D E PA RTA M E N T O L A B O R AT O R I O B I O M É D I C O N A C I O N A L Y D E R E F E R E N C I A

Instituto de
Salud Pública
Ministerio de Salud

DOCUMENTOS TÉCNICOS PARA EL LABORATORIO CLÍNICO

RECOMENDACIONES PARA LA DETECCIÓN

E IDENTIFICACIÓN DE ANTICUERPOS
IRREGULARES ERITROCITARIOS
DICIEMBRE, 2014
RECOMENDACIONES PARA LA DETECCIÓN E IDENTIFICACIÓN
DE ANTICUERPOS IRREGULARES ERITROCITARIOS

AUTOR:
TM. Mg. Cs. Andrés Aburto Almonacid.
Encargado Área de Inmunohematología. Sección de Hematología e
Inmunohematología. Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y
de Referencia. Instituto de Salud Pública de Chile.

REVISORES INSTITUTO DE SALUD PÚBLICA DE

CHILE:
TM. Mg. Mitzy Celis Morales.
Jefe Sección Coordinación de Redes de Laboratorios. Subdepartamento
Coordinación Externa. Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y
de Referencia. Instituto de Salud Pública de Chile.
Dra. Verónica Ramírez Muñoz.
Jefe Subdepartamento Coordinación Externa. Departamento Laboratorio
Biomédico Nacional y de Referencia. Instituto de Salud Pública de
Chile.

REVISORES EXTERNOS:
TM. Mg. Cs. Leonor Armanet Bernales.
Directora Escuela de Tecnología Médica. Universidad de Chile.
TM. Mg. Ped. Univ. Hugo Henríquez Bello.
Director Docente Escuela de Tecnología Médica. Universidad Mayor.
TM. Guillermo Herrera Calderon.
TM. Banco de Sangre Hospital Clínico de la Universidad Católica de
Chile.
Dr. Federico Liendo Palma.
Jefe UMT/Banco de Sangre. Complejo Asistencial Barros Luco Trudeau.
Dra. María Cristina Martínez Valenzuela.
Directora Centro de Sangre Concepción.
TM. Ramón Schifferli Salazar.
TM. Encargado de Calificación Microbiológica e Inmunohematológica.
Centro de Sangre y Tejidos de Valparaíso.
TM. Carolina Villalobos Urbina.
Jefe de Centro y Encargada de Calidad UMT/Banco de Sangre.
Complejo Asistencial Barros Luco Trudeau.
RECOMENDACIONES PARA LA DETECCIÓN E
IDENTIFICACIÓN DE ANTICUERPOS IRREGULARES
ERITROCITARIOS

RESUMEN ticuerpos irregulares eritrocitarios en la sangre de

donantes, pacientes y embarazadas.
Este documento presenta recomendaciones
para el procedimiento de detección e identifica-
ción de anticuerpos irregulares, y está dirigido
INTRODUCCIÓN
a los Centros de Sangre, Unidades de Medicina
Transfusional, Bancos de Sangre y Laboratorios Los anticuerpos irregulares corresponden a
Clínicos. Para su elaboración se recogieron las aquellos anticuerpos distintos a los anticuerpos na-
opiniones y sugerencias de los participantes del X turales del sistema ABO, que pueden aparecer en
Taller Nacional para Centros de Sangre y Unidades respuesta a la exposición a un antígeno eritrocitario
de Medicina Transfusional, realizado en mayo de extraño (transfusión o trasplante), por incompati-
2013 en el Instituto de Salud Pública de Chile, y bilidad materno-fetal o sin un estímulo identifica-
ha sido consensuado con el Comité de Expertos ble. En algunos casos, su presencia se asocia a la
PEEC del área de Inmunohematología. exposición a antígenos ambientales, bacterianos
Este documento entrega las directrices para la o virales de características bioquímicas similares
realización de una correcta detección e identifica- a los antígenos eritrocitarios. En nuestro país, los
ción de anticuerpos irregulares, a fin de contribuir anticuerpos irregulares más frecuentemente encon-
en asegurar la calidad de estos estudios inmuno- trados en donantes de sangre son: anti-Lea, anti-K y
hematológicos en cada institución. anti-E, mientras que en pacientes son: anti-D, anti-E
y anti-K. Todos estos anticuerpos son capaces de
provocar hemólisis in vivo y acortamiento en la so-
OBJETIVO brevida normal de los glóbulos rojos (Anexo 1).
La heterogeneidad de los anticuerpos, en cuanto
El objetivo de estas recomendaciones es dispo- a su tipo, clase de inmunoglobulina, temperatura de
ner de una metodología para la detección e iden- reacción, tipo de hemólisis asociada, su capacidad
tificación de anticuerpos irregulares contra antíge- de activar complemento, entre otras características,
nos eritrocitarios que contribuya a la obtención de hacen que la pesquisa e identificación de ellos, deba
resultados confiables y reproducibles. hacerse de una manera estandarizada y controlada.
La detección e identificación de anticuerpos irre-
gulares habitualmente se realiza mediante técnicas
ALCANCE de aglutinación en tubo, en columna o en micro-
Estas recomendaciones aplican a los Centros placa, con etapas a temperatura ambiente, 37°C y
de Sangre, Unidades de Medicina Transfusional, antiglobulina humana. En algunas ocasiones y de
Bancos de Sangre y Laboratorios Clínicos que acuerdo a condiciones observadas en cada labo-
realizan detección con o sin identificación de an- ratorio, se puede realizar análisis a 4°C frente a la

Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia.

Instituto de Salud Pública de Chile. 3
 RECOMENDACIONES PARA LA DETECCIÓN E IDENTIFICACIÓN
DE ANTICUERPOS IRREGULARES ERITROCITARIOS

sospecha de crioaglutininas. dores de reacción (suero antiglobulina humana

Cuando se detecta la presencia de un aloanti- poliespecífico y solución LISS), que permiten
cuerpo, se debe determinar su especificidad me- determinar la especificidad de anticuerpos úni-
diante la identificación y la consiguiente deducción cos o algunas mezclas de anticuerpos.
de su significado clínico, empleando un enfoque
sistemático descrito en el algoritmo (Anexo 2).
DESARROLLO
DEFINICIONES Y ABREVIACIONES I. DETECCIÓN DE ANTICUERPOS IRREGULARES
a) Abreviaciones: a) Muestras
Suero o plasma obtenido a partir de sangre total
ACD: Ácido cítrico, citrato, dextrosa. sin o con anticoagulante (EDTA, ACD), respectiva-
CE: Comunidad Europea mente, de acuerdo a las especificaciones del fabri-
CI: Centrifugación Inmediata cante del método o reactivo que utiliza. El uso de
plasma podría impedir la detección de anticuerpos
EDTA: Ácido Etilendiaminotetraacético. irregulares que se revelan solamente por la presen-
FDA: Food and Drug Administration cia de complemento adherido a los eritrocitos. Para
estudios automatizados se requiere plasma y en tests
GR: Glóbulos Rojos
manuales es deseable el uso de suero. Las muestras
LISS: Solución de Baja Fuerza Iónica para estudio deben ser almacenadas a 4°C y las prue-
NISS: Solución Salina de fuerza iónica normal bas deben ser realizadas en el menor tiempo posible,
no excediendo las 72 horas desde su obtención.
PA: Prueba Autóloga
PBS: buffer fosfato salino pH 6.9 a 7.2 b) Reactivos
SAGH: Suero Antiglobulina Humana - Células Panel para detección de anticuerpos
irregulares: sets comerciales de 2 o 3 frascos
TAD: Test Antiglobulina Humana Directa y en concentración adecuada para cada tipo
TAI: Test Antiglobulina Humana Indirecta de técnica. Ej. Tubo: 2-4%, Columna: 0,8-
1%. Estás células deben tener certificación de
fabricación ISO 13485 o estar aprobadas por
b) Definición de conceptos organismos (FDA, CE), sobre su capacidad de
detectar anticuerpos clínicamente significati-
- Aloanticuerpo: anticuerpo producido en un
vos, debiendo expresar al menos los siguientes
individuo que está dirigido contra antígenos
antígenos: D, C, E, c, e, M, N, S, s, P1, Lea, Leb,
eritrocitarios que él carece, presentes en otro
K, k, Fya, Fyb, Jka y Jkb. El laboratorio debiese
individuo de su misma especie.
disponer de reactivos con expresiones homo-
- Autoanticuerpo: anticuerpo producido en un cigotas para los antígenos D, C, E, S, s, Fya,
individuo que está dirigido contra antígenos Fyb, Jka y Jkc .
que expresan sus propios eritrocitos.
- En los sets de dos células, uno de los frascos
- Identificación básica de anticuerpos irregula- debe ser R1/R1 y el otro R2/R2, en los sets de
res: procedimiento del laboratorio de inmu- tres células, el tercero debe ser r/r.
nohematología que permite identificar la es-
- Suero Antiglobulina Humana: tipo poliespecífi-
pecificidad de la mayoría de los anticuerpos
co, apropiado para cada tipo de técnica (incor-
eritrocitarios de importancia clínica, detectados
porado en los sistemas de aglutinación en co-
en el TAI. Involucra el uso de células panel de
lumna o en presentaciones para su utilización
identificación básico y técnicas con potencia-
en tubos).

Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia.

4 Instituto de Salud Pública de Chile.
 RECOMENDACIONES PARA LA DETECCIÓN E IDENTIFICACIÓN
DE ANTICUERPOS IRREGULARES ERITROCITARIOS

- LISS: de acuerdo a la estandarización del reac- d) Procedimiento

tivo o a las recomendaciones del fabricante 1.- Identificar las muestras a estudiar y centri-
(incorporado en los sistemas de aglutinación fugarlas de acuerdo al tiempo estandariza-
en columna o en presentaciones para su utili- do en la centrífuga, para obtener suero o
zación en tubos). plasma.
- Suero AB inerte: plasma convertido en suero y 2.- Verificar que los reactivos estén vigentes y
calentado a 56°C por 1 hora. que tanto reactivos como equipos cumplan
- Suero fisiológico tamponado, PBS o solución con los parámetros definidos en el control
diluyente recomendada para la técnica utilizada. de calidad del laboratorio de inmunohemato-
logía. Las células panel deben utilizarse a la
concentración definida por el fabricante para
c) Técnicas realizar la técnica.
Los métodos de detección disponible son: hema-
glutinación en tubo, adhesión de eritrocitos en fase 3.- Para cada muestra a procesar se deben realizar
sólida (microplaca) y hemaglutinación en columnas. en forma independiente las siguientes reaccio-
En los dos últimos métodos se dispone de sistemas nes, utilizando volúmenes de suero o plasma y
semiautomatizados y automatizados, a diferencia del suspensión de glóbulos rojos de acuerdo a la
método en tubo que corresponde a una técnica manual. técnica empleada: ver tabla 1.

Tabla 1

TUBO,
COLUMNA O SUERO O PLASMA GLÓBULOS ROJOS UTILIDAD
MICROPLACA

Detección de anticuerpos irregulares

Panel I (R1/R1), en concentración
Reacción I Muestra en estudio dirigidos hacia antígenos presentes en
adecuada a la técnica usada
el Panel I

Detección de anticuerpos irregulares

Panel II (R2/R2) en concentración
Reacción II Muestra en estudio dirigidos hacia antígenos presentes en
adecuada a la técnica usada
el Panel II

Detección de anticuerpos irregulares

Panel III (r/r) en concentración
Reacción III Muestra en estudio dirigidos hacia antígenos presentes en
adecuada a la técnica usada
el Panel III (opcional)

Muestra en estudio en
Determinación de presencia de alo y/o
PA Muestra en estudio concentración adecuada a la
autoanticuerpo
técnica usada

Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia.

Instituto de Salud Pública de Chile. 5
 RECOMENDACIONES PARA LA DETECCIÓN E IDENTIFICACIÓN
DE ANTICUERPOS IRREGULARES ERITROCITARIOS

4.- Mezclar y centrifugar de acuerdo a la calibra- - Aglutinación en columna: la lectura se

ción para lectura de aglutinación de la centrífu- realiza en una etapa, permitiendo detectar prin-
ga, o a los tiempos y revoluciones establecidas cipalmente los anticuerpos clínicamente sig-
por el inserto de la técnica utilizada. nificativos, pero no estableciendo la clase de
5.- Observar en busca de aglutinación y/o hemóli- inmunoglobulina y la temperatura óptima a la
sis, de acuerdo a la técnica de lectura automa- cual son activas. También es posible detectar
tizada que recomiende el fabricante o tecnica anticuerpos de clase IgM que presentan amplio
estandarizada en el laboratorio. rango térmico.

6.- Registrar los resultados obtenidos en intensi- - Adhesión de eritrocitos en fase sólida:
dad de cruces, de acuerdo a la tabla de reac- uno de los componentes de la reacción antíge-
ción del Anexo 3. no-anticuerpo es inmovilizado en pocillo (fase
sólida) a la que se adiciona antígeno/anticuer-
7.- Dependiendo de la técnica utilizada, el procedi- po libre (muestra) y el punto final de la reacción
miento debe asegurar que se cumplan las dis- se evidencia por la adición de eritrocitos que
tintas etapas de lectura propias de la técnica: pueden ser parte de la reacción antígeno-anti-
- Tubo: Se recomienda realizar en medio de cuerpo o se pueden usar como células indica-
LISS-Coombs por su mayor sensibilidad que doras.
el medio NISS. La lectura se puede realizar en
tres etapas, permitiendo diferenciar anticuerpos e) Interpretación
que actúan en salino a temperatura ambiente, Ejemplos de reacciones que pueden observarse
en salino a 37°C y con SAGH, permitiendo in- en detección de anticuerpos irregulares y su com-
ferir la clase de inmunoglobulina (IgM y/o IgG) plemento con otras metodologías se muestran en la
y la temperatura óptima a la cual son activas. siguiente tabla: ver tabla 2.

Tabla 2

RESULTADO DE
REACCIÓN REACCIÓN
PA TAD DETECCIÓN DE INTERPRETACIÓN
PANEL I PANEL II
ANTICUERPOS

+ + 0 0 Positivo Aloanticuerpo

0 + 0 0 Positivo Aloanticuerpo

+ 0 0 0 Positivo Aloanticuerpo

0 0 0 0 Negativo Ausencia de Anticuerpos

+ + + +/0 Positivo Autoanticuerpo + Aloanticuerpo

0 0 + +/0 Positivo Autoanticuerpo/Crioaglutinina

0 = No hay reacción de aglutinación

+ = Aglutinación de cualquier intensidad (4+, 3+, 2+, 1+)

Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia.

6 Instituto de Salud Pública de Chile.
f) Informe de resultados de glóbulos rojos de distintos donantes. La
La denominación recomendada para el informe elección del tipo de panel debe ser realiza-
del resultado de este estudio es: da en base a las características del labora-
torio, el tipo de pacientes que atiende y las
estadísticas de los casos estudiados en el
DETECCIÓN DE ANTICUERPOS curso de un año, es deseable que el labora-
IRREGULARES: POSITIVO; NEGATIVO torio construya tablas con la prevalencia de
(según corresponda al paciente o donante estudiado). las especificidades identificadas durante el
año. El panel debe permitir que se identifi-
En caso de ser positivo, se recomienda registrar quen claramente las especificidades de los
las alternativas posibles de especificidades de los aloanticuerpos más prevalentes en la pobla-
anticuerpos detectados de acuerdo al panel utiliza- ción y de mayor importancia clínica (Anexo
do. Se adjunta en Anexo 4, propuesta de registro de 1). Debe verificarse y considerarse las si-
resultados. guientes características básicas del panel de
identificación:
a) Presentar especificidades para los siguien-
II. IDENTIFICACIÓN BÁSICA DE ANTICUER- tes antígenos: D, C, E, c, e, M, N, S, s, P1,
POS IRREGULARES Lea, Leb, K, k, Fya, Fyb, Jka y Jkb.
b) Poseer al menos dos células panel que
a) Muestras presenten y dos células panel que carez-
La identificación de anticuerpos irregulares debe can de los antígenos señalados en el punto
realizarse con muestras sanguíneas con las mismas anterior. En la tabla de trabajo (Anexo 5)
características definidas en este documento para la se puede observar que los antígenos e y k
Detección de Anticuerpos Irregulares, en su punto I.a). no cumplen esta regla, por lo que se debe
Para el estudio de mezclas de anticuerpos complejos incorporar al análisis, las células del panel
o múltiples, es fundamental disponer necesariamente de detección de anticuerpos irregulares,
de los glóbulos rojos de la muestra para realizar estu- logrando así cumplir esta regla.
dios de fenotipificación, autocontrol o TAD.
c) Disponer de células con doble dosis (homo-
La solicitud de examen que acompaña a la mues-
cigotas) especialmente de los antígenos Jka,
tra debe incluir al menos la identificación comple-
Jkb, S, s, Fya, y Fyb, ya que estos antígenos se
ta del paciente (nombre con dos apellidos), fecha,
expresan más débilmente cuando los genes
procedencia, edad, sexo, pertenencia a alguna et-
involucrados están en forma heterocigota.
nia, historial médico con especial énfasis en his-
toria transfusional reciente, embarazos, patologías d) Poseer células rr (cde/cde) en el panel y
asociadas, consumo de algún medicamento, etc., lo que entre ellas expresen los antígenos K,
que será de utilidad en el proceso de identificación Fya, Fyb, Jka, Jkb, M, S, s, de preferencia
de anticuerpos e interpretación de resultados. al estado homocigoto, de manera de po-
der evidenciar la presencia de ellos junto
al anti-D, dada la frecuencia de este anti-
b) Reactivos cuerpo.
- Células Panel para identificación de anti- e) Verificar que el inserto de especificación
cuerpos irregulares: El panel básico de iden- del reactivo y la tabla de trabajo que vie-
tificación generalmente presenta entre 8 a 11 nen con el panel, coincidan con el núme-
frascos de células con diferentes especifici- ro de lote del reactivo. Este punto es muy
dades antigénicas. Existen estos paneles de importante al momento de querer inter-
células en presentaciones de hasta 16 tipos pretar los resultados.

Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia.

Instituto de Salud Pública de Chile. 7
 RECOMENDACIONES PARA LA DETECCIÓN E IDENTIFICACIÓN
DE ANTICUERPOS IRREGULARES ERITROCITARIOS

f) Las células panel no deben utilizarse más d) Procedimiento

allá de la fecha de expiración indicada por 1.- Rotular la muestra a investigar y centrifugarla
el fabricante. de acuerdo al tiempo estandarizado en la cen-
g) Cada laboratorio de acuerdo a su realidad trífuga para obtener suero o plasma.
(frecuencia de anticuerpos irregulares, ca- 2.- Verificar que los reactivos estén vigentes y que
racterísticas étnicas de la población que tanto reactivos como equipos cumplan con los
atiende, entre otras), debe definir al mo- parámetros definidos en el control de calidad del
mento de su compra, características espe- laboratorio de inmunohematología. Las células
ciales del panel a utilizar. panel deben utilizarse a la concentración definida
- Suero Antiglobulina Humana: Ver punto Ib) de para la técnica a realizar en el inserto del fabricante.
Detección de anticuerpos irregulares. 3.- Verificar que la hoja de trabajo del panel de
- LISS: de acuerdo a la estandarización del reac- identificación está disponible y su número de
tivo o a las recomendaciones del fabricante, en lote corresponde al del reactivo que se utilizará.
caso de ser usado para esta metodología (in- 4.- Para cada muestra a procesar, se deben efectuar
corporado en los sistemas de aglutinación en tantas reacciones de acuerdo al número de células
columna o en presentaciones para su utiliza- panel básico utilizado en el laboratorio: ver tabla 3.
ción en tubos).
5.- Mezclar y centrifugar de acuerdo a la calibración
- Suero fisiológico tamponado, PBS o solu- de la centrífuga para lectura, o a los tiempos y
ción diluyente recomendada para la técnica revoluciones establecidas por el fabricante.
utilizada.
6.- Observar en busca de aglutinación y/o hemóli-
sis, de acuerdo a la técnica de lectura automa-
c) Técnicas tizada o manual que recomiende el fabricante.
Existen técnicas manuales, semiautomatizadas y 7.- Registrar los resultados obtenidos en intensidad de
automatizadas, en tubo, columna y microplaca. cruces, de acuerdo a la tabla de reacción del Anexo 3.
Tabla 3

TUBO,
COLUMNA O SUERO O PLASMA GLÓBULOS ROJOS UTILIDAD
MICROPLACA

Panel 1 en concentración adecuada Detectar reacción de acuerdo al

Reacción 1 Muestra en estudio
a la técnica usada fenotipo del Panel 1

Panel 2 en concentración adecuada Detectar reacción de acuerdo al

Reacción 2 Muestra en estudio
a la técnica usada fenotipo del Panel 2

Panel 3 en concentración adecuada Detectar reacción de acuerdo al

Reacción 3 Muestra en estudio
a la técnica usada fenotipo del Panel 3

Panel “n” en concentración Detectar reacción de acuerdo al

Reacción n* Muestra en estudio
adecuada a la técnica usada fenotipo del Panel “n”

Muestra en estudio en
Determinación de presencia de alo y/o
PA Muestra en estudio concentración adecuada a la
autoanticuerpo
técnica usada
*n: número de células del panel utilizadas en la identificación.

Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia.

8 Instituto de Salud Pública de Chile.
 RECOMENDACIONES PARA LA DETECCIÓN E IDENTIFICACIÓN
DE ANTICUERPOS IRREGULARES ERITROCITARIOS

8.- Dependiendo de la técnica definida en sus pro- nes señaladas en la tabla de trabajo (Anexo 5). Es
tocolos, debe asegurarse de cumplir con las importante verificar que ella corresponda al lote de
distintas etapas de lectura que se requieren: panel celular que se haya utilizado. A continuación
- Tubo: la lectura realizada en las tres etapas, se señala un ejemplo de identificación básica de an-
puede permitir diferenciar la detección de an- ticuerpos irregulares con especificidad anti-S:
ticuerpos que actúan a temperatura ambiente, 1.- Identificar y registrar adecuadamente la inten-
a 37°C y con SAGH. Además, la lectura y el sidad de cruces para cada célula panel, lo cual
registro de las intensidades en cruces puede puede orientar a la especificidad del o los anti-
orientar a la especificidad de un solo anticuer- cuerpos en la muestra.
po o a una mezcla de ellos. 2.- Proceda a descartar aquellas especificidades de
- Aglutinación en columna: la lectura se puede anticuerpos para las cuales el estudio muestra
realizar en una etapa, permitiendo detectar los an- un resultado negativo (descarte por reacciones
ticuerpos clínicamente significativos, pero no per- negativas) con células de expresión homocigo-
mite establecer la clase y la temperatura a la cual ta. En la figura se deben analizar las células 1,
ellos son activos. El análisis de las intensidades 3, 8, 10 y 11. La célula 1 permite descartar las
en cruces puede orientar a la especificidad de un especificidades D, C, e, M, s, k, P1, Leb y Jkb
solo anticuerpo o a una mezcla de ellos. (tachado azul); la célula 3 permite descartar las
especificidades E, c, N, Lea, Fyb (tachado rojo);
la célula 8 no descarta especificidades adicio-
e.- Interpretación nales; la célula 10 descarta la especificidad Jka
La asignación de la identificación de anticuerpos (tachado verde); la célula 11 descarta la espe-
irregulares, debe realizarse a través de la interpreta- cificidad Fya (tachado negro). Este análisis no
ción del registro de los resultados de las reaccio- permitió excluir las especificidades S y K.

Cel Rh MNS Kell P Lewis Duffy Kidd Cel Resultado

D C E c e M N S s K k P1 Lea Leb Fya Fyb Jka Jkb TA 37C AHG CC

1 R1R1 + + 0 0 + + 0 0 + 0 + + 0 + + + 0 + 1 0 ü

2 R1R1 + + 0 0 + + + + 0 0 + + 0 0 0 0 + 0 2 2+

3 R2R2 + 0 + + 0 0 + 0 + 0 + 0 + 0 0 + + + 3 0 ü

4 r’r 0 + 0 + + + 0 + + 0 + + 0 + + 0 + 0 4 2+

5 r’’r 0 0 + + + 0 + + + 0 + + 0 + 0 + 0 + 5 2+

6 rr 0 0 0 + + + 0 + 0 + + + 0 + + 0 0 + 6 2+

7 rr 0 0 0 + + + + + + 0 + + 0 + 0 + + 0 7 2+

8 R0r + 0 0 + + 0 + 0 0 0 + + 0 0 0 0 0 + 8 0 ü

9 rr 0 0 0 + + + + + + + 0 0 + 0 + 0 + + 9 2+

10 rr 0 0 0 + + + 0 0 + + + + 0 0 0 + + 0 10 0 ü

11 R1R1 + + 0 0 + + + 0 + 0 + + 0 + + 0 0 + 11 0 ü

PA PA

Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia.

Instituto de Salud Pública de Chile. 9
 RECOMENDACIONES PARA LA DETECCIÓN E IDENTIFICACIÓN
DE ANTICUERPOS IRREGULARES ERITROCITARIOS

Cel Rh MNS Kell P Lewis Duffy Kidd Cel Resultado

D C E c e M N S s K k P1 Lea Leb Fya Fyb Jka Jkb TA 37C AHG CC

1 R1R1 + + 0 0 + + 0 0 + 0 + + 0 + + + 0 + 1 0 ü

2 R1R1 + + 0 0 + + + + 0 0 + + 0 0 0 0 + 0 2 2+

3 R2R2 + 0 + + 0 0 + 0 + 0 + 0 + 0 0 + + + 3 0 ü

4 r’r 0 + 0 + + + 0 + + 0 + + 0 + + 0 + 0 4 2+

5 r’’r 0 0 + + + 0 + + + 0 + + 0 + 0 + 0 + 5 2+

6 rr 0 0 0 + + + 0 + 0 + + + 0 + + 0 0 + 6 2+

7 rr 0 0 0 + + + + + + 0 + + 0 + 0 + + 0 7 2+

8 R0r + 0 0 + + 0 + 0 0 0 + + 0 0 0 0 0 + 8 0 ü

9 rr 0 0 0 + + + + + + + 0 0 + 0 + 0 + + 9 2+

10 rr 0 0 0 + + + 0 0 + + + + 0 0 0 + + 0 10 0 ü

11 R1R1 + + 0 0 + + + 0 + 0 + + 0 + + 0 0 + 11 0 ü

PA PA

3.- Proceda a comparar el patrón de reacciones Aspectos a considerar en la identificación

(positivas y negativas) de su columna de re- de anticuerpos
sultados con las columnas para la especifici- • El suero o plasma del paciente debe ser ana-
dad S y K. El patrón de reacción en esta etapa lizado por la misma técnica que se usó en la
permite descartar la especificidad K, ya que la detección del anticuerpo. La inclusión de gló-
célula 10 positiva para Kell presenta reacción bulos rojos del paciente puede ser útil en el re-
negativa. conocimiento de anticuerpos dirigidos contra
4.- La especificidad probable del anticuerpo es antígenos de alta frecuencia o la presencia de
anti-S, lo cual se debe demostrar por la au- autoanticuerpos.
sencia del antígeno S en el fenotipo de los • La especificidad del anticuerpo sólo se debe
globulos rojos. asignar cuando es reactivo con al menos dos
5.- Cuando no es posible identificar los anti- células panel que tienen el antígeno y no reac-
cuerpos en una muestra a través del panel tivo con al menos dos células panel que care-
básico, se deben utilizar técnicas adiciona- cen del antígeno. Siempre que sea posible, la
les (fenotipo eritrocitario, panel enzimático, presencia de anti-Jka, -Jkb,-S, -s, -Fya, y –Fyb
elución-adsorción) o derivar a laboratorio debe excluirse usando células que tengan ex-
de Referencia para completar estudio. presiones homocigotas del antígeno relevante.
• Se debe utilizar un suero control anti-D débil
f.- Informe de resultados (≤ 0,1 UI / ml) para asegurar la eficacia del pro-
La denominación recomendada es: cedimiento, incluyendo la expresión antigénica
sobre células panel.
IDENTIFICACIÓN DE ANTICUERPOS IRRE- • Cuando una especificidad de anticuerpos ha
GULARES: anti-D, anti-K, anti-Fyb sido identificada, es esencial que la presencia
(según corresponda al paciente o donante estudiado). de otros anticuerpos clínicamente significativos

Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia.

10 Instituto de Salud Pública de Chile.
 RECOMENDACIONES PARA LA DETECCIÓN E IDENTIFICACIÓN
DE ANTICUERPOS IRREGULARES ERITROCITARIOS

no sean omitidos. Anticuerpos múltiples sólo se b) Control de calidad de cada nuevo lote
pueden confirmar por la elección de las células de reactivos: corresponde a la verificación
panel negativas para la especificidad reconoci- para asegurar la conformidad con los criterios
da, pero positivas para otros antígenos capaces utilizados. Cualquier reactivo que no cumpla
de producir anticuerpos clínicamente significa- con las especificación requeridas para los test,
tivos. El conocimiento de los fenotipos del pa- no se debe utilizar.
ciente puede ayudar en la selección de células • Tomar al azar uno o dos frascos de reac-
para el proceso de identificación y exclusión. tivos a verificar del nuevo lote como mí-
• Cuando se ha identificado un anticuerpo, los nimo y examinarlos por inspección visual,
glóbulos rojos del paciente deben ser fenotipa- en cuanto a corroborar que el volumen y la
dos para establecer la ausencia del antígeno (s) etiqueta señalan aspectos específicos del
correspondiente a la especificidad de los an- reactivo, Nº de lote y fecha de vencimiento
ticuerpos identificados. Se deben utilizar con- con un plazo adecuado a las necesidades
troles apropiados, es decir, antígeno positivo del servicio. Además verificar presencia
(heterocigoto) y antígeno negativo. del inserto que especifica características,
modo de uso y control de calidad.
• Evaluar en el laboratorio de Inmunohe-
III. CONTROL DE CALIDAD matología sus características en cuanto
a) Control de Calidad Interno: a actividad, especificidad, sensibilidad y
potencia, según corresponda. Si es-
Seguir los procedimientos de control de calidad
tos reactivos han sido evaluados por una
recomendados por los fabricantes de reactivos y equi-
entidad de referencia, deben solicitarse los
pos. Cada laboratorio debe realizar control de calidad.
resultados y verificar la coherencia con el
Nº de lote, marca y fecha de vencimiento
• Control negativo: utilizar un suero AB iner-
del reactivo en uso.
te estandarizado, como muestra en estudio.
Debe dar un resultado negativo. • Los paneles de identificación deben pre-
sentar para los anticuerpos simples por lo
• Control positivo: utilizar un suero con an-
menos dos tipos de células positivas y tres
ticuerpos irregulares de clase IgG, como
negativas, o una positiva y siete negativas
muestra en estudio. Debe presentar una
para permitir identificar con un valor de p
intensidad de reacción de 2+ (anti-D débil
de 0,05.
(≤ 0,1 UI / ml)) con alguno de los glóbu-
los rojos utilizados en el test. Este reactivo • Se recomienda controlar al azar una o dos
control debe ser de origen humano y es- expresiones antigénicas heterocigotas (fe-
tandarizado por el encargado de calidad del notipar) de las células de detección e iden-
laboratorio. tificación.
• Control de lavado o Células Control c) Con cada nueva técnica o tecnología:
Coombs (se usa sólo en técnicas en tubo además de probar los reactivos como se descri-
y cuando el resultado de la detección en ben anteriormente, es conveniente realizar junto
la etapa AGH es negativa): corresponde a a este nuevo método, si es posible, en paralelo
GR sensibilizados con cantidades bajas de con el método que se estaba usando, de acuer-
IgG, de manera que ellos son capaces de do al protocolo de verificación implementado en
revelar el suero AGH que queda libre, en el laboratorio. Incluyendo al menos 10 muestra
aquellos test que muestran un resultado de sueros con anticuerpos irregulares positivos
negativo. Este reactivo control debe dar un (almacenadas en serotecas), para evaluar repro-
resultado positivo. ducibilidad y concordancia de los resultados.

Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia.

Instituto de Salud Pública de Chile. 11
 RECOMENDACIONES PARA LA DETECCIÓN E IDENTIFICACIÓN
DE ANTICUERPOS IRREGULARES ERITROCITARIOS

Esa semana de prueba puede utilizarse también b.- Sensibilidad:

como etapa de inducción y capacitación del per- No debe presentar hemólisis o aglutinación des-
sonal que utilizará la nueva técnica o tecnología. pués de una incubación con suero fresco inerte y
En esta etapa es imprescindible la participación compatible, como en una prueba de compatibilidad,
del proveedor para la entrega de información, usando las siguientes células no sensibilizadas: 2
asesoría y capacitación. Esto deberá asegurar células A, 2 células B, 2 células O.
que el método es apto para su uso rutinario. Se deben obtener reacciones positivas con:

Especificaciones de los reactivos • Glóbulos rojos RhD positivos (preferiblemente

R1r) sensibilizadas con un débil anti-D (0,1 UI/
Suero Antiglobulina humana - poliespecífi- ml o 20 nanogramos/ml)
co (SAGH)
• Glóbulos rojos recubiertos con C3b y C3d.
a.- Inspección visual Reacciones negativas se deben obtener
- Etiqueta con el nombre del producto, el nú- • Con las mismas células, pero no sensibilizadas
mero de lote (serie), la fecha de vencimiento, con anti-D ni complemento.
las condiciones de almacenamiento y el nom-
bre del fabricante o su logo.
- Inserto del producto debe aportar los mis- c.- Potencia:
mos detalles que los señalados en la etiqueta, Obtener el mismo título o más alto, sin prozo-
pero explicitando el método recomendado para na, que el obtenido con una “solución de potencia
su uso, los controles de calidad a aplicar, los mínima” o un AHG con licencia al día (FDA o CE),
diluyentes recomendados etc., que pueden ser usando glóbulos rojos RhD positivos recubiertos
necesarios, además de cualquier limitación o con un anti-D de 0,1 UI/ml o 20 nanogramos/ml
advertencias en el uso de ese reactivo. Debe (reacción de 2+ en SAGH).
incluir también detalles de la composición del Es útil tener un pequeño panel de anticuerpos
reactivo, entregar las advertencias de biosegu- débiles (1+ a 2+) de especificidad conocida por ej.
ridad, y aportar detalles para su uso seguro. anti-Fya además de un anti-D, para utilizar tanto en
Todos los reactivos no-celulares deben estar estudios de especificidad como potencia.
libres de hemólisis, precipitados, partículas o for-
mación de gel.

Salino LISS

pH 6.6-6.8 6.6-6.8

Conductividad mS/cm 15-18 3.4-4.0

Osmolaridad mOsmol/kg 285-305

Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia.

12 Instituto de Salud Pública de Chile.
 RECOMENDACIONES PARA LA DETECCIÓN E IDENTIFICACIÓN
DE ANTICUERPOS IRREGULARES ERITROCITARIOS

Solución salina de baja fuerza iónica (LISS) REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Aspecto; sin turbidez, ni partículas. No hemoli- • American Association of Blood Banks. AABB
zar, ni causar aglutinación de las células. Standards for Blood Bank and Transfusion Ser-
vices, 25th ed., Bethesda, Maryland, 2008.
• Guidelines for the blood transfusion services in
El LISS se puede utilizar de dos maneras: sus- the United Kingdom, 7th edition 2005.
pendiendo los glóbulos rojos de prueba en LISS
(1,5 - 2%) o agregando un volumen igual de la so- • Harmening DM, Modern Blood Banking and
lución de LISS al suero y utilizando glóbulos rojos Transfusion Practices, 6th ed., 2012.
suspendidos en salino (3%). Las células suspendi- • Ministerio de Salud de Chile. Orientaciones
das en LISS no se deben conservar más de 24 horas para Centros de Sangre y Unidades de Medi-
para ser usadas. cina Transfusional, MINSAL, 2007.
• Roback JD, editor. AABB Technical Manual,
17th ed., Bethesda, Maryland, 2011.
b) Control de Calidad Externo:
Los Centros de Sangre, Unidades de Medicina
Transfusional, Bancos de Sangre y Laboratorios
Clínicos del país que realizan esta determinación
deben participar en algún programa de evaluación
externa de la calidad, para que en conjunto con el
control de calidad interno, se asegure la calidad de
la detección e identificación de anticuerpos irregu-
lares eritrocitarios.

Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia.

Instituto de Salud Pública de Chile. 13
 RECOMENDACIONES PARA LA DETECCIÓN E IDENTIFICACIÓN
DE ANTICUERPOS IRREGULARES ERITROCITARIOS

ANEXO 1
Características de los anticuerpos irregulares de significancia clínica y sus frecuencias en donantes y pacientes en dos Servicios
de Sangre chilenos durante los años 2011-2013.

Reactividad Asociado a Frecuencias

Sistema Donantes1 Pacientes2

Anticuerpo 4°C 22°C 37°C AGH EHRN RHT
Sanguíneo n % n %

Anti-M Raro Raro Raro 27 7.9 13 3.4

Mayoría
Anti-N Raro No Raro 4 1.2 1 0.3
Mayoría Mayoría
MNS Anti-S Mayoría Sí Sí 4 1.2 10 2.6
Mayoría Mayoría
Anti-s Mayoría Sí Sí 1 0.3
Anti-U Mayoría Sí Sí

P1PK Anti-P1 Mayoría Mayoría No Raro 2 0.6 2 0.5

Anti-D Algunos Algunos Mayoría Sí Sí 51 15.0 103 27.3

Anti-C Algunos Algunos Mayoría Sí Sí 5 1.5 12 3.2
Rh Anti-E Algunos Algunos Mayoría Sí Sí 63 18.5 81 21.4
Anti-c Algunos Algunos Mayoría Sí Sí 8 2.4 13 3.4
Anti-e Algunos Algunos Mayoría Sí Sí 5 1.3

Anti-Lua Mayoría Mayoría Raro No 1 0.3 4 1.1

Lutheran
Anti-Lub Algunos Mayoría Leve Sí 3 0.9

Anti-K Mayoría Sí Sí 63 18.5 63 16.7

Anti-k Mayoría Sí Sí
Anti-Kpa Mayoría Sí Sí 2 0.5
Kell Algunos
Anti-Kpb Mayoría Sí Sí
Anti-Jsa Mayoría Sí Sí
Anti-Jsb Mayoría Sí Sí

Anti-Lea Mayoría Mayoría Mayoría Mayoría No Raro 83 24.4 42 11.1

Lewis
Anti-Leb Mayoría Mayoría Mayoría Mayoría No No 7 2.1 2 0.5
Anti-Fya Mayoría Sí Sí 11 3.2 8 2.1
Duffy
Anti-Fyb Mayoría Sí Sí 1 0.3 1 0.3
Anti-Jka Mayoría Sí Sí 6 1.8 13 3.5
Kidd
Anti-Jkb Mayoría Sí Sí 3 0.8
Anti-Dia Mayoría Sí Sí
Diego
Anti-Di, Mayoría Sí Sí
Anti-Yta Mayoría No Sí
Yt
Anti-Ytb Mayoría No No

Xg Anti-Xga Algunos Mayoría No No

Anti-Sc1 Mayoría No No
Scianna
Anti-Sc2 Mayoría No No
Anti-Doa Mayoría No Sí
Dombrock
Anti-Dob Mayoría No Sí
Anti-Coa Mayoría Sí Sí
Colton
Anti-Cob Mayoría Sí Sí
TOTAL 340 100 378 100

Fuente: Manual Técnico AABB, 2011 (adaptado)

1 Datos obtenidos sobre un total de 142.812 donantes del Centro Metropolitano de Sangre y Tejidos, Santiago.
2 Datos obtenidos sobre un total de 45.584 pacientes del Hospital Guillermo Grant Benavente, Concepción.

Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia.

14 Instituto de Salud Pública de Chile.
 RECOMENDACIONES PARA LA DETECCIÓN E IDENTIFICACIÓN
DE ANTICUERPOS IRREGULARES ERITROCITARIOS

ANEXO 2
Algoritmo para la detección e identificación de anticuerpos irregulares eritrocitarios.

Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia.

Instituto de Salud Pública de Chile. 15
 RECOMENDACIONES PARA LA DETECCIÓN E IDENTIFICACIÓN
DE ANTICUERPOS IRREGULARES ERITROCITARIOS

ANEXO 3
Intensidades de Reacción de acuerdo a las distintas técnicas de aglutinación.

AGLUTINACIÓN EN
INTENSIDAD AGLUTINACIÓN
AGLUTINACIÓN COLUMNA
DE MICROPLACA
TUBO/MICROPLACA (GEL Y ESFERAS DE
REACCIÓN (FASE SÓLIDA)
VIDRIO)

Banda homogénea de
Botón único. Fondo claro. Sin La adherencia es fuerte, cubriendo
4+ aglutinados en la parte
células libres. por completo la monocapa.
superior de la columna.

El grado de adherencia es
Varios aglutinados de gran Banda superior de aglutinado
moderado a fuerte, ligera
3+ tamaño. Fondo claro. Sin y desplazamiento en la parte
formación de células en el centro
células libres. superior de la columna.
del pocillo.

Muchos aglutinados de Aglutinados pequeños en la El grado de adherencia es

2+ mediano tamaño. Fondo claro. columna y a lo largo de la moderado, botón celular irregular
Sin células libres. columna. con agujero.

Numerosos aglutinados
Algunos aglutinados El grado de adherencia es ligero a
1+ pequeños. Fondo turbio por GR
pequeños en la columna. pequeño, botón celular difuso.
libres.

Apenas la aglutinación es Escasos aglutinados de

+/- visible. Fondo turbio por GR pequeño tamaño en la No aplica.
libres. columna.

Banda de GR al fondo de la
No hay adherencia, botón celular
0 Ausencia de aglutinación columna, resto de la columna
central bien definido.
sin aglutinados.

Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia.

16 Instituto de Salud Pública de Chile.
 RECOMENDACIONES PARA LA DETECCIÓN E IDENTIFICACIÓN
DE ANTICUERPOS IRREGULARES ERITROCITARIOS

ANEXO 4
Elementos básicos de un registro recomendado para anotar los resultados de la detección de anticuerpos irregulares eritrocitarios

Fecha:_______________ Tecnólogo Médico responsable:_________________

Reacción Panel Reacción Panel PA Resultado

Identificación I (intensidad de II (intensidad de (intensidad de Detección de Interpretación Posibles
paciente/ cruces) cruces) cruces) Anticuerpos (Características especificidades
del o los
donante involucradas
Anticuerpos)
CI 37ºC AGH CI 37ºC AGH CI 37ºC AGH

Ejemplos de
-
reacciones

Ausencia de
Paciente XXXX 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Negativo
anticuerpos

Anti-c; Anti-E;
Paciente XXXX 0 0 0 0 0 2+ 0 0 0 Positivo Aloanticuerpo
anti-K…..

Paciente XXXX 0 0 4+ 0 0 4+ 0 0 0 Positivo Aloanticuerpo Anti-D; ……..

Autoanticuerpo
Paciente XXXX 2+ 0 0 2+ 0 0 2+ 0 0 Positivo
frío

Paciente n….

Reactivo Lote N° de serie Marca Fecha vencimiento

Panel celular

Columna (soporte)

AGH

LISS

Otro reactivo

Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia.

Instituto de Salud Pública de Chile. 17
 RECOMENDACIONES PARA LA DETECCIÓN E IDENTIFICACIÓN
DE ANTICUERPOS IRREGULARES ERITROCITARIOS

ANEXO 5
Ejemplo de tabla de trabajo para la identificación de anticuerpos irregulares.

Cel Rh MNS Kell P Lewis Duffy Kidd Cel Resultado

D C E c e M N S s K k P1 Lea Leb Fya Fyb Jka Jkb TA 37C AHG CC

1 R1R1 + + 0 0 + + 0 0 + 0 + + 0 + + + 0 + 1

2 R1R1 + + 0 0 + + + + 0 0 + + 0 0 0 0 + 0 2

3 R2R2 + 0 + + 0 0 + 0 + 0 + 0 + 0 0 + + + 3

4 r’r 0 + 0 + + + 0 + + 0 + + 0 + + 0 + 0 4

5 r’’r 0 0 + + + 0 + + + 0 + + 0 + 0 + 0 + 5

6 rr 0 0 0 + + + 0 + 0 + + + 0 + + 0 0 + 6

7 rr 0 0 0 + + + + + + 0 + + 0 + 0 + + 0 7

8 R0r + 0 0 + + 0 + 0 0 0 + + 0 0 0 0 0 + 8

9 rr 0 0 0 + + + + + + + 0 0 + 0 + 0 + + 9

10 rr 0 0 0 + + + 0 0 + + + + 0 0 0 + + 0 10

11 R1R1 + + 0 0 + + + 0 + 0 + + 0 + + 0 0 + 11

PA PA

Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia.

18 Instituto de Salud Pública de Chile.