Práctica de Laboratorio de Cromatografía

PRCTICA DE LABORATORIO N 07
TITULO: Separacin de pigmentos fotosintticos mediante cromatografa.

OBJETIVO
Conocer la tcnica de cromatografa.

Identificar que pigmentos hay en mayor y menor proporcin.
I.-INTRODUCCIN:
En las clulas vegetales, hay unos orgnulos llamados cloroplastos que poseen
distintos pigmentos fotosintticos con colores diferentes: clorofila-a (verde
intenso), clorofila-b (verde), carotenos (amarillo claro) y xantofilas (amarillo
anaranjado) en diferentes proporciones. En ocasiones uno de estos pigmentos
es tan abundante que enmascara a los dems y estos no se pueden observar.
Para separar y obtener estos pigmentos se puede utilizar la cromatografa que
es una tcnica que permite la separacin de las sustancias de una mezcla. De
tal manera que al introducir una tira de papel poroso en esa mezcla el
disolvente arrastra con distinta velocidad a los pigmentos segn la solubilidad
que tengan, permitiendo identificarlos perfectamente segn su color.
Aparecern, por tanto, varias bandas de diferentes colores, que poseern
diferente grosor, dependiendo de la abundancia del pigmento en la disolucin.
PREGUNTA DE LA INVESTIGACIN:
Cmo influye la tcnica de cromatografa en la proporcin
fotosintticos de la Bougainvillea?
de pigmentos
II.- DISEO
2.1. HIPTESIS
La tcnica de cromatografa influir en la separacin de los pigmentos
del Papelillo puesto que al insertar la hoja de filtro en forma vertical la
mezcla ascender y se distinguir el pigmento por las bandas o marcas
de colores.
La dimetilcetona contiene propanoma que permitir la separacin de
pigmentos de la planta de papelillo y actuar como solvente del acetato
de celulosa en la industria de las fibras sintticas.
La dimetilcetona disminuye las posibilidades de separacin de los
pigmentos de la planta papelillo porque esta no posee el grupo funcional
adecuada para esta separacin.
2.2 VARIABLES:
V.I: La tcnica de la cromatografa
V.D: Proporcin de pigmentos fotosintticos
V.C: -Cantidad de acetona (18 ml) 0.25
-Tiempo
-Tipo de planta
-Ambiente (cerrado)
III.- METODOLOGA
3.1. MATERIALES
Mortero,
Papel de filtro
Material biolgico: hojas de espinacas,
acetona
Placa de Petri
vaso de precipitado
3.2. PROCEDIMIENTOS:
1. Colocar en un mortero trozos de hojas de un vegetal quitando las
terminaciones nerviosas.
2. Aadir etanol al mortero hasta cubrir las hojas.
3. Triturar sin golpear hasta que el lquido adquiera una coloracin verde
intensa con un poco de arena lavada para mejorar la extraccin de
pigmentos.
4. Filtrar en un embudo con papel de filtro y recoger el filtrado en un vaso de
precipitado
5. Colocar el filtrado en una placa Petri, y sobre ella pon un rectngulo de
unos 15 centmetros de ancho por 10 centmetros de alto doblado en V para
que se mantenga en pie sobre la placa de Petri.
6. Dejar 30 minutos reposando
.
3.3. NORMAS DE SEGURIDAD
Utilice su mandil de seguridad.

Colocar sobre la mesa nicamente los materiales que se van a utilizar
durante la prctica.
Manipular con mucho cuidado la vidriara utilizada.
Tener cuidado al utilizar el cuchillo para realizar los cortes de la papa.
No manipular la balanza hasta despus que sea calibrada por la persona
encargada del laboratorio
IV.- ANLISIS Y DISCUSIN

Para obtener estos datos, hemos hecho uso de las operaciones bsicas de la
matemtica puesto que hemos tenido que medir el pigmento absorbido en el
papel filtro y hemos calculado un promedio de las 5 mediciones realizadas para
poder obtener un solo resultado. (Tabla1).
Nmero
mediciones
1
2
3
4
5
Papelillo 0.5 mm
de Amarillo
Amarrillo azulado
3 cm
3,1 cm
3,1 cm
3,1 cm
3.1 cm
3 cm
3.2 cm
2.9 cm
3.0 cm
3.0 cm
Verde amarillento
2 cm
2.1 cm
2.3 cm
2.2 cm
2.2 cm
(Tabla 1)
Algunos de ellos nos salan con 2 cifras decimales por lo que hemos optado por
redondear a centsimas para que sean ms fiables y exactos los datos para
nuestras posteriores conclusiones. (Tabla 2)
Medidas centrales de los datos de las 5 mediciones 0.5 mm
TIPOS
PIGMENTO
AMARILLO
AMARILLO
AZULADO
VERDE
AMARILLENTO
DE PROMEDIO
MODA
MEDIANA
3.08 3.1 cm
3.02 3 cm
3.1 cm
3.1 cm
3.0 cm
3.0 cm
2.16 2.2
2.2 cm
2.2 cm
cm
(Tabla 2)
Esta tabla nos muestra que la tcnica de la cromatografa permite la separacin
de los pigmentos del Papelillo. Asimismo, nosotros hemos podido descubrir
que los tipos de pigmentos que ha logrado separar y proporcionar la tcnica
son: la clorofila A (verde azulado), clorofila B (verde amarillento) y Xantofilas
(amarillo). Sin embargo, al introducir la tira de papel en forma vertical en la
mezcla el disolvente arrastra con distinta velocidad a los pigmentos segn su
solubilidad, lo que posteriormente nos permite distinguirlos e identificarlos por
su color. Esta idea queda respaldada porque el promedio de las 5 medidas de
los 3 diferentes pigmentos son totalmente distintas y esto se debe a su
solubilidad. En el caso de la Xantofilas obtuvo 3.1 cm, mientras que, el amarillo
azulado tuvo 3 cm y el verde amarillento tan solo 2.2 cm.
Cul es la variable independiente en este experimento?
La variable independiente es la tcnica de la cromatografa, la cual se define
como el mtodo usado para la separacin de pigmentos. Cabe agregar tambin
que segn la bromatloga de Argentina Lidia, la tcnica de la cromatografa en
la muestra o mezcla es distribuida en dos fases: estacionaria y mvil. La fase
estacionaria est constituida por el papel filtro, el cual en el experimento fue
colocado en el embudo depositndose la muestra para que el papel pueda
filtrar y coloque pequeas gotas en el vaso de precipitacin para
posteriormente evaporar el disolvente (dimetilcetona
CH 3 ( CO ) CH 3 ) o
conocido como acetona. La fase mvil fue la tira de papel colocada

verticalmente en el vaso de precipitacin cuyo objetivo principal es separar los
pigmentos de la Bougainvillea.
Qu significan los resultados con respecto a la proporcin de pigmentos?
La proporcin de pigmentos va a depender de la tcnica de cromatografa. La
tcnica nos ayuda a comprobar que la solubilidad de cada pigmento es distinta.
Es por eso que el pigmento ms soluble ser el que forme una banda
coloreada en la parte superior del papel filtro y en este caso es el Xantofila
(amarillo) con 3.1 cm de recorrido. Por el contrario, el pigmento menos soluble
ser el que ascienda ltimo a travs del filtro. En este caso es el verde
amarillento (Clorofila B) con 2.2 cm de recorrido. Cabe sealar que un dato
muy importante para darnos cuenta de la proporcin de pigmentos y poder
hacer las respectivas mediciones es que aparecern bandas coloreadas en la
disolucin extrada del vegetal, en este caso del papelillo.
Representar grficamente la proporcin de pigmentos en funcin de la tcnica
de la cromatografa. (Grfico n1)
Tcnica de la cromatografa en la proporcin de pigmentos del papelillo 0.5

VERDE AMARILLENTO
Pigmentos
2.2
AMARILLO AZULADO
AMARILLO
0
3.1
0.5
1.5
2.5
3.5
tcnica cromatogrfica
(Grfico n1)
A travs de este grfico queda respaldada nuestra hiptesis porque la tcnica
de cromatografa si influy en la proporcin de pigmentos. La tabla dinmica
nos muestra diversos recorridos de los distintos tipos de pigmentos (Clorofila A,
Clorofila B y Xantofilas) de los cules la Xantofila tuvo un mayor recorrido lo
que quiere decir que es ms soluble respecto a los dems pigmentos, mientras
que la clorofila B tiene la menor proporcin y por tanto es menos soluble.
V.- CONCLUSIONES
Despus de haber realizado la experimentacin podemos afirmar que la tcnica

de cromatografa influye en la separacin de los pigmentos del Papelillo puesto
que al insertar la hoja de filtro en forma vertical la mezcla ascendi y se
distingui el pigmento por las bandas o marcas de colores. La clave de la
separacin en cromatografa es que la velocidad con la que se mueve cada
sustancia que conforma la mezcla (papelillo-acetona) depende de las dos
fases: estacionaria y mvil, adems del equilibrio de distribucin de ambas.
Esto quiere decir que segn los datos arrojados por el Grfico n1 el verde
amarillento se encuentra en una fase estacionaria debido a que avanza
lentamente como si algo lo retuviera, en cambio el verde azulado est ms
ligado a la fase mvil y de manera anloga a este se va a desplazar con mucha
ms rapidez. Se debe agregar que para poder cuantificar los datos no lo
hicimos mediante un detector, por el contrario, utilizamos el instrumento de la
regla (0.5) para poder calcular su recorrido en un determinado tiempo (20min).
Acorde con lo mencionado anteriormente, la tcnica de cromatografa ha
separado, identificado y cuantificado cada uno de los tipos de pigmentos,
concibindose como un controlador de la velocidad de cada sustancia que
constituye la muestra, tal y como tambin lo demostr el botnico Tswett (1906)
en su experimento de la cromatografa en pigmentos vegetales.
En consecuencia, segn la experimentacin se puede afirmar que la hiptesis
que se cumple es la primera La tcnica de cromatografa influir en la
separacin de los pigmentos del Papelillo puesto que al insertar la hoja
de filtro en forma vertical la mezcla ascender y se distinguir el pigmento
por las bandas o marcas de colores. De esta manera puedo concluir que la
tcnica de cromatografa influyo en la proporcin de pigmentos de la hoja de
papelillo.
VI.- EVALUACIN (JUSTIFICACIN)
Fortalezas:
Contamos con el personal adecuado para la realizacin del experimento.

Contamos con un ambiente adecuado para la realizacin del
experimento.
Todos tenamos conocimiento de cmo usar y que pasos seguir para la
obtencin de datos exactos con insercin de la tecnologa que se
encuentra insertada en un laboratorio de biologa.
Contbamos con el material adecuado (bata) para evitar cualquier uso
inadecuado de los materiales.
En laboratorio todos participamos en las previas intervenciones para la
posterior experimentacin. La docente sigui todo el proceso de
experimentacin y nos aclaraba algunas dudas.
Dificultades:
La curiosidad de algunos compaeros de los dems grupos condujo a la

prdida de tiempo y desorganizacin del grupo.
Sugerencias:
Deberian otorgarnos el tiempo necesario para poder procesar y analizar

datos puesto que muchas veces no solo tenemos un curso en el cual
realizar tareas y solamente por las noches nos dan dos horas las cuales
nos quedan sumamente cortas.
VII.- REFERENCIAS:
Allott, A. (2015). Biologa PROGRAMA DEL DIPLOMA. Oxford.

Online Cosmos. (2016). Informacin Tcnica y Comercial de la Dimetil
cetona
(acetona,
2-propanona).
Recuperado
de:
http://www.cosmos.com.mx/wiki/dllc/dimetil-cetona-acetona-2-propanona
Chiapas, U. a. (12 de julio de 2005). Documents. Obtenido de
http://documents.mx/documents/practica-10-osmolaridad.html

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posteriormente evaporar el disolvente (dimetilcetona

conocido como acetona. La fase mvil fue la tira de papel colocada

Tcnica de la cromatografa en la proporcin de pigmentos del papelillo 0.5

Despus de haber realizado la experimentacin podemos afirmar que la tcnica

Contamos con el personal adecuado para la realizacin del experimento.

La curiosidad de algunos compaeros de los dems grupos condujo a la

Deberian otorgarnos el tiempo necesario para poder procesar y analizar

Allott, A. (2015). Biologa PROGRAMA DEL DIPLOMA. Oxford.

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