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    Metodo de Sanger

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    Este documento describe un experimento para identificar el aminoácido terminal de la hemoglobina humana mediante el método de Sanger. Los estudiantes trataron la hemoglobina con DNFB para derivatizar el grupo alfa-amino terminal, luego hidrolizaron la proteína y realizaron una cromatografía de papel para separar los derivados de aminoácidos. El aminoácido con el Rf más cercano a la valina fue identificado como el aminoácido N-terminal de la hemoglobina.

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    Este documento describe un experimento para identificar el aminoácido terminal de la hemoglobina humana mediante el método de Sanger. Los estudiantes trataron la hemoglobina con DNFB para derivatizar el grupo alfa-amino terminal, luego hidrolizaron la proteína y realizaron una cromatografía de papel para separar los derivados de aminoácidos. El aminoácido con el Rf más cercano a la valina fue identificado como el aminoácido N-terminal de la hemoglobina.

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    Metodo de sanger

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    Este documento describe un experimento para identificar el aminoácido terminal de la hemoglobina humana mediante el método de Sanger. Los estudiantes trataron la hemoglobina con DNFB para derivatizar el grupo alfa-amino terminal, luego hidrolizaron la proteína y realizaron una cromatografía de papel para separar los derivados de aminoácidos. El aminoácido con el Rf más cercano a la valina fue identificado como el aminoácido N-terminal de la hemoglobina.

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    Este documento describe un experimento para identificar el aminoácido terminal de la hemoglobina humana mediante el método de Sanger. Los estudiantes trataron la hemoglobina con DNFB para derivatizar el grupo alfa-amino terminal, luego hidrolizaron la proteína y realizaron una cromatografía de papel para separar los derivados de aminoácidos. El aminoácido con el Rf más cercano a la valina fue identificado como el aminoácido N-terminal de la hemoglobina.

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    INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

    ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS


    BIOQUIMICA GENERAL
    Nombres: León Peralta María José Grupo: 3IV1
    Osorio Andrea Eunice Sección: 2
    Profesor: Víctor Hugo Peñafort Sotelo

    Determinación de Aminoácidos Terminales con el grupo Alfa Amino Libre


    Método de Sanger.

    Objetivos. DNFB siga reaccionando en otras zonas de


    la proteína .
     Identificar el aminoácido que
    contiene el grupo alfa-amino 3) Con la extracción con éter/FeSO4
    terminal de las cadenas de la observamos un cambio a color amarillo
    hemoglobina mediante el método ligero y la formación de dos fases: etérea y
    de Sanger. acuosa. En esta etapa se elimina el DNFB
     Recordar la elaboración de la que no reacciono. La fase acuosa se
    cromatografía. desechó y esta se encuentra la DNP-Tyr, la
    DNP-His y la DNP-Lys porque son
    Resultados. aminoácidos polares.

    Fase estacionaria: Papel cromatográfico. 4) La hidrolisis que se llevó acabo fue


    Fase Móvil: Ácido cítrico/Citrato de sodio acida, al agregar HCl 6N y también se
    Frente disolvente:37cm sometió a condiciones de presión (15
    Derivado Dist.recorrida Rf lb/pulg2) y temperatura (121 °C) durante 3
    DNFB hrs para romper los enlaces de la proteína
    Hemoglobina 28.1 0.75 .5) Hicimos una segunda extracción con
    DNFB 17 0.45
    éter y se formaron 2 fases: una acuosa (se
    Alanina 0
    desechó) y otra etérea y esta se evaporo
    Valina 28.1 0.75
    Fenilalanina 23.3 0.62 hasta eliminar todo el éter y quedarnos solo
    con el residuo. Se agregó alcohol y se
    realizó la cromatografía sobre papel.

    6) En etapa de la cromatografía
    observamos que la DNFP-Ala no se quedó
    tan impregnada sobre el papel.
    Colocamos el cromatograma en una
    cámara con solución de ácido cítrico-citrato
    de sodio (ambos disolventes son polares).
    Discusión.
    7) Después de que corrió el disolvente,
    1) Cuando se agregó la DNFB, la marcamos hasta donde recorrió cada
    hemoglobina se tornó color verde oscuro sustancia. Se observa que la mancha de la
    mientras lo agitamos para que el DNFB se sustancia problema coincide con el
    uniera a los grupos –R de la muestra. En derivado de Valina. Y también coinciden
    esta etapa se desprotona el grupo COOH- con los valores de Rf calculados. Notamos
    terminal y el DNFB se une al grupo amino la mancha de Fenilalanina pero esta no
    terminal, liberando HF. coincidió con al del problema .No se
    observó las manchas de DNP-Ala debido a
    2) Al agregar las 12 gotas de HCl se logró que
    que el pH bajara a uno más acido con el fin
    de protonar el grupo COO- y evitar que el
    Conclusión.

    El aminoácido terminal de la hemoglobina 2. PRATT, Charlotte; Voet Donald; [et.


    humana es la L-Val . Con este método al.]. 2009. Fundamentos de
    obtuvimos buenos resultados Bioquímica. La vida a nivel
    molecular. 2a ed. Medica
    Preguntas extras. Panamericana. España. 109 – 110
    pp.
    1. ¿Cómo se une la L-His al DNFB?
    El DNFB se combina con la
    histidina liberándose ácido
    fluorhídrico y se forma un
    dinitrofenilaminoácido.

    2. ¿Qué es el método de Edman ?


    Es un método de degradación para
    la identificación de aminoácidos N-
    terminales.
    Se produce un feniltiocarbanil
    derivado del aminoácido, que se
    cicla en medio ácido débil o por
    acción del calor. El
    feniltiohidantoin-aminoácido
    producido es característico de
    aminoácido, ya que su naturaleza
    depende del grupo R.

    Bibliografía

    1. GARRIDO Pertierra, Armando;


    Teijon R. José M; [et. al.]. 2006.
    Fundamentos de Bioquímica
    Estructural. 2a ed. Tebar. España.
    67 – 68 pp.

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