Preparacion Medios de Cultivo

PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO
OBJETIVOS
Preparar algunos medios de cultivo utilizados en el laboratorio de

microbiologa
Evaluar la calidad del proceso de esterilizacin de medios de cultivo
mediante indicadores fsicos y por control por lote
Valorar la calidad de los medios de cultivo a travs de evaluaciones
semicuantitativas de productividad y selectividad
Aplicar mtodos de asepsia bsicos para la realizacin del trabajo en el
laboratorio de microbiologa
MATERIALES Y REACTIVOS
Cajas de Petri
Balanza
Papel kraft
Frasco tapa rosca por 250 ml
Probeta
Esptula
Asa bacteriolgica
Cinta termoestable
Agua destilada
Gradilla
Mechero
Jabn liquido
Escobillones
Medio de cultivo deshidratado de salado manitol
Caldo Tetrationato
Agar EMB
Agar salado manitol
Agar nutritivo
Agar SS
Cepas en fase estacionaria de E. coli, S. aureus, Salmonella sp (en tubo de
caldo BHI y en cajas de agar selectivo)
PROCEDIMIENTO
Materiales de trabajo
Evaluacin del procedimiento de desinfeccin de manos (medida asptica bsica)
Manos sucias
Toma de muestra de
las manos estando
sucias
Manos limpias, toma

de muestras con
manos limpias
Manos sucias
Jabn (Intigym
Toma de muestra de
Manos limpias, toma
syndet) utilizado
las manos estando
de muestras con
para el lavado de
sucias
manos limpias
las manos
Evaluacin del proceso de esterilizacin

Procedimiento realizado por los compaeros del otro grupo, pero de igual manera
se evaluaron los criterios de control de calidad de la esterilizacin de los medios
de cultivo
Evaluacin de medio de cultivo liquido
Selectividad
Aprox.10 U.F.C.
microorganismo
deseado (Salmonella
sp)
+/- 100 U.F.C.

microorganismo no
deseado (E. coli)
Luego de las 24 horas

se debe revisar el
crecimiento
Se inoculo en caldo
Tetrationato
Productividad
Luego de las 24 horas

se debe revisar el
crecimiento
+/- 100 U.F.C.
microorganismo no
deseado (E. coli)
Se inoculo en caldo
Tetrationato
Evaluacin de medio de cultivo solido

Productividad y selectividad medio EMB
Microorganismo deseaso
(E.coli)
Inoculacion en el medio
Microorganismo no
deseado (S. aureus)
Luego de las 24 horas se

debe revisar el
crecimiento
Productividad y selectividad de medio salado manitol
Microorganismo deseaso
(S. aureus)
Microorganismo no
deseado (E. coli)
Luego de las 24 horas se

debe revisar el crecimiento
PRE-LABORATORIO
1. Establezca diferencias entre medios de cultivo selectivos y medios no
selectivos
El medio de cultivo selectivo favorece el crecimiento de ciertas bacterias
contenidas en una poblacin polimicrobiana, facilitndoles nutrientes
necesarios para su crecimiento y conteniendo sustancias inhibidoras para
otros microorganismos.
El medio de cultivo no selectivo no contiene sustancias que inhiban el
crecimiento de ningn microorganismo.
2. Mencione 3 medios de cultivo selectivos
Agar salado manitol
Agar SS
Agar McConkey
3. Explique brevemente el mecanismo de accin sobre los microorganismos
del calor hmedo y calor seco
Calor hmedo; se fundamenta en la accin del calor transmitido por el
vapor saturado a presin superior a lo normal sobre los componentes
celulares, produciendo coagulacin proteica, ruptura de ADN y ARN,
perdida del material de bajo peso molecular, logrando as inactivacin del
microorganismo.
Calor seco; el mecanismo se basa en la oxidacin del aire seco caliente
que circula por convencin forzada a travs de los productos.
4. Defina cepa o clon y de ejemplos de la codificacin internacional para
algunas bacterias de acuerdo al tipo de coleccin
Conjunto de clulas homogneas que derivan de la reproduccin de una
clula inicial nica, seleccionada y aislada. Colonia pura de una bacteria.
CECT 516 (ATCC 8739) E.coli
CECT 4594 (ATCC 14028) Salmonella typhimurium
CECT 239 (ATCC 6538) S. aureus
CECT 231 (ATCC 12228) S epidermidis
CECT 111 (ATCC 9027) P. aeruginosa
5. Mencione al menos tres desinfectantes utilizados en el laboratorio de
microbiologa
Hipoclorito de sodio
Yodo
Perxido de hidrogeno
Permanganato de potasio
POST-LABORATORIO
FORMATO DE EVALUACIN DE MEDIO DE CULTIVO SOLIDO

Medio
de
cultivo
evaluad
o
Lote
Salado
manitol
VM574704
340
29/09/2014
EMB
VM982647
820
29/09/2014
Identificacin de cepa
(microorganismo deseado)
Fecha de
realizacin
de anlisis
Tipo
(microorganismo interferente)
Resultado (unidades)
(microorganismo
deseado)
Resultado (unidades)
(microorganismo
interferente)
Medio de
cultivo
conforme
Resp.
Cdigo
Genero/especie
Tipo
Cdigo
Genero/especie
Produc.
Selec.
Produc.
Selec.
Si
ATCC
6538
Staphylococcus
aureus
No
ATCC
8739
Escherichia coli
Saray Ortiz
ATCC
8739
Escherichia coli
ATCC
6538
Staphylococcus aureus
0,2
0,2
Saray Ortiz
FORMATO DE EVALUACIN DE MEDIO DE CULTIVO LQUIDO

Medio de
cultivo
evaluado
Lote
Fecha de
realizacin
de anlisis
Caldo
Tetrationato
VK620385
049
29/09/2014
(microorganismo deseado)
(microorganismo no deseado)
Medio de cultivo
selectivo (agar)
Tipo
Cdigo
Genero/especie
Tipo
Cdigo
Genero/especie
ATCC
14028
Salmonella
typhimurium
ATCC
6538
Escherichia coli
Produc.
U.F.C
Medio de
cultivo no
selectivo
(agar)
Selec. (cto
de m.o no
deseado)
Si
Agar SS
> 10 U.F.C Agar Nutritivo
Medio de
cultivo
conforme
No
Si
Resp.
No
Saray Ortiz
FORMATO DE EVALUCACION D EPROCESO DE ESTERILIZACION

Fecha de
vencimiento
Lote
Fecha de
preparacin
en el
laboratorio
Gramos
Fecha de
vencimiento
del medio de
Tipo
cultivo
preparado
Control de esterilizacin
Medio de
cultivo
Tiempo
Cinta
Biolgico
Incubacin
Salado
manitol
12/09/18
VM574704
340
29/08/14
21,6 gr
29/09/14
15 Lp
15 min.
121 C
Cambio
No
No
crecimiento
autoclave
Verificacin de esterilizacin
Responsable
Saray Ortiz
NOTA:
Cinta
Incubacin
Cinta inicialmente con lneas blancas,

luego del proceso de esterilizacin
cambiaron la tonalidad a negro.
Luego de someter a incubacin no

se evidencio crecimiento luego de
transcurridas 24 horas
ANLISIS DE RESULTADOS
Evaluacin del procedimiento de desinfeccin de manos (medida asptica
bsica)
En los resultados se evidenciaron diferencias en los tubos, los que
contenan las muestras de manos sucias, se presentaban aspecto turbio,
estaban opalescentes y se notaba una nata en su superficie y en los tubos
de las muestras de manos limpias si haba un aspecto turbio pero en una
escala muy inferior al que presentaba cuando las manos se hallaban
sucias, pero no se presentaba nata y era mucho mas transparente.
Evaluacin del proceso de esterilizacin
La cinta presento el cambio esperado que se sospechaba iba a realizar, en
cuanto a la incubacin el medio no presento crecimiento de ninguna clase
de patgenos
Evaluacin de medio de cultivo liquido
En cuanto a la productividad del caldo de Tetrationato, esta se realizo en un

agar SS en donde se evidencio la presencia de ms de 10 U.F.C. del
microorganismo deseado (Salmonella sp) y a la selectividad, en esta no se
presento crecimiento en el medio nutritivo de ningn microorganismo.
Evaluacin de medio de cultivo solido
Para el EMB el medio es productivo porque el ICA del microorganismo
deseado (E. coli) fue de 5 y es selectivo porque el microorganismo no
deseado (S. aureus) presento un ICA de 0,2 (este resultado se lo agrego al
tiempo excesivo de incubacin).
Para el Salado Manitol es productivo porque el ICA del microorganismo
deseado (S. aureus) fue de 5 y es selectivo porque el microorganismo no
deseado (E. coli) presento un ICA de 0.
BIBLIOGRAFA
Coleccin internacional bacteriana. 2014. En internet: www.sanilabo.com /
http://www.sanilabo.com/pdf/pdf_industria/02.Cepas.pdf
Medios selectivos. 2014. En internet:
http://perso.wanadoo.es/sergioram1/medios_de_cultivo.htm
Mecanismo de accin calor hmedo y seco. 2014. En internet:
http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/tecnofarma/wp-content/uploads/2013/08/Esterilizaci
%C3%B3n-por-calor.pdf

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Preparar algunos medios de cultivo utilizados en el laboratorio de

Evaluacin del procedimiento de desinfeccin de manos (medida asptica bsica)

Manos limpias, toma

Evaluacin del proceso de esterilizacin

Evaluacin de medio de cultivo liquido

+/- 100 U.F.C.

Luego de las 24 horas

Luego de las 24 horas

Evaluacin de medio de cultivo solido

Luego de las 24 horas se

Productividad y selectividad de medio salado manitol

Luego de las 24 horas se

FORMATO DE EVALUACIN DE MEDIO DE CULTIVO SOLIDO

FORMATO DE EVALUACIN DE MEDIO DE CULTIVO LQUIDO

> 10 U.F.C Agar Nutritivo

FORMATO DE EVALUCACION D EPROCESO DE ESTERILIZACION

Cinta inicialmente con lneas blancas,

Luego de someter a incubacin no

En cuanto a la productividad del caldo de Tetrationato, esta se realizo en un

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