AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DAN KUALITAS MINUMAN SINBIOTIK LABU KUNING

(Cucurbita moschata) DENGAN VARIASI WAKTU FERMENTASI

ANTIOXIDANT ACTIVITY AND QUALITY OF PUMPKIN (Cucurbita moschata) SYNBIOTIC

DRINKS WITH VARIATION OF FERMENTATION TIMES
Agnes Sekar Arum Jati1, L.M. Ekawati Purwijantiningsih2, F. Sinung Pranata3
Program Studi Biologi, Fakultas Teknobiologi, Universitas Atma Jaya Yogyakarta
Jl. Babarsari no 44 Yogyakarta
theresiaasaj@gmail.com

ABSTRAK

Labu kuning (Cucurbita moschata) diketahui kaya akan senyawa betakaroten yang dapat berperan
sebagai sumber antioksidan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh waktu fermentasi (12 jam,
24 jam, 48 jam) terhadap aktivitas antioksidan dan kualitas minuman sinbiotik terbaik. Serangkaian uji yang
dilakukan meliputi penentuan aktivitas antioksidan dengan persentase inhibisi DPPH, uji total fenol, uji
kadar abu, uji kadar protein, uji kadar lemak, uji pH, uji total asam tertitrasi, uji warna, uji mikrobiologi dan
uji organoleptik. Hasil perlakuan terbaik yaitu perlakuan waktu fermentasi 24 jam dengan aktivitas
antioksidan sebesar 72,43%, total fenol 24,92 mg GAE/100g, kadar abu 0,53%, kadar protein 0,56%, kadar
lemak 0,84%, pH 4,52, total asam titrasi 0,474%, warna jingga kekuningan, total BAL 1,17 x 109 CFU/ml,
negatif Salmonella dan organoleptik pada peringkat pertama. Berdasarkan pengolahan data dengan ANOVA
yang dilanjutkan dengan Duncan Multiple Range Test (DMRT), minuman sinbiotik labu kuning
memberikan pengaruh beda nyata terhadap aktivitas antioksidan, kadar protein, kadar lemak, pH, total asam
tertitrasi, total BAL serta memberikan pengaruh yang tidak berbeda nyata pada total fenol dan kadar abu.

Kata Kunci : Labu Kuning, Minuman Sinbiotik, Antioksidan.

PENDAHULUAN

Perubahan gaya hidup berpengaruh terhadap pola makan sehari-hari. Pola makan yang salah memicu

timbulnya berbagai penyakit, terutama gangguan saluran pencernaan seperti diare. Hal ini berkaitan dengan

Laporan Riset Kesehatan Dasar 2007, yang menunjukkan bahwa sebagian besar penduduk Indonesia masih

kurang mengkonsumsi serat dari sayur dan buah, kurang olah raga hingga kebiasaan mengkonsumsi

makanan yang mengandung pengawet dan pewarna sintetis. Salah satu cara untuk mengatasi hal tersebut

yaitu dengan mengkonsumsi produk pangan yang baik untuk pencernaan seperti minuman sinbiotik, yang

merupakan kombinasi dari probiotik dan prebiotik.

Labu kuning merupakan sumber karbohidrat dan kaya akan β-karoten yang berperan sebagai

antioksidan (Raharjo, 2009). Salah satu upaya dalam pemanfaatan labu kuning yaitu dengan pembuatan

minuman sinbiotik, Pada produk ini terdapat dua komponen sekaligus yaitu inulin dari labu kuning yang

berperan sebagai prebiotik dan kultur starter Lactobacilluscasei yang berperan sebagai probiotik. Dengan

adanya proses fermentasi, maka antioksidan eksogenus dapat meningkat karena adanya interaksi dengan

1
 2

bakteri asam laktat (Eleganty, 2016). Oleh karena itu, produk minuman sinbiotik labu kuning ini dapat

memberikan efek kesehatan karena mengandung probiotik dan antioksidan.

METODE PENELITIAN

Bahan-bahan yang digunakan adalah buah labu kuning, Lactobacillus casei, cat Gram A, cat Gram

B, cat Gram C, cat Gram D, cat nigrosin, larutan 3% H2O2, akuades, indikator phenolphthalein 1%, H2SO4

pekat, NH3 pekat, HCl 0,1N, NaOH 0,1N, Na2CO3 7%, methanol 96%, ethanol 9%, alkohol 70%, alkohol

95%, reagen DPPH, reagen Folin-Ciocalteu, asam galat, katalis N, indikator merah metil, dietil eter,

petroleum eter, MRS agar, MRS broth, medium Lactose Broth, medium SCB, Sodium Biselenite, medium

SSA, CaCO3, kertas saring, plastik dan kapas.

Alat-alat yang digunakan adalah pisau, talenan, kompor gas, panci, termometer, kain saring, jarum

ose, erlenmeyer, jarum enten, cawan petri, rak tabung reaksi, tabung reaksi, magnetic stirrer, botol jar, gelas

benda, gelas penutup, pipet tetes, cup plastik, corong, penjepit kayu, buret, statif, propipet, pipet ukur, gelas

beker, tabung falcon, corong pemisah, gelas ukur, eksikator, cawan porselin, mikrotip, mikropipet, bunsen,

tanur, labu kjeldhal, lemari asam, timbangan analitik, vortex, spektrofotometer, mikroskop, oven, autoklaf,

pH meter, milipore membrane, juicer, hot plate, microwave, laminar air flow, frezzer, waterbath, color

reader, sentrifuge, inkubator, kertas payung, aluminium foil, korek api dan karet.

Cara kerja

1. Isolasi dan Karakterisasi Bakteri Lactobacillus casei

Lactobacillus casei diperoleh dari medium agar tegak. Lactobacillus casei diisolasi ke medium

MRS broth dan dilanjutkan dengan metode streak plate agar pada medium MRS agar untuk memperoleh

koloni tunggal. Karakterisasi Lactobacillus casei meliputi pengecatan Gram, identifikasi bakteri

berdasarkan karakter morfologikal, uji katalase dan uji motilitas.

2. Pembuatan Sari Labu Kuning (Argarini, 1997 dengan modifikasi)

Labu kuning dicuci bersih, dikupas kulitnya dan dipisahkan dari jonjotnya. Kemudian labu

dipotong kecil-kecil dan diblanching pada suhu 85oC selama 2 menit. Selanjutnya potongan labu kuning
 3

dihancurkan dengan menggunakan juicer dan diperoleh sari labu kuning. Setelah itu, sari labu kuning

disaring dengan kain saring dan kertas saring.

3. Pembuatan Starter Lactobacillus casei

Lima ml MRS Broth yang telah steril diinokulasi dengan satu ose kultur kerja lalu diinkubasi

pada suhu 37oC untuk Lactobacillus casei selama 48 jam sehingga diperoleh kultur cair bakteri.

Selanjutnya, kultur cair tersebut diinokulasikan sebanyak 5% ke dalam 100 ml sari labu kuning yang

telah pasteurisasi dengan penambahan 8% sukrosa dan diinkubasi pada suhu 24 jam sehingga diperoleh

starter siap pakai.

4. Pembuatan Minuman Sinbiotik (Mulyani dkk., 2013 dengan modifikasi)

Sari labu kuning sebanyak 200 ml ditambah dengan 8% glukosa. Selanjutnya, campuran sampel

dipasteurisasi dengan suhu 60oC selama 15 menit dan didinginkan pada suhu freezer. Campuran sampel

dimasukkan ke dalam botol jar. Starter siap pakai Lactobacillus casei dengan konsentrasi 5%

diinokulasikan ke dalam campuran sampel. Selanjutnya diinkubasi pada suhu 37oC dengan lama

inkubasi 12 jam, 24 jam dan 48 jam.

5. Uji Kimia Minuman Sinbiotik

a. Kadar Abu (AOAC, 1995)

Cawan porselen dikeringkan dengan oven 105oC selama 1 jam. Cawan porselen (a) dan

minuman probiotik (w) ditimbang dalam cawan porselen yang telah diketahui bobot kosongnya,

Kemudian dimasukkan ke dalam tanur bersuhu 550oC selama 8 jam, lalu didinginkan dengan

eksikator dan ditimbang (x).

Kadar Abu =

b. Kadar Protein (Sudarmadji dkk., 1984)

Labu kuning dipotong menjadi bagian yang kecil dan tipis kemudian diambil sebanyak 1

gram dan dimasukkan ke dalam labu Kjeldahl kemudian ditambahkan dengan 2gram katalisator dan

15 ml H2SO4 pekat untuk mendigesti sampel danmendekomposisi Nitrogen. Semua bahan dalam labu

Kjeldahl dipanaskan dalam almari asam sampai berhenti berasap, pemanasan diteruskan dengan api
 4

besar hingga mendidih dan cairan jernih. Pemanasan tambahan diteruskan selama 1 jam. Api lalu

dimatikan dan bahan dibiarkan hingga dingin.

Aquades 100 ml, beberapa lempeng keramik, dan empat tetes indikator PP ditambahkan ke

dalam labu Kjeldahl yang didinginkan dalam air es. Setelah itu ditambahkan dengan larutan NaOH

40% sebanyak 40 – 50 ml perlahan-lahan sambil diaduk hingga larutan dalam labu berwarna pink.

Labu Kjeldahl kemudian dipasangkan pada alat destilasi dan dipanaskan perlahan-lahan sampai dua

lapisan cairan tercampur, lalu dipanaskan dengan cepat sampai mendidih.

Hasil destilasi ditampung dalam erlenmeyer yang telah diisi dengan 50 ml larutan standar

HCl (0,1 N) dan 5 tetes indikator metil merah. Destilasi dilakukan hingga destilat tertampung

sebanyak 75 ml. Destilat dititrasi dengan NaOH 0,1 N hingga berwarna kuning. Setelah itu larutan

blanko dibuat dengan mengganti bahan dengan aquades sebanyak 10 ml lalu dilanjutkan tahap

destruksi, destilasi, dan titrasiseperti pada bahan contoh. Persentase N dihitung dengan rumus:

%N = Kadar protein = %N x 6,38

c. Kadar Lemak (AOAC, 1995)

Sampel sebanyak 10 gram ditambah dengan NH3 pekat sebanyak 1,25 ml selanjutnya larutan

ini dipanaskan dengan waterbath 70oC kurang lebih 15 menit. Larutan ditambah alkohol 95%

sebanyak 10 ml dan dietil eter 25 ml. Seluruh larutan dimasukkan dalam labu sarisi kemudian

dikocok 1 menit. Larutan ditambahkan petroleum eter 25 ml dan dikocok 1,5 menit. Larutan

didiamkan sehingga akan membentuk dua lapisan. Lapisan atas diambil yang kemudian ditaruh

dalam cawan porselen yang telah ditimbang untuk diuapkan di atas waterbath.

Kadar Lemak =

d. Derajat Keasaman atau pH (AOAC, 1995)

Minuman sinbiotik labu kuning yang telah jadi dikocok secara merata, kemudian diukur pH

nya dengan menggunakan pH meter.

e. Total Asam Titrasi (AOAC, 1995)

 5

Pengukuran dengan prinsip titrasi asam basa. Sebanyak 10 ml sampel minuman sinbiotik labu

kuning dimasukkan dalam erlenmeyer kemudian ditambahkan dengan tiga tetes indikator PP 1% dan

dititrasi dengan NaOH 0,1 N hingga berubah menjadi merah muda.

Total Asam Laktat :

f. Penentuan Aktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH (Sasaki dkk., 2007 dengan modifikasi)

Larutan sari labu kuning sebanyak 0,5 ml dilarutkan ke dalam 5 ml metanol 96%. Selanjutnya

larutan campuran diambil sebanyak 1 ml dan ditambahkan dengan larutan DPPH sebanyak 4 ml

dikocok dengan vortex hingga homogen dan diinkubasi dalam ruang gelap selama 2 jam. Serapan

diukur pada panjang gelombang 517 nm. Kemudian dihitung % aktivitas antioksidan sari labu

kuning dengan rumus :

g. Pengukuran Kandungan Total Fenolik (Lee dkk., 2003 dengan modifikasi)

Sampel sari labu kuning sebanyak 0,4 ml dilarutkan dengan metanol 96% sebanyak 10 ml

kemudian sebanyak 0.4 ml dimasukkan dalam labu ukur lalu ditambah 0,4 ml reagen Folin

Ciocalteu. Larutan dihomogenkan menggunakan vortex selama 3 menit. Na2CO3 7% sebanyak 4 ml

ditambahkan ke dalam larutan. Aquades ditambahkan hingga volumenya mencapai 10 ml. Larutan

disimpan dalam ruangan gelap selama 60 menit pada suhu ruang. Absorbansinya dibaca pada λ 750

nm.

6. Uji Fisik Minuman Sinbiotik

a. Analisis Warna dengan Chromameter (deMan, 1997)

Sampel dimasukkan dalam plastik bening secukupnya. Pengukuran dilakukan hingga alat

memberi cahaya terhadap sampel sebanyak 3 kali pada titik yang berbeda.

X= Y=

7. Uji Mikrobiologis
 6

a. Viabilitas BAL (Fardiaz, 1987 dengan modifikasi)

Sebanyak 1 ml minuman sinbiotik labu kuning diencerkan dalam 9 ml larutan akuades steril

pada pengenceran 10-1 hingga 10-10, kemudian sampel pada pengenceran 10-6 hingga 10-10 dipipet

sebanyak 1 ml ke dalam cawan petri steril. Ditambahkan dengan 20 ml MRSA cair steril, lalu cawan

petri digoyangkan secara mendatar agar sampel menyebar rata. Setelah agar membeku, diinkubasi

dengan posisi terbalik pada suhu 37oC selama 48 jam. Jumlah koloni yang tumbuh dihitung dan

dinyatakan dalam satuan CFU/ml atau log CFU/ml.

b. Salmonella Hocking dkk., 1997)

Sampel sebanyak 1 ml dimasukkan ke dalam 9 ml medium LB (Lactoe Broth), kemudian

diinkubasi pada suhu 37oC selama 24 jam. Hasil inkubasi diambil sebanyak 1 ml dan diinokulasikan

ke 9 ml medium SCB (Selenite Cystine Broth). Kemudian diinkubasi pada suhu 37oC selama 48 jam.

Kemudian koloni yang muncul diambil sebanyak 1 ose dan diinokulasikan pada medium SSA

(Salmonella Shingella Agar) dengan metode streak plate. Kemudian diinkubasi selama 48 jam pada

suhu 37oC. Hasil positif berupa koloni transparan dengan warna hitam pada bagian tengah.

8. Uji Organoleptik (Soekarto, 1985 dengan modifikasi)

Pengujian dilakukan oleh 30 orang panelis yang memiliki latar belakang suka dengan minuman

yang cenderung asam. Parameter uji meliputi warna, aroma, rasa dan homogenitas. Kriteria penilaian

dilakukan yaitu dengan skala (1) tidak suka, (2) agak suka, (3) suka dan (4) sangat suka.

9. Analisis Data (Gaspersz, 1991)

Data yang diperoleh dianalisis dengan menggunakan metode Analysis of Variance (ANOVA)

dan untuk mengetahui letak beda nyata antar perlakuan digunakan uji Duncan’s Multiple Range Test

(DMRT) dengan tingkat kepercayaan 95%. Data diproses dengan SPSS versi 15.

HASIL DAN PEMBAHASAN

1. Analisis Uji Kemurnian Lactobacillus casei

 7

Uji kemurnian bakteri Lactobacillus casei memberikan hasil Gram positif, berbentuk batang,

katalase negatif dan bersifat non-motil. Menurut Saxelin (1991), Lactobacillus caseimerupakan bakteri

Gram-positif, anaerobik fakultatif, katalase negatif, heterofermentatif fakultatif, tidak membentuk spora,

berbentuk batang. Lactobacillus casei dapat diisolasi dari berbagai habitat seperti daging, susu, produk

olahan susu, makanan atau minuman asam dan limbah.

2. Analisis Kimia Sari Labu Kuning

Hasil analisis kimia sari labu kuning dapat dilihat pada Tabel 2.

Tabel 2. Hasil Analisis KimiaSari Labu Kuning

Parameter Dima dkk. Usmiati dkk. Bath dan Bath (2013) Analisis kimia
(2015) (2005)
Kadar Abu 0,41% - - 0,44%
Kadar Protein - 0,63% - 0,35%
Kadar Lemak - - 1,43% 0,52%

Berdasarkan Tabel 2 diketahui bahwa hasil analisis kimiakadar abu pada labu kuning tidak

jauh berbeda dengan teori menurut Dima dkk. (2015) yang menyatakan bahwa kadar abu pada labu

kuning sebesar 0,41%. Hasil analisis kadar protein lebih rendah dari penelitian Usmiati dkk. (2005) dan

hasil analisis kadar lemak lebih rendah dari penelitian Bath dan Bath (2013). Kandungan gizi pada bahan

makanan dipengaruhi oleh genetik tanaman, kondisi tanah tempat tumbuh, iklim, kondisi fisiologis buah,

proses pemanenan (cara pengepakan, kondisi penyimpanan dan cara pengolahannya), sehingga

memungkinkan hasil pengujian dapat berbeda satu sama lain (Morris dkk., 2004). Sari labu kuning juga

mengandung aktivitas antioksidan dan total fenolik yang dapat dilihat pada Tabel 3.

Tabel 3. Hasil Analisis kimia Kandungan Antioksidan dan Total Fenol pada Sari Labu Kuning
Parameter Azizah dkk. (2009) Ellong dkk. (2015) Analisis kimia
DPPH 78,4% - 54,13%
Total Fenol - 27,03 mg GAE/100g 26,52 mg GAE/100g

Berdasarkan Tabel 3 diketahui bahwa penangkapan radikal bebas DPPH oleh antioksidan

lebih rendah dari penelitian yang dilakukan oleh Azizah dkk. (2009). Perbedaan hasil ini dapat
 8

disebabkan karena senyawa antioksidan merupakan senyawa yang memiliki sifat mudah rusak selama

proses pengolahan sehingga mengalami penyusutan saat analisis kimia.Polifenol merupakan senyawa

turunan fenol yang mempunyai aktivitas sebagai antioksidan. Hasil analisis total fenol tidak jauh berbeda

dari penelitian yang dilakukan oleh Ellong dkk. (2015). Penelitian Valenzuela dkk. (2014) mengenai

kandungan polifenol dalam labu kuning, menunjukkan bahwa kandungan fenolik dalam labu kuning

yaitu flavonoid.

3. Analisis Kimia Minuman Sinbiotik Labu Kuning

a. Kadar Abu

Semakin tinggi kadar abu pada bahan pangan, maka kualitas bahan pangan tersebut semakin

buruk (Sudarmadji, 2003).Uji DMRT menunjukkan bahwa minuman sinbiotik dengan perlakuan

waktu fermentasi tidak memberikan pengaruh beda nyata terhadap kadar abu, cenderung mengalami

peningkatan pada waktu fermentasi 24 jam dan cenderung menurun pada waktu fermentasi 48

jam.Peningkatan dan penurunan yang tidak signifikan dapat disebabkan karena semua perlakuan

pada minuman sinbiotik labu kuning menggunakan jumlah bahan yang sama sehingga tidak

memberikan pengaruh beda nyata. Hasil analisis kadar abu dapat dilihat pada Tabel 4.

Tabel 4. Hasil Analisis Kadar Abu (%) pada Minuman Sinbiotik Labu Kuning
Waktu Fermentasi Kadar Abu (%)
A (12 jam) 0,50 a
B (24 jam) 0,53 a
C (48 jam) 0,50 a
Keterangan : Angka yang diikuti huruf yang sama pada kolom yang sama menunjukkan hasil
yang tidak berbeda nyata pada uji DMRT, dengan tingkat kepercayaan 95%

b. Kadar Protein

Uji DMRT diketahui bahwa perlakuan 12 jam dan 24 jam tidak memberikan pengaruh beda

nyata, sedangkan perlakuan 48 jam terdapat pengaruh beda nyata.Peningkatan kadar proteinkarena

protein dari kultur Lactobacillus caseiikut terdeteksi dan semakin meningkat seiring dengan waktu

fermentasi yang semakin lama. Herawati dan Wibawa (2009) menyatakan bahwa semakin lama

waktu fermentasi maka terjadi peningkatan kadar protein yang berhubungan dengan penurunan
 9

konsentrasi lemak karena dalam metabolisme sel mikrobia terdapat pembentukan protein

(lipoprotein) dari material non protein. Hasil analisis kadar protein dapat dilihat pada Tabel 5.

Tabel 5. Hasil Analisis Kadar Protein (%) pada Minuman Sinbiotik Labu Kuning
Waktu Fermentasi Kadar Protein (%)
A (12 jam) 0,54a
B (24 jam) 0,56 a
C (48 jam) 0,70 b
Keterangan : Angka yang diikuti huruf yang sama pada kolom yang sama menunjukkan hasil
yang tidak berbeda nyata pada uji DMRT, dengan tingkat kepercayaan 95%

c. Kadar Lemak

Uji DMRT menunjukkan bahwa minuman sinbiotik labu kuning dengan perlakuan fermentasi

12 jam dan 24 jam tidak memberikan pengaruh beda nyata, tetapi perlakuan 12 jam dan 24 jam

berbeda nyata dengan perlakuan 48 jam. Penurunan disebabkan karenaLactobacillus casei mampu

menggunakan lemak pada sari labu kuning sebagai energi untuk pertumbuhannya. Menurut Khusnul

dan Kusnaidi (2014), selama proses fermentasi bakteri asam laktat memiliki aktivitas lipolitik

sekunder yang dikendalikan oleh enzim lipase sehingga dapat memecah lemak menjadi asam lemak

dan gliserol. Hasil analisis kadar lemak dapat dilihat pada Tabel 6.

Tabel 6. Hasil Uji Lemak (%) pada Minuman Sinbiotik Labu Kuning
Waktu Fermentasi Kadar Lemak (%)
A (12 jam) 0,96b
B (24 jam) 0,84b
C (48 jam) 0,55a
Keterangan : Angka yang diikuti huruf yang sama pada kolom yang sama menunjukkan hasil
yang tidak berbeda nyata pada uji DMRT, dengan tingkat kepercayaan 95%

d. Derajat Keasaman atau pH

Selama proses fermentasi Lactobacillus casei memecah zat gula menjadi komponen lebih

sederhana yaitu glukosa dan fruktosa, serta menghasilkan asam laktat. Menurut Winarno dan

Fernandez (2007), asam laktat yang merupakan hasil proses fermentasi dapat meningkatkan citarasa,

meningkatkan keasaman, bahkan dapat menurunkan pH suatu produk. Menurut Rosa (2010), nilai

pH untuk yogurt berkisar antara 3,5 – 4,5. Hal ini menunjukkan bahwa perlakuan lama fermentasi 24

jam dan 48 jam masih berada dalam standar pH yogurt. Hasil pengamatan derajat keasaman

minuman sinbiotik labu kuning dapat dilihat pada Tabel 7.

 10

Tabel 7. Hasil Pengamatan Derajat Keasaman pada Minuman Sinbiotik Labu Kuning
Waktu Fermentasi pH
A (12 jam) 5,54c
B (24 jam) 4,52b
C (48 jam) 3,99a
Keterangan : Angka yang diikuti huruf yang sama pada kolom yang sama menunjukkan hasil
yang tidak berbeda nyata pada uji DMRT, dengan tingkat kepercayaan 95%

e. Total Asam Titrasi

Asam yang terbentuk selama proses fermentasi karbohidrat oleh Lactobacillus casei ini

menjadi asam laktat yang akan memberikan cita rasa khas pada minuman sinbiotik labu kuning.

Peningkatan kadar asam laktat sejalan dengan penurunan derajat keasaman yang terbentuk selama

proses fermentasi.Sreeramulu dkk. (2000) menyatakan bahwa selama proses fermentasi terjadi

perombakan glukosa dan fruktosa oleh bakteri yang kemudian menghasilkan asam-asam organik

yang akan semakin meningkat seiiring dengan semakin lama waktu fermentasi.Hasil pengamatan

total asam titrasi minuman sinbiotik labu kuning dapat dilihat pada Tabel 8.

Tabel 8. Hasil Analisis Total Asam Tertitrasi (%) pada Minuman Sinbiotik Labu Kuning
Waktu Fermentasi Total Asam Laktat (%)
A (12 jam) 0,132a
B (24 jam) 0,474b
C (48 jam) 0,609c
Keterangan : Angka yang diikuti huruf yang sama pada kolom yang sama menunjukkan hasil
yang tidak berbeda nyata pada uji DMRT, dengan tingkat kepercayaan 95%

f. Aktivitas Antioksidan

Tabel 9 menunjukkan bahwa selama fermentasi terjadi peningkatan aktivitas antioksidan

pada minuman sinbiotik yang semula sebesar 54,13% pada analisis kimia lalu meningkat menjadi

66,06% pada minuman sinbiotik dengan perlakuan waktu fermentasi 12 jam dan semakin meningkat

pada perlakuan waktu fermentasi 24 jam menjadi 72,43%.Peningkatan aktivitas antioksidan ini

disebabkan senyawa antioksidan lebih stabil pada pada kondisi asam yang terbentuk selama proses

fermentasi.Menurut Yu dan Van (2005), asam laktat pada yoghurt mengandung α-hydroxi acids

(AHA) yang memiliki sifat antioksidan, sehingga aktivitas antioksidan yang dipengaruhi oleh asam

laktat dari probiotik berperan sebagai donor atom hidrogen bagi atom yang memiliki elektron tidak
 11

berpasangan pada orbit terluarnya (radikal bebas).Ayu dkk. (2013), menambahkan bahwa aktivitas

antioksidan yang mengalami penurunan karena suasana yang semakin asam menyebabkan senyawa

fenolik menjadi semakin stabil dan sulit melepaskan proton yang dapat berikatan dengan DPPH

sehingga aktivitas antioksidannya menurun.

Tabel 9. Hasil Analisis Aktivitas Antioksidan (%) pada Minuman Sinbiotik Labu Kuning
Waktu Fermentasi DPPH (%)
A (12 jam) 66,06b
B (24 jam) 72,43c
C (48 jam) 58,38a
Keterangan : Angka yang diikuti huruf yang sama pada kolom yang sama menunjukkan hasil
yang tidak berbeda nyata pada uji DMRT, dengan tingkat kepercayaan 95%

Minuman sinbiotik labu kuning mengandung senyawa karotenoid dan vitamin C yang

berfungsi sebagai antioksidan. Senyawa karotenoid pada labu kuning yaitu β-karoten, α-karoten, β-

criptoxanthin, zeaxanthin dan lutein (Rodriguez-Amaya dkk., 2008). Penurunan aktivitas

antioksidan dapat terjadi karena senyawa β-karoten dapat terdegradasi oleh cahaya maupun oksigen.

Menurut Hounhouigan dkk. (2014), selain β-karoten, vitamin C mengalami penurunan besar akibat

paparan cahaya dan oksigen, sehingga memungkinkan penurunan antioksidan.

g. Total Fenolik

Total fenol pada minuman sinbiotik labu kuning juga berada di bawah hasil penelitian yang

dilakukan oleh Ellong dkk. (2015) dan hasil analisis kimia. Kehilangan total fenol selama pemasakan

dapat terjadi melalui dua cara yaitu terlarut dalam cairan pengolah dan melalui proses oksidasi (Pratt,

1992). Semakin tinggi suhu dan semakin lama proses pengolahan dapat mengakibatkan kandungan

fenol semakin menurun. Menurut Supriyono dkk. (2014), pembentukan senyawa fenol ada pada

rentang pH 4 – 5 sehingga kandungan fenol dapat menurun karena kondisi asam semakin meningkat.

Menurut McQue dan Shetty (2005), penurunan senyawa fenolik karena adanya proses degradasi

sruktur fenolik oleh mikrobia sebagai bentuk strategi detoksifikasi oleh antimikrobia, hasil analisis

total fenol dapat dilihat pada Tabel 10.

Tabel 10. Hasil Analisis Total Fenol (mg GAE/100g) pada Minuman Sinbiotik Labu Kuning
Waktu Fermentasi Total Fenol
 12

A (12 jam) 21,61a

B (24 jam) 24,92 a
C (48 jam) 18,53 a
Keterangan : Angka yang diikuti huruf yang sama pada kolom yang sama menunjukkan hasil
yang tidak berbeda nyata pada uji DMRT, dengan tingkat kepercayaan 95%

Minuman sinbiotik ini mengandung senyawa fenolik yaitu flavonoid yang juga dapat

berperan sebagai antioksidan. Menurut Hamid dkk. (2010), senyawa flavonoid memiliki potensi

sebagai antioksidan karena memiliki gugus hidroksil yang terikat pada karbon cincin aromatik

sehigga dapat menangkap radikal bebas yang dihasilkan dari reaksi peroksidasi lemak. Cuppett dkk.

(1954) menambahkan bahwa flavonoid berperan sebagai antioksidan dengan cara mendonasikan

atom hidrogennya atau melalui kemampuannya mengkelat logam, berada dalam bentuk glukosida

(mengandung rantai samping glukosa) atau dalam bentuk bebas yang disebut aglikon.

4. Analisis Fisik Minuman Sinbiotik Labu Kuning

a. Analisis Warna

Hasil analisis warna pada minuman sinbiotik labu kuning dapat dilihat pada Tabel 11.

Tabel 11. Hasil Analisis Warna pada Minuman Sinbiotik Labu Kuning
Waktu Fermentasi Warna
A (12 jam) Jingga kekuningan
B (24 jam) Jingga kekuningan
C (48 jam) Jingga kekuningan

Berdasarkan Tabel 11, dapat diketahui bahwa seluruh perlakuakan pada minuman sinbiotik

labu kuning menunjukkan warna jingga kekuningan. Kesamaan warna pada seluruh perlakuan karena

minuman sinbiotik ini menggunakan 100% sari labu kuning tanpa kombinasi dengan air. Warna

jingga kekuningan ini diperoleh dari β-karoten yang memberikan warna oranye-kuning pada labu

kuning.

5. Analisis Mikrobiologi Minuman Sinbiotik Labu Kuning

a. Viabilitas Bakteri Asam Laktat

Lactobacillus casei memiliki peran penting dalam minuman sinbiotik labu kuning yaitu

menghasilkan asam laktat yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri patogen dan bakteri

pembusuk makanan.Berdasarkan Tabel 12, dapat diketahui bahwa total bakteri asam laktat semakin

meningkat seiring dengan waktu fermentasi yang semakin lama.Jumlah total BAL semula 7,93 x 108
 13

CFU/ml pada fermentasi selama 12 jam, lalu meningkat menjadi 1,17 x 109 CFU/ml pada fermentasi

selama 24 jam dan jumlah paling besar ada pada waktu fermentasi selama 48 jam yaitu 1,67 x 109

CFU/ml. Hal ini menunjukkan bahwa semakin lama waktu fermentasi maka jumlah Lactobacillus

casei akan semakin tinggi pula. Menurut Magala dkk. (2013), semakin lama waktu fermentasi maka

asam piruvat, asam asetat dan asam laktat yang dihasilkan akan semakin banyak oleh bakteri asam

laktat. Kimoto dkk. (1999) menambahkan bahwa bakteri probiotik akan mempunyai efek pada

lingkungan usus apabila jumlah populasi bakteri tersebut mencapai minimal 106-108 CFU/ml, hal ini

menunjukkan bahwa minuman sinbiotik labu kuning telah memenuhi syarat yang ada.

Tabel 12. Total BAL (CFU/ml) pada Minuman Sinbiotik Labu Kuning
Waktu Fermentasi Total BAL
A (12 jam) 7,93 x 108a
B (24 jam) 1,17 x 109b
C (48 jam) 1,67 x 109c
Keterangan : Angka yang diikuti huruf yang sama pada kolom yang sama menunjukkan hasil
yang tidak berbeda nyata pada uji DMRT, dengan tingkat kepercayaan 95%

b. Salmonella

Pengujian Salmonellapada Tabel 13menunjukkan hasil negatif pada seluruh minuman

sinbiotik labu kuning, hal ini berarti pada perlakuan fermentasi selama 12 jam, 24 jam dan 48 jam

tidak terdapat bakteri Salmonella yang dapat mengkontaminasi produk.Hasil ini sesuai dengan syarat

yang ditentukan oleh SNI Minuman Susu Fermentasi Berperisa (SNI 7552 : 2009) yang menyatakan

bahwa pertumbuhan patogen Salmonella harus negatif. Menurut Jay dkk. (2005), kondisi asam yang

dihasilkan oleh asam laktat dapat menghambat pertumbuhan Salmonella, dimana patogen tersebut

tumbuh baik pada pH 6,6 – 8,2.

Tabel 13. Hasil Pengujian Salmonella pada Minuman Sinbiotik Labu Kuning
Waktu Fermentasi Hasil
A (12 jam) Negatif
B (24 jam) Negatif
C (48 jam) Negatif

6. Analisis Uji Organoleptik Minuman Sinbiotik Labu Kuning

Menurut Susiwi (2009), penerimaan konsumen terhadap suatu produk diawali dengan

penilaiannya terhadap penampakan, flavor dan tekstur. Berdasarkan data pada Tabel 14 dapat
 14

diketahui bahwa dari parameter warna, aroma, rasa dan homogenitas, panelis lebih menyukai produk B

yaitu minuman sinbiotik labu kuning dengan perlakuan fermentasi 24 jam. Selain itu apabila diurutkan

berdasarkan peringkat, minuman sinbiotik A (fermentasi 12 jam) berada pada peringkat kedua,

kemudian minuman sinbiotik B (fermentasi 24 jam) berada pada peringkat pertama dan minuman

sinbiotik C (fermentasi 48 jam) berada pada peringkat ketiga. Hal ini menunjukkan bahwa pada uji

organoleptik, perlakuan terbaik ada pada minuman sinbiotik B dengan waktu fermentasi 24 jam.

Tabel 14. Hasil Uji Organoleptik Minuman Sinbiotik Labu Kuning

Waktu Parameter Peringkat
Fermentasi Warna Aroma Rasa Homogenitas
A (12 jam) 3,3 2,8 2,8 2,8 2
B (24 jam) 3,4 3 3,3 3,1 1
C (48 jam) 2,2 2,7 2,3 1,8 3

SIMPULAN

Waktu fermentasi pada minuman sinbiotik labu kuning dengan kualitas terbaik dari segi aktivitas

antioksidan, analisis kimia, fisik dan mikrobiologis serta nilai evaluasi sensori dengan parameter warna,

aroma, rasa dan homogenitas yang paling disukai panelis adalah 24 jam.

DAFTAR PUSTAKA

AOAC. 1995. Official Methods of Analysis. Association of Official Analytical Chemist Inc., Virginia.
Argarini, T. 1997. Stabilitas Vitamin A Sari Buah Wortel Selama Penyimpanan. Skripsi. Fakultas Teknologi
Pertanian Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
Ayu, S., Yan, R. dan Eka, L. 2013. Penetapan Antioksidan pada Teh Hitam Kombucha Lokal di Bali dengan
Waktu Fermentasi. Skripsi. Universitas Udayana, Bali.
Azizah, A. H., Wee, K. C., Azizah, O. dan Azizah, M. 2009. Efect of Boiling and Stir Frying on Total
Phenolics, Carotenoids and Radical Scavenging Activity on Pumpkin (Cucurbita moschato).
International Food Research Journal. 16:45-51.
Badan Standardisasi Nasional. 2009. SNI 7552:2009 (SNI minuman susu fermentasi berperisa).
http://sisni.bsn.go.id. 30 Agustus 2015.
 15

Bath, M. A. dan Bhat, A. 2013. Study on Physico-Chemical Characteristics of Pumpkin Blended Cake.
Journal Food Processing and Technology. 4(9):1-4.
Cuppett, S., Schrepf, M. dan Hall, C. 1954. Natural Antioxidant – Are They Reality. Dalam Foreidoon
Shahidi: Natural Antioxidants, Chemistry, Health Effect and Applications. AOCS Press, Champaign,
Illinois.
deMan, J. M. 1997. Kimia Makanan. ITB, Bandung.
Dima, F., Istrati, D., Garnai, M., Serea, V dan Vizireau, C. 2015. Study on Obtaining Vegetables Juices with
High Antioxidant Potential, Preserved by Ohmic Pasteurization. Journal of Agroalimentary Processes
and Technologies. 21(1):67-74.
Ellong, E. N., Billard, C., Adenet, S. dan Rochefort, K. 2015. Polyphenols, Carotenoids, Vitamin C Content
in Tropical Fruits and Vegetables and Impact of Processing Methods. Food and Nutrition Sciences.
6:299-313.
Fardiaz, S. 1987. Penuntun Praktek Mikrobiologi Pangan. Lembaga Sumberdaya Informasi. Institut
Pertanian Bogor, Bogor.
Gaspersz, V. 1991. Metode Perancangan Percobaan. Armico, Bandung.
Hamid, A. A., Aiyelaagbe, O. O., Usman, L. A, Ameen, O. M. dan Lawal, A. 2010. Antioxidant : Its
Medidal and Pharmacological Applications. African Journal Of Pure and Applied Chemistry.
4(8):142-151.
Herawati, D. A. dan Wibawa, D. A. A. 2009. Pengaruh Konsentrasi Susu Skim Dan Waktu Fermentasi
Terhadap Hasil Pembuatan Soyghurt. Jurnal Ilmiah Teknik Lingkungan. 1(2):48-58.
Hocking, A. D., Arnold, G., Jenson, I., Newton, K. I. dan Sutherland, P. 1997. Foodborne Microorganisms
of Public Health Significance 5th Edition. Australian Instittute of Food Science and Technology Inc,
NSW Branch, Food Microbiology Group, North Sidney. Australia.
Hounhouigan, M. H., Linnemann, A. R., Soumanou, M. M. dan Van Boekel, M. A. J. S. 2014. Effect of
Processing on The Quality of Pineapple Juice. Food Reviews International. 30(2):112–133.
Khusnul, K. dan Kusnaidi, J. 2014. Aktifitas Antibakteri Minuman Probiotik Sari Kurma (Phoenix
dactilyfera L.) Menggunakan Lactobacillus plantarum dan Lactobacillus casei. Jurnal Pangan dan
Agroindustri. 2(3):110-120.
Kimoto, H., Kurisaki, J.,Tsuji, Mn, Ohmomo, S. dan Okatomo, T. 1999. Lactococci as Probiotic Strain:
Adhesion to Human Enterocytelike caco-2 Cells and Tolerans to Low pH and Bile. Lett in Appl
Microbiol. 29:313-316.
Lee, K.W. Kim, Y. J. Lee, H.J. and Lee, C.Y. 2003. Cocoa Has More Phenolic Phytochemical and a Higher
Antioxidant Capacity than Teas and Redwine. J. Agric. Food Chem. 51(25):7292-7295.
Magala, M., Kohajdová, Z. dan Karovicová, J. 2013. Preparation of Lactic Acid Bacteria Fermented Wheat-
Yoghurt Mixtures. Acta. Sci. Pol., Technol. Aliment. 12(3):295-302.
Morris, A., Barnett, A. dan Jean-Burrows, O. 2004. Effect of Processing on Nutrient Content of Food.
Research Council. 37(3):160-164.
Mulyani, T., Sudaryati dan Susanto. 2013. Kajian Peran Susu Skim dan Bakteri Asam Laktat pada Minuman
Sinbiotik Umbi Bengkuang (Pachyrhizus erosus). Jurnal Penelitian IFT. UPN Veteran, Surabaya.
 16

Pratt, D.E. 1992. Natural Antioxidant from Plant Material. Am. Chem. Society, Washinton DC.
Rodriguez-Amaya, D. B., Kimura, M., Godoy, H. T. dan Amaya-farfar, J. 2008. Updated Brazilian Database
on Food Carotenoids: Factors Affecting Carotenoids Composition. Journal of Food Composition and
Analysis. 21:445-463.
Rosa, N. 2010. Pengaruh Penambahan Umbi Garut (Maranta arundinaceae L) dalam Bentuk Tepung dan
Pati sebagai Prebiotik pada Yoghurt sebagai Produk Sinbiotik terhadap Daya Hambat Bakteri
Escherichia coli.Skripsi. Program Studi Ilmu Gizi Fakultas Kedokteran. Universitas Diponegoro,
Semarang.
Sasaki , Y., Ito, L.A.,Canteli, V, C., Ushirobira, T.M., Ueda,M, T., Dias, F.B.P., Nakamura, C.V., dan
Mello, J.C. 2007. Antioxidant Capacity and In Vitro Prevetion of Dental Plaque Formation by Extract
and Condensed Tannins of Paullinia cupana. Molecules. 12:1950-63
Saxelin M., Elo, S., Salminen, S. dan Vapaatalo, H. 1991. Dose Response Colonization of Feces after Oral
Administration of Lactobacillus casei Strain GS. Microbiol Ecol Health Dis. 4:14-209.
Soekarto, S. T. 1985. Penilaian Organoleptik. Pusat Pengembangan Teknologi Pangan IPB, Bogor.
Sreeramulu, G., Zhu, Y. dan Knol, W. 2000. Kombucha Fermentaion and It’s Antimicrobial Activity.
Journal of Agricultural Food Chemistry. 48(6):2589-2594.
Sudarmadji, S., Haryono, B. dan Suhandi. 1984. Analisis untuk Bahan Makanan dan Pertanian. Edisi II.
Penerbit Alumni, Bandung.
Sudarmadji. 2003. Analisis Bahan Makanan dan Pertanian. Penerbit Liberti, Yogyakarta.
Susiwi, S. 2009. Penilaian Organoleptik. Universitas Pendidikan Indonesia, Bandung.
Usmiati, S., Setyaningih, D., Purwani E.Y., Yuliani S. dan Maria, O.G. 2005. Karakteristik Serbuk Labu
Kuning (Cucurbita moschata). Jurnal Tekonologi dan Hasil Pangan. 16(2):157-167.
Valenzuela, G. M., Soro, A. S., Tauguinas, A. L., Gruszycki, M. R., Cravzov, A. L., Gimenez, M. C. dan
Wirth, A. 2014. Evaluation Polyphenol Content and Antioxidant Activity of Cucurbita spp. Open
Access Library Journal. 1:1-6.
Winarno, F.G. dan Fernandez, I. E. 2007. Susu dan Produk Fermentasinya. M-Brio Press, Bogor.
Yu, R.J. and Van-Scott, E.J. 2005. α-hydoxyacids, Polyhydroxy Acids, Aldobionic Acids and Their Topical
Actions.In : Baran, R., Maibach, H.I., Taylor and Francis, editors. Textbook of Cosmetic Dermatology.
Third Ed. Boca Raton Taylor and Francis, USA.