Practica de laboratorio N°2

MICROSCOPÌA

AUTORES:

Ivón Galvis Verbel

Código: 2019117027
Valeria Lozano Castañeda
Código: 2019117077

Docente:
Juan Diego Rios Diez

Programa de pregrado en Ingeniería Ambiental y Sanitaria

Código SNIES: 11221

Universidad del Magdalena

Facultad de ingeniería
Santa Marta, Magdalena
26/02/2019
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 RESUMEN

En este laboratorio se toma como método de aprendizaje práctico el uso correcto del microscopio el

cual es una herramienta óptica que nos permite observar elementos de tamaño pequeño que a simple vista

no percibe el ojo humano y utilizando las diferentes medidas de enfoque nos mostrará una descripción

detallada de las muestras que trabajamos, las cuales son una letra pequeña (a), fibras de algodón, hiló,

cabello humano y 5mm de hoja milimetrada.

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 INTRODUCCION

La mejor forma de aprender es haciendo y llevando a la práctica los conocimientos teóricos de manera

que pueda enriquecer y fortalecer las experiencias. El ser humano posee el sentido de la vista desarrollo

sin embargo, no se pueden ver a simple vista cosas que midan menos de una décima de milímetro por

ello desde las civilizaciones antiguas surgió la necesidad de observar objetos con aumento por lo que

aflora el ingenio y las nuevas ideas en personas que marcan la historia del nacimiento del microscopio,

que en la actualidad desempeña un papel fundamental en el desarrollo científico.

El microscopio es un instrumento óptico compuesto indispensable en el laboratorio, que genera imágenes

ampliadas debido a un haz de luz que atraviesa la muestra e ilumina el campo de observación , además

de este tipo de microscopio existen con diferentes mecanismos de funcionamiento como son el de luz

transmitida, de campo oscuro, de contraste de fases y de luz polarizada, por lo tanto es de gran

importancia diferenciar los tipos de microscopios, para así conocer la utilidad y funcionamiento de los

mismos a trabajar, los diversos campos de visión y las partes que lo conforman pero aún más importante

es saber manejarlo adecuadamente en el momento oportuno, teniendo en cuenta las medidas de

precaución que él requiere puesto que una mala manipulación afecta al instrumento además del éxito de

la práctica.

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 OBJETIVOS:

 Conocer las diferentes partes del microscopio compuesto y sus respectivas funciones.

 Conocer los principios básicos de la microscopia.

 Familiarizar al estudiante con el microscopio mediante el manejo de montajes sencillos.

MARCO TEÓRICO:

1. MICROSCOPIA

El microscopio es un instrumento que posibilita una mejor visibilidad de estructuras celulares de menor

tamaño, obteniendo una imagen aumentada de los mismos. La microscopía es la ciencia encarga de la

investigación, la construcción y el empleo de estos instrumentos. La etimología de la palabra microscopio

proviene del griego “micro” que significa pequeño y “scopio” aparato para ver u observar. Robert Hooke

en 1665 describe por primera vez la célula, al observar un trozo de corcho con un microscopio fabricado

por el mismo y Antony Van Leeuwenhoek el primero que observa células vivas a través de este método.

Depende de las características, y categorías podemos encontrar diferentes categorías de microscopios,

depende de las necesidades a desarrollar en el laboratorio; algunos de ellos pueden ser, el microscopio

de contraste de fase, el microscopio invertido, el microscopio estereoscópico, microscopio electrónico

de barrido, microscopio simple, complejo etc. (Serrano, 2016)

·
 Microscopio compuesto:

Sistema óptico:

Responsable del aumento y reproducción de la imagen mediante el sistema de lentes.

Incluye una óptica de iluminación que ayuda a dirigir la luz natural o artificial hacia la muestra

y una óptica de reproducción que está contribuida por dos sistemas de lentes.

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  Oculares: un par de lentes, ocular y de campo, que ayudan al aumento de la imagen real

proyectada por el objetivos (aumento de las imágenes de las muestras, no descomponen

la luz, son acromáticos, y son los más cercanos a la muestra).

 Los objetivos se pueden ser secos (no se coloca ninguno sustancia entre ellos y tiene un

aumento débil o mediano, que va de 4x, 10x, 40x) y de inmersión (si debe colocar entre

la muestra y ellos un aceite de cedra para una mayor proyección, aumento de 100x).

Óptica de iluminación, este sistema tiene como finalidad dirigir la luz natural o artificial de tal manera

que ilumine la preparación u objeto que se va a observar en el microscopio de la manera adecuada.

Comprende los siguientes elementos:

Tabla 1 : Sistema óptico: Óptica de iluminación

Parte Función
Lámpara Provee la luz al sistema
Recibe los rayos de luminosidad y los
refleja hacia el condensador, suelen tener
Espejo dos caras: una cóncava y otra plana, y
encuentran principalmente en los
microscopios modernos
Está formado por un sistema de lentes,
cuya finalidad es concentrar los rayos
Condensador luminosos sobre el plano de la preparación,
formando un cono de luz con el mismo
ángulo que el del campo del objetivo.
Regula la cantidad de luz, ajustando la
Diafragma necesaria para la muestra, está acoplado al
condensador.

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Sistema mecánico

El elemento de este sistema sostiene las partes de los otros dos sistemas (óptico y de

iluminación), además, permite el desplazamiento necesario para el enfoque ideal de la muestra,

está compuesto por:

Tabla 2: Sistema mecánico

Parte Función
Constituye la base sobre la que se apoya el
Tubo
microscopio
Es una pieza giratoria que soporta los
Revolver o tambor
diferentes objetivos del microscopio.
elemento que para sujetar el aparato de
Brazo manera adecuada al momento de ser
transportado
Es una pieza metálica plana en la que se
Platina
coloca la preparación o muestra.
Base o pie Da la estabilidad al microscopio.
Es un dispositivo que consta de dos
tornillos y está colocado sobre la platina,
Carro que permite deslizar la preparación con
movimiento ortogonal de adelante hacia
atrás y de derecha a izquierda.
Permite que la platina ascienda o descienda
Tornillo Macrométrico cuando se gira, ayuda hacer un enfoque
rápido de la muestra
Nos permite un enfoque preciso y mejor
nitidez de la imagen. Lleva acoplado un
Tornillo Micrométrico
tambor graduado en divisiones de 0,001
mm.
Sirve para graduar la iluminación del
Tornillo condensador
campo microscópico.

(Solomon, E. Biología; 2008.p. 76-77.)

(Serrano, 2016ª)

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 METODOLOGÍA:

Para el laboratorio de microscopía, primero se identificamos las partes del microscopio y se aprendió a

usar cada una de ellas. Para después utilizarlo correctamente en la observación de diferentes

muestras que fueron letra “a” o “e”, fibras de algodón, cabello humano, hilo de color rojo, amarillo y

azul y hoja milimetrada, tomando una cantidad diminuta de cada una. Una vez ya conocido las partes se

prepara el montaje o preparación del material, para mayor claridad siga el procedimiento descrito en el

siguiente esquema.

Tabla 3: Técnica de preparación para montaje.

45°

(1) (2) (3)

(1)Coloque una diminuta muestra de la muestra del material que se va a observar sobre un portaobjetos

limpio.

(2)Adiciono un gota de agua (4x, 10x y 40x) y aceite de inmersión (100x).

(3)Cúbralo con un portaobjetos formando un ángulo de 45° respecto a la lámina portaobjetos.

Ya teniendo la muestra listas coloque el portaobjeto sobre la platina, sujételo con la pinza y centre la

presentación, ubicar el objetivo de menor aumento (4x), acerque la plantilla lentamente hasta poder

visualizar la preparación a través de los oculares con ayuda del tornillo macrométrico, mediante leves

giros del tornillo micrométrico haga un enfoque preciso. Este mismo procediendo se tiene en cuenta para

observar con mayor detalle en los objetivos 10x y 40x, girando el revólver, siempre teniendo en cuenta

que se debe girar hacia el objetico de inmersión.

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 RESULTADOS:

PRACTICA: MICROSCOPIA

 IMÁGENES
Tabla 4: Muestras tomadas

Letra “a”

4x 10x 40x

Algodón

4x 10x 40x

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 Hilos (Amarill, Rojo y Azul)

4x 10x 40x

Cabello

4x 10x 40x

Hoja milimetrada

4x 10x

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  CALCULOS

Campo visual mediante la toma de la muestra del papel milimetrado, dando como resultado:

Tabla 5: Campo de visión

Campo de visión
4x 10x 40x 100x
4000 µ 1600 µ 400 µ 160 µ

(1) 1 𝑚𝑚 → 1000

4𝑚𝑚 → 𝑥

𝑥 = 4 𝑚𝑚 ∗ 1000 µ / 1𝑚𝑚𝑚 = 4000 µ

(2) Objetivo conocido (X) / 1 / Objetivo desconocido / Objetivo conocido

 4000 / 1 / 10x / 4x

= 4000 / 2,5 = 1600 µ

 4000 / 1 / 40x / 4x

= 4000 / 10 = 400 µ

 4000 / 1 / 100x / 4x

= 4000 / 25 = 160 µ

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 ANÁLISIS DE RESULTADO:

 De acuerdo a lo observado, nuestro microscopio que es el Microscopio óptico compuesto invierte

las imágenes, esto se debe a que posee los lentes objetivos convexos y la imagen que muestra es

bidimensional.

 Los objetivos que trabajamos fueron 4x la cual da una imagen 40 veces más grande, 10x que da

100 veces más grande y 40x da 400 veces más grande , y 100x que no utilizamos esta ves que

es da 1000 más grande la imagen.

 En algunas muestras se observaron unas burbujas esto se debe a que quedó oxígeno en la muestra

y no pusimos correctamente el cubreobjetos.

 La imagen que se ve a través de un microscopio compuesto se invierte al compararla con la

muestra que se está examinando.

 En el lente 4x y 10x el campo de visión permite observar los tres hilos y diferenciar los colores

de cada uno, además de poder identificar la posición.

Superior: Azul

Media: Rojo

Inferior: Amarillo

 Al observar la muestras en el enfoqué 40x el campo de visión es muy pequeño y no nos deja

visualizar, ya que la toma de la muestra por ver es visible por fuera del microscopio.

 El método utilizado para estas muestras fue el SQUASH, consiste en la disgregación de la muestra

mediante el aplastamiento del material entre el portaobjetos y el cubreobjetos y este consta de 4

pasos.

 Valores obtenidos por el procedimiento de la hoja milimetrada es el campo de vidicón en unidades

de micras.

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 CONCLUSIONES:

 Se logró observar efectivamente con la ayuda del microscopio óptico compuesto las diferentes

muestras con un detalle superior a lo percibido por el ojo humano.

 Por medio de la práctica de observación de las distintas muestras se pudo aprender a usar los

mecanismos del microscopio para posteriormente aplicar los conocimientos en nuevos

laboratorios.

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 PREGUNTAS ADICIONALES:

1. Por medio de un dibujo esquemático indique las diferentes partes del microscopio.

Tabla 6: Microscopia y sus partes

2. ¿Qué tipo de imagen da el microscopio compuesto?

El funcionamiento de un microscopio compuesto está basado en dos lentes. La lente situada cerca de la

muestra y que proporciona el aumento de la muestra se conocen como objetivos, el ocular son los lentes

(uno ocular y otro de campo) que se encarga de aumentar la imagen proyectada por el objetivo y eliminar

defectos, con los que observamos la muestra con el ojo.

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El objeto se coloca a una distancia ligeramente mayor que el foco del objetivo, lo que proporciona una

imagen real e invertida. Esta imagen se debe formar a una distancia del ocular, menor que la distancia

focal del mismo. En estas condiciones, la nueva imagen que se forma es virtual y derecha.

Con relación al objeto que se examina, la imagen que forma el microscopio compuesto es virtual,

invertida y amplificada dependiendo el objetivo de visión. (Crovetto, 2016)

3. ¿En qué forma observó usted la letra “e” o “a”?

La mayoría de los microscopios compuestos contienen un sistema de iluminación integrado en la base

del microscopio. La luz generada por la lámpara en el sistema de iluminación pasa a través de un filtro

azul y se recoge en el condensador de platina inferior del microscopio, que es el panel de fondo plano en

la parte inferior de un microscopio.

El condensador de platina inferior enfoca la luz sobre el objeto a ser vista, y la imagen es transmitida a

la lente del objetivo (la lente más cercana a la muestra). Debido a que la lente del objetivo es una lente

positiva, se invierte la imagen antes de que lo proyecta a la lente ocular (la lente más cercana al ojo), es

por eso que observamos la letra “a” inversa. (Crovetto, 2016ª)

4. ¿En qué dirección se mueve la letra “e” cuando usted mueve el carro hacia la

derecha, la izquierda, hacia arriba, hacia adentro?

El lente objetivo de un microscopio compuesto tiene una corta longitud focal. Después de que la luz

pasó a través de la lente ocular esté actúa como un aumentador sencillo y alarga la imagen creada por el

lente objetivo como resultado la imagen que se ve a través de un microscopio compuesto se invierte al

compararla con la muestra que se está examinando.

La inversión de una imagen bajo un microscopio compuesto puede demostrarse observando la versión

impresa de la letra “e” bajo al microscopio la imagen estará invertida debido a que el lente objetivo es

convexo. Por ello, al momento de hacer un movimiento con el carro la imagen será opuesta al mismo

movimiento hecho. Cuando se observa la muestra corrida hacia a la derecha se ve un movimiento hacia

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la izquierda y viceversa y cuando se mueve el carro hacia arriba se percibe la muestra hacia adentro y

ocurre de igual manera cuando se direcciona hacia adentro. Los movimientos de oponen a las

direcciones.

5. ¿Cuál aumento le da su microscopio con el objetivo de menor aumento? ¿Con mayor

aumentó?

El aumento de un microscopio es una de sus características esenciales que define su calidad y el tipo de

muestras que se podrían observar. Los microscopios ópticos tienen 2 sistemas de lentes: objetivo y ocular,

para calcular el aumento total proporcionado por cada tipo de lente objetivo (4x, 10x, 40x, 100x) se

multiplica la magnificación que produce el objetivo por la que produce el ocular. (Serrano, 2016b)

Tabla 7: Aumento total

Objetivo Ocular Aumento total

4x 10x 40x

10x 10x 100x

40x 10x 400x

100x 10x 1000x

6. Señale los cuidados que deben tenerse en manejo del microscopio

 Protegerlo de la humedad, el polvo y vapores corrosivos.

 Mantener limpios los objetivos y oculares, evitar los, limpiarlos solo exteriormente. Eliminar los

restos del aceite de inmersión con solvente y un paño suave o papel de arroz.

 La limpieza profunda (mantenimiento) debe ser realizada por un técnico.

 No raye las lentes, bajar tornillos con cuidado para avisar roce.

 Cuando tengas que trasladarlo sujetarlo fuertemente por el brazo y la base.

 Al terminar la práctica. Desconéctelo, enrolle el cable en la base y cúbralo.

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  No jalar el cable, desconectar de raíz.

 Dejar los objetivos en su ubicación, el 4x en el centro.

7. Establezca diferencias entre microscopio compuesto y el microscopio electrónico y

el esteromicroscopio.

En el microscopio compuesto la muestra es iluminada mediante luz visible (sistema óptico).Esto significa

que existe un foco de luz apuntando hacia la muestra. Esa misma luz es conducida a través del objetivo

y del ocular hasta llegar a formar la imagen en el ojo del observador. Este es el tipo de microscopio más

habitual pero su resolución está limitada por la difracción de la luz. El aumento máximo que se puede

obtener con este tipo de microscopio alcanza alrededor de 1500x. En el microscopio electrónico la

muestra no es iluminada con luz sino que se utilizan electrones. Los electrones impactan contra la muestra

dentro de una cámara de vacío. Existen diferentes tipos de microscopio electrónico pero su principio de

funcionamiento se basa siempre en capturar los electrones dispersados u omitidos por la muestra y así

poder reconstruir una imagen. También conocido como microscopio petrográfico. Este microscopio es

en realidad un tipo de microscopio óptico al que se la han añadido dos polarizadores. Esto significa que

la onda de luz utilizada para observar la muestra tiene una dirección de oscilación concreta. Este tipo de

microscopio es muy útil para observar estructuras cristalinas de rocas y minerales. El estéreo-

microscopio o también conocido como microscopio de disección es empleado cuando se quiere ver una

imagen en tercera dimensión. La muestra analizar se observa atravesó de dos lentes que enfocan dos

posiciones diferentes para así cada ojo observe una imagen diferente y nítidas dando una percepción de

profundidad. Este microscopio es ideal para gemología, grabado de metales, museos, industria

electrónica y de semiconductores, investigación. También se emplea en microbiología que requiere baja

generación de calor (Adendorf, 2012). En conclusión, los diferentes modelos de microscopios se dan

por los lentes y la intensidad lumínica en mucho de los casos. (Solomon, 1996)

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 8. Historia del microscopio

Las primeras lentes fueron fabricadas por civilizaciones antiguas como el imperio asirio alrededor del

año 750 a.c. que aparte de permitir observar objetos con aumento, también los utilizaban para concentrar

los rayos de luz en un punto y hacer fuego, su poder de aumento era limitado por lo que el verdadero

desarrollo en la óptica empezó en el año 1300 cuando se emplearon lentes sencillas como lupas o gafas,

que son un tipo de microscopio simple, sin embargo, pasaron 300 años antes de que se combinaban 2 de

esas lentes para crear el microscopio compuesto, artefacto inventado en 1590 por Hans y Zacarías

Janssen de Middelburg Holanda, que era un tubo de 45 cm de largo y 5 cm de diámetro, sin soporte y

solo podía emplearse con luz reflejada y su aumento variaba entre 3x y 9x dependiendo la distancia entre

las lentes.

En 1609, Galileo Galilei ayudó a popularizar este instrumento modificando uno de sus telescopios con

una lente cóncava y otra convexa y en 1619 Cornelius Drebbel presentó su diseño de microscopio con

dos lentes convexos. El cualquiera de los casos no fue sino hasta 1625 que Giovanni Faber colega de

Galilei acuñó el término microscopio a este nuevo invento.

Pero hasta la publicación en 1665 del libro Micrographia de Robert Hooke fue que empezaron los

científicos a concientizarse del potencial del microscopio, el libro presentó ilustraciones de las

observaciones realizadas hasta con un aumento de 50x y el aporte más significativo fue describir las

estructuras que observó en una muestra de corcho como "célula". También introdujo la iluminación

mediante velas que es equivalente al foco utilizado actualmente.

Los incipientes resultados obtenidos por el microscopio compuesto motivó a Antonie Van Leeuwenhoek

a pasar más de 50 años trabajando en el microscopio y en 1676 descubrir nuevas técnicas de fabricación

de lentes con aumento de hasta 200x y los microscopios eran simples (de una sola lente) pero su técnica

de fabricación permitía obtener lentes de gran aumento, su contribución a la ciencia hizo que todavía hoy

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se le conozca cómo el padre de la microbiología. Durante los 2 primeros siglos de existencia los

microscopios compuestos estaban severamente limitados por las aberraciones ópticas que aparecen

debido a características no ideales de las lentes y a la naturaleza de la luz que hacía perder la nitidez en

las imágenes. Las dos aberraciones más relevantes eran las aberraciones cromáticas y esféricas por lo

que en 1730 el inventor Chester Moore Hall. Encontró una combinación de lentes que corregía

significativamente la aberración cromática, un siglo después Joseph Jackson Lister perfeccionó la idea

de Moore para corregir la aberración esférica variando la distancia entre lentes, gracias a sus aportes se

convirtió al microscopio en un instrumento fiable para la investigación científica.

Fue en Inglaterra y Alemania que debido a la producción y comercialización de microscopios se

produjeron las innovaciones más importantes. En 1776 el británico Jeremiah Sisson construyó el primer

revólver que permitía cambiar el objetivo con el que se observaba la muestra. En 1846 el físico Ernst

Abbe sentó las bases para la teoría de la óptica moderna que permitió sistematizar la construcción de

microscopios, además, demostró que la resolución del microscopio óptico es proporcional a la longitud

de onda de la luz y así calcular la mínima distancia que puede distinguirse en un microscopio óptico es

aproximadamente 0.25 micrómetros, por lo que para distinguir distancias menores es necesario iluminar

la muestra con señales de baja longitud de onda con rayos ( uv, x, e incluso electrones). El avance más

significativo del siglo xx fue el microscopio electrónico que ilumina la muestra con un haz de electrones

, construido por primera vez en 1931 por el físico Ernst Ruska e Ing. Electrónico Max Knoll cuya

resolución superaba al microscopio óptico ya que la longitud de onda puede ser 100000 más pequeña

que la de la luz. Otros desarrollos importantes se relacionan con la forma de iluminar las muestras ópticas,

que es lugar a microscopios de contraste de fases, interferencia diferencial y de fluorescencia. (QUO,

2015) (Biografía, 2017)

18
 9. Porque se debe usar agua o aceite de inmersión para observar en el microscopio de

luz.

Los objetivos, este sistema de lentes produce el aumento de las imágenes de las preparaciones, son

acromáticos, es decir, no descomponen la luz. Esta hace que necesitemos agregar alguna sustancia para

crear una difracción, en el caso de los lentes 4x, 10x y 40x podemos utilizar una gota de agua. Pero en

los objetivos de mayor aumento, tienen una distancia focal muy pequeña y además la primera lente del

objetivo es de pequeño diámetro. Los rayos que desde la muestra se dirigen al objetivo atraviesan el

vidrio del cubreobjeto y al pasar al aire se separan de la normal. Algunos rayos incluso sufren reflexión

total en la interface vidrio-aire. Solo llega al microscopio una pequeña parte de la luz que parte de la

muestra, con el problema que conlleva para la visión. Al intercalar, entre el objetivo y el cubreobjeto una

gota de aceite de cedro, de índice de refracción casi igual al vidrio, los rayos emergentes ya no se apartan

de la normal, sino que continúan su camino sin desviación, consiguiendo así que una mayor cantidad de

luz llegue al objetivo, mejorando notablemente la visión. (Quintero, 2018)

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 BIBLIOGRAFÍA:

Adendorf, 2012. Adendorf Representaciones. [En línea]

Available at: http://www.adendorf.net/estereo-microscopio-para-laboratorio-p-684.html
[Último acceso: 24 Febrero 2019].

Biografía, H. y., 2017. historia-biografia.com. [En línea]

Available at: https://historia-biografia.com/historia-del-microscopio/
[Último acceso: 25 Febrero 2019].

Crovetto, G., 2016. Colección de Instrumentos Científicos. [En línea]

Available at: https://sites.google.com/site/coleccionguillermocrovetto/home/miscelnea/formacin-de-la-
imagen-en-un-microscopio-compuesto
[Último acceso: 25 Febrero 2019].

Quintero, D., 2018. Microscopia y division celular , Floridablanca : Universidad Santo Tomas .

QUO, R., 2015. QUO. [En línea]

Available at: https://www.quo.es/tecnologia/a44589/breve-historia-del-microscopio/
[Último acceso: 25 Febrero 2019].

Serrano, A. L., 2016. Manual de practicas de biologia. Bucaramanga: Universidad Santo Tomas.

Solomon, E., 1996. Biología. 3era ed. Mexico: Interamericana, Mc Gra– Hill.

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