Assassin's Creed: Bloodlines se déroule un mois après la fin des événements du premier Assassin's Creed, en automne 1191. Le jeu prend principalement place sur l'île de Chypre, dans deux de ses villes, Limassol et Kyrenia, où le joueur devient Altaïr, le personnage de Assassin's Creed . Altaïr est parti pour Chypre depuis la Terre sainte (lieu de la première partie) afin de savoir pourquoi les Templiers y sont réunis, et d'assassiner les derniers d'entre eux. Bloodlines comprend plus de temps face à Maria, la femme membre des Templiers qui a été épargnée par Altaïr dans Assassin's Creed. L'antagoniste est Armand Bouchart, qui est devenu le Grand Maître de l'Ordre du Temple. Il cherche la « Pomme d'Éden », qui permet à l'utilisateur de contrôler l'esprit des gens et les plier à la volonté de quiconque utilise la Pomme. Altaïr doit l'arrêter, et empêcher d'autres dirigeants des Templiers notables comme Moloch « Le Taureau », Shalim et Shahar (fils de Moloch), Frederic « Le Rouge », et l'Oracle noir, d'utiliser l'autre Relique présente sur l'île pour atteindre leurs objectifs.
Assassin's Creed: Bloodlines est un jeu d'action-aventure en vue à la troisième personne avec des éléments de jeu d'infiltration dans lequel le joueur reprend le contrôle d'Altaïr Ibn La-Ahad. Contrairement au précédent spin-off de la série, Assassin's Creed: Altaïr's Chronicles, sorti sur Nintendo DS, le jeu propose un gameplay similaire au premier opus dans lequel le joueur progresse dans un monde ouvert avec un gameplay non linéaire, permettant au joueur d'accomplir certaines quêtes dans un autre ordre. Ces dernières consistent généralement à atteindre furtivement et interroger un personnage, protéger une zone ou encore à assassiner un personnage clé de l'histoire. Altaïr peut, à la manière du personnage principal du premier jeu, escalader divers bâtiments, se battre contre des ennemis ou encore rester hors de leur champ de vision en se fondant dans l'environnement ou en se cachant dans des endroits tels que des meules de foin[1].
