative Determination of Tenoxicam in Tablets by UV Spectrophotometry. Different experimental conditions were optimized and validated for fast quantitative determination of tenoxicam in tablets. The solvents used were: sodium hydroxide 0,1M, methanol and methanol/hydrochloric acid 0,1M. The methods were validated with regard to linearity, limit of quantitation and detection, precision, accuracy and specificity. The linearity was observed in the range of 6,0 to 16,0 g/mL for all tested conditions. The methods M1, M2 and M3 showed precision and accuracy compared to the official method, with no interference of the excipients used in the tablets.
INTRODUO Tenoxicam (TNX, Fig. 1) um frmaco noesteroidal do grupo dos oxicans que apresenta propriedades antiinflamatrias, analgsicas e tambm inibidoras da agregao plaquetria 1. Quimicamente corresponde a 1,1-Dixido de 4hidroxi-2-metil-N-(2-piridinil)-2H-tieno[2,3-e]-1,2tiazino-3-carboxamida 2. Comercialmente o TNX encontrado na forma de comprimidos, supositrios, granulado solvel e p liofilizado para injetvel. A Farmacopia Brasileira 4 ed. 2 disponibiliza monografia para TNX como matriaprima. Para avaliao da pureza da matria prima essa monografia descreve a titrimetria de neutralizao em meio no aquoso. Na Farmacopia Britnica 1 os mtodos indicados para determinao de TNX so: titrimetria de neutralizao em meio no aquoso, para avaliar a matria-prima e a cromatografia lquida de alta eficincia, para quantificao do frmaco em comprimidos. Essa mesma farmacopia descreve a espectrofotometria no ultravioleta, utilizando hidrxido de sdio 0,1 M, para a quantificao do TNX em p para injetvel. Outros mtodos en-
Figura 1. Estrutura Qumica do Tenoxicam.
contram-se descritos na literatura para a determinao quantitativa do TNX e incluem: determinao polarogrfica 3,4 cromatografia lquida de alta eficincia 5,6, espectroscopia no infravermelho 7,8, determinao espectrofotomtrica na regio do visvel 9,10, espectrofotometria de injeo de fluxo 11, espectrofotometria derivada 5 e espectrofluorimetria 12. A determinao de TNX em comprimidos por espectrofotometria na regio do ultravioleta no se encontra referenciada na literatura consultada. Os mtodos espectrofotomtricos constituem-se em procedimento bastante utilizados na anlise de frmacos, principalmente em laboratrios que no disponham de equipamentos sofisticados. Dessa forma, o objetivo desse estudo foi desenvolver e validar mtodo para a determinao rpida de tenoxicam em comprimi-
PALAVRAS CHAVE: Espectrofotometria no UV, Tenoxicam, Validao. KEY WORDS: Tenoxicam, UV-spetrophotometry, Validation.
* Autor a quem dirigir correspondncia. E-mail: simonegc@ccs.ufsm.br
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ISSN 0326-2383
acta farmacutica bonaerense - vol. 25 n 2 - ao 2006
dos atravs da espectrofotometria no ultravioleta, por ser esta tcnica mais simples e menos dispendiosa que a cromatografia lquida de alta eficincia indicada pela Farmacopia Britnica 1. O emprego de hidrxido de sdio 0,1M (M1), metanol (M2) e metanol/cido clordrico 0,1M (M3) como diluentes foram avaliados. As validaes foram conduzidas conforme preconizado pela Farmacopia Americana 13 e ICH 14. Os mtodos podem ser utilizados para controle do frmaco durante a produo e para avaliar a uniformidade de contedo. Devido limitada seletividade dos mtodos espectrofotomtricos, a avaliao da qualidade dos comprimidos deve ser complementada com outras tcnicas, com o intuito de verificar a presena de produtos de degradao ou impurezas relacionadas ao frmaco. MATERIAL E MTODO Equipamento Espectrofotmetro UV/Vis, Milton-Roy Genesys 2; com cubetas de quartzo de 10 mm de espessura. Reagentes e solventes Acido clordrico fumegante, grau analtico (Merck), Metanol grau cromatogrfico (Tedia), Hidrxido de sdio grau analtico (Merck). Substncia qumica de referncia (SQR) e produto farmacutico TNX, substncia qumica de referncia (pureza declarada de 99,91%), foi adquirido da empresa Delaware (Brasil). Os comprimidos foram adquiridos comercialmente, com teor declarado de 20 mg de TNX e apresentavam os seguintes excipientes: estearato de magnsio, croscarmelose sdica, dixido de silcio coloidal, lactose monoidratada, celulose microcristalina, dixido de titnio, xido frrico amarelo, hidroxipropilmetilcelulose, polietilenoglicol 3350 e gua purificada. Padronizao do mtodo Preparo das solues estoques da SQR Foram pesadas, analiticamente, quantidades da SQR, previamente dessecada a 110 C por 1 h, correspondentes a 25,0 mg de tenoxicam as quais foram transferidas para bales volumtricos de 250 mL. Aps solubilizao, os volumes foram completados com hidrxido de sdio 0,1 M (M1) ou metanol (M2), obtendo-se solues com concentrao de 100,0 g/mL. A partir dessas solues foram preparadas solues para construo dos espectros de absoro, curvas de Ringbom e curvas de calibrao.
Espectros de absoro Os espectros de absoro das solues da SQR e dos comprimidos foram traados no intervalo de 200 a 450 nm, utilizando solues contendo 8,0 g/mL de TNX preparadas em hidrxido de sdio 0,1 M (M1), metanol (M2) e metanol/cido clordrico 0,1M (M3). Para M3, utilizou-se soluo estoque preparada em metanol com concentrao de 100,0 g/mL de TNX. Construo das curvas de Ringbom A partir da soluo estoque da SQR em hidrxido de sdio 0,1 M, foram transferidas, com auxlio de bureta, alquotas variando de 0,5 a 12,5 mL, para bales volumtricos de 50 mL. Os volumes foram completados com hidrxido de sdio 0,1 M para obter solues com concentraes variando de 1,0 a 25,0 g/mL. As leituras de transmitncia foram realizadas a 368 nm. O mesmo procedimento foi aplicado para mtodos M2 e M3 utilizando, entretanto, metanol (M2) e cido clordrico 0,1 M (M3) para obter as concentraes de 1,0 a 25,0 g/mL, a partir de solues metanlicas da SQR. Para M2 e M3 as leituras de transmitncia foram realizadas em 372 nm e 360 nm, respectivamente. Validao dos mtodos Os seguintes parmetros analticos foram avaliados na validao dos mtodos propostos (M1, M2 e M3) para a determinao de teor de TNX em comprimidos: Especificidade Foi avaliada pela comparao entre os espectros de absoro obtidos para a substncia de referncia e as amostras e pelo ensaio de amostra simulada, contendo os excipientes (ASE) presentes nos comprimidos. Linearidade Trs curvas de calibrao foram preparadas, cada uma com seis nveis de concentrao, em trs diferentes dias. As curvas foram obtidas a partir das solues estoques da SQR. Alquotas de 3,0; 4,0; 5,0; 6,0; 7,0 e 8,0 ml das solues estoque foram transferidas, com auxlio de bureta, para bales volumtricos de 50 ml. Os volumes foram completados com hidrxido de sdio 0,1 M (M1), metanol (M2) ou cido clordrico 0,1M (M3), obtendo-se solues com concentraes de 6,0; 8,0; 10,0; 12,0; 14,0 e 16,0 g/mL. Os valores de absorvncias foram obtidos em 368 nm (M1), 372 nm (M2) e 360 nm (M 3 ). Com os valores das absorvncias em funo das concentraes de TNX foram calculados os coeficientes de correlao e as equaes das retas de calibrao.
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CARDOSO S.G., ROLIM C.M.B., ESCARRONE A.L., IEGGLI C.V.S., CAVALETT C., OLIVEIRA D.C. de, LORETO E.S. de, SCHMITT G.C., CARLOSSO I.P., CMERA K., BAJERSKI L., MALESUIK M.D. & BER T.M.
Limites de deteco (LD) e de quantificao (LQ) Foram calculados, conforme ICH 14, a partir do desvio padro da resposta e da inclinao das curvas de calibrao obtidas por regresso linear. Preciso Para determinao da repetibilidade foram preparadas e analisadas, no mesmo dia, seis amostras de comprimidos na mesma concentrao (12,0 g/mL). Na determinao da preciso intermediria foram preparadas e analisadas, em trs diferentes dias, trs amostras de comprimidos na mesma concentrao (12,0 g/mL). A preciso foi expressa como coeficiente de variao percentual (CV%). Para anlise das amostras foi determinado o peso mdio de 20 comprimidos, os quais foram posteriormente triturados. Pesaram-se quantidades equivalentes a 10 mg de TNX as quais foram transferidas para bales volumtricos de 50 ml, com auxlio de hidrxido de sdio 0,1 M ou metanol. Aps banho de ultra-som durante 5 min, os volumes foram completados com hidrxido de sdio 0,1 M ou metanol, obtendo-se solues com concentrao de 200 g/mL, as quais foram filtradas. A partir da soluo preparada em hidrxido de sdio 0,1M foram transferidos 3,0 mL para balo volumtrico de 50 mL, completando-se o volume com o mesmo solvente (M1). A partir da soluo metanlica foram transferidas alquotas de 3,0 mL para bales volumtricos de 50 mL, completando-se o volume com o metanol (M2) ou cido clordrico 0,1 M (M3). A concentrao
de TNX nas amostras foi 12,0 g/mL, tanto para M1, M2 e M3. As leituras de absorvncias foram efetuadas nos comprimentos de onda citados anteriormente. Exatido Foi verificada pela comparao dos resultados obtidos com um segundo e bem caracterizado mtodo. Empregou-se a cromatografia lquida de alta eficincia descrita na Farmacopia Britnica 1 para anlise do teor de TNX em comprimidos. RESULTADOS E DISCUSSO Para otimizao de mtodo espectrofotomtrico na regio do ultravioleta deve-se, inicialmente, investigar o espectro de absoro do frmaco em diferentes solventes para definir as bandas de absoro mxima e suas intensidades e para escolher o comprimento de onda de trabalho, onde no devem observadas interferncias de excipientes, impurezas ou de solventes. TXN solvel em solues cidas e bsicas, em metanol e diclorometano e insolvel em gua 1,2. Com base na sua solubilidade 1,2 e em estudos prvios 5,15, foi avaliado o emprego de hidrxido de sdio 0,1 M, de metanol e de metanol/cido clordrico 0,1 M para determinao quantitativa do frmaco em comprimidos. Os mximos de absoro em hidrxido de sdio 0,1 M, metanol e metanol/cido clordrico foram, respectivamente, 368 nm, 372 nm e 360 nm, conforme pode ser observado na Fig. 2. Em relao ao hidrxido de sdio 0,1 M obFigura 2. Espectros de absoro de na regio do UV referentes s solues de Tenoxicam, na concentrao de 8 g/ml: (a) SQR em hidrxido de sdio 0,1 M; (b) comprimidos em hidrxido de sdio 0,1 M; (c) SQR em metanol; (d) comprimidos em metanol; (e) SQR em metanol/cido clordrico 0,1 M; (f) comprimidos em metanol/cido clordrico 0,1 M.
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acta farmacutica bonaerense - vol. 25 n 2 - ao 2006
Absorvncias Mdias (a) e.p.m. Concentrao (g/ml) M1 M2 M3
6,0 8,0 10,0 12,0 14,0 16,0

mx
0,258 0,344 0,434 0,519 0,617 0,701
0,001 0,002 0,001 0,003 0,007 0,005
0,246 0,329 0,411 0,485 0,568 0,644
0,003 0,003 0,005 0,006 0,004 0,006
0,388 0,518 0,649 0,780 0,902 1,029
0,003 0,003 0,009 0,009 0,009 0,013
368 nm y = 0,0446x - 0,0116 0,9997 14619,72 0,4 g/ml 1,2 g/ml
372 nm y = 0,04x + 0,0076 0,9998 13661,97 0,4 g/ml 1,1 g/ml
360 nm y = 0,0644x + 0,0028 0,9999 21971,83 0,2 g/ml 0,7 g/ml

a n = 3;
Equao da reta r Absortividade molar () Limite de deteco Limite de quantificao
Tabela 1. Resultados obtidos na determinao das curvas de calibrao atravs dos mtodos propostos.
e.p.m. = erro padro da mdia; r = coeficiente de correlao; mx = Comprimento de onda de mxima absoro.
serva-se efeito batocrmico para metanol e hipsocrmico para metanol/cido clordrico 0,1 M nos mximos de absoro. Segundo Banerjee et al. 15 em solues acidificadas predominam as formas neutras e/ou dipolares (zwitterions) do TNX enquanto que em solues alcalinas ou solventes polares, tais como metanol, etanol e 1-propanol, predominam as espcies aninicas do frmaco. Comparando os espectros de absoro obtidos para TNX SQR com aqueles obtidos para os comprimidos, verifica-se que no houve interferncia de excipientes presentes nos comprimidos (Fig. 2) para os mtodos M1, M2 e M3. Nas anlises realizadas com amostras simuladas de excipientes, verificou-se, tambm, no haver interferncia dos mesmos. Aps definio dos solventes e dos mximos de absoro, iniciou-se a validao dos mtodos, de acordo com Farmacopia Americana 13 e ICH 14. Com o objetivo de determinar a faixa ideal de concentrao na qual o mtodo obedece a Lei de Lampert-Beer foram construdas curvas de Ringbom, com concentraes variando de 0,5 a 12,5 g/ml, utilizando hidrxido de sdio 0,1 M, metanol e metanol/cido clordrico 0,1 M como solventes. Verificou-se, atravs das curvas de Ringbom, que a faixa de concentrao de 6,0 a 16,0 g/ml adequada para quantificao. As equaes da reta, obtidas pelo mtodo dos mnimos quadrados, o coeficiente de correlao e as absortividades molares, encontramse na Tabela 1. Os coeficientes de correlao foram superiores a 0,999, demonstrando relao linear entre absorvncia e concentrao. Anlises de varincia (ANOVA) das curvas obtidas demonstraram que houve regresso linear significativa, no havendo desvio significativo da li-
nearidade (p<0,01) tanto para M1, M2 e M3. Os limites de deteco e quantificao foram calculados atravs do intercepto e inclinao da curvas obtidas e os valores encontram-se na Tabela 1. Os valores experimentais obtidos na determinao de TNX nos comprimidos esto apresentados na Tabela 2. A preciso foi demonstrada pela repetibilidade dos resultados obtidos atravs de vrias reprodues dos mtodos, nas mesmas condies, no mesmo dia. Os coeficientes de variao (CV%) inferiores a 1% demonstram a boa preciso dos mtodos. A preciso intermediria foi avaliada pelo CV% e teste F, sendo que os resultados individuais esto apresentados na Tabela 2. Os CV% foram 0,91%; 0,44% e 0,54% para M1,
Repetibilidade (mesmo dia) Amostra M1 M2 M3
1 2 3 4 5 6 Mdia CV%
Dia
100,56 101,97 100,00 99,72 101,69 100,28 100,70 0,91

M1
96,10 97,25 97,25 95,72 96,29 96,67 96,55 0,64

M2
95,85 95,73 96,11 95,22 94,71 94,84 95,41 0,60

M3
Preciso Intermediria (diferentes dias)
1 2 3 Mdia CV% F(2,9)= 4,26 P=0,05
100,70 99,28 99,01 99,66 0,91 4,05
95,55 96,45 95,77 96,26 0,44 1,63
95,41 96,21 95,24 95,62 0,54 4,15
Tabela 2. Avaliao da preciso (repetibilidade e preciso intermediria) dos mtodos propostos.
265
CARDOSO S.G., ROLIM C.M.B., ESCARRONE A.L., IEGGLI C.V.S., CAVALETT C., OLIVEIRA D.C. de, LORETO E.S. de, SCHMITT G.C., CARLOSSO I.P., CMERA K., BAJERSKI L., MALESUIK M.D. & BER T.M.
M1
M2
M3
CL (BP 2003)
Mdia (%), n = 3 Desvio padro (DP) Varincia (DP2) Teste t (4; 0,01) = 4,60 (exatido) Teste F (2,2; 0,05) = 19 (preciso)
99,66 0,908 0,824 2,94* 1,12*
96,26 0,424 0,180 2,32* 0,25*
95,62 0,518 0,268 1,36* 0,36*
97,54 0,857 0,735 -
Tabela 3. Comparao estatstica da exatido e preciso de cada mtodo com o mtodo oficial (cromatografia lquida - CL). * valores no significativos
Exatido
teste t(4; 0,01) = 4,60 M2 M3

Preciso
M1
M2
5,89 6,70
M2
2,92*
M3
teste F (2,2; 0,05) = 19 Varincia (DP2)

M1 M3 M2
0,824 0,268 0,180
4,58* 1,49* -
3,07* -
Tabela 4. Comparao estatstica da exatido e preciso entre os mtodos. * Valores no significativos.
dendo ser utilizados durante o processo de produo, quando se necessitam de anlises rpidas, ou para avaliar a uniformidade de contedo dos comprimidos. A desvantagem dos mesmos a impossibilidade de diferenciar produtos de degradao ou compostos relacionados. Para que possam ser utilizados como mtodo de quantificao, devem ser complementados com outras tcnicas tais como cromatografia em camada delgada ou cromatografia lquida de alta eficincia, para verificar presena de produtos de degradao ou impurezas relacionadas.
REFERNCIAS
M2 e M3, respectivamente. Os valores de F obtidos foram 4,05; 1,63 e 4,15; respectivamente para M1, M2 e M3 (F tabelado = 4,26), indicando no haver diferena significativa entre os resultados obtidos em dias diferentes (P <0,05). Segundo ICH14, para demonstrar a exatido do mtodo pode-se utilizar um segundo e bem caracterizado mtodo. Dessa forma, as amostras foram analisadas por cromatografia lquida (CL), conforme mtodo descrito na Farmacopia Britnica 1 e os resultados da determinao em triplicata esto apresentados na Tabela 3. A comparao dos mtodos M1, M2 e M3 com o mtodo oficial foi realizada atravs de testes de significncia. Para avaliar a exatido utilizou-se o teste t de Student 16. Para comparar a preciso empregou-se o teste F 16, comparando-se as varincias dos mtodos. Verificou-se que no houver diferena significativa quanto exatido e preciso para M1 e CL, M2 e CL e M3 e CL (Tabela 3). A comparao da exatido e da preciso entre os mtodos M1, M2 e M3 foi igualmente avaliada (Tabela 4). Verificou-se que M1 diferiu de M2 e M3 quanto exatido, no havendo diferena significativa quanto preciso entre os trs mtodos. Os resultados obtidos pelos mtodos M1, M2 e M3 encontram-se, no entanto, dentro da faixa de variao de 92,5 a 105% estabelecida pela Farmacopia Britnica 1. CONCLUSES Os mtodos propostos possuem as vantagens de economia e facilidade de execuo, po266
1. British Pharmacopoeia (2003) London, Her Majestys Stationery Office. 2. Farmacopia Brasileira 4 ed. (2003) So Paulo: Atheneu, Monografia 3. Atkobar, Z. & M. Tuncel, (1996) Anal. Lett. 29: 2383-97. 4. Acua, J.A, Vzquez, M.D, Tascn, M. L. & Snchez-Batane P. (2004) J. Pharm. Biomed. Anal. 36: 157-62. 5. El Walil Y.A.F.M., S.M. Blaih, M.H Barary, M.A. El-Sayed, H.H. Abdine & A.M. El-Kersh (1997) J. Pharm. Biomed. Anal. 15: 1923-8. 6. Joseph-Charles, J. & M. Bertucat (1999) J. Liq. Chromatogr. R. T. 22: 2009-21. 7. Atay, O. & F. Dincol (1997) Anal. Lett. 30: 167584. 8. El-Gazayerly, O.N. (2000) Drug Dev. Ind. Pharm. 26: 925-30. 9. Amim, A.S. (2002) J. Pharm. Biomed. Anal. 29: 729-36. 10. El Ryes, M.A., G. Mohamed, S. Khalil & M. ElShal (2003) Chem. Pharm. Bull. 51: 6-10. 11. Al-Tamrah, S.A. (1998) Anal. Chim. Acta. 375: 277-83. 12. Barary M.H, M.H. Abdel-Hay, S.M. Sabry & T.S. Bela (2004) J. Pharm. Biomed. Anal. 34: 221-6. 13. The United States Pharmacopoeia, 28 ed. (2005) US Pharmacopeial Convention, Rockville. 14. International Conference on Harmonisation (ICH). Validation of Analytical Procedures: Methodology (1996), Geneva, IFPMA. 15. Banerjee, R., H. Charkraborty, & M. Sarkar, (2003) Spectrochim. Acta Part A 39: 1213- 22. 16. Miller, J.C. & J.N. Miller (2000) Statistics and chemometrics for analytical chemistry, 4 ed. Prentice Hall.

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CONSELHO REGIONAL DE QUMICA - IV REGIO (SP)

Anlise instrumental: da amostragem validao

So Paulo, 21 de julho de 2012

Conselho Regional de Qumica IV Regio (SP) Apoio: Caixa Econmica Federal

QUANTITATIVOS MTODOS ANALTICOS QUALITATIVOS MODERNOS ou INSTRUMENTAIS

Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.03

Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.04

Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.05

Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.08

Conselho Regional de Qumica IV Regio (SP) Apoio: Caixa Econmica Federal

Rejeio de Resultados (teste Q) Caso Q calc>Q tab o valor rejeitado

Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.11

3 9,28 6,56 5,41 4,76 4 76 3,49 3,10 2,60

4 9,12 6,39 5,19 4,53 4 53 3,26 2,87 2,37

Graus de Liberdade (Numerador) 5 6 12 20

9,01 6,26 5,05 4,39 4 39 3,11 2,71 2,21

8,94 6,16 4,95 4,28 4 28 3,00 2,60 2,10

8,74 5,91 4,68 4,00 4 00 2,69 2,28 1,75

8,64 5,80 4,56 3,87 3 87 2,54 2,12 1,57

8,53 5,63 4,36 3,67 3 67 2,30 1,84 1,00

Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.12

Escotopsina rodopsina Luz

Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.21

Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.23

Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.24

Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p25

Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.26

Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.27

Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.29

A 410 nm 0,760 0 760 0,185 0,715

A 460 nm 0,513 0 513 0,250 0,657

Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.30

Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.31

5-GONALVES,M.L.S.S.MTODOS Instrumentais para Anlise Solues.3 Ed.FUNDAO CALOUSTE Gulbenkian,Lisboa,1996.

Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.32

Acta Farm. Bonaerense 25 (2): 262-6 (2006)

Determinao Quantitativa de Tenoxicam em Comprimidos por Espectrofotometria no Ultravioleta

Figura 1. Estrutura Qumica do Tenoxicam.

acta farmacutica bonaerense - vol. 25 n 2 - ao 2006

acta farmacutica bonaerense - vol. 25 n 2 - ao 2006

Absorvncias Mdias (a) e.p.m. Concentrao (g/ml) M1 M2 M3

6,0 8,0 10,0 12,0 14,0 16,0

0,258 0,344 0,434 0,519 0,617 0,701

0,001 0,002 0,001 0,003 0,007 0,005

0,246 0,329 0,411 0,485 0,568 0,644

0,003 0,003 0,005 0,006 0,004 0,006

0,388 0,518 0,649 0,780 0,902 1,029

0,003 0,003 0,009 0,009 0,009 0,013

368 nm y = 0,0446x - 0,0116 0,9997 14619,72 0,4 g/ml 1,2 g/ml

372 nm y = 0,04x + 0,0076 0,9998 13661,97 0,4 g/ml 1,1 g/ml

360 nm y = 0,0644x + 0,0028 0,9999 21971,83 0,2 g/ml 0,7 g/ml

Equao da reta r Absortividade molar () Limite de deteco Limite de quantificao

100,56 101,97 100,00 99,72 101,69 100,28 100,70 0,91

96,10 97,25 97,25 95,72 96,29 96,67 96,55 0,64

95,85 95,73 96,11 95,22 94,71 94,84 95,41 0,60

Preciso Intermediria (diferentes dias)

1 2 3 Mdia CV% F(2,9)= 4,26 P=0,05

100,70 99,28 99,01 99,66 0,91 4,05

95,55 96,45 95,77 96,26 0,44 1,63