Biotecnologia Vegetal

IV SIMPOSIO NACIONAL DE BIOTECNOLOGÍA VEGETAL
REDBIO ARGENTINA´99
11 Y 12 DE NOVIEMBRE DE 1999.
Biblioteca Nacional – Auditorio Jorge Luis Borges

Ciudad Autónoma de Buenos Aires
El Comité Organizador del IV Simposio Nacional de
Biotecnología Vegetal, REDBIO Argentina ´99, agradece
profundamente la desinteresada colaboración de:
Secretaría de Ciencia y Técnica de la Nación.
Asociación Semilleros Argentinos, Asociación Civil.
FAO/REDBIO
CANBIOTECH, Canadá
NIDERA S.A.
Universidad Nacional de Quilmes (UNQ)
Biosidus
Foro Argentino de Biotecnología (FAB)
Sin su patrocinio esta reunión no hubiera podido

concretarse.
COLABORADORES
El Comité Organizador agradece la ayuda

brindada por los Ings. Agrs.: Victor Beltrán y Carlos
Vera Bravo de la EEA INTA Bella Vista (Corrientes) y
de:
Cantore, Damián
Castroagudín, Vanina
Commessatti, Lorena
González, Alejandro
Piñeiro, Sandra
Ponde de León, Juan
Ramirez, Viviana
Rodríguez, Marcos
Sacco, Natalia
Soria, Verónica
Uz, Viviana
Alumnos de la Diplomatura en Ciencia y Tecnología de la

UNIVERSIDAD NACIONAL DE QUILMES
IV SIMPOSIO NACIONAL DE BIOTECNOLOGIA VEGETAL
REDBIO ARGENTINA – 99
11 y 12 de Noviembre
Auditorio Jorge Luis Borges, Biblioteca Nacional,
Agüero 2502, Ciudad Autónoma de Buenos Aires
REDBIO
ARGENTINA
Comité Organizador
Alicia Diamante (EEA Bella Vista-INTA, Corrientes)

Graciela Salerno (FIBA, Mar del Plata)
Sandra Sharry (CeProVe, UNLP, La Plata)
Ana María Giulietti (Cát. Biotecnología, FFyB, UBA)
Alejandro Escandón (IB, CNIA -INTA)
Horacio Esteban Hopp (IB, CNIA -INTA y FCEyN, UBA)
Alberto Acevedo (IRB, CIRN-INTA y Depto. Ciencia y Tecnología, UNQ)
Programa
Jueves 11
8,00 - 10,00 Acreditación
Colocación de Pósters
10,30 - 11,30 Sesión Inaugural
"Actividades de los laboratorios de la RED Argentina".
Ing. Agr. Alicia Diamante, Coordinadora Nacional de REDBIO
Apertura de simposio
Dr. Alberto Díaz (UNQ)
Conferencia
"Rol crítico de la biotecnología en el mejoramiento de cultivos
alimenticios. Perspectivas para el próximo milenio. La visión de la
FAO"
Dr. Juan Izquierdo (FAO-RLCA)
11,30 - 11,45 Café

11,45 - 13,00 Visita a Pósters
13,00 - 14,00 Almuerzo
SESION I - CULTIVO DE TEJIDOS Y METABOLITOS SECUNDARIOS
14,00 – 14,30 Conferencia:

”Micropropagación comercial: factores que la afectan”.
Ing. Agr. Daniel Moriconi (BIOSIDUS)
14,30 - 15,00 Estado actual del tema a nivel Nacional
Análisis de los trabajos presentados (pósters)
Ing. Agr. Hebe Rey
Dra. Ana María Giulietti
Coordinador: Ing. Agr. Luis Mroginski
15,00 - 15,30 Discusión general
15.30 - 15,45 Café
SESION II - HERRAMIENTAS Y PERSPECTIVAS DE LA BIOLOGIA MOLECULAR

EN EL MEJORAMIENTO VEGETAL
PLANTAS TRANSGENICAS
15,45 – 16.30 Conferencia:

"Sustentabilidad, Desarrollo y Plantas Transgénicas"
Dr. Elibio Rech (CENARGEN-EMBRAPA, Brasil)
16,30 – 17,00 "Manejo de insectos en cultivos transgénicos"
Ing. Agr. Juan Kiekebuch (ASA)
Ing. Agr. Martín Reggiardo
Coordinador: Dr. Alejandro Escandón
18,00 - 19,30 Reunión Nacional de REDBIO
21,00 Cena de Camaradería.
Viernes 12 (Continuación Sesión II)
MARCADORES MOLECULARES
9,00 - 9,45 Conferencia

“Aplicación de Marcadores Moleculares AFLP. Avances en la
Viticultura Molecular”
Dra. María Teresa Cervera (INIA Madrid, España)
Dr. Ricardo Mazuelli
Dr. Dario Bernacchi
Coordinadora: Dra. Graciela Salerno
11,00 - 11,15 Café
PERSPECTIVAS EN EL MEJORAMIENTO DEL RINDE Y LA SANIDAD
11,15 - 11,45 Conferencias:

"Señales moleculares en la asociación simbiótica entre
Rhizobium y leguminosas"
Dr. Mario Aguilar
11,45 - 12,15 "Pasado y presente de las investigaciones relacionadas con roya de
la hoja del trigo en el Instituto de Genética del INTA Castelar"
Ing. Francisco Sacco
Coordinador: Dr. Alberto Acevedo
12,30 - 14,00 Almuerzo
SESION III - BIOSEGURIDAD Y PERCEPCION PUBLICA
14,00 - 14,30 Conferencia:

"Bioseguridad de CultivosTransgénicos"
Dra. M. Kenny Directora Asociada, Canadian Food Inspection
Agency (CFIA-Ottawa)
14,30 - 14,45 Preguntas y discusión
14,45 – 15,15 Conferencia:
"Percepción Pública sobre la Biotecnología moderna"
Mr. Rick Walter Presidente, BCG Life Sciences Inc. (Ottawa)
15,15 - 15,30 Preguntas y discusión
Coordinador: Dr. Burachik
15,30 - 15,45 Café
SESION IV - OPORTUNIDADES DE COOPERACION Y FINANCIAMIENTO
15,45 - 16,05 Dr. Mario Parisi FONCyT

16,05 – 16,25 Ing. Carlos León - FONTAR
“Oportunidades económicas para el desarrollo de la biotecnología
en la región”
16,25 – 16,45 Ing. Agr. MSc. Daniel Pagliano (INIA Uruguay)
Coordinador: Dr. Juan Dellacha
16,45- 17,10 Preguntas y discusión
17,15- 17,30 Cierre.
La inscripción se abonará en el hall del auditorio el costo es de:

Particulares: $200. Investigadores: $50,00. Estudiantes: $10,00.
REDBIO 99
ARGENTINA
La humanidad enfrenta en la actualidad una extensa variedad de amenazas como

ser: el deterioro ambiental, el crecimiento de la población mundial, la necesidad de producir
mas alimentos y la superficie cultivable que ya prácticamente alcanzó su techo.
La biotecnología, con los primeros aportes de mayor productividad agrícola a menor

costo y menos contaminación ambiental, plantea dudas a los ecologistas y se ponen serias
objeciones a esta fértil herramienta del conocimiento. El problema principal surge tal vez
por el desconocimiento que existe sobre las bondades o consecuencias de su aplicación.
Sin descartar objeciones y preocupaciones serias, se debe continuar y avanzar en el

conocimiento sabiendo que la naturaleza siempre estuvo generando plantas transgécnicas,
que los genetistas siempre transfirieron no solo un gen sino “paquetes de genes” al obtener
variedades más productivas y resistentes a enfermedades y plagas. Sería un grave error
ignorar su aplicación y no evaluar sus consecuencias mediante un riguroso análisis de
costos y beneficios.
El objetivo general de la Red de Cooperación Técnica de Biotecnología Vegetal –

REDBIO es el de desarrollar mecanismos de concertación y promoción del conocimiento
para la aplicación de la Biotecnología Vegetal a la solución de problemas productivos que
afectan a la agricultura de América Latina y el Caribe.
REDBIO Argentina, hoy concreta uno de sus más caros anhelos, que es el de
fortalecer la RED de laboratorios de BIOTECNOLOGIA VEGETAL y dar continuidad a
aquellas primeras y exitosas reuniones iniciadas en el año 1991, lo que se cristaliza en este
IV SIMPOSIO NACIONAL DE BIOTECNOLOGIA VEGETAL REDBIO-99.
Finalmente esta Coordinación desea manifestar su agradecimiento al grupo de

colaboradores que hicieron posible la realización de este evento.
Alicia Diamante
Coordinadora Argentina de REDBIO
Sección I
Cultivo de Tejidos
00
ACTIVIDADES EN EL LABORATORIO DE CULTIVOS IN-VITRO EN LA EEA INTA BALCARCE
Susana Rigato y Marcelo Huarte
Laboratorio de Cultivos In-Vitro:
Se realiza el saneamiento, la introducción y el mantenimiento in-vitro de cultivares de papa. En

la eliminación de virosis se aplican técnicas de termoterapia, quimioterapia y cultivos de
meristemas. Se mantienen in-vitro colecciones de materiales sanos de interés para mejoramiento
e investigación y de variedades comerciales.
Se trabaja en micropropagación a gran escala para producción de semilla pre-básica de papa de

alta sanidad. Se inició el desarrollo de un nuevo sistema de producción de plántulas donde se
combinan técnicas de micropropagación e hidroponía.
0
ESTIMULACION DE LA REGENERACION DE PLANTAS POR PRODUCTOS
EXTRACELULARES CIANOBACTERIANOS – Proyecto UBACYT TX79.
María Cristina Zaccaro, Gloria Zulpa, Mónica Storni, **Marta Divo de Sesar y ***Ana María Stella.
Laboratorio de Fisiología Vegetal y Biología de Cianobacterias, FCEyN. **Cátedra de Producción

Vegetal, Facultad de Agronomía, UBA. ***Centro de Investigaciones sobre Porfirinas y Porfirias (
CIPYP) – CONICET y FCEyN, UBA. E-mail: cyanob@bg.fcen.uba.ar.
La regeneración eficiente de plantas a partir de callos de arroz ha sido ampliamente

registrada. Extractos de diferentes cianobacterias promueven la embriogénesis somática en
cultivos de tejidos de zanahoria y sándalo. La influencia de exometabolitos cianobacterianos en la
capacidad morfogenética de callos de arroz está poco estudiada.
Se estudian los efectos de productos extracelulares (PE) de Microchaete tenera nº 14 b
(Cyanobacteria), aislada de arrozales de Argentina, sobre la regeneración de plantas de Oryza
sativa var. Yeruá, de uso comercial, a partir de callos embriogénicos.
Callos de 30 días, obtenidos a partir de embriones maduros en medio MS adicionado con 3
mg/L de 2-4 D, se cultivan en MS suplementado con: 1) 0.05 mg/L de ANA y 0.25 mg/L de BAP, 2)
5 ml de PE de un cultivo de 14b en fase estacionaria y 3) 5 ml de PE de 14b, 0.05 mg/L de ANA y
2
0.25 mg/L de BAP, con una intensidad luminosa de 45 µE/ m / s, fotoperíodo 16:8 y 26± 1 º C. Se
toman fotografías a la lupa de las plantas regeneradas y se realizan cortes histológicos a fin de
corroborar la naturaleza bipolar correspondiente a los embriones somáticos.
A los 20 días se observó la inducción de embriones somáticos en los callos tratados con
los PE según el tratamiento 2; y desarrollo de raíces en los otros tratamientos: 1 y 3, siendo mayor
el número de raíces en el tratamiento combinado (3).
Los exometabolitos cianobacterianos podrían reemplazar el uso de reguladores del
crecimiento sintéticos para la obtención de embriones somáticos a partir de callos de arroz.
1
ESTABLECIMIENTO DE SUSPENSIONES CELULARES DE AJO (Allium sativum)
Silvia Cabral, Pablo Zaltz, Alejandro Mentaberry. (INGEBI-CONICET).
El presente trabajo se realiza en el marco del proyecto de transformación genética del ajo en el que
nuestro laboratorio está involucrado. El objetivo es disponer de una técnica eficiente y
reproducible para la introducción de genes en el ajo para poder de esa forma avanzar rápidamente
en su mejoramiento genético.
La electroporación de protoplastos aparece como una alternativa posible para lograr esto.
Trabajando con discos de diente de ajo colorado, se generaron callos en medio de Murashige-
Skoog suplementado con 2 mg/l de Cinetina; 1,5 mg/l de 2,4 D y 2 mg/l de AIA. Los discos de
diente fueron incubados a 25 C en oscuridad durante alrededor de 4 meses, con repiques a medio
fresco cada aproximadamente 45 días. Los callos obtenidos fueron utilizados para iniciar
suspensiones celulares colocando alrededor de 1gr de tejido en Erlenmeyers de 125 ml
conteniendo medio MS líquido suplementado con 3 concentraciones diferentes de 2,4 D: 0.2 mg/l;
0.5 mg/l y 1mg/l, así como MS líquido + Cinetina 2 mg/l+ 2,4D 1,5 mg/l + AIA 2 mg/l. En todos
los casos los Erlenmeyers fueron incubados a 25C, en oscuridad y a 110 RPM en un shaker
rotatorio. La evolución de los cultivos fue seguida por observación en microscopio de fluorescencia
de muestras teñidas con FDA. Solamente en el caso de los callos incubados con 2,4D a una
concentración de 1mg/l fue posible obtener a partir de los 15 días de incubación una cantidad
suficiente de células viables como para intentar la obtención de protoplastos a partir de las mismas.
Resultados preliminares nos indican que es posible obtener protoplastos de ajo viables incubando
durante 4 hs las células en presencia de 0.01 gr de pectoliasa y 0.1 gr de celulasa . Si bien los
resultados no son todavía totalmente reproducibles ya estamos intentando poner a punto las
condiciones de electroporación utilizando el colorante calceína.
2
COMPORTAMIENTO “in vitro” DE UNA LINEA DE MAIZ (Zea mays) PORTADORA DE
UN SISTEMA DE LETALES BALANCEADOS.
Ciancio J.R., Robredo C.G., Rios R.D., Gomez M.C., Salerno J.C., Franzone P.M., Díaz
D.G.
Instituto de Genética “Ewald A. Favret” (IGEAF)-CICV y A-CNIA-INTA

C.C.25 (1712) Castelar.
El genotipo de maíz BLS1, desarrollado en el IGEAF, se caracteriza por presentar un

sistema de letales balanceados formado por un gen para pigmentación, que en condición
homocigota recesiva produce plantas de fenotipo amarillo que mueren al estado de 3-4
hojas y 1 gen letal gamético que actúa sobre el polen. Estos genes están estrechamente
ligados en repulsión y por autofecundación dicha línea produce, generación tras
generación, progenie formada por 50% de plantas de fenotipo amarillo y 50% de plantas
de fenotipo verde (normales) heterocigotas para ambos genes. Experimentos posteriores
mostraron que las plantas heterocigotas para los genes letales tenían mayor rendimiento
que las homocigotas verdes normales derivadas del sistema BLS por recombinación.
En el presente trabajo se determino el crecimiento “in vitro”de suspensiones celulares,
formadas a partir de callos individuales derivados de embriones inmaduros, de la linea
BLS1 que regeneraban plantas verdes o amarillas. Para establecer el orígen de los
materiales y de este modo descartar una posible contaminación con polen extraño, se
analizó una muestra aleatoria del material por la técnica de AFLP. El crecimiento in vitro se
analizó a través de la técnica de “Pack Cell Volume”. Se observó que las suspensiones
celulares derivadas de callos que regeneraban plantas amarillas, tuvieron un crecimiento
estadísticamente superior al de las suspensiones derivadas callos que regeneraban
plantas verdes. Este hecho indica que en el “segmento cromosómico amarillo” existe al
menos un gen que, al estado homocigota, otorga ventaja de crecimiento in vitro a nivel
celular.
3
APLICACIÓN DE RECURSOS BIOTECNOLÓGICOS AL MEJORAMIENTO DE LA CEBOLLA
(Allium cepa l.)
II. Estudio de algunas respuestas de defensa en la interacción cebolla-Phoma terrestris y

obtención de variantes con mayor tolerancia
(1)
Director: Curvetto, Néstor
(1) (1) (2) (2)
Integrantes: Zappacosta, Diego ; Marinangeli, Pablo ; Kiehr, Mirta ; Delhey, Rolf
(1)
Laboratorio de Fisiología Vegetal, Departamento de Agronomía, Universidad Nacional del Sur y
CERZOS CONICET, 8000 Bahía Blanca, Argentina
(2)
Laboratorio de Patología Vegetal, Departamento de Agronomía, Universidad Nacional del Sur,
8000 Bahía Blanca, Argentina
e-mail: ficurvet@criba.edu.ar
La cebolla (Allium cepa L.) es uno de los cultivos hortícolas más importantes en Argentina (30.000
ha), especialmente en el sur de la Pcia. de Buenos Aires (15000 ha) que incluye a la zona bajo
riego del Valle Inferior del Río Colorado. El aumento de la producción se ha encontrado con
algunas limitaciones, especialmente en lo relacionado con aspectos fitosanitarios debido a
enfermedades causadas por hongos del suelo (fusariosis, raíz rosada y carbonilla). La raíz rosada,
causada por el hongo Phoma terrestris Hansen, es una de las enfermedades de mayor incidencia
en el cultivo de la cebolla y es endémica de las zonas productoras de nuestro país.
El presente proyecto pretende seleccionar in vitro cebollas de mayor tolerancia a P. terrestris, con
la ayuda de marcadores bioquímicos (actividad peroxidasa y PAL, e isoformas quitinasas, 1,3-B-
glucanasas y peroxidasas), en presencia de una presión de selección (patógeno o sus
metabolitos), sustituyendo así el sistema tradicional de selección a campo donde se utilizan
plántulas e infección in vivo.
Con el objetivo de estudiar las eventuales respuestas de defensa en la interacción cebolla-P.
terrestris se han ensayado distintos sistemas, tanto in vivo (infección de raíces originadas de
bulbos), como in vitro. Los sistemas in vitro evaluados incluyen cultivos duales (hongo-callo) y el
uso de filtrados sobre callos y plántulas. Hemos demostrado que el crecimiento así como algunos
indicadores bioquímicos (actividad de peroxidasas, presencia de pigmentos) sufren modificaciones,
tanto en los sistemas in vivo como in vitro. Esto permitiría utilizar dichos sistemas como modelo
para estudios de patogénesis y reacciones de defensa o, eventualmente, para la selección de
genotipos resistentes.
4
PROPAGACIÓN CLONAL RÁPIDA (scaling up) DE VARIEDADES COMERCIALES DE
PLANTAS BULBOSAS (Lilium sp. y Allium sativum) Y UTILIZACIÓN DE TÉCNICAS
MOLECULARES PARA EL CONTROL DE LA IDENTIDAD GENÉTICA.
(1)
Director en Argentina: Curvetto, Néstor
(1)
Co-Director en Argentina: Marinangeli, Pablo
(2)
Director en Brasil: Sergeren, Monique
(1) (1) (1)
Integrantes: Luciani, Gabriela ; Delmastro, Silvia ; Mockel, Gabriela
(1) Laboratorio de Fisiología Vegetal, Departamento de Agronomía, Universidad Nacional del Sur
(LFV-DA-UNS), 8000 Bahía Blanca, Argentina.
(2)
(2) ProClone, Rua dos Girassóis nº 70, Caixa Postal157; CEP: 13.825-000, Holambra, San
Pablo, BrasilNuestro laboratorio trabaja desde hace varios años en sistemas de
micropropagación de especies bulbosas de interés económico (lilium, ajo, cebolla, narciso),
estableciendo y ajustando condiciones culturales como: medios de cultivo, temperatura,
luminosidad y tiempo. En Lilium, se estudiaron las técnicas existentes de micropropagación
por bulbificación directa y se ajustaron para optimizar la eficiencia de multiplicación
considerando también la etapa de rustificación. En una etapa posterior se estudiaron los
factores que afectan la inducción de callos y la regeneración por embriogénesis somática y
organogénesis indirecta. En ajo, se establecieron líneas saneadas de tres clones de ajo
colorado de importancia regional usando protocolos de termoterapia y cultivo de meristemas,
se ajustaron las condiciones de multiplicación in vitro y se establecieron protocolos de
bulbificación in vitro.El 40% de la producción florícola de Brasil se encuentra en Holambra,
San Pablo, donde se ubica el laboratorio comercial ProClone, con amplia experiencia en
micropropagación de especies ornamentales. Ha participado en programas de formación de
recursos humanos del Centro Nacional de Investigaciones de Brasil (RHAE-CNPq) y de
desarrollo de tecnología para la elaboración de protocolos y medios de cultivo para
micropropagación.El presente proyecto binacional propone desarrollar un sistema para
micropropagación eficiente y rápida de lilium y ajo empleando sistemas automatizados y
monitoreo de estabilidad genética con técnicas moleculares. Para su concreción, ProClone
será responsable de la coordinación de los procesos de automatización que lleven al scaling
up, involucrando e integrando empresas especializadas en fabricación de autoclaves,
sistemas filtrantes y proveedoras de innovaciones que integren los procesos en una propuesta
única e inédita. El LFV-DA-UNS desarrollará los protocolos y medios de cultivo para los
diferentes modelos y realizará el monitoreo de la estabilidad genética con métodos
isoenzimáticos, moleculares y citogenéticos.
5
BIOTECNICAS PARA EL MEJORAMIENTO GENETICO DE LOS CITRUS APLICADAS EN
LA EEA-INTA Bella Vista (Corrientes)
1 2 3
Alicia Diamante ; Héctor Zubrzycki y Carlos Vera Bravo .
1,2
Ings. Agrs. MSc. en Mejoramiento Genético,
3
Ing. Agrónomo
INTA Bella Vista CC 5 CP 3432 Bella Vista (Ctes) ArgentinaE-mail: intaexp@bvista.com.ar
Si bien existe gran variabilidad genética dentro del género cítrus y géneros relacionados, el
mejoramiento convencional a tenido poco éxito en el desarrollo de nuevas variedades para
copa y portainjerto.
La mayoría de las variedades que actualmente se encuentran en difusión comercial se
obtuvieron por mutaciones espontaneas, selección de las ya existentes y muy pocas por
hibridaciones e inducción de mutaciones.
Los cítricos tienen la ventaja de poder reproducirse a través de injertos, por ello obtener una
planta con características superiores es suficiente.
El uso de técnicas biotecnológicas permite sortear las barreras biológicas de los cítricos y
acelerar la solución de los problemas limitantes en sanidad y productividad. La EEA de INTA
Bella Vista, con éxito a aplicado, desarrollado y ajustado las siguientes técnicas:
Microinjerto de ápices caulinares in vitro: Para obtener plantas cítricas libres de virus y otros
patógenos. Para obtener plantas a partir de vástagos no enraizados en vitro.
Cultivo de óvulos: se emplea para inducir embriones nucelares libres de virus, para obtener
callos friables para suspensiones celulares, para el rescate de embriones en cruzamientos
interespecíficos y también para la inducción de poliembrionía en algunas especies.
Cultivo de nucelas: se emplea para la formación de embriones nucelares en variedades

monoembriónicas las que dan plantas libres de virus y constituyen una fuente excelente para
obtener callos embriogénicos.
Cultivo de anteras: para obtienen plantas haploides, las que se utilizan para estudios genéticos.
A través de esta técnica se obtienen plantas totalmente homocigotas, donde se pueden eliminar
todos los genes letales o indeseables.
Fusión de protoplastos: permite lograr híbridos somáticos interespecíficos o intergenéricos.

6
CULTIVO DE ANTERAS APLICADO AL MEJORAMIENTO DE TRIGO
DIRECTOR: Dra. Viviana Echenique e-mail: echeniq@criba.edu.ar
CODIRECTOR: Ing. Rubén Miranda
PARTICIPANTES: Ing. G. Aldao Humble, Lic. Pablo Polci y Srta. Verónica Conti.
Dpto. Agronomía (UNS). San Andrés 800 – 8000 Bahía Blanca
Asociación de Cooperativas Argentinas (ACA).
La producción de doble haploides representa un acortamiento del período total de producción y un

incremento de la eficiencia del proceso de selección sobre materiales con todos sus loci en
homocigosis. Fuera de lo informado por Ortiz y Mroginski (1991) no se han realizado estudios para
caracterizar variedades nacionales de trigo en función de su capacidad androgénica, ni se ha
intentado incorporar la técnica como herramienta complementaria en planes de mejoramiento, tal
vez debido a la falta de información concreta del potencial de respuesta de los genotipos utilizados
en los bloques de cruzamiento de las compañías mejoradoras de trigo.
El objetivo de este proyecto es poner a punto una técnica de cultivo de anteras para materiales del
Criadero de Cereales ACA y estimar la capacidad androgénica de las líneas parentales
intervinientes a fin de utilizar esta técnica en planes de mejoramiento.
Se utilizaron semillas de 17 filiales F3 segregantes del Criadero. Las F3 se seleccionaron en
función de los antecedentes de respuesta al cultivo de anteras de los padres involucrados en las
cruzas, siendo estos en su gran mayoría, líneas nacionales con antecesores introducidos
respondedores muy remotos en la genealogía. La selección más concreta fue la de las líneas 2186
y 2152, con Buck Ombú como padre y madre respectivamente, respondedor informado por Ortiz y
Mroginski (1991).
Las anteras se inocularon en diferentes medios de inducción y se cultivaron en oscuridad a 25°C
hasta la aparición de estructuras embriogénicas (45 días). Para la regeneración se aplicó un
fotoperíodo de 16 horas de luz y 8 horas de oscuridad, a 26°C.
Se lograron estructuras (embrioides) comparables a las documentadas en la bibliografía,
resultando significativamente superior el medio MN6mod líquido para este propósito. Los genotipos
Buck Ombu y F3 2103-5 regeneraron un 100% de plantas verdes. En cuanto a los materiales del
bloque de cruzamiento: CB-113 y Coop. Liquen produjeron 0,3% de plantas verdes. La alta
inducción registrada en dos de las tres filiales 2186-x hermanas de 2186-3 confirmó la hipótesis de
mayor probabilidad de éxito para materiales relacionados cuando uno de ellos presenta respuesta.
Los resultados sugieren mayor eficiencia del proceso induciendo con el medio NM6mod,
pretratando con frío, y chequeando previamente los materiales.
7
CULTIVO DE TEJIDOS PARA LA OBTENCION DE VARIANTES SOMACLONALES EN PASTO
LLORON
DIRECTOR: Dra. Viviana Echenique
PARTICIPANTES: Pablo A. Polci, Susana Cardone y Luís Mroginski

Depto. de Agronomía, UNS. San Andrés 800. Bahía Blanca, Argentina.
La variación en plantas obtenidas por cultivo in vitro es a menudo grande. Esta podría ser
generada por procesos mutagénicos durante la iniciación, mantenimiento de callos, y
diferenciación celular hasta la regeneración de plantas. Esta variabilidad puede ser epigenética o
heredable y podría utilizarse en especies apomícticas con fines de mejoramiento.
Con este proyecto se pretende ampliar la variabilidad dentro del complejo Eragrostis curvula,
fundamentalmente para cultivares de reproducción apomíctica obligada, estudiar la variación
obtenida a varios niveles: morfológico, citogenético, bioquímico y molecular y la trasmisibilidad a la
progenie.
Se obtuvieron plantas a partir de callos de inflorescencias utilizando MS suplementado con 2,4-D y
BA, de 3 cultivares apomícticos obligados (Tanganyika 2n=4x=40, Morpa 2n=4x=40 y Don Pablo
2n=7x=70) y uno facultativo, Kromdraai 2n=6x=60). Se tomó una planta como donadora de
explanto para cada cultivar que fue utilizada como control. Los cultivares de pasto llorón con
reproducción apomíctica obligada son muy uniformes. Se analizaron 155 plantas R0 y 702 R1 entre
los 4 cultivares. Para ambas generaciones se realizaron estudios de caracteres morfométricos
(largo y ancho foliar, pesos fresco y seco, número de panojas y peso total de semillas por planta)
que se analizaron por ANOVA, componentes principales y árboles de clasificación, isoenzimas
(índice de Shannon), cromosomas y RAPD’s.
El test de componentes principales permitió detectar variabilidad en R0 para los 4 cultivares
investigados. En R1 se compararon grupos de plantas, cada uno formado por 5 hijas de cada
planta R0. Los tests no evidenciaron variabilidad en caracteres morfométricos en cvs. Morpa y Don
Pablo. Para todas las variables las diferencias fueron altamente significativas en cvs. Tanganyika y
Kromdraai. La presencia de fenotipos intermedios, la altísima mortalidad de plántulas y los estudios
isoenzimáticos indicarían la ocurrencia de hibridación en el cv. Tanganyika.
No obstante la ausencia de variación significativa en caracteres morfométricos, algunas plantas de
los cultivares Morpa y Don Pablo mostraron cambios en isoenzimas y RAPD’s, y evidencia de
mosaicismo cromosómico. Los índices de Shannon para peroxidasas en R0 y R1 de los cvs.
apomícticos obligados fueron mayores a los correspondientes a sus poblaciones control (H=0),
alcanzando valores semejantes a los normales para el cv Kromdraai (H=0.79).
El método es válido para generar variabilidad llevando a cultivares apomícticos obligados a niveles
de variación similares a la de aquellos que exhiben un cierto grado de sexualidad.
Se continúa trabajando a fin de detectar posibles cambios en caracteres agronómicamente
deseables.
8
MÉTODOS BIOTECNOLÓGICOS APLICADOS AL MEJORAMIENTO DE SORGO FORRAJERO.
OBTENCIÓN DE SUSPENSIONES CELULARES EN Sorghum arundinaceum var sudanense Y
EN S. saccharatum var EL INCA.
PARTICIPANTES: Ing. Maria del Carmen Torroba, Lic. Pablo Polci

Facultad de Agronomía. UNLPampaDpto. Agronomía (UNS). San Andrés 800 – 8000 Bahía
Blanca.
Casi toda la llanura pampeana está sujeta a procesos erosivos, debido a la naturaleza de sus
suelos livianos y de los fuertes vientos que predominan especialmente en la primavera. En ésta
región, la alimentación del ganado está basada en pastizales naturales o cultivados tanto en los
campos de cría como en los de engorde. Los alfalfares y cultivos forrajeros de “estación” incluyen
cereales de pastoreo, sorgos forrajeros y graníferos y maíces forrajeros.
Por lo expuesto, sería deseable lograr cultivos forrajeros que provean calidad y cantidad de forraje,
con el menor movimiento de suelo y con costos menores de implantación que los verdeos anuales.
El género Sorghum comprende diferentes especies económicamente importantes que crecen
fundamentalmente en zonas semiáridas. Las especies silvestres del género poseen genes de
importancia agronómica tales como resistencia a enfermedades, que sería interesante incorporar a
las especies cultivadas.
La posibilidad de obtener algunos híbridos de sorgos forrajeros interespecíficos utilizando métodos
de mejoramiento tradicional no ha sido exitosa en lograr conjuntamente perennidad y calidad
forrajera. Este proyecto se propone obtener un sistema de cultivo de tejidos de Sorghum almun
Parodi (de corta perennidad) y S. saccharatum (L.) var El Inca, utilizando el medio básico de cultivo
MS con distintas combinaciones de 2,4 D y BAP. A partir de los callos obtenidos se procederá a
establecer suspensiones celulares, paso previo a la obtención de protoplastos con capacidad
morfogénica que podrían utilizarse para la obtención de híbridos somáticos o cíbridos y/o para
estudios de transformación genética.
De los cuatro explantos utilizados en ambas variedades los mejores resultados se obtuvieron con
semilla y en segundo término, ápice; utilizando como medio de cultivo MS con el agregado de
-1 -1
distintas combinaciones de 2,4-D y BAP (de 2 a 7 mg.l y 0,01 a 1 mg.l , respectivamente).
En la etapa de proliferación, la concentración hormonal se unificó en los distintos tratamientos en
-1 -1
1mg.l de 2,4D y 0,01 mg.l de BAP, respondiendo en todos los casos con gran proliferación de
callos embriogénicos. Actualmente, a partir de estos callos, se evalúa el número de plantas
desarrolladas y la estabilidad genética de las mismas.
9
REGENERACIÓN IN VITRO DE Arachis hypogaea L. , MEDIANTE ORGANOGÉNESIS
3
DIRECTA E INDIRECTA .
1 2
Cucco , M, F.; A, Rossi Jaume
1. Dto de Microbiología; Fac de Cs Exactas, Fco, Qco y Naturales. UNRC.

2. Profesor de Fisiología Vegetal. Fac de Cs Exactas, Fco, Qco y Naturales. UNRC.
Arossijaume@exa.unrc.edu.ar
3. Proyecto financiado por la Secretaría de Ciencia y Técnica de la Universidad Nacional de Río Cuarto.
Las variedades de maní tipo runner, son las que principalmente se siembran en la zona sur de
la provincia de Córdoba; su difusión introdujo una nueva enfermedad fúngica, la viruela tardía,
la que conjuntamente con otras como: sarna, mancha húmeda, roya, tizones, podredumbre de
frutos, ocasionan importantes pérdidas económicas y condicionan cada vez más su cultivo.
La transformación genética de la planta, mediante la introducción de genes que lleven
resistencia a dichas enfermedades, constituye una alternativa para la obtención de variedades
resistentes.
Una alta eficiencia de regeneración “ in Vitro “ de Arachis hypogaea L., es fundamental para la
obtención de plantas transgénicas y este proyecto tiene como finalidad obtenerla.
Durante 1998, se comenzó a trabajar en la inducción de embriones somáticos a partir de
diferentes explantos: cotiledones embrionados y no embrionados, epicótilos y hojuelas, de las
variedades Tegua, Nahuel, Florman INTA; obteniendose el mayor porcentaje de callos
embriogénicos cultivando epicótilos con 50 mg/l de 2,4-D. Los embriones obtenidos dieron
lugar a la formación de plántulas, las cuales aclimatadas llegaron al estado reproductivo.
Actualmente, se esta trabajando en la producción de embriones somáticos en medio líquido y
en la multiplicación de las tres variedades mencionadas por medio de estacas.
10
CULTIVO in vitro DE RUDIMENTOS SEMINALES DE VID (Vitis vinifera L.)
Silvia M. Ulanovsky, Rubén H. Osorio, Jorge G. Valdez y Pablo Castro
Lugar: EEA Rama Caída INTA
La demanda creciente de variedades de uva de mesa estenospermocárpicas,

conocidas en el mercado como "sin semillas", ha incentivado la aplicación de técnicas de
cultivo in vitro en los programas de obtención de nuevas variedades. El cultivo in vitro de
rudimentos seminales ha posibilitado obtener plantas viables de cruzamientos entre
progenitores estenospermocárpicos. Se aplica el término estenospermocarpia a la
formación de frutos, que por aborto de los óvulos fecundados, no presentan semillas
normales sino rudimentos seminales de distinto tamaño y consistencia.
En el Programa de Mejoramiento de vid conducido en la EEA INTA Rama Caída
funciona desde 1996 el laboratorio de cultivo in vitro. Los rudimentos seminales se
cultivan en cajas de Petri con medio nutritivo de Nitsch y Nitsch. Las plántulas,
germinadas en forma directa o por excisión de embriones, crecen hasta su aclimatación
a condiciones in vivo en frascos de vidrio con medio nutritivo de Murashige y Skoog.
Las variedades presentan un comportamiento diferencial al cultivo in vitro. Se
ensayan cruzamientos recíprocos para evaluar la capacidad de producción de embriones
viables de las variedades como progenitores femeninos y masculinos. Asimismo se
determina para cada variedad el período adecuado de cosecha. En cada ciclo productivo
se cultivan alrededor de 10.000 rudimentos seminales.
Sección II
Micropropagación
11
C.E.PRO.VE: PLANES DE INVESTIGACIÓN DENTRO DEL MARCO DE LA COMISION
DE INVESTIGACIONES CIENTIFICAS (CICPBA)
Abedini W., Sharry S., Ruscitti M., Marinucci L. y Lede S.
Centro Experimental de Propagación Vegetativa (C.E.Pro.Ve), Facultad de Ciencias

Agrarias y Forestales, Universidad Nacional de La Plata. C.C 31 (1900) La Plata.
Fax: 0221-425-2346. Tel. 0221-483-3467
En los últimos años, la superficie forestada de la Prov. de Buenos Aires se vio

incrementada en forma notoria, existiendo a la fecha más de 165.000 ha con plantaciones
de producción. La creciente demanda de madera y productos forestales, la reducción de
tierras disponibles para forestación y la existencia de ambientes no aptos o contaminados,
a conducido a la necesidad de introducir varias herramientas moleculares y
biotecnológicas dentro de los programas de investigación y mejora genética forestal. Por
tal motivo, en el C.E.Pro.Ve se desarrollan los siguientes planes subsidiados por la
Comisión de Investigaciones Científicas de la Prov. de Buenos Aires:
1.Incremento de la variabilidad genética de especies forestales de importancia para
la Prov. de Buenos Aires mediante la aplicación de biotécnicas.
Objetivos:
• Ajuste de protocolos de regeneración de plantas in vitro
• Cultivo de meristemas
• Obtención de semilla sintética
• Análisis de la variabilidad de plantas regeneradas
• Selección in vitro a estrés abiótico
• Transformación genética
Especies en las que se trabaja: Melia azedarach, Fraxinus sp., Populus sp.
2. Estudio de las especies forestales nativas que crecen en sitios de alta

contaminación industrial en el partido de La Plata.
Objetivos:
• Dilucidar el efecto de ambientes con alta polución sobre la anatomía y fisiología de
Erythrina crista-galli (seibo)
• Ajustar los métodos de propagación vegetativa de los individuos resistentes a
situaciones de alta contaminación.
• Utilizar el material clonado con el fin de forestar ambientes semejantes.
12
PROPAGACION VEGETATIVA DE ESPECIES FORESTALES, FRUTALES,
AROMATICAS Y MEDICINALES.
Programa de Incentivos a la Investigación, Ministerio de Educación de

la Nación C.E.Pro.Ve
Abedini W., Dessy S.,Sharry S., Rivas C., Traversaro M., Romero M., Torres R., Mattia V.
Cátedras de Introducción a la Dasonomía, Fruticultura y Fisiología Vegetal.
Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales, Universidad Nacional de La Plata. C.C 31

(1900) La Plata.
Fax: 0221-425-2346. Tel. 0221-483-3467
La finalidad de este plan de investigación es la propagación de plantas nativas y

exóticas de importancia para la industria forestal, alimenticia y farmaceútica. Para ello se
aplican técnicas de macropropagación y cultivo de tejidos in vitro, en especies
pertenecientes a la flora bonaerense y en especies exóticas de interés económico. La
producción de un gran número de plantas nativas selectas obtenidas mediante estas
técnicas, permitirá disponer de germoplasma nativo para rehabilitar ecosistemas
degradados, conservar recursos genéticos y contar con materia prima de potencial uso
industrial. En el caso de las especies frutales, se identifican y seleccionan variedades de
ciruelos del Delta Bonaerense, con dos finalidades, determinar la aptitud para consumo en
fresco e industrialización y buscar tolerancia a bacteriosis.
Objetivos:
Aplicar diferentes técnicas de reproducción asexual para la producción masiva de
especies forestales, frutales, medicinales y aromáticas, nativas y exóticas.
Realizar acciones conducentes a profundizar el campo del conocimiento científico en lo
referente a caracterización, aplicación industrial, propagación y conservación de recursos
fitogenéticos nativos.
Conservar germoplasma de especies vegetales nativas mediante la aplicación de
biotécnicas.
Especies que abarca el proyecto: Celtis tala, Erythrina crista –galli, Scutia buxifolia, Acacia
caven, Parkinsonia aculeata, Jodinia rombifolia, Phytolacca tetramera, Salix humboldtiana,
Shinus sp., Tessaria integrifolia, Phyllanthus sellowianus, Sapium haematospermun, Melia
azedarach, Aloisia sp., Melissa sp., Hydrocotile bonaeriensis, Lippia sp. Mentha sp.,
Pelargonium graveolens.
13
BANCO DE GERMOPLASMA DE ESPECIES FORESTALES NATIVAS DE LA
PROVINCIA DE BUENOS AIRES
Abedini W., Rivas C., Guido A., Rivera S., Ruscitti M., Marinucci L. y Galliussi E.
Cátedras de Introducción a la Dasonomía, Dendrología y Fisiología Vegetal.

Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales, Universidad Nacional de La Plata. C.C 31 (1900)
La Plata. Fax: 0221-425-2346. Tel. 0221-483-3467.
La Provincia de Buenos Aires cuenta con un número elevado de especies vegetales nativas,
distribuídas en las distintas Regiones Fitogeográficas, y la mayoría se encuentran sometidas
a distintas presiones, sobre todo de tipo antrópico, que ponen en peligro la subsistencia de la
flora, la fauna y de los ecosistemas en su conjunto.
Los árboles autóctonos, en particular, brindan desde tiempos remotos una serie de servicios a
los pobladores locales en forma de leña, abrigo, tratamientos terapéuticos formando parte del
patrimonio cultural y paisajístico. La pérdida de biodiversidad es un proceso acelerado que
lleva a la desaparición de especies nativas sin haber conocido a fondo sus características y
usos potenciales.
Los bancos de germoplasma de plantas poseen colecciones de material vegetal con objeto de
mantenerlas vivas y preservar sus características para el futuro beneficio de la humanidad y
del ambiente.
El propósito de este plan es conservar germoplasma forestal nativo ex situ en forma de banco
activo de semillas, banco in vitro y huerto clonal.
Las especies incluidas son: espinillo (Acacia caven), seibo (Erythrina crista-galli) y cina-cina
(Parkinsonia aculeata)
Las tareas programadas incluyen:
-Relevamiento, identificación y recolección del material en áreas protegidas.
-Estudio de la fisiología de las semillas (viabilidad y características germinativas)
-Conservación de semillas en condiciones de baja temperatura y humedad.
-Ajuste de técnicas de micropropagación in vitro.
-Conservación de meristemas y plantas completas in vitro en condiciones de crecimiento
limitado.
-Implantación de huerto clonal con ejemplares obtenidos mediante técnicas de
macropropagación y micropropagación in vitro.
-Caracterización y evaluación del material regenerado, mediante técnicas bioquímicas y
moleculares
14
MICROPROPAGACIÓN DE ESPECIES DE INTERÉS AGRÍCOLA E INDUSTRIAL
Llorente, B. E.; Apóstolo, N. M.; Brutti, C. B.; Carletti, S. M.; Bravo, C. A.
Laboratorio de Cultivo de Tejidos Vegetales (CULTEV)
Departamento de Ciencias Básicas. Universidad Nacional de Luján

CC 221. Luján (6700). BsAs. Argentina. e-mail: llorente@mail.unlu.edu.ar
La finalidad de este proyecto es tratar de establecer los parámetros biológicos, químicos y

ambientales, necesarios para micropropagar clones de especies vegetales elegidas por su
importancia agronómica o industrial. De este modo se trata de optimizar la producción constante de
clones selectos por sexo y productividad, tanto con fines agrícolas como para la obtención de
metabolitos.
En nuestro laboratorio hemos logrado estandarizar la técnica de micropropagación de
jojoba, Aristolochia y alcaucil. El plan de trabajo incluye los ensayos necesarios para incrementar
los rendimientos en las diferentes etapas de la micropropagación (variaciones en la concentración
de nitrógeno, reguladores de crecimiento y utilización de ciclodextrinas).
Actualmente realizamos ensayos para estudiar el efecto de oligosacáridos (3 a 5
unidades) y de diferentes sustratos sobre el enraizamiento y la aclimatización de jojoba y alcaucil.
Por otra parte, ha comenzado a estudiarse el efecto de la concentración de amonio en los medios
de cultivo sobre la vitrescencia o hiperhidricidad de los brotes de jojoba. Estos experimentos
involucran estudios morfológicos, anatómicos y ultraestructurales de las plantas micropropagadas.
Además, está proyectado realizar el estudio de la estabilidad genética y ensayos a campo de las
plantas producidas. Por otro lado, se estudia el enraizamiento de especies vegetales recalcitrantes
y la aclimatización de plantas obtenidas por cultivo in vitro aplicando algunas PGPR (Plant Growth-
Promoting Rhizobacteria) como Azospirillum, Azotobacter, Bacillus, Bradyrhizobium,
Pseudomonas.
En primera instancia, se evaluó la acción de diferentes PGPR sobre cultivos hidropónicos de
tomate, pimiento, vinca, digitalis, cebada y jojoba. Azospirillum y Azotobacter estimularon el
enraizamiento in vitro y la aclimatización de jojoba, portainjertos de manzano y cerezo y
Spathiphyllum. Esta técnica biotecnológica se aplicará en diferentes especies cultivadas in vitro y
se realizarán estudios ultraestructurales y de actividad peroxidásica.
15
AVANCES EN EL ESTUDIO DE LA PROPAGACIÓN DE
PLANTAS LEÑOSAS DE INTERÉS REGIONAL
Miriam E Arena
Laboratorio de Propagación y Producción Vegetal (LPPV), Centro Austral de

Investigaciones Científicas (CONICET), C.c. 92, Ushuaia (9410), Tierra del Fuego,
Argentina.
Desde 1992, el LPPV viene llevando a cabo estudios sobre la producción y

propagación de plantas forestales y frutales de la Patagonia. Si bien se han abordado
diversos aspectos de la propagación convencional tanto agámica como sexual en
diversas especies, los estudios se han centrado en la propagación por cultivo in vitro,
desarrollándose protocolos de propagación para diversas especies de Nothofagus,
Berberis buxifolia y Ribes magellanicum. La capacidad de enraizamiento suele ser el
factor limitante al propagar especies leñosas, existiendo un gran desconocimiento al
referirnos a la fisiología de especies nativas en general. Es por ello que en los últimos
años el LPPV ha comenzado a estudiar la morfofisiología del enraizamiento adventicio
in vitro en N. nervosa y N. antarctica, y más recientemente en B. buxifolia, en forma
conjunta con diversas Instituciones (Centro de Ecofisiología Vegetal, Universidad
Nacional del Sur, Universidad de Buenos Aires, Universidad Nacional de La Plata). Los
trabajos llevados a cabo tienen por objetivo correlacionar las diferentes etapas del
enraizamiento adventicio in vitro (Iniciación, Inducción y Expresión), con los cambios
bioquímicos (peroxidasas. reguladores del crecimiento, fenoles y flavonoides,
nutrientes, poliaminas, etc...) y morfológicos (cortes histológicos e histoquímicos)
ocurridos dentro de la microestaca. Los resultados obtenidos aportan conocimientos y
metodologías de análisis para el estudio del enraizamiento adventicio in vitro de las
especies leñosas, que a través de la compresión del proceso, permitirán mejorar las
técnicas y medios de propagación (medios sucesivos de propagación).
16
CULTIVO "in vitro" DE Eucalyptus dunnii: ENRAIZAMIENTO Y RUSTICACIÓN
Billard, Cristina - Lallana, V.H.
Facultad Ciencias Agropecuarias - Laboratorio de Cultivo de Tejidos Vegetales - Universidad

Nacional de Entre Ríos
El Laboratorio de Cultivos de Tejidos Vegetales, dependiente de la Cátedra de Fisiología

Vegetal de la F.C. A. - U.N.E.R. cuenta con el equipamiento básico necesario para la realización de
trabajos de micropropagación in vitro de especies arbóreas y ornamentales.
A través de un proyecto de Investigación (PID - UNER 2113) sobre multiplicación de

Eucalyptus dunnii se logró poner a punto la técnica de desinfección e implantación de los explantos
(segmentos nodales y brotes epicórmicos de Eucalyptus dunnii) y la preparación de medios de
cultivos. Los resultados fueron presentados en el II Simposio Argentino de Biotecnología Vegetal -
REDBIO Argentina - Huerta Grande, Córdoba - 1993 y en la Revista Ciencia, docencia y tecnología
de la Universidad Nacional de Entre Ríos N°16 año IX,1998. Además se publicó una traducción del
inglés "Términos comúnmente usados en cultivo de tejidos", 1995.
La continuidad de este trabajo se logró a través del Proyecto PID - UNER 2064
"Cultivo in vitro de Eucalyptus dunnii: enraizamiento y rusticación" actualmente en ejecución. El
objetivo es ensayar medios de cultivo y concentraciones hormonales para lograr al menos el 50%
de enraizamiento de brotes a partir de explantos de Eucalyptus dunnii ensayando distintos
sustratos y condiciones de sombreado para lograr la rusticación de plantas.
Además se participa del Proyecto: “Banco de Germoplasma y selección de ecotipos de especies

medicinales y aromáticas” en lo que se refiere a la multiplicación de plantas madres de las
especies seleccionas para el Banco de Germoplasma, habiendo realizado ensayos preliminares
para la obtención de plántulas de menta (Mentha sp), que servi rán de base para ensayos a ser
implantados en el 2000.
Palabras claves: micropropagación - cultivo in vitro - rusticación - Eucalyptus dunnii - Mentha sp. -
17
PROPAGACIÓN DE Prosopis chilensis (MOL.) STUNTZ MEDIANTE TÉCNICAS DE CULTIVO
"in vitro".
Director: Dr. Luis F. Hernández E-mail: lhernan@criba.edu.ar
Participantes: Ing. Agr. Luis A. Caro, Dra. Viviana Echenique, Lic. Pablo Polci, Ing. Agr. Pablo
Marinángelli y Dr. Néstor Curvetto.
Departamento de Agronomía – Universidad Nacional del Sur

San Andrés s/n (Altos de Palihue)
(8000) Bahía Blanca - Buenos Aires - Argentina
TE: 0291-4531821 FAX: 0291-4595127 E-mail: lcaro@criba.edu.ar
Dada la dificultad de regenerar agámicamente por vías convencionales árboles adultos de

Prosopis chilensis (“algarrobo de Chile”), se intenta establecer, como objetivo general, un protocolo
simple de regeneración in vitro de plántulas de esta especie, con fines de poder seleccionar
fenotipos en estado adulto que demuestren caracteres forestales elite para su propagación.
Se evaluaron 2 medios de cultivo basales, BTM (Broadleave Tree Medium) con la
concentración de macronutrientes reducidos a la mitad y MS (Murashigue and Skoog). A ambos
medios basales se los combino con 3 auxinas (ácido 3 indol acético, ácido naftalen acético y ácido
3 indol butírico) y una citocinina (6-bencil adenino purina). Como explantes se utilizaron estacas de
1-2 cm de longitud con una yema lateral, extraídas de árboles adultos y plantines.
Las microestacas fueron cultivadas en tubos de ensayo con 5 ml de medio de cultivo
durante un período de 10 días, subcultivándose posteriormente las mismas en medio basal por 30
días más. Por cada tratamiento se realizaron 30 réplicas y dos repeticiones. Los parámetros
evaluados fueron: % de tubos infectados (TI), % de tubos con estacas brotadas (V), % de tubos
con estacas brotadas y enraizadas (VR), longitud de raíces en mm (LR), longitud de vástagos en
mm (LV), peso seco de raíces (PR) y peso seco de vástagos (PV).
El porcentaje de infección de los explantes es mayor cuando se trabaja con material adulto.
La mayor longitud de raíces y porcentaje de enraizamiento se obtuvo con el medio basal BTM
-1 -1
fortificado con 3 mg.l de IBA y 0,05 mg.l de BAP (p<0,05). Se observo menor porcentaje de
enraizamiento, menor elongación de vástagos y menor porcentaje de estacas brotadas en los
tratamientos que contenían ANA (p<0,05). No se encontraron diferencias significativas en los
valores medios de PR y PV (p<0,05).
18
LIBERACIÓN DE VIRUS Y MICROPROPAGACIÓN DE CLONES DE AJO COLORADO (Allium
sativum L.) PARA LA OBTENCIÓN DE AJO SEMILLA
Integrantes: Luciani, Gabriela; Marinangeli, Pablo

CERZOS – CONICET, 8000 Bahía Blanca, Argentina.
El ajo es la primera hortícola de exportación en fresco con ingresos que oscilan entre 50 y 70
millones de dólares por año. En Argentina, el ajo colorado representa el 40 % de la producción total
y el 50 % del volumen exportable. La región productora del sur de Buenos Aires con 650 ha y un
-1
rendimiento de 5-6 tn ha aporta el 5 % de la producción nacional.
La micropropagación del ajo presenta dos problemas principales: baja tasa de multiplicación y fácil
dispersión de enfermedades, principalmente virosis que causan una gran disminución del
rendimiento y la calidad del cultivo. La resolución de estos problemas fue planteada a través de la
aplicación de termoterapia y quimioterapia para la obtención de plantas saneadas de virus y la
optimización de la multiplicación y bulbificación in vitro en clones de ajo colorado. Se trabajó en
colaboración con la Dra. V. Conci del IFFIVE (INTA) Córdoba y se logró la liberación de virus de los
clones Español Selección Ascasubi, Español Selección Médanos e I 50 mediante el uso de
termoterapia y cultivo de meristemas. Actualmente, se está evaluando el efecto de dos agentes
antivirales. También se logró la optimización de la multiplicación y bulbificación de dichos clones
estudiando la influencia del medio de cultivo basal, el suplemento hormonal y el tipo de explanto
empleado. Así se obtuvo un protocolo ajustado a los requerimientos nutricionales de cada clon
donde la relación nitrato:amonio es la variable que condiciona en multiplicación la respuesta a los
reguladores de crecimiento y en bulbificación la respuesta a las concentraciones del medio y de
sacarosa. Asimismo, se evaluó el efecto del AMPc y de los ácidos traumático (AT) y jasmónico (AJ)
en el medio de multiplicación, observándose que tanto el AMPc como el AJ ejercen una
estimulación de la brotación y de la formación de bulbillos mientras que el AT solamente estimula la
bulbificación.
19
MULTIPLICACIÓN DE PORTAINJERTOS PARA FRUTALES DE CAROZO
Daorden, Maria Elena; Graciela Corbino.

EEA INTA San Pedro.
CC Nº 43 2930 San Pedro - Buenos Aires.
E - mail: daorden@inta.gov.ar
Laboratorio de Cultivo in vitro de la E.E.A San Pedro, cuenta con la infraestructura adecuada para
llevar a cabo trabajos de micropropagación de distintas especies, y con equipamiento para realizar
la determinación de virus mediante el test Elisa.
Una de las líneas de trabajo que se lleva a cabo es la multiplicación in vitro de portainjertos
clonales de frutales de carozo con el objetivo de obtener un lote de plantas madres de sanidad
controlada.
Con esta finalidad se llevan a cabo las siguientes acciones:
I. Evaluación virósica por medio por medio del test de Elisa de los distintos portainjertos que se
multiplican in vitro. Los virus evaluados son: Prunus Necrotic Ring Spot Virus (PNRSV), Prunus
Dwarf (PDV) y Sharka (PPV).
II. Aplicación de distintas estrategias in vivo para el control de microorganismos en el material que
se sembrará in vitro.
III. Evaluación de distintas hormonas de multiplicación y en diferentes dosis para cada uno de los
porta-injertos probados.
IV. Ensayos de ajuste de la técnica de micropropagación para
portainjertos de propagación agámica y de semilla.
V. Evaluación de distintas hormonas de enraizamiento y en diferentes dosis
para cada uno de los porta-injertos probados
VI. Medición de desarrollo de plantas obtenidas en vivero (altura y diámetro
de tronco),en ensayo de distintos orígenes de carozos.
VII. Ensayos de germinabilidad de carozos de diferentes orígenes de cuaresmillos .
20
MICROPROPAGACION DE Eucalyptus grandis PARA LA FORMACION DE VIVEROS
CLONALES. PROCEDIMIENTO Y COSTO.
PARTE I
1 2 3
PROCEDIMIENTO: DIAMANTE Alicia y VERA BRAVO Carlos COSTO: MOLINA, Néstor
INTA Bella Vista (Ctes.) CC 5 CP 3432 Tel-FAX: 03777 451923.

E-mail: intaexp@bvista.com.ar
1 2 3
Ing. Agr. MSc. Mejoramiento Genético Ingeniero Agrónomo CPN
Especial. Desarrollo Regional.
La micropropagación clonal de Eucalyptus grandis es una realidad innegable por las
bondades que presenta el método para la multiplicación comercial de material seleccionado.
Uno de los temas que no se ha estudiado con detenimiento es el cálculo de costos.
El objetivo del trabajo fue calcular el costo de cada actividad involucrada

en el protocolo de micropropagación in vitro de Eucalyptus grandis para determinar el
costo unitario del plantín.
Se trabajó con clones de Eucalyptus grandis seleccionados del jardín clonal del INTA Bella
Vista. El protocolo de micropropagación se dividió en etapas: Introducción, Inducción,
Multiplicación, Enraizamiento, Acondiciona- miento de plantas completas y tareas de
Mantenimiento (tercerizadas).
La metodología de costeo aplicada fue la de “Sistema de Costos basado en Actividades” (ABC)

el cual incorpora elementos cuantitativos (costo primo determinado, imputado, efectivo) y
cualitativos (mejora calidad, negociación y cadena de valor).
La metodología propuesta describe los componentes del costo y permite ajustar actividades en
base al principio: “el costo que no arroja valor debe ser tercerizado”.
El ciclo productivo para obtener clones de Eucaliptos in vitro es variable y puede abarcar de
10 a 16 meses, dependiendo del clon, su actividad vegetativa y adaptación in vitro.
El método de medición de costo basado en el protocolo de micropropa- gación estandarizado

en INTA Bella Vista permitió obtener un valor unitario por plantín el que presenta factibilidad
económica para la formación de viveros de plantas madres prebásicas, constituyendo esta la
“PARTE I”, la que se complementa con la “PARTE II”, presentada en otro trabajo.
21
MICROESTACAS (MICROCUTTING) DE Eucalyptus grandis A PARTIR DE CLONES
MICROPROPAGADOS "in vitro".
PROCEDIMIENTO Y COSTO. PARTE II
1 2 3
PROCEDIMIENTO:DIAMANTE Alicia y VERA BRAVO Carlos COSTO: MOLINA Néstor
INTA Bella Vista (Ctes.) CC 5 CP 3432 Bella Vista (Corrientes) Argentina

Tel-FAX: 03777 451923 E-mail: intaexp@bvista.com.ar
1 2 3
Ing. Agr. MSc. Mejoramiento Genético Ing. Agrónomo CPN Esp. En Desarrollo Regional
En Eucaliptos la micropropagación in vitro de individuos selectos, complementada con la

técnica de producción de microestacas (microcatting) ex vitro representa una nueva alternativa
para la obtención de forestaciones clonales de máxima homogeneidad y calidad.
El objetivo de este trabajo fue calcular el costo de las actividades necesarias para lograr
microestacas enraizadas ex vitro y en condiciones óptimas para su transferencia a campo, a partir
de clones micropropagados in vitro.
Se utilizaron clones de Eucalyptus grandis de in vitro como plantas madres dadoras de
microestacas. Las plantas de in vitro y las microestacas fueron transferidas a tubetes conteniendo
un sustrato formado por vermiculita y turba (1:1) y un fertilizante de liberación lenta con macro y
microelementos. Las plantas se rustificaron en invernáculo húmedo (80 % humedad). A los 30 días
del transplante se inició la primer cosecha de microestacas, separando los extremos de crecimiento
(3 a 5 cm)de las plantas madres. Para calcular el costo se utilizó el procedimiento de “Costeo
basado en Actividades” considerando el total de microestacas obtenidas durante los 5 meses que
duró la experiencia.
Se constató que las microestacas forman plantas completas sin el agregado de
enraizantes.
La cantidad total de plantas de microestacas obtenidas a partir de una planta madre de in
vitro varió de 0.5 a 14.2. De estas, las que alcanzaron condiciones óptimas para el transplante
pasó de 0.4 a 12.7. Esta variación estuvo asociado con el agregado de fertilizantes.
El costo unitario de cada planta lograda de microestaca sin fertilizar triplicó el valor de la
planta madre in vitro. En cambio con el agregado de fertilizante, el valor es un tercio de la planta
original.
Queda pendiente, para futuros ensayos, determinar el costo mínimo posible con mayor
tratamiento de fertilizante, de forma de alcanzar el punto de inflexión de costos.
22
OBTENCIÓN DE MICROESTACAS (MICROCUTTINGS) PARA LA
PRODUCCIÓN CLONAL DE Eucalyptus grandis A PARTIR DE PLANTAS
MICROPROPAGADAS IN VITRO
Vera Bravo Carlos, APARICIO Jorge y DIAMANTE Alicia

EEA INTA Bella Vista CC 5 – CP 3432 – Corrientes E-mail:intaexp@bvista.com.ar
Para la producción clonal de Eucalyptus grandis, existe una nueva técnica que permite
propagar masivamente árboles selectos, empleando microestacas (microcutting) obtenidas a
partir de plantas micropropagadas in vitro. En estas últimas se produce un rejuvenecimiento
que permite incrementar la capacidad de enraizamiento de los microcuttings, los que además
tienen la ventaja de presentar buen sistema radicular.
El objetivo del presente trabajo fue determinar la producción de microcutting a partir de
plantas propagadas in vitro, el efecto de la incorporación de un fertilizante al sustrato y la
producción de plantas de calidad.
Se usó un stock de 787 plantas enraizadas in vitro dispuestas en bloques de 200 y

transferidas a un sustrato compuesto por vermiculita y turba (1:1) al que se aplicó un fertilizante
de liberación controlada con 4 dosis (0, 200, 400 y 600 mg/planta). Al mes se extrajeron puntas
de brotes de 3-5 cm y las láminas foliares se redujeron al 30%, el enraizamiento se realizó en un
invernáculo con humedad relativa ambiente del 80-85% y temperatura promedio de 35 °C. El
proceso de corte de microcutting se repitió 9 veces durante 5 meses.
La relación entre el número de microcutting y la planta madre fue: 0,5; 10,2;12,7 y 14,2 a
medida que aumentó la dosis de fertilizante en el sustrato.
Por otra parte, la relación entre las plantas óptimas para trasplantar a campo y la planta
madre fue: 1; 7; 9,5 y 11,8 respectivamente, alcanzando en este último caso un 83 % de
eficiencia.
Estos resultados preliminares demostraron la importancia del fertilizante en el sustrato, se
deberán realizar ensayos para determinar dosis y la obtención del mayor número de plantas
óptimas para el transplante.
23
INFLUENCIA DE TRES MEDIOS DE CULTIVO EN EL MACOLLAJE IN VITRO DE LA
VARIEDAD DE CAÑA DE AZÚCAR LCP 85-384.
Díaz, L.; Sosa, S.; Digonzelli, P.; Portas de Zamudio, A.; Martinez Arias, F. y Noguera, A.
Laboratorio de Cultivo de Tejidos Vegetales. Cátedra de Caña de Azúcar. Facultad de Agronomía

y Zootecnia. Universidad Nacional de Tucumán. Av. Roca 1900. (4000) San Miguel de Tucumán.
Argentina.
E-mail: ldiaz@manant.unt.edu.ar
La micropropagación de variedades de caña de azúcar es ampliamente utilizada para producir

caña semilla de calidad en muchas regiones cañeras del mundo. En un sistema de
micropropagación en escala comercial es fundamental optimizar todas las etapas. El objetivo de
este trabajo es lograr la optimización de la etapa de multiplicación, a fin de obtener el mayor
número de macollos posibles, para la variedad LCP 85-384. Se trabajó con tres medios de cultivo
líquidos:
a)1M= MS (1962) + Cinetina (0.07 ppm) + BAP (0.15 ppm) + Ac. Cítrico (150 ppm).
b)2M= MS (1962) + Cinetina (0.1 ppm) + BAP (0.2 ppm) + Ac. Cítrico (150 ppm).
c)3M= MS (1962) + Cinetina (0.05 ppm) + BAP (0,1 ppm) + Ac. Cítrico (150 ppm). Se utilizaron
vástagos provenientes de cultivo de meristemas, se seleccionaron tres alturas diferentes: 2, 4 y
6 cm. Se colocaron seis vástagos por frasco de 350 ml, conteniendo 50 ml de medio de cultivo. Se
trabajó con un diseño totalmente aleatorizado con cinco repeticiones para cada altura y medio de
cultivo. Durante dos meses se realizaron evaluaciones cada veinte días de: altura, número y peso
fresco de los macollos y número de hojas de los mismos. El análisis estadístico de los resultados
demuestra que no hay diferencias significativas entre los tres medios con respecto al peso fresco y
altura de macollos; mientras que el 2M es significativamente superior con respecto al número de
macollos formados. La tasa de multiplicación fue 1:5 para el 1M, 1:7 para el 2M y 1:6 para el 3M.
Hay diferencias significativas entre los tres medios de cultivo en relación al número de hojas, el 2 M
es el de mejor comportamiento. En la actualidad se está evaluando el comportamiento de esta
variedad empleando medios de cultivo sin cinetina.
24
COLORANTES PARA CONTROLAR LA CONTAMINACIÓN BACTERIANA EN LA ETAPA
DE MULTIPLICACIÓN DE LA VARIEDAD DE CAÑA DE AZÚCAR NA 63-90.
PARTE I.
Digonzelli,P; Carrizo de Bellone,S; Díaz,L y Portas de Zamudio,A.
Laboratorio de Cultivo de Tejidos Vegetales. Cátedra de Caña de Azúcar. Laboratorio de

Microbiología. Cátedra de Microbiología Agrícola. Facultad de Agronomía y Zootecnia.
Universidad Nacional de Tucumán. Av. Roca 1900. (4000) San Miguel de Tucumán.
Argentina.
E-mail: digonze@manant.unt.edu.ar
El problema de la contaminación bacteriana es uno de los más graves para los

micropropagadores de plantas en el mundo. La caña de azúcar presenta una gran flora
bacteriana endofítica que se convierte en contaminante de alta frecuencia de aparición en la
etapa de multiplicación. El objetivo de este trabajo fue determinar el efecto de cuatro
colorantes, en cuatro con-centraciones, sobre el crecimiento de dos cepas bacterianas
aisladas a partir de cultivos contaminados de la variedad de caña de azúcar NA 63-90 en la
etapa de multiplicación. Los colorantes empleados fueron: Azul de Metileno, Cristal Violeta,
Verde Brillante, Violeta de Genciana. Se usaron las siguientes concentraciones: 50,100, 200
y 400 ppm, incorporando los co-lorantes al medio de cultivo de multiplicación (MS 1962
modificado). Las bac-terias se sembraron en medio MS (líquido) con el agregado de los
colorantes, con cinco repeticiones para cada colorante y cada concentración. Se llevó a
estufa de cultivo y se evaluó el desarrollo de colonias, realizándose preparados
microscópicos para confirmar la presencia de las bacterias sembradas. Se determinó el
colorante y la concentración que permite el control de ambas cepas bacterianas
simultáneamente. El verde brillante en las concentraciones de 100, 200 y 400 ppm y el
cristal violeta en las concentraciones de 200 y 400 ppm impidieron el desarrollo de ambas
cepas bacterianas. Se probó luego si su efecto es bacteriostático o bactericida, para lo cual
se resembró en medio MS (sólido) con los colorantes en las concentraciones mencionadas
y sin los colorantes, con cuatro repeticiones para cada colorante y cada concentración. En
ningún caso se observó desarrollo de colonias, por lo cual se infiere que el efecto de los
colorantes es bactericida. En la actualidad se está probando la fitotoxicidad de estos
colorantes en las concentraciones mencionadas sobre plántulas de caña de azúcar en la
etapa de multiplicación.
25
CAMBIOS EN PARAMETROS BIOQUIMICOS DURANTE EL
DESARROLLO DE LA HIPERHIDRICIDAD EN VASTAGOS MICROPROPAGADOS DE Lupinus
polyphyllus
* M. Divo de Sesar, **V. Melito, *A. Kato, *F. Vilella, A. M. Stella
*Cátedra de Producción Vegetal –Facultad de Agronomía, UBA, ** Centro de Investigaciones sobre

Porfirinas y Porfirias (CIPYP) – CONICET y FCE y N, UBA. Fvilella@mail.agro.uba.ar
La vitrificación o hiperhidricidad es un desorden que afecta la multiplicación in vitro de L.

polyphyllus apareciendo alteraciones anatómicas, morfológicas y fisiológicas. Estos desórdenes
pueden ser la consecuencia de cambios que ocurren antes que los síntomas visibles que definen
este estado se vuelvan aparentes. Por lo tanto, este trabajo estudia cambios bioquímicos
originados durante un ciclo de multiplicación en vástagos micropropagados vitrificados de L.
polyphillus. Se utilizó el medio M-S suplementado con 2,2 mM de BAP y 0,27 mM de ANA,
tomándose muestras durante cuatro semanas para realizar los análisis correspondientes. El
contenido de clorofilas (Cl) disminuyó desde 2512 a 499 µg g/p.fr. Las proteinas bajaron de 146,3
a 66,5 µg/g de p.fr. La relación peso sc/fr descendió (%) de 14,9 a 6,7. El contenido total de
porfirinas se redujo de 20 a 5 µg mg/proteína. Las porfirinas con mayor número de grupos
carboxilos aumentaron mientras que el nivel de uroporfirinógeno III disminuyó. La disminución en
Cl implicaría una caída en la tasa fotosintética y una reducción en la relación C/N. M-S es un
medio rico en iones NH4, los que se asimilan más rápido que otros. La rápida absorción de NH4
aumentaría el consumo de C desviándolo del camino metabólico que lleva a la síntesis de lignina y
celulosa, lo que disminuiría la presión de las paredes celulares incrementando la absorción de
agua, explicando el crecimiento vitrificado.
26
ENRAIZAMIENTO DIRECTO DE VASTAGOS MICROPROGAGADOS
DE ARANDANO (V. ashei Reade y V. corimbossum)
Divo de Sesar, Marta; Espósito, José; Vilella, Fernando
Cátedra de Producción Vegetal – Facultad de Agronomía – UBA

Fvilella@ mail.agro.uba.ar
Numerosos sistemas de micropropagación a escala comercial o experimental utilizan el

enraizamiento ex vitro de los vástagos logrados. Este procedimiento provee un excelente período
de transición entre el ambiente del laboratorio y el invernáculo disminuyendo las labores culturales.
Este trabajo estudia el efecto de distintos factores que afectan el enraizamiento directo de distintas
variedades de arándano. Vástagos micropropagados (5 + 1 cm) de V. ahsei var Climax y Tifblue y
V. corimbossum var Cape Fear y O’Neill se plantaron, previo tratamiento con IBA (25 mg/l) en
pequeñas bandejas cubiertas, para crear una cámara húmeda, en distintos sustratos: turba (T),
perlita (P), arena (A), turba y arena (T+A), turba y perlita (T+P). A la mitad de las bandejas se les
aplicó un pre-tratamiento de 14 días en oscuridad. Existiendo un tratamiento adicional para la
variedad O’Neill en P sin IBA. Las bandejas se incubaron en cámaras climatizadas con 16 horas
de fotoperíodo durante 9 semanas.
Tratamientos con IBA mejoran el porcentaje de enraizamiento (86 vs 45 %), el largo (32 vs
17 cm) y el peso seco (26 vs 15 mg) de las raíces. Asimismo, se observaron diferencias altamente
significativas (P < 0,01) en los porcentajes de enraizamiento (media: 62 % y T > P > T+P > T+A >
A), peso y largo de raíces. Las raíces formadas con T son más largas (28 cm) y las de P más
pesadas (29 mg).
27
MULTIPLICACION in vitro DE BLUEBONNET (Lupinus polyphyllus)
*Kato, Adriana Elena; *Divo de Sesar, Marta; * Vilella, Fernando;

**Stella, Ana María
*Cátedra de ProducciónVegetal –Facultad de Agronomía, UBA, ** Centro de Investigaciones sobre

Porfirinas y Porfirias (CIPYP) – CONICET y FCE y N, UBA. Fvilella@mail.agro.uba.ar
Lupinus texensis es la flor del estado de Texas. Otras especies del mismo género poseen
atractiva floración primaveral adaptándose a distintas condiciones ambientales. Por lo tanto, es de
interés la explotación comercial de las mismas para flor de corte o bordura. El objetivo del presente
trabajo fue ajustar un protocolo para la micropropagación de L. polyphyllus.
Segmentos nodales (1 cm) provenientes de seedlings se sembraron en el medio M-S,
completo, semisólido, suplementado con 3 % de sacarosa y distintas concentraciones de BAP (0 a
4,4 mM) y 0,27 mM de ANA. Los mismos se mantuvieron en cámaras climatizadas con fotoperíodo
-2
de 16 horas y 32 µmol cm de luz.
A los 15 días comenzó la diferenciación de yemas. Al aumentar la concentración de BAP
se incrementa el número de vástagos (tasa media de multiplicación 4,65:1) y a partir del día 18 y
con 2,2 y 4,4 mM de BAP comienzan a manifestarse signos de hiperhidricidad (vitrificación). Este
desorden fue parcialmente revertido (66 %) al iniciarse y/o subcultivarse los mismos en el mismo
medio reemplazando los iones NH4 por K. Los brotes formados se dividieron y repicaron cada 4
semanas. Durante la etapa de enraizamiento no se observó formación de raíces en los brotes
vitrificados.
28
MICROPROPAGACIÓN DE Eucalyptus grandis
Autores: Plata, M. I.; Tesón, N.
Programa de Producción de Material de Propagación Mejorado del Subprograma

Eucalyptus en Mesopotamia del Proyecto Forestal de Desarrollo INTA - SAGPyA,
EEA Concordia. CC 34. Entre Ríos.
La propagación agámica es utilizada en la EEA Concordia del INTA como una

herramienta ventajosa dentro del Mejoramiento Génetico, ya que permite capturar la
variancia genética total, maximizando el progreso genético en cada ciclo de
mejoramiento. Para seleccionar un árbol que va a ser clonado los principales criterios
que se tienen en cuenta son: productividad, forma del fuste o tronco, desrame natural,
tamaño de copa. Los clones producidos en la experimental tienen como destino la
instalación de ensayos comparativos clonales, de huertos semilleros clonales y la
reposición del área de multiplicación vegetativa.
La técnica de micropropagación se utiliza para aquellos árboles selectos que por
diversos motivos no pueden ser apeados y macropropagados. El cultivo in vitro de
Eucalyptus consta de cuatro etapas: desinfección e introducción del explanto,
multiplicación de brotes, elongación de brotes y enraizamiento. El mismo se lleva a
cabo en una cámara de cultivo con condiciones de temperatura, intensidad de luz y
fotoperíodo controlados. Para las distintas etapas se utilizan los medios de Murashige
y Skoog, el de Fossard y el de Knop modificados. El explanto utilizado proviene de
brotaciones epicórmicas obtenidas a partir de ramas incubadas en condiciones de alta
humedad y temperatura. El mismo es desinfectado y sembrado en condiciones
asépticas en el medio de cultivo específico para esta etapa. A los treinta días
aproximadamente se separan los brotes axilares obtenidos y se repican al medio de
cultivo donde se multiplican. Al mes se vuelven a separar los brotes multiplicados y se
colocan en el medio de cultivo para elongación. Cuando el brote alcanza
aproximadamente tres cm, se repica al medio de enraizamiento. En cada etapa varían
la composición del medio de cultivo y las condiciones de luz. Una vez obtenidas las
plantas completas in vitro se transplantan a macetas y se aclimatan primero en el
módulo de propagación y luego en el vivero. El comportamiento de los clones es
variable. Algunos pueden no ser elongados. En otros, la etapa de enraizamiento puede
realizarse ex vitro, transplantando los brotes elongados directamente al sustrato
esterilizado y manteniéndolos con alta humedad en la cámara de cultivo durante dos
semanas. La EEA Concordia cuenta con noventa y cuatro clones de los cuales
veinticinco son producidos mediante micropropagación. Los mismos están siendo
evaluados en ensayos clonales de productividad.
29
MICROPROPAGACION DE PORTAINJERTOS PARA FRUTALES LEÑOSOS
M.I. Plata, C.M. Anderson y A. Fabiani
EEA Concordia, Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria, C.C. 34, 3200 Concordia, E. R.,
Email:plata@concordia.com.ar
Los frutales leñosos como cítricos, vides y durazneros se injertan sobre portainjertos que le
confieren a la combinación copa/pie ciertos atributos como tolerancia a heladas, sequía,
enfermedades y plagas. Los portainjertos para cítricos y durazneros son propagados
comercialmente por semilla mientras que los de vid se obtienen por enraizamiento de estacas.
Algunos portainjertos para cítricos potencialmente importantes producen poca semillas o son
variables, al igual que sucede con los de duraznero.
1. Cítricos. Segmentos uninodales de trifolio [Poncirus trifoliata (L.) Raf.] Rich 16-6 y Flying
Dragon, de citrange [Citrus sinensis (L.) Osb. x P. trifoliata] Benton y C-35 y de mandarina (C.
reticulata Blanco) Murcott fueron cultivados en el medio de Murashige y Skoog (MS) + 25 mg/l y
500 mg/l de extracto de malta. La multiplicación de los vástagos de ‘Rich 16-6’, ‘Flying Dragon’,
‘Benton’ y ‘C-35’ se logró en MS con 40 mg/l de adenina, 2.2 µM de 6-bencilaminopurina (BA) y
1.23 µM de ácido indolbutírico (IBA), mientras que ‘Murcott’ se multiplicó en MS + 4.44 µM BA y
2.46 µM IBA. El enraizamiento de llevó a cabo en MS + 5.4 µM de ácido naftalenacético (ANA).
Plantas de ‘C-35’, ‘Benton’, ‘Flying Dragon’ y ‘Rich 16-6’ de 1 año de edad se injertaron con yemas
de naranja dulce ‘Salustiana’ y se plantaron a campo.
2. Durazneros. Segmentos uninodales de Prunus sp. Nemaguard extraídos de brotaciones de
primavera fueron cultivados en 1/3 MS +0.44 µM BA. La multiplicación y elongación de los
vástagos se realizó en MS + 4.44 µM BA. Para enraizamiento se usó ½ MS + 4.9 µM IBA con un
54% de éxito. Se adaptaron a maceta el 53% de de las plántulas.
3. Vides. Segmentos uninodales de 5 cm delos híbridos SO4, Paulsen 1103 y Richter 110
extraídos de brotaciones de primavera se cultivaron en MS líquido sin sacarosa + 9.99 µM BA. La
etapa de multiplicación y elongación se realizó en MS + 4.44 µM BA. El 64% de las plántulas de
‘SO4’ en ½ MS + 0.54 µM ANA enraizaron y se obtuvo un 48% de adaptación a maceta.
La disponibilidad del material permitirá evaluar el comportamiento versus los pies obtenidos por
semillas o estacas.
30
NUEVOS ENFOQUES AGRONÓMICOS Y TECNOLÓGICOS PARA PRUNOIDEAS
APTAS PARA LA ZONA FRUTÍCOLA TEMPLADO-HÚMEDA DE ARGENTINA
Proyecto SECYT 08-044 04 Director O.H.Caso
Cátedra de Fruticultura Facultad Cs. Agr. y Forestales UNLP. CC 31. 1900 La Plata.
Centro de Ecofisiología Vegetal-CONICET. Serrano 669. 1414. Capital Federal.

Estación Experimental Agropecuaria San Pedro, Ruta Nac 9 Km 170 CC 43.CP 2930. San Pedro.
El proyecto propone establecer pautas para el mejoramiento de la producción de frutales de carozo

en la zona templado-húmeda de la Argentina.
Para ello se buscará el saneamiento de los cultivares de portainjertos e injertos actualmente en
uso, la recuperación de áreas por la incorporación de otros nuevos y el desarrollo de tecnologías
de propagación clonal empleables para una producción en gran escala. Es importante además,
para áreas frutícolas pre-existentes, la selección de nuevos portainjertos adecuados a la resolución
de sus limitantes vinculadas con el suelo, que posibiliten la replantación de las nuevas
combinaciones aprovechando el mayor vigor de la combinación estiónica.
La propagación de los portainjertos de duraznero, se hará por micropropagación y/o propagación
tradicional, identificando los métodos de multiplicación que mejor se adecuen a cada uno de ellos.
Se estudiará también la compatibilidad entre el patrón y el injerto, determinando la mejor
combinación que permita contar con plantas de alta calidad y productividad. Como así también se
evaluarán los perjuicios que ocasionan las enfermedades sistémicas actualmente presentes en el
país
Material identificado y de sanidad controlada será propagado para ser evaluado, comparando su
comportamiento en condiciones de campo, con los actualmente empleados. Los objetivos finales
de este proyecto serán difundir entre los productores frutícolas actuales los resultados de las
investigaciones sobre portainjertos y variedades, a fin de generar demanda de nuevas
combinaciones estiónicas. Accionar sobre los viveristas, a través de la provisión de material vegetal
de base y la transmisión del conocimiento, para que den respuesta a esta demanda. Contribuir a
implementar la legislación nacional y provincial sobre viveros frutícolas. Generar fuentes de trabajo
tecnificado. Contribuir a desarrollar las ventajas competitivas de la zona en el abastecimiento con
frutas frescas de mercados nacionales y del exterior. Aportar información técnica sobre nuevas
áreas potenciales a interesados diversos (Organismos públicos y privados, productores de plantas
y de frutas, inversores, comercializadores).
Sección III
Metabolitos
Secundarios
31
OBTENCIÓN DE ENZIMAS Y METABOLITOS SECUNDARIOS
Llorente, B. E.; Brutti, C. B.; Bravo, C. A.; Apóstolo, N. M.
Laboratorio de Cultivo de Tejidos Vegetales (CULTEV)
Departamento de Ciencias Básicas. Universidad Nacional de Luján.

CC 221. Luján (6700). BsAs. Argentina. e-mail: llorente@mail.unlu.edu.ar
Producción y purificación de proteinasas coagulantes de la leche

En este proyecto se estudia la actividad proteinolítica y coagulante de la leche de extractos
vegetales de especies de la Familia Compositae en plantas cultivadas a campo e in vitro El objetivo
consiste en aislar, caracterizar y purificar proteinasas vegetales que podrían usarse como
sustitutos del cuajo bovino, en la elaboración de quesos.
Para lograr este objetivo, se elaboró la siguiente estrategia experimental: 1) estudio de la
actividad proteinolítica y coagulante de la leche de los extractos crudos de las diferentes partes de
especies de esta Familia; 2) caracterización de la preparación enzimática cruda que presente los
mejores parámetros de acuerdo a los resultados del item anterior; 3) purificación de dicho extracto
crudo y caracterización de las fracciones puras; 4) inducir la expresión in vitro de proteinasas
coagulantes de la leche por influencia de diferentes reguladores de crecimiento, en callos y
suspensiones celulares; 5) realizar estudios comparativos entre las proteinasas coagulantes de la
leche obtenidas de las plantas y por cultivos in vitro; 6) inmunolocalización de las proteinasas
obtenidas; 7) producción de diferentes tipos de quesos y evaluación bioquímica y sensorial.
Obtención de metabolitos secundarios de plantas medicinales autóctonas: Aristolochia spp.

El objetivo de este proyecto es obtener metabolitos de interés medicinal a partir de especies
nativas de Aristolochia por técnicas de cultivo in vitro. Las metodologías en desarrollo son: 1)
micropropagación de diferentes especies de Aristolochia para producir clones seleccionados por su
productividad de ácidos aristolóquicos y/o aristolactama;. 2) obtención de callos y suspensiones a
partir de plantas cultivadas in vitro; 3) cultivo de tejidos transformados por Agrobacterium spp.; 4)
estudios fitoquímicos sobre las plantas madres y tejidos cultivados in vitro, seleccionando el tipo de
estrategia y/o tejidos más adecuado para la producción de estos metabolitos secundarios.
32
PRODUCCIÓN DE ALCALOIDES DEL TROPANO MEDIANTE EL EMPLEO DE

RAÍCES TRANSFORMADAS DE Brugmansia candida: ESTUDIO DE LA
INFLUENCIA DE GIBERELINAS EN EL METABOLISMO PRIMARIO Y SECUNDARIO
Carla N. Carrizo, Julián Rodriguez Talou, Sandra I. Pitta-Alvarez y Ana M. Giulietti.

Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología, Facultad de Farmacia y Bioquímica,
Universidad de Buenos Aires. Junín 956, Buenos Aires (1113), Argentina. E-mail:
ccarrizo@ffyb.uba.ar
Los alcaloides del tropano, hiosciamina y escopolamina, son compuestos utilizados en

medicina como anticolinérgicos. Su fuente de obtención son plantas de la familia
Solanaceae debido a que su síntesis química es complicada y costosa. El cultivo in vitro
es una altenativa interesante ya que permitiría un suministro sostenido y uniforme de las
drogas de interés. En nuestro laboratorio, hemos obtenido raíces transformadas de
Brugmansia candida (Solanaceae), planta sudamericana que produce ambos alcaloides,
para la obtención de los mismos. Una de las principales limitaciones del cultivo in vitro
son los bajos rendimientos obtenidos, que impide que se trate de una tecnología
competitiva. A fin de incrementar los rendimientos las estrategias recomendables
actualmente implican la manipulación del camino biosintético, por lo que es necesario
ahondar en su conocimiento. Especial interés se focaliza en la regulación de las distintas
rutas biosintéticas en plantas y en particular aquellos pasos que vinculan el metabolismo
primario y secundario. La biosíntesis de hiosciamina y escopolamina utiliza como
precursor la putrescina (poliamina), y compite por este compuesto con la biosíntesis de
las poliaminas espermidina y espermina (metabolismo primario), involucradas en
procesos de división y de crecimiento celular. Nuestro objetivo es estudiar el efecto de
las giberelinas (AG3, AG7, AG13) sobre el metabolismo primario (poliaminas: putrescina,
espermidina y espermina) y secundario (alcaloides del tropano) en raíces transformadas
de B. candida con el fin de conocer la regulación y la relación entre estas vías
metabólicas, a fin de diseñar procesos productivos altamente eficientes.
34
ESTRATEGIAS BIOTRECNOLÓGICAS PARA LA OBTENCIÓN DE
METABOLITOS SECUNDARIOS
PICT0138
Marconi, P., Radice, S., Giulietti, A. M. y Caso, O.H.
Centro de Ecofisiología Vegetal, Serrano 669, (1414), Bs. As., Argentina y Facultad de Farmacia y
Bioquímica de la UBA, Junin 956, (1113), Bs. As., Argentina
La presente colaboración se funda en el objetivo de obtener metabolitos secundarios de interés

farmacológico a partir del cultivo de vegetales. Los modelos experimentales son Berberis buxifolia y
Ginkgo biloba. El primero es productor de berberina, un alcaloide isobencilquinolínico suministrado
a pacientes HIV. Esta droga parece controlar las infecciones gastrointestinales debido al amplio
espectro antimicótico, antimicrobiano y por sus propiedades de antiespasmódico. Los extractos de
ginkgo contienen una interesante mezcla de flavonoides glicosilados y derivados terpénicos,
también con interés farmacológico. Se emplearán sistemas de cultivo in vitro (embriogénesis y
organogénesis somática, cultivo de células y callos) para la obtención de plantas selectas de
calidad controlada aptas para el cultivo agronómico.
Asimismo, se contemplará la producción in vitro de ambos metabolitos. Las ventajas del cultivo in
vitro son: producción sistemática y regulada según la demanda, cultivo en condiciones controladas
y óptimas que garantizan la producción constante en cantidad y calidad del metabolito de interés.
En este caso, a fin de obtener la mayor producción se tiene planeado el empleo de estrategias no
genéticas y genéticas. Dentro de las primeras centraremos nuestra atención en la diferenciación y
elicitación. Para abordar las estrategias genéticas (ing. metabólica) se requiere el conocimiento de
las vias metabólicas que conducen a la síntesis de ambos metabolitos.
35
ESTUDIO SOBRE LA BIOSÍNTESIS Y PRODUCCIÓN DE SOLASODINA
Juliana Parsons, Julián Rodriguez Talou y Ana María Giulietti.
En los últimos años, los avances en el estudio de la bioquímica y de la biología molecular han dado
lugar a la caracterización y clonado de gran número de genes involucrados en la biosíntesis de
metabolitos secundarios en plantas. A través de la ingeniería metabólica podemos modular una
determinada ruta biosintética, ya sea por la introducción de copias extra del gen deseado, por
supresión de genes de las rutas catabólicas, uso de secuencias antisense, etc.. Sin embargo para
hacer uso racional de estas herramientas, es necesario conocer las rutas metabólicas que se
quieran modificar.
La solasodina es un esteroide sintetizado por Solanaceas, y constituye una fuente alternativa para
la producción de drogas esteroidales.
Nosotros planteamos el estudio de la ruta biosintética de la solasodina con el fin de aplicar
estrategias de ingeniería metabólica que conduzcan a una mayor producción de este alcaloide.
Para ello utilizamos raices transformadas de Solanum eleagnifolium, debido a su alta velocidad de
crecimiento, su estabilidad genética, su facil manipulación y su independencia del agregado de
fitohormonas.
El principal objetivo es identificar las enzimas que regulan la síntesis de la solasodina. Para ello se
deberá probar si este metabolito es sintetizado a través de la ruta tradicional del mevalonato para
terpenos, o a través de la ruta que parte de gliceraldehído fosfato y piruvato descripta
recientemente por los grupos de Croteau, Verpoorte y Lichtenthaler y que ocurre dentro de los
plástidos. La metodología incluye el uso de elicitación e inhibidores específicos de las enzimas
claves en la biosíntesis de los terpenos.
36
OBTENCIÓN DE ALCALOIDES DEL TROPANO A PARTIR DE CULTIVOS DE RAÍCES
TRANSFORMADAS DE BRUGMANSIA CANDIDA: EFECTO DE DIFERENTES ELICITORES
Tatiana Spollansky, Sandra Pitta-Alvarez y Ana María Giulietti.
Microbiología Industrial y Biotecnología, Facultad de Farmacia y Bioquímica,
Universidad de Buenos Aires, Junín 956, Buenos Aires (1113), Argentina. E-mail: tspoll@ffyb.uba.ar
Los alcaloides del tropano hiosciamina y escopolamina son agentes anticolinérgicos empleados en
medicina que se extraen de plantas de la familia Solanaceae ya que su síntesis química es
complicada y costosa.
Con el objetivo de establecer un sistema in vitro de obtención de alcaloides del tropano, fueron
obtenidas raíces transformadas de Brugmansia candida (Solanaceae), mediante la infección de
explantos con Agrobacterium rhizogenes LBA 9402.
Con el fin de optimizar el sistema, se estudió el efecto de diferentes elicitores (bióticos y abióticos)
sobre crecimiento, acumulación de hiosciamina y escopolamina en raíces y liberación al medio de
cultivo.
En el proceso de optimización, se consideraron las siguientes variables: edad de los cultivos,
concentración de elicitor y tiempo de exposición. Fueron analizados los alcaloides por HPLC en
raíces y en medios y la biomasa como peso fresco.
Fueron seleccionados como elicitores ácido jasmónico y tricloruro de aluminio,
ya que fue establecido previamente que tratamientos con jasmonatos exógenos incrementan la
productividad de alcaloides en varias especies vegetales. Por otro lado, el Aluminio, metal tóxico del
suelo, ha sido descripto como un elicitor que induce up-regulación de genes involucrados en
defensa en especies tolerantes a dicho metal.
Sección IV
Transformación
Genética
37
APLICACIÓN DE RECURSOS BIOTECNOLÓGICOS AL MEJORAMIENTO DE LA CEBOLLA
(Allium cepa L.)
I. Transformación genética de cebolla (Allium cepa L.) en busca de resistencia a patógenos
Integrantes: Marinangeli, Pablo; Zappacosta, Diego; Delmastro, Silvia

La productividad de la cebolla (Allium cepa L.), una de las especies hortícolas más importantes del
país en producción y exportación, se ve limitada por varios factores bióticos y abióticos. La falta de
resistencia o tolerancia a microorganismos patógenos es un problema que requiere urgente
solución y que el mejoramiento tradicional no ha podido resolver.
Este proyecto pretende desarrollar un protocolo que permita la transformación genética estable de
cebolla basado en la aplicación combinada de biotécnicas conocidas, con la finalidad última de
introducir construcciones génicas que le confieran resistencia o tolerancia a los patógenos de
mayor impacto en la producción.
En cultivo in vitro se han evaluado distintos explantos de varios cultivares ajustando el medio de
cultivo para la inducción de callos y regeneración de vástagos, regeneración directa de vástagos,
bulbificación y selección con antibióticos. También se ha ajustado un protocolo de aislamiento de
protoplastos. En transformación, se ha obtenido muy buena expresión transiente con
transformación mediada por distintas cepas de Agrobacterium tumefaciens (Agl1, C58 c1rif pMP90
y EHA 105) en: inflorescencias inmaduras de la variedad Valcatorce INTA; en embriones zigóticos
y callos de varios cultivares, entre ellos Valcatorce, Norstar y T412. También se obtuvo muy buena
expresión transiente en embriones y meristemas de Valcatorce por medio del cañon génico.
Actualmente se realizan transformaciones periódicas para ajustar algunos parámetros del proceso
y se inició el cultivo in vitro con medios de selección, según los protocolos propios establecidos,
para obtener callos y vástagos transgénicos. Los genes de interés agronómico que se pretende
incorporar codifican para proteínas antimicrobianas (AceAMP1 y Chi6) que conferirían resistencia
horizontal a los patógenos fúngicos y que han probado ser efectivos “in vitro” y en otras especies.
38
TRANSFORMACIÓN GENÉTICA DE CEBADA A TRAVÉS DEL MÉTODO BIOLÍSTICO
(1) (1) (2,3)

Díaz Paleo A. , Marrero R. , Acevedo A.
(2) (3)
IGEAF, CNIA-INTA, 1712 Castelar. IRB, CRN-INTA, 1712 Castelar. Depto. de Ciencia y
Tecnología, UNQ, 1876 Bernal.
Durante el desarrollo del proyecto “Biotecnología de la tolerancia a estrés abiótico en cebada (H.
vulgare L.)” se puso énfasis en distintas actividades relacionadas con la finalización de la puesta a
punto de un protocolo de transformación genética de cebada por el método biolístico utilizando el
acelerador de microproyectiles PIG (Particle Inflow Gun). El protocolo se basa en el bombardeo de
embriones inmaduros del cultivar Golden Promise –genotipo de alta potencialidad de regeneración
in vitro- utilizando higromicina B como agente selectivo.
Se intentó asimismo la introducción de la secuencia codificante del gen Catalasa1 (Cat1) de
cebada regulado por el promotor constitutivo y primer intrón del gen Act1 de arroz, presente en el
plásmido pBTPaC. La imposibilidad de obtener plantas de cebada transgénicas para dicho gen se
atribuye a la escasa expresión del gen seleccionable hpt de resistencia a higromicina B en cebada
bajo el control del promotor del gen nos. Teniendo en cuenta estos resultados, se desarrollaron en
nuestro laboratorio nuevas construcciones con la secuencia codificante del gen Cat1 y las
secuencias reguladoras 5’ y primeros intrones de los genes Ubi1 y Act1 y la secuencia terminadora
3’ del gen rbcS. Estas secuencias reguladoras garantizan de alta expresión génica en cebada, de
acuerdo con ensayos previos de expresión transitoria con el gen marcador gusA. Estas nuevas
construcciones serán utilizadas en ensayos de transferencia génica en combinación con el
plásmido pAcH1 (Act1::hph::35S CaMV) y pUbar (Ubi1::bar::nos).
El objetivo final es investigar la posible protección contra el daño ocasionado por el estrés abiótico
en plantas que constitutivamente sobreexpresan Cat1 de cebada.
39
BIOTECNOLOGIA PARA EL MEJORAMIENTO DE LA CALIDAD NUTRITIVA EN PASTO
LLORON, Eragrostis curvula (SCHRAD.) NEES.
PARTICIPANTES: Lic. Marina Díaz, Lic. Pablo Polci
Dpto. Agronomía (UNS). San Andrés 800 – 8000 Bahía Blanca.
En un plan de mejoramiento pueden considerarse varias estrategias, como el mejoramiento

convencional, la mutagénesis y la ingeniería genética. Para ser útil, el potencialmente nuevo
cultivar debe ser superior en el carácter clave pero debe también estar adaptado en otros rasgos
agronómicos importantes. En el caso de pastos apomícticos, donde hubiere formas sexuales, a
menos que ambos progenitores estén relativamente bien adaptados, muchos cientos de híbridos
deberían producirse para encontrar uno que fuera aceptable en todas las características
importantes.
Para superar esta dificultad sería imprescindible obtener un cultivar apomíctico que reuniera las
características deseadas, incorporando un gen capaz de introducir el carácter de interés, con la
posibilidad de perpetuar el nuevo genotipo sin segregación ni recombinación.
El objetivo del presente proyecto es mejorar el valor nutritivo del pasto llorón desarrollando una
metodología para la regulación negativa de alguna de las enzimas clave involucradas en el
metabolismo de la lignina. Para lograrlo, se está trabajando en tres aspecto que son
indispensables:
1- Establecer sistemas de cultivo in vitro.
2- Establecer condiciones de regeneración de plantas.
3- Poner a punto una metodología de transformación genética utilizando genes informadores y
marcadores de selección.
En cuanto al primer punto, se ha logrado la obtención de cultivos celulares embriogénicos para
diferentes cultivares de pasto llorón. Se encontró una fuerte influencia del explanto y del genotipo,
siendo las inflorescencias el explanto mas apropiado, y Kromdraai el cultivar que mejor respuesta
posee al cultivo in vitro.
En cuanto al segundo punto, se encontró una metodología apropiada para regenerar plantas
fértiles a partir de cuatro explantos diferentes y de cuatro cultivares de pasto llorón. En cuanto al
tercer punto, si bien los resultados son aún preliminares, podemos considerar que se cuenta con
un sistema de transformación transiente por métodos biolísticos utilizando el gen para β-
glucuronidasa (gusA) como informador, conducido por el promotor de ubiquitina de maíz. Se
bombardearon callos embriogénicos de los cultivares Morpa y Kromdraai y se registró el número de
eventos de transformación por callo (aproximadamente 500). Se está trabajando en un protocolo
de transformación estable, utilizando el gen hph conducido por el promotor Act1.
40
DESARROLLO, SUSTENTABILIDAD Y PLANTAS TRANSGÉNICAS
Elibio L. Rech
elbrech@cenargen.embrapa.br
EMBRAPA Recursos Genéticos e Biotecnologia
Nuestro planeta posee actualmente una población de aproximadamente 6 mil millones de

habitantes, la perspectiva de crecimiento indica que, en torno del próximo año 2030, la población
será de alrededor de 13.000 millones de habitantes.
Si bien existe una heterogeneidad intrínseca en el desarrollo de cada país, hay alrededor
de 5000 grupos étnicos distribuidos en 190 países. Esto no quizás no haya relevante en años
pasados, pero ahora nos impone cuestiones básicas, que no fueron tratadas con la debida
importancia en su momento, por numerosos motivos, de acuerdo con el contexto de la época.
Nuestro planeta, está configurado como un sistema finito desde el punto de vista físico y
además es un sistema no linear cerrado, o sea, donde las causas no poseen una proporcionalidad
directa con los efectos.
Como consecuencia, las evaluaciones, análisis e interpretaciones de cualquier
modificación genética efectuadas en nuestro ecosistema global, poseen características tan
complejas, que hoy sería imposible predecir los efectos de carácter absolutos que podrían traer
aparejados.
Existen evidencias de que casi la totalidad de nuestras biodiversidad, está concentrada en
las regiones de los tropicales y subtropicales. Las selvas tropicales contienen por lo menos la mitad
de todas las especies vegetales y animales existentes en nuestro planeta. El valor económico de
esta biodiversidad es enorme, tanto en el área agrícola como farmacéutica. Este dato, nos sugiere
la necesidad permanente de evaluar las cuestiones asociadas la sustentabilidad y a
nuestro crecimiento económico, de forma racional y objetiva, evitando posiciones lineares. En
suma, la sustentabilidad y el desarrollo económico, deberían estar en íntima relación con las
regulaciones de los diferentes aspectos de la propiedad intelectual. No solamente, en relación con
los conceptos formales de la legislación tradicional de la propiedad intelectual que incluyen
derechos de los mejoradores, patentes, marcas y a los negocios confidenciales, sino
también con una ley más amplia que regule el acceso a la diversididad biológica de los diferentes
intereses y posibilite una protección efectiva de la misma.
Como modelo viable del crecimiento económico, la utilización de las llamadas nuevas
tecnologías, como la biotecnología y microelectrónica, los nuevos materiales, la automatización y la
información deberán formar la base sostenible del desarrollo en nuestro planeta.
Con relación a la biotecnología, especialmente en lo que se refiere a la tecnología del DNA
recombinante -también denominada ingeniería genética- los resultados en el área agrícola están
mostrando evidencia de que los productos vegetales genéticamente modificados, deberán
contribuir en un aumento gradual del 15 a 20 % de nuestra productividad de alimentos en los
próximos años.
La demanda por productos de biotecnología agrícola deberá aumentar significativamente con
relación a la utilización de plantas transgénicas. Actualmente, los productos están más asociados a
la producción de plantas transgénicas conteniendo características que confieren características
endógenas, como tolerancia a herbicidas y resistencia a enfermedades, pero la tendencia es que
avancen también para la generación de
plantas con características que confieran valores exógenos, cono la manipulación en la
composición de aceites o su utilización como biorreactores, para que produzcan,
por ejemplo anticuerpos contra virus o a otras enfermedades, como el cancer.
Desde la manipulación de los genes en el laboratorio, hasta llegar al mercado, la obtención
de una planta transgénica incluye, básicamente, las siguientes etapas: disponibilidad de la
característica (del gen), introducción del gen en la planta de interés, obtención del evento (planta
transgénica expresando la característica deseada); selección e introducción del nuevo genotipo en
un programa de mejoramiento y el lanzamiento de las semillas al mercado. Paralelamente
a este desarrollo se van cumplimentando las etapas que involucran la afirmación de propiedad
intelectual y los correspondientes controles de bioseguridad, tanto alimenticia como ambiental.
El costo para la ejecución de esas etapas varía principalmente en función de: el gen, de la
planta y del tiempo que haya demandado la obtención del evento, pero puede ser estimado entre
los seis y los diez millones de dolares en un tiempo medio de cinco 5 años. Dentro de este
contexto y con una visión amplia del sistema productivo, el desarrollo de estas tecnologías pone a
las plantas transgénicas como un producto desarrollado por una determinada tecnología.
Las plantas transgénicas están siendo citadas aquí apenas como ejemplo, ya que
esas secuencias básicas pueden ser extrapoladas para la generación de otros productos que
incluyan, con las adaptaciones necesarias, la utilización de la tecnología del DNA recombinante en
otros sistemas.
Por lo tanto, necesitamos discutir no solamente la relación entre estructura y
función de genes que transferimos de una especie a otra, con sin la utilización de la ingeniería
genética, como también, hacer más eficiente el desarrollo de mecanismos para la utilización
racional de nuestra biodiversidad, donde nuestro objetivo general no sea solamente la
manipulación de la naturaleza, sino también la determinar y analizar conceptos básicos como las
respuestas de los ecosistemas a la introducción de los organismos genéticamente modificados,
por ejemplo: modificaciones genéticas que puedan ocurrir o sobre como afectarían los OGMs
sobre la evolución de los organismos en nuestro planeta.
41
TRANSFORMACIÓN GENÉTICA DE GIRASOL (Helianthus annuus L.): OBTENCIÓN DE
PLANTAS TRANSGÉNICAS UTILIZANDO ÁPICES DIVIDIDOS COMO EXPLANTO BLANCO DE
Agrobacterium
(1) (2) (2)
Lewi Dalia , Carrari Fernando , Maskin Laura , López Nilda y Escandón Alejandro
Instituto de Biotecnología, CICVyA, CNIA, INTA-Castelar

(1) Dirección actual: Instituto de Genética, CICVyA, CNIA, INTA-Castelar.
(2) Dirección actual: Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.
El girasol es uno de los cultivos oleaginosos más importantes del mundo luego de la soja, la colza
y el maní. En la Argentina se sembraron más de 4.000.000 has y la producción superó las
5.000.000 de toneladas en la campaña 98/99. Este nivel de producción coloca a nuestro país en un
primer plano como productor de girasol y de sus derivados. Es de sumo interés contar con una
tecnología de transformación genética de esta especie que posibilite la introducción y expresión de
genes tanto de importancia agronómica (resistencia a insectos, a enfermedades fúngicas,
tolerancia a herbicidas, a estrés hídrico, etc.) o de calidad (modificación en la composición de
aceites, en las proteínas de reserva, etc.).
Con el objetivo de desarrollar un protocolo de transformación genética de girasol vía Agrobacterium
tumefaciens se puso en ejecución, el PIE 80/002 (Proyecto de Interés Estratégico del INTA). En
este marco se han ensayado diferentes estrategias de transformación (agroinfección por cocultivo,
cañón génico, cultivo líquido), cepas de Agrobacterium , diversos genotipos y explantos (con las
variantes en el cultivo in vitro de tejidos).
Se realizó un relevamiento de la capacidad de regeneración de diferentes genotipos de girasol
cultivado y se seleccionaron aquellos de buen potencial morfogénico. Los mejores resultados de
transformación se han obtenido exponiendo como blanco de infección por cocultivo a los
meristemas preexistentes de embriones maduros. Se estableció un protocolo de regeneración, a
partir de estos meristemas que consiste, básicamente, en una secuencia de diferentes relaciones
de 6-bencil amino purina (BAP) y ácido giberélico (GA3).
Como agente selectivo se utilizó kanamicina 50 mg/l. Esta concentración del antibiótico permitió el
desarrollo de los brotes quiméricos, pero también de escapes, lo que redundó en una disminución
de la eficiencia de transformación. Los brotes finalmente recuperados y rusticados fueron
injertados sobre pies jóvenes en condiciones de invernáculo.
Se han obtenido resultados positivos en plantas analizadas por PCR y por Southern blot y que
expresan el transgén en la reacción histoquímica de ß-glucuronidasa.
La eficiencia de transformación, medida como porcentaje de plantas con reacción PCR positiva en
relación al número inicial de embriones tratados, varía entre 0.9 y 4.6 en los ensayos de cocultivo
con Agrobacterium según la estrategia utilizada.
Actualmente se están analizando más familias en la generación T2.
Los resultados obtenidos muestran la incorporación efectiva de los transgenes al genoma de
girasol, además de la actividad de los mismos y la factibilidad de obtener plantas de girasol
transgénicas y viables por distintos métodos.
42
TRANSFORMACIÓN GENÉTICA DE GIRASOL (Helianthus annuus L.):
“Estudios preliminares de la respuesta de embriones inmaduros como explanto blanco”
(1)
Tejera, A , López, N. y Escandón, A.
Instituto de Biotecnología CICVyA. CNIA –INTA.

(1) Dirección actual: Universidad Nacional de Quilmes
La transformación genética de plantas ha realizado un importante progreso y lo que era una

prespectiva promisoria a fines de los ´80, es en estos momentos una realidad tangible con cultivos
transgénicos ya liberados al medio como algodón, soja, maiz, papa, tomate y otros siguiendo, en
breve, el mismo camino. En este contexto, en la Argentina, el girasol se encuentra en el grupo de
cultivos a punto de ser liberados, con numerosas pruebas a campo efectuadas. A mediados de los
‘80 se produjeron las primeras plantas transgénicas de Nicotiana tabacum a partir de protoplastos
transformados via Agrobacterium tumefaciens. A partir de los ensayos pioneros de Everett et al
(1987) se han logrado importantes avances en la obtención de plantas transgénicas de girasol. De
hecho en diferentes laboratorios del mundo se ha logrado este objetivo y el protocolo se ha
convertido en rutina. Pero, a pesar de los progresos alcanzados, los protocolos de transformación
que se aplican de girasol han mostrado ser muy poco eficientes, siendo su principal inconveniente
el alto número de escapes que se registran. El alto porcentaje de plantas quimeras que se
recuperan y la floración precoz acotan, en forma sustancial, la capacidad de selección “in vitro” de
los protocolos, ya que no se puede aplicar una fuerte presión de selección sin riesgo de perder
quimeras interesantes, además de no poder (debido a la floración precoz) prolongar durante largos
períodos la etapa “in vitro”, esto tiene como consecuencia la obtención de un alto número de falsos
positivos. La hipótesis del presente proyecto es que la utilización de embriones de girasol
inmaduros como explanto blanco de la transformación. Una vez inducido y establecido el cultivo de
callo, se subcultivarán porciones de callo ya sea sobre diferentes a fin de lograr la regeneración de
plantas completas. Paralelamente a los ensayos de regeneración se determinará la sensibilidad de
los callos cultivados a herbicidas y a otros fitotóxicos por medio de curvas dosis respuesta que
permitan establecer la concentración adecuada de fitotóxico a aplicar en un sistema de selección
del material transgénico. En lo que transformación se refiere se ensayarán adaptaciones de los
diferentes protocolo de transformación ya probados en nuestro laboratorio, esto es: biobalística,
Agrobacterium y la combinación de ambas alternativas.
43
IDENTIFICACION DE LINEAS DE MAIZ DE TIPO FLINT PARA LA REGENERACION
Y TRANSFORMACION GENETNICA
Lewi, Dalia M.; Turica,M.; Allocati, J.P.; Salerno, J. C. y Franzone,P.

Instituto de Genética, CICVyA, CNIA INTA-Castelar.
El maíz duro argentino tipo flint o maíz ”Plata“ es apreciado en el mercado internacional debido
entre otros factores a que posee un endosperma de mayor dureza que los maíces dentados. La
industria de alimentos balanceados demanda para la actividad avícola, granos de este tipo debido
a su dureza y alta proporción de pigmentos, sustancias esenciales en la alimentación avícola.
Es de interés obtener un protocolo de transformación de maíz tipo flint que permita obtener plantas
que expresen genes para mejorar características como la calidad del grano o la resistencia a
enfermedades (Mal de Río Cuarto).
Los protocolos de transformación de maíz utilizan en su mayoría el cañón génico y son de carácter
genotipo-dependiente. En el caso de los maíces flint no se ha reportado aún un sistema de
transformación.
En el Instituto de Genética, se han desarrollado líneas de maiz flint que poseen sistemas de genes
letales balanceados las cuales están siendo estudiadas por sus respuestas a la regeneración y
transformación.
La metodología utilizada aborda dos sistemas de transformación: la aceleración de partículas
(cañón génico) sobre embriones inmaduros y el cocultivo de meristemas con Agrobacterium.
En el caso de los embriones inmaduros, se han ensayado tres líneas y un híbrido, y se han
cuantificado los puntos azules observados como expresión estable en la reacción histoquímica de
GUS. Se están llevando a cabo ensayos para ajustar las condiciones de regeneración en medio
selectivo (higromicina) y de rustificación (pasaje a macetas en invernáculo).
Con respecto a la transformación mediada por Agrobacterium, se han tratado explantos extraídos
de plántulas de entre 3 y 6 días de germinación. En estos ensayos se han observado reacciones
de GUS positivas en tejidos de hojas, nervaduras y zonas próximas a la meristemática. Estos
resultados, de tipo preliminar estarían indicando la posibilidad de transformar con Agrobacterium a
células de tejidos provenientes de estas líneas de maíz, lo que resulta promisorio por tratarse de
una monocotiledónea y de genotipos no usados como modelos en la bibliografía.
44
EXPRESIÓN DE PÉPTIDOS ANTIMICROBIANOS DE ANFIBIOS EN PLANTAS DE PAPA
Luppi, J.P., Barzola, K., Mentaberry, A.N.
Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular (INGEBI-CONICET-UBA)
La piel de los batracios es una fuente interesante de compuestos farmacológicamente activos,

entre los que se cuentan numerosos péptidos antifúngicos y antibacterianos. Se conoce la
estructura primaria de unos 20 péptidos de este tipo, los cuales ejercerían su acción perturbando
las funciones normales de la membrana celular. Entre ellos, los péptidos dermaseptina, y
magainina2 han resultado particularmente activos contra distintas especies fúngicas y
bacterianas.El interés principal del presente proyecto es utilizar a la papa (Solanum tuberosum)
como modelo para probar los efectos de estos péptidos, expresados en la forma de proteínas de
fusión con la enzima glucanasa β 1-3, esperando obtener plantas con mayor resistencia a
patógenos fúngicos y bacterianos. Para llegar a obtener la proteína de fusión, se ha procedido a
realizar mutagénesis silente del gen de la glucanasa, y se han sintetizado las secuencias
codificantes para los péptidos magainina y dermaseptina a partir de oligonucleótidos de cadena
simple. La estrategia incluye la remoción opcional de los péptidos de tránsito intracelular de la
glucanasa, de manera de obtener proteínas recombinantes que sean direccionadas al espacio
vacuolar o al apoplástico. El efecto de estos transgenes se analizará en un marco genético
silvestre o en plantas previamente transformadas con los genes que codifican la proteína inhibidora
de ribosomas (RIP), la enzima quitinasa, -ambas provenientes de cebada-, o AP24, una proteína
tipo osmotina proveniente de tabaco, con cuyos genes combinados de a pares se han
transformado plantas de papa variedad Spunta, disponiéndose actualmente de más de 20 líneas
transgénicas en distinto estado de caracterización.Por otra parte se está poniendo a punto un
ensayo en placas de ELISA con el cual se podrá determinar la eficacia de los péptidos por
separado o de la proteína de fusión, frente a distintos patógenos vegetales de origen bacteriano.
45
RESISTENCIA A PATÓGENOS EN TRIGO TRANSGÉNICO
Reggiardo, M.I., Permingeat, H.R., Detarsio, E., Guelman, S., López, M.E., Lustig, S.,
Romagnoli, M.V., Romo, C.L. y Vallejos, R.H.
Centro de Estudios Fotosintéticos y Bioquímicos (CEFOBI), Suipacha 531, 2000 Rosario,

Argentina.
Fusarium graminearum es el agente causal del golpe blanco o fusariosis, una de las
enfermedades más importantes que afectan el trigo cultivado. Las fuentes de resistencia
genética son estrechas y en muchos casos de uso restrictivo. Sin embargo, la ingeniería
genética permite la introducción de genes de resistencia como aquellos que codifican para
proteínas relacionadas con la patogénesis (PR) de otras plantas, los que mostraron proteger a
las plantas transgénicas contra patógenos fúngicos.
En el laboratorio hemos desarrollado un método eficiente para la transformación estable
de trigo. Se realizaron experimentos de cotransformación que involucraron la introducción de
genes reporteros y marcadores de selección en combinación con genes PR que codifican para
glucanasas y/o quitinasas, con el objetivo de aumentar la tolerancia de trigos argentinos contra
el golpe blanco y otras enfermedades fúngicas. Las plantas transgénicas regeneradas del cultivo
in vitro se identificaron por PCR y dot blot. La presencia de los genes mencionados se confirmó
por hibridación Southern.
Varios eventos transgénicos conteniendo hasta 4 transgenes se seleccionaron para
estudiar la expresión de los mismos. La expresión de los genes marcadores de selección y
reportero se confirmó por ensayos de toques con herbicida e histoquímica, respectivamente. La
expresión de los genes de glucanasas y quitinasas se determinó por hibridación Northern,
actividad enzimática y Western blot.
Los transgenes fueron transmitidos a la progenie siguiendo las proporciones
mendelianas para genes simples dominantes. Líneas transgénicas homocigotas de la tercera
generación están siendo analizadas respecto de la resistencia a la infección de patógenos.
Ensayos in vitro preliminares sugieren que algunas de las plantas transgénicas muestran un
aumento de la tolerancia a la infección fúngica.
46
OBTENCIÓN DE PLANTAS TRANSGÉNICAS DE CÍTRICOS EXPRESANDO GENES DE
RESISTENCIA A CANCROSIS (Xanthomonas axonopodis pv citri)
(PROYECTO DE INVESTIGACION Y DESARROLLO CON ADOPTANTE PID-98 – FONCyT -

Aprobado)
INTA – INSTITUTO NACIONAL DE TECNOLOGÍA AGROPECUARIA

EEA-INTA Bella Vista (Ctes.). Laboratorio de Cultivo de Tejidos.
Héctor Miguel Zubrzycki; Alicia Diamante; Carlos Vera Bravo.
INSTITUTO DE BIOTECNOLOGÍA de INTA Castelar (Bs. As.)
Alejandro Escandón;
DIVISIÓN DE BIOLOGÍA MOLECULAR - PROMUBIE Facultad de Ciencia Bioquímicas y

Farmacéuticas - UNR
Néstor Carrillo; María Rosa Marano; Jorgelina Ottado
FEDERACIÓN DEL CÍTRUS DE ENTRE RÍOS - FeCiEr (ADOPTANTES)
Resumen del proyecto
La Cancrosis de los cítricos presente en la región NEA, es causada por Xanthomonas axonopodis
pv citri. La bacteria daña frutas y hojas de las variedades cítricas cultivadas, afectando la
productividad de las plantaciones y el comercio de frutas en el mercado interno y externo. La
enfermedad se controla con aplicaciones de agroquímicos (cúpricos) y otras practicas culturales
que incrementan costos de producción. La UE, destinataria del 90% de las exportaciones cítricas
de Argentina, impuso barreras fitosanitarias a regiones con Cancrosis, dificultando o impidiendo la
comercialización de frutas.
Los cítricos son plantas perennes, poliembriónicas y con elevada heterocigosis, lo que dificulta el
mejoramiento genético por métodos convencionales. La aplicación de biotécnicas como la
transformación de plantas para la obtención de variedades cítricas resistentes, sería el método más
efectivo y económico para controlar la enfermedad. En cítrus se demostró la factibilidad de
transformar y regenerar plantas con Agrobacterium tumefaciens, pero no la incorporación de genes
de resistencia a Cancrosis. Con el fin de obtener plantas cítricas resistentes a Cancrosis se elabora
éste proyecto cuyo objeto es lograr la metodología para obtener plantas transgénicas e identificar
genes en especies cítricas que intervienen en la resistencia a la enfermedad y su incorporación a
variedades de interés comercial.
47
TRANSFORMACIÓN GENÉTICA DE ALFALFA (MEDICAGO SATIVA L)
Rios, R.D.; Ardila, F.; Gómez, M.C.; Ferri, A.M.; Ciancio J.R.; Bonafede M.; Franzone
P.M.
Instituto de Genética “Ewald A. Favret” (IGEAF), CICV y A, CNIA, INTA

CC 25 -(1712) Castelar, Argentina
En alfalfa, si bien hasta el presente varios laboratorios lograron obtener plantas

transgénicas, la técnica no constituye una rutina. En el IGEAF se desarrolla una línea
de investigación que tiene por finalidad la utilización de la transformación genética
para el mejoramiento genético de esta especie. Por esta razón se realizan
investigaciones tendientes a establecer protocolos eficientes y reproducibles para la
transformación genética de genotipos locales de alfalfa, utilizando Agrobacterium
tumefaciens como vector de transformación, así como bombardeo con
microproyectiles. En esta comunicación se presenta el estado actual de desarrollo de
metodología de transformación así como su utilización en estudios básicos y
aplicados. Así, se mostrará el grado de avance en los temas siguientes:
a) Aspectos básicos de la metodología de transformación genética.

b) Resistencia a insectos lepidópteros.
c) Manipulación de la biosíntesis de taninos por ingeniería genética para la
obtención de alfalfa no productora de meteorismo.
48
EXPRESIÓN TRANSGÉNICA DE ISOCORISMATO SINTASA DE Catharanthus roseus EN
CÉLULAS EN SUSPENSIÓN DE Morinda citrifolia Y Rubia tinctorum.
1, 2 2 2 3 3 2
J. Rodriguez Talou , M. Verberne , B. Gonsalvez-Bernal , H. Linthorst , J. Bol y R. Verpoorte
1
Biotecnología, Fac. Farmacia y Bioquímica, Univ. Buenos Aires, Junin 956 1113 Buenos Aires,
2 3
Argentina, Division of Pharmacognosy, LACDR, Institute of Molecular Plant Science, Leiden
University, Gorlaeus Laboratories, P.O. Box 9502, 2300 RA Leiden.
Las antraquinonas (AQs) son metabolitos secundarios y el grupo mas grande de quinonas
naturales. Debido a sus características como ser resistencia a la luz y al calor poseen un
importante potencial para su uso en la industria alimenticia, además de mostrar actividades
antifúngicas y antimicrobianas (1).
La enzima isocorismato sintasa (ICS) es la primer enzima de la ruta metabólica que conduce a la
síntesis de las antraquinonas (AQs.) a partir del ácido corísmico, conectando metabolismo primario
y secundario. ICS ha sido caracterizada y clonada a partir de cultivos en suspensión de
Catharanthus roseus (2). Con el objetivo de estudiar el efecto de la sobreexpresión de ICS en la
biosíntesis de las AQs, el cDNA correspondiente ha sido clonado en un vector de expresión bajo el
control del promotor 35S del CaMV para su expresión en plantas tanto en orientación sense como
en antisense.
La transformación se realizó directamente sobre las suspensiones celulares a través de la infección
con Agrobacterium tumefaciens, de esta manera se obtuvo una población de células transformadas
heterogénea en términos de número de inserciones y localización cromosómica. Las suspensiones
celulares Rubia mostraron una baja eficiencia de transformación (después del ensayo de GUS)
seguido de un oscurecimiento de los cultivos (darkening) después de tres días de cocultivación con
Agrobacterium. Con suspensiones celulares de M. citrifolia se establecieron seis líneas
transgénicas, dos de ellas expresando el gen de la ICS en orientación sense (S 1 y 2), dos
expresando ICS en antisense (AS 1 y 2) y dos transformadas con el vector sin ningún inserto (VO 9
y 10). La actividad de ICS y el contenido de AQs se analizaron en todas las líneas transgénicas
obtenidas.
49
OBTENCIÓN DE PAPA TRANSGÉNICA RESISTENTE A MÚLTIPLES PATÓGENOS
C. Vázquez-Rovere, S. Asurmendi, V. Romero, A. Dengis, H.E. Hopp.
Instituto de Biotecnología, CICV- INTA Castelar.
El objetivo de este proyecto es introducir genes que confieran resistencia a patógenos fúngicos y
virales en un cultivar de papa de interés comercial para la región (Kennebec), para incrementar el
rendimiento económico por disminución de la incidencia de enfermedades y a la vez disminuir el
impacto ambiental producido por el uso de agentes químicos como fungicidas y acaricidas . Para
ello se ha empleado la estrategia de transformación genética mediada por Agrobacterium
tumefaciens para obtener expresión simultánea de varios transgenes. En este trabajo se decidió
utilizar genes con probada capacidad de conferir resistencia a hongos por su interacción sinérgica
en la planta. Estos son, dos genes que codifican para enzimas capaces de degradar la pared de
los hongos: un gen de quitinasa (CHI) de Hordeum vulgaris y una β-1,3 glucanasa (GLU) de
tabaco, y otros dos genes con capacidad inhibitoria de patógenos: el gen AP24 derivado de tabaco,
una proteína similar a la taumatina capaz de alterar la permeabilidad de la pared celular de ciertos
microorganismos y un gen que codifica para una proteína inhibitoria de ribosomas (RIP),
proveniente de Hordeum vulgaris, que solo es funcional ante ribosomas de microorganismos. Para
conferir resistencia a virus se ha utilizado el gen de la proteína de cápside del virus del mosaico de
lechuga (cpLMV) que confiere resistencia heteróloga al virus Y de la papa (PVY) y el gen de la
replicasa del virus del enrollamiento de la hoja de la papa (rPLRV), En el laboratorio se han
generado varias construcciones que contienen combinaciones de dos genes, bajo el control del
promotor 35S del CaMV, las que han sido clonadas en vectores binarios pZP200 con los cuales se
ha transformado la cepa LBA 4404 de A. Tumefaciens, utilizando diferentes marcadores de
selección, para lo cual hemos optimizado el uso de kanamicina como agente selectivo primario e
higromicina y fosfinotricina como agentes selectivos secundarios para ensayos de co-
transformación. Hasta el momento se han obtenido 155 plantas cpLMV-rPLRV, 108 plantas RIP-
CHI, 32 plantas AP24-GLU, 10 plantas cpLMVrPLRV/RIP-CHI, y 2 plantas RIP-Chi/AP24-GLU.
Las plantas obtenidas se están evaluando a nivel molecular (PCR) para confirmar la presencia de
los transgenes. Posteriormente se evaluará el nivel de expresión de las proteínas antifúngicas para
seleccionar las líneas más adecuadas, y se realizarán ensayos biológicos de resistencia frente a
patógenos.
Este trabajo forma parte de un proyecto de la UE en el cual están involucrados laboratorios de
varios países de Latinoamérica y Europa, cuyo objetivo final es la obtención de líneas transgénicas
que retengan las características de interés comercial y agronómico y a su vez presenten un alto
nivel de resistencia a múltiples patógenos.
50
PRODUCCIÓN DEL FACTOR DE CRECIMIENTO EPIDÉRMICO HUMANO (HEGF) EN
PLANTAS TRANSGÉNICAS DE TABACO
Wirth, S.; Cabral, S.; Mentaberry, A.N. y Bravo Almonacid, F.
Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular.

INGEBI - UBA - CONICET. Obligado 2490 Buenos Aires.
La expresión de genes heterólogos en procariotas ha conducido en muchos casos a la producción

y comercialización de proteínas recombinantes de uso industrial y farmacológico. Sin embargo la
falta de las enzimas responsables de plegar correctamente un polipéptido e incorporar las
modificaciones postraduccionales usuales en eucariotas, hechos que pueden restringir altamente
su utilidad, han limitado el uso de estos sistemas y dirigido la investigación al uso de sistemas
animales o vegetales.
Aunque existen diversos ejemplos de expresión de proteínas heterólogas en plantas,
principalmente con fines agronómicos, el intento de utilizarlas como biorreactores es aún un
campo en desarrollo. En este contexto, y utilizando como modelo la producción del factor de
crecimiento epidérmico humano (hEGF), hemos transformado discos de Nicotiana tabacum var.
Xanthi D8 con cuatro construcciones distintas. Dos de ellas, a las que llamaremos versiones
citoplasmáticas, llevan el gen de hEGF bajo el control de un promotor 35S del virus del mosaico del
coliflor (CaMV) en un caso y del promotor 35S duplicado, además de una secuencia enhancer
traduccional ( ) del virus del mosaico del tabaco (TMV), en el otro. Las otras dos construcciones
permitirán analizar si existe alguna ventaja en enviar la proteína producida al espacio extracelular o
apoplasto. A tal fin se fusionó, en marco de lectura la señal de tránsito a retículo endoplasmático
del gen de la osmotina de tabaco al gen de hEGF. Al igual que en las versiones citoplasmáticas,
las apoplásticas difieren entre sí en que una lleva el promotor 35S del CaMV y la otra el 35S
duplicado y la secuencia del TMV.
Hasta la fecha, se han obtenido regenerantes de cada construcción y se está evaluando su
carácter transgénico por ensayos de PCR y actividad de neomicina fosfotransferasa (marcador de
selección utilizado), así como el nivel de hEGF producido en cada caso, lo que permitirá hacer un
análisis estadístico a fin de comparar la efectividad de cada construcción.
51
UTILIZACIÓN DE GFP COMO MARCADOR DE EXPRESIÓN TRANSITORIA EN DISCOS
BASALES DE AJO
Pablo ZALTZ, Silvia CABRAL y Alejandro N. MENTABERRY.
INGEBI-CONICET. Vuelta de Obligado 2490. 1428 Buenos Aires. amenta@dna.uba.ar
La transformación genética del ajo es una importante herramienta en el mejoramiento agronómico

de la especie. Debido a la ausencia de floración en la mayoría de las variedades de ajo, el
mejoramiento clásico no es posible. La introducción de genes mediante técnicas de ingeniería
genética permitiría superar esta limitación. En el caso del ajo, se conoce el modo de regenerar una
planta entera a partir de callos, meristemas y discos basales, entre otros explantos.
El proceso de transformación requiere contar con un gen marcador capaz de reportar la expresión
transitoria del DNA introducido. Debido a la elevada actividad endógena beta-glucuronidasa
presente en la mayoría de los tejidos de ajo, no es posible utilizar al gen uidA, que codifica para la
enzima beta-glucuronidasa de E. coli (GUS) como marcador. Con el fin de encontrar un gen
reportero adecuado se introdujo mediante bombardeo con microparticulas, el gen que codifica la
proteína verde fluorescente de Aequorea victoria (GFP) en discos basales de ajo.
Se aislaron discos basales de bulbillos de ajo variedad “colorado”. Una parte de éstos fueron
bombardeados con partículas recubiertas con el plásmido pGEMGUS (35S::uidA) (control
negativo); otra parte fueron bombardeados con el plásmido pBSGFP5 (35S::gfp5). Se evaluó la
expresión de GFP a las 24, 48 y 72 horas observando los explantos bajo el microscopio de
epifluorescencia. Los componentes de la pared celular presentan una elevada fluorescencia que en
muchos casos pueden dificultar la observación de otras estructuras fluorescentes. En los explantos
bombardeados con pGEMGUS se observaron estructuras que presentaban fluorescencia amarilla,
la cual se atribuye a las autofluorescencia antes descripta. A pesar de esto, entre las 24 y 48
horas, en los discos bombardeados con pBSGFP, se observó fluorescencia verde en el interior de
varias células, la cual se mantiene a las 72 horas. Esto nos permite concluir que GFP es un
marcador adecuado para evaluar la expresión transitoria en discos basales de ajo, como parte del
procedimiento para generar plantas transgénicas de ajo.
Sección V
Biología
Molecular
52
SILENCIAMIENTO DE LOS GENES ENDOGENOS DE LAS SUBUNIDADES DE GLUTENINAS
DE ALTO PESO MOLECULAR INDUCIDO POR LA INTRODUCCIÓN DE TRANSGENES
HOMÓLOGOS EN TRIGO
1 1 2 1 1 1 2
M.L.Alvarez ; S. Guelman ; N. Halford ; S. Lustig ; M.I. Reggiardo ; N. Ryabushkina ; P. Shewry ;
1 1
J. Stein ; R.H. Vallejos
1
Centro de Estudios Fotosintéticos y Bioquímicos (CEFOBI). Suipacha 531, (2000) Rosario,
Argentina. (cefobi@arnet.com.ar)
2
Deparment of Agricultural Sciences, University of Bristol, AFRC Institute of Arable Crops
Research, Long Ashton Research Station, Long Ashton, Bristol, BF18 9AF, U.K.
Las diferencias observadas entre la calidad panadera de distintos cultivares de trigo se

hallan estrechamente correlacionadas con variaciones alélicas en el número y/o estructura y
propiedades de las subunidades de gluteninas de alto peso molecular (APM), una familia de
proteínas sintetizadas en el endosperma en desarrollo. Con el objeto de mejorar la calidad
panadera, las subunidades de gluteninas de APM 1Ax1 y 1Dx5, asociadas con buena calidad
panadera, fueron introducidas por biolística y expresadas o sobreexpresadas en variedades
comerciales de trigos argentinos que ya expresaban 5 subunidades.
Se analizaron 6 eventos transgénicos, tres de los cuales resultaron en un silenciamiento
parcial o completo de genes endógenos. En dos de estos eventos, la introducción en un bajo
número de copias y la expresión del gen 1Ax1 fue asociada con una completa inactivación de su
gen alélico 1Ax2*, pero sólo cuando el transgén fue homocigota, sugiriendo un efecto de dosis del
transgén. En el tercer evento, se observó un silenciamiento de todas las subunidades de glutenina
de APM endógenas, junto con la expresión del gen 1Ax1 y la sobreexpresión del 1Dx5. En este
caso el silenciamiento fue asociado con alto número de copias y múltiples sitios de inserción de los
transgenes.
Los transgenes y su patrón de expresión fueron establemente transmitidos a la progenie en
todos los eventos, menos en uno, en el cual, el silenciamiento de todas las subunidades de
gluteninas endógenas se revirtió debido a una drástica pérdida de número de copias de los
transgenes. Este fenómeno confirma el hecho de que la integración de un alto número de copias
aumenta la eficiencia de silenciamiento.
Un aspecto común de muchos casos de silenciamiento inducido por transgenes es la
presencia de homología entre las secuencias de los mismos y los genes endógenos. El
silenciamiento observado podría estar operando tanto a nivel transcripcional como
postranscripcional ya que los transgenes introducidos tiene homología con la región promotora y
codificante de algunos de los genes silenciados.
CLONADO Y EXPRESIÓN DE UN GEN DE SORGO INVOLUCRADO EN LA RESISTENCIA AL
BROTADO PRE COSECHA.
53
F. Carrari, L. Perez-Flores, D. Lijavetzky, R. Benech-Arnold y N. Iusem.
LFBM, FCE y N Universidad de Buenos Aires. Årgentina.
El brotado pre-cosecha (BPC) es una de las causas de pérdidas de cosecha en los

cereales. En sorgo granífero, este problema se encuentra asociado a la falta de dormición de las
semillas durante su desarrollo, lo cual está determinado genéticamente. Trabajos recientes han
demostrado que la falta de dormición de semillas de genotipos susceptibles al BPC se encuentra
asociada a una baja sensibilidad de los embriones al ácido abscísico (ABA). Por otro lado, plantas
de maíz mutantes para el gen vp1 presentan este mismo fenotipo.
En este trabajo, utilizando oligonucleótidos heterólogos clonamos el gen de sorgo
homeólogo a vp1 de maiz, determinamos la secuencia genómica y analizamos la expresión
durante la ontogenia de los embriones y germinación de las semillas.
El análisis de la expresión durante la ontogenia mostró un patrón diferencial entre el
genotipo resistente y el susceptible al BPC. Mientras que la cantidad de mRNA cae durante el
desarrollo de los embriones susceptibles, en el genotipo resistente el pico de expresión de Sbvp1
(Sorghum bicolor vp1) se encuentra a los 30 días después de la floración, momento en el cual se
observan la mayores diferencias de germinación entre ambos genotipos. Por otro lado, durante la
germinación de las semillas, los niveles de Sbvp1 caen rapidamente después que las semillas son
embebidas; sin embargo la tasa de caída de dichos niveles resulta mayor en los genotipos
susceptibles al BPC.
Estos resultados apoyan la hipótesis de la participación de este gen en el control de la
resistencia al BPC en sorgo granífero.
SEMILLAS DE GIRASOL: FUENTE DE PÉPTIDOS ACTIVOS CONTRA HONGOS PATÓGENOS
54
DE PLANTAS
Regente, M., Espinosa Vidal, E., de la Canal L.
Instituto de Investigaciones Biológicas – UNMdP – C.C. 1245 – 7600 – Mar del Plata – E-mail:
ldelacan@mdp.edu.ar
Es te proy ec to enc aró el ais lamiento de péptidos antifúngic os analiz ando ex trac tos de
s emilla de giras ol por s u c apac idad de inhibir la germinac ión de es poras fúngic as .
Uno de los péptidos ais lados , PA10 (10 k Da), pertenec e a la familia de las “lipid trans fer
proteins ” (LTPs ), c onoc idas por s u c apac idad de trans ferir lípidos entre membranas in vitro y por
s u ac tividad antimic robiana. PA10 ac túa s obre Fus arium s olani c omo agente fungis tátic o,
produc iendo una reduc c ión del 50% del c rec imiento en una c onc entrac ión de 6.5 µg/ml, valor
c omparable a los des c riptos para las LTPs más potentes . En c uanto a s u modo de ac c ión, s e
determinó que PA10 s e une a las es poras fúngic as e interac c iona c on membranas para ejerc er s u
ac tividad. Además , s e detec tó s u pres enc ia en el fluido ex trac elular de la s emilla, loc aliz ac ión
c ompatible c on la limitac ión del ataque fúngic o.
Otra proteína ais lada e identific ada, PA15 (15 k Da), pertenec e a la familia de las 2S
albúminas , proteínas de res erva c uy a ac tividad antifúngic a s e ha des c ripto para algunas es pec ies .
PA15 es ac tiva c ontra Sc lerotinia s c lerotiorum en c onc entrac iones s uperiores a 100 µg/ml,
s ugiriendo una baja potenc ia antifúngic a. Sin embargo, s u partic ipac ión en la defens a no debe s er
des c artada por s u alta abundanc ia relativa en s emillas de giras ol y por s u potenc ial s inergis mo c on
otro tipo de proteínas antifúngic as , c omo s e ha des c ripto para las 2S albúminas de la familia
Bras s ic ac eae.
Es tudios futuros tenderán a c ompletar la c arac teriz ac ión y c lonado de las proteínas
ais ladas , c omo as í también identific ar y c arac teriz ar otras proteínas antifúngic as detec tadas en
s emillas de giras ol, que podrían c ons tituir en forma c onjunta una barrera de protec c ión c ontra
patógenos mic robianos .
55
EL CLOROPLASTO COMO BLANCO DE LA BIOTECNOLOGÍA
Diéguez, María José; Colombo, Noemí; Arias, M. del Carmen; Saione, Héctor; Manghers, Luis;
Ríos, Raúl y Prina, Alberto
Instituto de Genética “Ewald A. Favret” (IGEAF) CYCVyA-CNIA-INTA
El cloroplasto, además de dar base estructural a la fotosíntesis, es portador de genes involucrados

en la regulación de caracteres de gran interés agronómico-comercial como la tolerancia a
herbicidas y la eficiencia fotosintética. La genética cloroplástica es altamente conservativa y la
mutagénesis preferencial del genoma cloroplástico ha sido habitualmente poco exitosa. Sin
embargo, se ha descripto en cebada un gen mutador de cloropastos Cpm/cpm que permite generar
en forma simple y eficiente variabilidad genética en el plastoma sin afectar el núcleo y las
mitocondrias. Inicialmente se observó que este gen nuclear, al estado homocigota recesivo,
produce un amplio espectro de deficiencias clorofílicas de herencia materna cuya expresión, una
vez inducida, es independiente de la constitución nuclear. Además, a partir de este genotipo
mutador se aislaron dos mutantes de cebada con tolerancia al herbicida atrazina que presentaron
una mutación de punto en el gen cloroplástico psbA, responsable de la tolerancia a este herbicida
en otras especies.
El aislamiento molecular del gen Cpm/cpm, permitiría su uso en una estrategia antisentido en otras
especies de importancia agronómica con el fin de generar variabilidad genética en los cloroplastos
de las mismas y asi obtener alelos de utilidad agronómica (resistencia a herbicidas, tolerancia a
estrés abiótico, etc.). A su vez, el genoma cloroplástico se presenta actualmente como un blanco
clave para la transformación genética pues presenta numerosas ventajas con respecto a la
integración de transgenes en el genoma nuclear (niveles de expresión, no existe silenciamiento,
bioseguridad, reemplazo génico, transcriptos policistrónicos, etc.). La caracterización de los efectos
del mutador sobre el ADN del cloroplasto de líneas selectas, algunas de las cuales poseen
expresión termosensible, temporal, tejido-específica o de alta frecuencia de reversión haría
disponibles herramientas potencialmente útiles para el desarrollo de las construcciones necesarias
(vectores y señales regulatorias). Por otro lado, también se están seleccionando mutantes con
tolerancia a salinidad, temperatura y diversos herbicidas.
56
SONDAS MOLECULARES PARA VIROIDES EN CITRICOS
1 1 2 3
M.I. Plata , N.B. Costa , L. Semorile y N. Durán-Vila
1
Estación Experimental Agropecuaria Concordia, INTA, Concordia, E. R. ,
2 3
Email:plata@concordia.com.ar Universidad Nacional de Quilmes, Instituto Valenciano de
Investigaciones Agrarias (IVIA), Valencia, España
Las enfermedades causadas por viroides en el cultivo de los cítricos (exocortis y cachexia) causan
daños económicos importantes y se difunden fácilmente a través de material de propagación
(injerto de yemas) y mecánicamente (por medio de herramientas). Este proyecto nos permitirá
poner a punto un método de diagnóstico más sensible y rápido (3 meses) que el actualmente en
uso (con plantas indicadoras) que es lento (1 ó 2 años según el viroide a diagnosticar, poco
sensible (no manifiesta todos los viroides presentes) y errático (muchas veces el indicador
biológico no manifiesta el viroide que se está analizando). Esta puesta a punto se realizará a través
de:
i- Determinar los viroides que se encuentran en las plantas madres,

proveedoras del material de propagación
ii- Relacionar los viroides con los síntomas en el indicador biológico (cidra
Etrog)
iii- Caracterización molecular de los viroides encontrados
iv- Obtención de sondas moleculares específicas
Esta metodología (hibridación de impresiones) está recomendada para los programas de

certificación de Plantas Madres Cítricas “libres de enfermedades”, e.g. España.
Este proyecto ha sido presentado al Fondo de la Comisión Mixta de la Cooperación Hispano-

Argentina para su aprobación.
57
USO DE TECNICAS DE BIOTECNOLOGIA EN EL SANEAMIENTO Y
CERTIFICACION DE CITRICOS EN ARGENTINA
M.I. Plata, N.B. Costa y C.M. Anderson
Estación Experimental Agropecuaria Concordia, Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria,

C.C. 34, 3200 Concordia, Entre Ríos, Email:plata@concordia.com.ar
PROCITRUS, el programa de mejora genética y sanitaria de material cítrico de Argentina, tiene

como objetivo principal proveer a los viveristas con clones selectos libres de enfermedades para la
producción comercial de plantas de vivero en todo el país. El material introducido al Programa es
sometido a microinjerto de ápices caulinares in vitro para la obtención de plantas libres de
patógenos. Se utilizan diversos métodos de detección de patógenos basados en la serología
[Inmunoimpresión-ELISA para el virus de la tristeza de los cítricos (CTV), ELISA-DAS para
Xanthomonas axonopodis pv. citri (cancrosis) y Xylella fastidiosa (clorosis variegada de los
cítricos)] y en técnicas moleculares para el análisis de ácidos nucleicos (hibridación de impresiones
para exocortis y cachexia-xiloporosis), las cuales se están poniendo a punto en el Laboratorio de
Protección Vegetal y Biotecnología de la EEA Concordia. Estas nuevas técnicas tienen varias
ventajas sobre el uso de plantines indicadores: sencillez, rapidez, y especificidad lo que permite
procesar un mayor número de muestras en menor tiempo con resultados altamente confiables. En
el caso de las técnicas mencionadas el tiempo de diagnóstico se reduce a 3 meses. Con estos
avances se puede acortar considerablemente el período total que lleva liberar un cultivar para estar
disponible para su propagación. Actualmente este Programa tiene 102 cultivares “libres de
enfermedades”.
58
PROYECTO: PRESENTACIÓN DE ANTÍGENOS EN LA SUPERFICIE DEL VIRUS X DE LA
PAPA
1 2-3 2 2 2 1 2
F. Verna , G. Calamante , C. Tami , O. Taboga , F. Bigi , K. Kobayashi , A. Cataldi y A.
1-3
Mentaberry
1 2 3
( ) INGEBI-CONICET, Bs. As. ( ) Inst. de Biotecnología, CICVyA-INTA, Castelar, Bs. As., ( )
FCEyN-UBA
La utilización de los virus vegetales como presentadores de epitopes de virus animales y humanos
posee un gran potencial para el desarrollo de vacunas efectivas, económicas y seguras El objetivo
de nuestro proyecto es la obtención de virus X de la papa (PVX) quimérico que exprese en su
superficie antígenos derivados del virus de la fiebre aftosa (VFA). En una colaboración INGEBI-
INTA se ha diseñado un sistema de presentación de antígenos foráneos en la superficie de PVX,
con el que se ha construido el virus quimérico PVX-2a-sitioA. Este virus presenta en su superficie
el sitioA del VFA, infectó sistémicamente plantas de N. Benthamiana y la proteína de fusión CP-2a-
sitioA se detectó tanto en hojas inoculadas como en las hojas superiores a las mismas. Tomando
como partida los resultados obtenidos con PVX-2a-sitioA, se obtendrán virus PVX quiméricos que
presenten las proteínas estructurales VP1 y P1 del VFA en su superficie (PVX-2a-VP1 y PVX-2a-
P1 respectivamente). A su vez, se obtendrán vectores de inserción derivados de PVX para
expresar las proteínas estructurales del VFA antes mencionadas. Posteriormente, se evaluará la
respuesta inmune inducida y el grado de protección conferido por los virus quiméricos PVX-2a-A,
PVX-2a-VP1 y PVX-2a-P1 y por los vectores de inserción PVXVP1 y PVXP1, utilizando para ello el
modelo experimental murino.
En una segunda instancia, dado que en nuestro país no se vacuna contra la tuberculosis bovina, el
desarrollo de métodos sensibles para el serodiagnóstico de la misma es de gran importancia. En el
INTA Castelar se han identificado y clonado diversos antígenos de Micobacterium bovis, entre los
cuales se encuentran las proteínas P36 y ESAT-6. Se obtendrán virus PVX quiméricos que
presenten dichas proteínas en su superficie (PVX-2a-P36 y PVX-2a-ESAT-6), los cuales serán
utilizados para el desarrollo de un sistema de diagnóstico por ELISA.
Sección VI
Marcadores
Moleculares
58
PROYECTO: PRESENTACIÓN DE ANTÍGENOS EN LA SUPERFICIE DEL VIRUS X DE LA
PAPA
1 2-3 2 2 2 1 2
F. Verna , G. Calamante , C. Tami , O. Taboga , F. Bigi , K. Kobayashi , A. Cataldi y A.
1-3
Mentaberry
1 2 3
( ) INGEBI-CONICET, Bs. As. ( ) Inst. de Biotecnología, CICVyA-INTA, Castelar, Bs. As., ( )
FCEyN-UBA
La utilización de los virus vegetales como presentadores de epitopes de virus animales y humanos
posee un gran potencial para el desarrollo de vacunas efectivas, económicas y seguras El objetivo
de nuestro proyecto es la obtención de virus X de la papa (PVX) quimérico que exprese en su
superficie antígenos derivados del virus de la fiebre aftosa (VFA). En una colaboración INGEBI-
INTA se ha diseñado un sistema de presentación de antígenos foráneos en la superficie de PVX,
con el que se ha construido el virus quimérico PVX-2a-sitioA. Este virus presenta en su superficie
el sitioA del VFA, infectó sistémicamente plantas de N. Benthamiana y la proteína de fusión CP-2a-
sitioA se detectó tanto en hojas inoculadas como en las hojas superiores a las mismas. Tomando
como partida los resultados obtenidos con PVX-2a-sitioA, se obtendrán virus PVX quiméricos que
presenten las proteínas estructurales VP1 y P1 del VFA en su superficie (PVX-2a-VP1 y PVX-2a-
P1 respectivamente). A su vez, se obtendrán vectores de inserción derivados de PVX para
expresar las proteínas estructurales del VFA antes mencionadas. Posteriormente, se evaluará la
respuesta inmune inducida y el grado de protección conferido por los virus quiméricos PVX-2a-A,
PVX-2a-VP1 y PVX-2a-P1 y por los vectores de inserción PVXVP1 y PVXP1, utilizando para ello el
modelo experimental murino.
En una segunda instancia, dado que en nuestro país no se vacuna contra la tuberculosis bovina, el
desarrollo de métodos sensibles para el serodiagnóstico de la misma es de gran importancia. En el
INTA Castelar se han identificado y clonado diversos antígenos de Micobacterium bovis, entre los
cuales se encuentran las proteínas P36 y ESAT-6. Se obtendrán virus PVX quiméricos que
presenten dichas proteínas en su superficie (PVX-2a-P36 y PVX-2a-ESAT-6), los cuales serán
utilizados para el desarrollo de un sistema de diagnóstico por ELISA.
60
UTILIZACIÓN DE MARCADORES RAPDs EN ALFALFA (Medicago sativa L.)
¹Marcos D. Bonafede, Raúl D. Ríos, Claudio G. Robredo, ²Daniel Basigalup
¹Instituto de Genética “Ewald A. Favret”, CICVyA, CNIA, INTA,C.C. 25 (1712) Castelar, Argentina.
²INTA EEA-Manfredi, Ruta Nac. N°9 Km 636, Manfredi, Córdoba.
La alfalfa (Medicago sativa L) es una leguminosa forrajera de amplia importancia mundial,

constituyendo en nuestro país uno de los pilares más destacados de la ganadería argentina.
En el presente trabajo se realizó la puesta a punto de la técnica de RAPDs en esta especie.
Esta metodología se está aplicando a la evaluación de la variabilidad genética de dos poblaciones
comerciales del programa de mejoramiento del INTA, de diferente latencia invernal.
Hasta el presente se evaluaron 27 individuos de cada una de las dos poblaciones con 30 “primers”.
De ellos se seleccionaron 15, que mostraron mayor número de bandas polimórficas nítidas y
repetibles en distintas reacciones, para realizar el correspondiente análisis de variabilidad. Cabe
destacar que se han encontrado “primers” que amplifican bandas específicas para cada población.
Con estos mismos “primers” se evaluarán otras poblaciones de dicho programa del INTA Manfredi.
61
APROXIMACIÓN BIOTECNOLÓGICA PARA LA SELECCIÓN DE VARIEDADES ARGENTINAS
DE FRUTILLA E IDENTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS/GENES Y COMPUESTOS NATURALES
PARA LA DEFENSA VEGETAL.
Castagnaro A, Diaz Ricci JC, Zembo JC, Mroginski L, Filippone P, Ontivero M, Arias M, Mamani de
Marchese A, Salazar S, Aprea A, Coll García Y, Vellicce G, Terada G, Kirschbaum D, Gamboa S,
Brandán E, Martínez Novillo J y Bulacio E.
Instituto Superior de Investigaciones Biologicas (INSIBIO), Conicet-UNT.
Este proyecto interdisciplinario e interinstitucional, incluye aspectos básicos y tecnológicos del

cultivo de la frutilla. Desde un punto de vista básico:
i) Se caracterizan especies silvestres relacionadas con la cultivada Fragaria ananassa y se
estudian las relaciones evolutivas entre ellas: se describió botánicamente una nueva
especie vegetal que denominamos Potentilla tucumanensis.
ii) Tomando como modelo la enfermedad de la antracnosis, se investiga la interacción
patógeno/planta bajo condiciones controladas y se identifican proteínas (genes) y
compuestos de defensa: se purificaron compuestos antimicrobianos de hojas de frutilla que
fueron llamados Fragarinas.
iii) Se estudian cultural, morfológica y genéticamente las cepas de patógenos: sobre distintas
variedades y en diferentes zonas frutilleras del país, se han aislado tres especies de
Colletotrichum (C.fragariae, C.acutatum y C.gloeosporioides) causantes de la antracnosis.
iv) A través de rastreo genómico molecular y de BSA (“Bulked Segregant Analisys”), se
desarrollan marcadores moleculares para identificar fondos genéticos y para seguir
caracteres de interés en descendientes de cruzas intra e interespecíficas: se han detectado
marcadores RAPD (“Random Amplified Polymorphic DNA”) específicos de especies.
v) También se evaluará el nivel de protección que confieren y los mecanismos de acción de
genes de defensa, transferidos por ingeniería genética vía Agrobacterium tumefasciens.
Toda la información básica es aprovechada en una aproximación biotecnológica que combina el
mejoramiento genético clásico con el molecular, para:
vi) La obtención de cultivares de frutilla con un nivel de productividad competitivo y con
resistencia genética a factores de estrés biótico: se dispone de selecciones avanzadas
más resistentes a enfermedades que sus progenitores comerciales, usados como testigos.
vii) Evolucionar hacia sistemas de producción sin bromuro de metilo, que minimizan la
utilización de agroquímicos y que integran el uso de nuevas variedades, la producción de plantines
en viveros y el manejo agronómico del cultivo.
62
APLICACIÓN DE MARCADORES AFLP EN EL ANÁLISIS GENÓMICO Y MEJORA DE
ESPECIES LEÑOSAS. AVANCES EN LA VITICULTURA MOLECULAR
M.T. Cervera, J.A. Cabezas J.M. Martínez-Zapater
Departamento de Genética Molecular de Plantas, Centro Nacional de Biotecnología (CSIC).

Campus Universidad Autónoma de Madrid, Cantoblanco 28049 Madrid
Tradicionalmente, la mejora genética se ha basado en el análisis de caracteres morfológicos. El

éxito de este enfoque depende, en gran medida, de la heredabilidad de los caracteres, y del tiempo
requerido para completar un ciclo de mejora. Pese a que la vid es uno de los cultivos frutícolas de
mayor importancia mundial, el conocimiento de su genética es pobre fundamentalmente debido a
que esta especie leñosa muestra largos tiempos de generación, elevada heterozigosidad,
depresión por consanguinidad y largos periodos de juvenilidad por lo que muchos caracteres de
interés agronómico se expresan de forma tardía en el desarrollo. Sin embargo, el desarrollo de
nuevas técnicas moleculares ha facilitado el análisis genético de la vid permitiendo el desarrollo de
la mejora molecular.
Entre las nuevas técnicas de análisis molecular, AFLP y técnicas derivadas (SAMPL, S-SAP,
MSAP) destacan por su elevada razón múltiple y reproducibilidad. Además no requieren
información de la secuencia previa al análisis. Estos marcadores se muestran como herramientas
muy útiles en estudios de diversidad, identificación y discriminación de genotipos, permitiendo la
caracterización genética de variedades y clones de interés. Asimismo, los marcadores moleculares
permiten la rápida construcción de mapas genéticos en los que podemos identificar regiones que
controlan caracteres de interés agronómico mediante la asociación de marcadores con dichos
caracteres. Los proyectos de mejora genética asistida por marcadores en especies leñosas se
basan en la canalización de la información de ligamiento entre marcadores asociados a caracteres
de interés, permitiendo la selección precoz para caracteres de difícil evaluación. Durante la
presentación discutiremos nuevos abordajes moleculares en el análisis genético y mejora de la vid.
63
DESARROLLO DE VARIEDADES DE ARROZ CON RESISTENCIA DURABLE A
PYRICULARIA GRISEA.
1 2 1 1
Consolo, Fabiana , Cordo, Cristina , Giarrocco, Laura y Graciela Salerno .
1
Centro de Investigaciones Biológicas-FIBA-INBIOP (CONICET)-Vieytes 3103. 7600. Mar
del Plata. Universidad Nacional de Mar del Plata. Argentina. E-mail: fibamp@mdq.com.ar
2
. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales. Calle 60
y 119. 1900. La Plata.
El arroz es la principal fuente de alimentación de más del 50% de la población mundial.

En nuestro país es un componente fundamental en la economía de las provincias de
Entre Ríos, Corrientes, Santa Fe, Chaco y Formosa. Su producción pasó en los últimos
cinco años de 400.000 a 1.200.000 toneladas. Para satisfacer la demanda de nuevos
mercados internacionales y sostener los niveles de producción ya obtenidos es
imprescindible contar con variedades de alto rendimiento que sean resistentes al ataque
de insectos y enfermedades.
Una de las principales enfermedades que ataca a los cultivos de arroz es el "quemado" o
“bruzone” causada por el hongo Pyricularia grisea (Cooke) Sacc que se encuentra muy
difundida a nivel mundial. En la Argentina se ha detectado la presencia del patógeno en
todas las campañas, por lo cual es necesario contar con variedades de arroz resistentes
a P. grisea para evitar un ataque que resulte en pérdidas importantes en la producción.
La caracterización biológica de los aislamientos de P. grisea utilizando metodologías y
enfoques modernos permitirá analizar la estructura de la población e identificar las
familias genéticas presentes en nuestro país.
El objetivo de este proyecto es realizar una caracterización exhaustiva y sistemática a
nivel de ADN de la población nativa de P. grisea para detectar e incorporar resistencia a
las familias genéticas del patógeno presentes en nuestro país en variedades comerciales
de arroz.
La detección de marcadores moleculares fuertemente ligados a genes de resistencia al
patógeno proveerá una herramienta fundamental para acelerar la selección de genotipos
resistentes con el fin de desarrollar nuevas variedades de arroz con resistencia durable a
P. grisea.
64
CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DE PLANTAS MICROPROPAGADAS DE PARAÍSO
GIGANTE (Melia azedarach L. var gigantea).
PARTICIPANTES: Ing. Sofía Olmos, Ing.Luis Mroginski

IBONE – UNNE – Sgto. Cabral 2131- 3400 Corrientes
Cuando se micropropagan especies forestales es fundamental evaluar la estabilidad de las plantas

regeneradas en etapas tempranas debido a las posibles alteraciones fisiológicas y/o genéticas
inducidas por el cultivo in vitro. De esta manera es posible determinar el momento adecuado para
volver a establecer los genotipos selectos.
El objetivo de este proyecto es analizar las posibles alteraciones a nivel cromosómico,
isoenzimático y molecular producidas en plantas micropropagadas de paraíso gigante a fin de
determinar el número de subcultivos a realizar sin riesgos de variación somaclonal cuando se
realiza la micropropagación a nivel comercial.
Inicialmente se estudiaron RAPD’s e isoenzimas como marcadores para detectar cambios en
etapas tempranas del cultivo.
Se utilizaron 20 plantas provenientes de semillas que fueron establecidas in vitro siguiendo la
metodología de cultivo que se utiliza a nivel comercial. Se realizaron perfiles isoenzimáticos y
moleculares (RAPD’s) de estas 20 plantas a fin de usarlas como control. Se probaron 8 sistemas
isoenzimáticos diferentes (ACP, PGD,PGM,MDH,SKDH,PX,EST y PGI).
Para el análisis de RAPD’s se utilizaron 12 primers (serie U, G y P de OPERON TECHN). Los
resultados se analizaron con el programa NTSYS para obtener los coeficientes de similitud
genética de Jaccard.
Del análisis isoenzimático se obtuvieron 16 bandas totales, con un promedio de 3 bandas por
sistema, de las cuales 10 resultaron polimórficas y permitieron encontrar un perfil único para 4
plantas. Se obtuvo un rango de similitud entre 0,5 a 1,0. El análisis de RAPD’s detectó 102 bandas
totales definidas, un promedio de 8 bandas por primer y 70 bandas polimórficas que posibilitaron la
caracterización de 16 plantas. El rango de similitud estuvo entre 0,4 y 0,9. La mayor variación en
los perfiles de RAPD’s fue suficiente para caracterizar la mayoría de los genotipos analizados. En
ninguna de las comparaciones de a pares se osbervó una similitud de 1,0, evidenciando la
variabilidad que no había sido detectada por isoenzimas.
Los RAPD’s son marcadores polimórficos adecuados para caracterizar genotipos de paraíso
gigante que permitirían detectar cambios genéticos en las plantas micropropagadas. Las
isoenzimas brindan un nivel de polimorfismo menor, sin embargo, pueden ser útiles para
complementar los análisis.
65
CULTIVO DE ANTERAS APLICADO AL MEJORAMIENTO DE TRIGO
CODIRECTOR: Ing. Rubén Miranda
PARTICIPANTES: Ing. G. Aldao Humble, Lic. Pablo Polci y Srta. Verónica Conti.

Asociación de Cooperativas Argentinas (ACA).
La producción de doble haploides representa un acortamiento del período total de producción y un

incremento de la eficiencia del proceso de selección sobre materiales con todos sus loci en
homocigosis. Fuera de lo informado por Ortiz y Mroginski (1991) no se han realizado estudios para
caracterizar variedades nacionales de trigo en función de su capacidad androgénica, ni se ha
intentado incorporar la técnica como herramienta complementaria en planes de mejoramiento, tal
vez debido a la falta de información concreta del potencial de respuesta de los genotipos utilizados
en los bloques de cruzamiento de las compañías mejoradoras de trigo.
El objetivo de este proyecto es poner a punto una técnica de cultivo de anteras para materiales del
Criadero de Cereales ACA y estimar la capacidad androgénica de las líneas parentales
intervinientes a fin de utilizar esta técnica en planes de mejoramiento.
Se utilizaron semillas de 17 filiales F3 segregantes del Criadero. Las F3 se seleccionaron en
función de los antecedentes de respuesta al cultivo de anteras de los padres involucrados en las
cruzas, siendo estos en su gran mayoría, líneas nacionales con antecesores introducidos
respondedores muy remotos en la genealogía. La selección más concreta fue la de las líneas 2186
y 2152, con Buck Ombú como padre y madre respectivamente, respondedor informado por Ortiz y
Mroginski (1991).
Las anteras se inocularon en diferentes medios de inducción y se cultivaron en oscuridad a 25°C
hasta la aparición de estructuras embriogénicas (45 días). Para la regeneración se aplicó un
fotoperíodo de 16 horas de luz y 8 horas de oscuridad, a 26°C.
Se lograron estructuras (embrioides) comparables a las documentadas en la bibliografía,
resultando significativamente superior el medio MN6mod líquido para este propósito. Los genotipos
Buck Ombu y F3 2103-5 regeneraron un 100% de plantas verdes. En cuanto a los materiales del
bloque de cruzamiento: CB-113 y Coop. Liquen produjeron 0,3% de plantas verdes. La alta
inducción registrada en dos de las tres filiales 2186-x hermanas de 2186-3 confirmó la hipótesis de
mayor probabilidad de éxito para materiales relacionados cuando uno de ellos presenta respuesta.
Los resultados sugieren mayor eficiencia del proceso induciendo con el medio NM6mod,
pretratando con frío, y chequeando previamente los materiales.
65
APLICACIÓN DE MARCADORES MICROSATÉLITES EN LA CARACTERIZACIÓN DE
GERMOPLASMA Y EN EL MEJORAMIENTO DE ARROZ
Laura E. GIARROCCO y Graciela L. SALERNO.
Centro de Investigaciones Biológicas. Fundación para Investigaciones Aplicadas (FIBA).

Vieytes 3103. 7600. Mar del Plata. Argentina.
e-mail: fiba@mdq.com.ar
El desarrollo y aplicación de la tecnología de Marcadores Moleculares en plantas ha

permitido un considerable avance en la realización de mapas genéticos, la evaluación de la
variabilidad genética, el clonado de genes y el análisis de caracteres cuantitativos,
convirtiéndose en una herramienta fundamental para genetistas y mejoradores. Los
progresos en el mejoramiento de plantas dependen de la variabilidad genética disponible.
Los marcadores moleculares permiten obtener una medida cuantitativa de la variabilidad
genética de una colección de germoplasma lo que conduce a un mejor aprovechamiento de
la misma.
Esta información tiene importantes aplicaciones como: identificación varietal,
verificación de pedigree, determinación de grupos heteróticos para el desarrollo de híbridos;
en los Bancos de Germoplasma permite: identificar material duplicado en la colección,
establecer una colección de referencia, determinar los grados de similitud entre especies
cultivadas y salvajes y establecer prioridades para la adición de material nuevo a la
colección.Los marcadores Microsatélites se basan en la amplificación específica por PCR
de repeticiones en "tandem" de dos a cuatro nucleótidos y su polimorfismo se debe a la
variabilidad en el número de repeticiones.
Estos marcadores son técnicamente simples, económicos, altamente reproducibles,
automatizables y muy informativos (por ser codominantes, multialélicos e hipervariables).
En arroz se han desarrollado mapas genéticos basados en microsatélites con buena
cobertura del genoma.El objetivo general de nuestra línea de trabajo es la aplicación de
marcadores microsatélites en la caracterización de germoplasma y en la asistencia de
programas de mejoramiento de arroz. Como primera etapa se está realizando la
caracterización de la variabilidad genética existente en el germoplasma de arroz utilizado en
Argentina y el desarrollo de un fingerprinting genético para la identificación de las mismas.
Los resultados obtenidos indican que el nivel de polimorfismo detectado es adecuado para
los fines propuestos.
66
APLICACIÓN DE MARCADORES MICROSATÉLITES EN EL MEJORAMIENTO DE SOJA
1 2 2 1
L. Giarrocco , J. Lúquez , M.E.Weilenmann de Tau y G. L. Salerno .
1- Centro de Investigaciones Biológicas. Fundación para Investigaciones Biológicas

Aplicadas. Vieytes 3103. (7600) Mar del Plata.
2- Unidad Integrada Balcarce. Ruta 226, km 73,5, cc 276. (7620) Balcarce.

E-mail: fiba@mdq.com.ar; jluquez@balcarce.inta.gov.ar
El grano de soja y sus subproductos constituyen uno de los rubros más

significativos de las exportaciones agrícolas de Argentina. Los objetivos de los programas
de mejoramiento de soja en el mundo enfatizan la obtención de cultivares con contenidos
específicos de aceite y proteína en el grano, acorde con la demanda de los mercados.
El mapeo molecular de los genomas y la tecnología de marcadores moleculares
asociada ha permitido importantes avances en el mejoramiento y genética de plantas. Los
microsatélites son marcadores de ADN altamente polimórficos especialmente adecuados
para análisis genéticos en cultivos como la soja cuya base genética es estrecha. La
disponibilidad de mapas genéticos de soja basados en marcadores microsatélites con una
adecuada cobertura del genoma, hace posible utilizar dichos marcadores en:
caracterización de germoplasma, estudios genéticos, clonado de genes de interés, mapeo
de caracteres cuantitativos, así como en mejoramiento asistido por marcadores moleculares
para acelerar y mejorar la eficiencia en la selección de genotipos con características de
interés.
El objetivo general de esta línea de trabajo es asistir mediante la aplicación de
marcadores microsatélites distintos proyectos de mejoramiento de soja. Particularmente en
el mejoramiento de la calidad de soja tendiente a obtener granos con altos contenidos de
aceite y/o proteína los objetivos planteados fueron: i) Caracterizar con marcadores
microsatélites una población de líneas de soja con altos contenidos de proteína en el grano,
ii) detectar asociaciones entre marcadores microsatélites y contenido de aceite y proteína y
iii) determinar los parentales más adecuados para mapear QTL’s (loci de caracteres
cuantitativos) de interés en el marco del programa de mejoramiento para calidad de soja.
Los resultados obtenidos constituyen la base para futuros estudios sobre ligamiento
genético entre marcadores microsatélites y QTLs de interés agronómico.
67
CARACTERIZACIÓN MOLECULAR DE LA POBLACIÓN DE Pyricularia grisea DE
LATINOAMÉRICA
A A D B C
Livore Alberto,B. , Carlos Dezar , Maria I. Plata and Stella Avila Morris Levy .
A EEA INTA Concepcion del Uruguay, E.R. Argentina.econcep@inta.gov.ar

B EEA del Este INIA, Treinta y Tres, Uruguay. savila@iniae.org.uy
C Purdue University, Dept. of Biol. Sciences levym@bilbo.bio.purdue.edu
D EEA INTA Concordia, E.R. Argentina
La sonda MGR586 fue usada para generar los “fingerprints” sobre ADN digerido con ECO RI de
aislamientos monoconidios recolectados sobre cultivares y líneas endocriadas de arroz durante los
años 1994, 1997 y 1998. Los patrones MGR/RFLP del ADN digerido con ECO RI de los
aislamientos monoconidios realizados sobre el cultivar El Paso 144 fueron idénticos en todas las
muestras de toda la región y en todos los años. Los aislamientos realizados sobre otros cultivares
estrechamente relacionados al cultivar mencionado, como IRGA 409, RP2, y EPAGRI 107,
mostraron el mismo patrón. Un total de 5 patrones diferentes basados en esta sonda fueron
encontrados en la región muestreada pero tan solo uno de ellos ha sido aislado sobre los cultivares
de tipo de planta tropical como El Paso 144. Aún en viveros con alta variabilidad de hospedantes
como los campos experimentales de mejoramiento, donde otros aislamientos diferentes fueron
identificados, solo un tipo de linaje (un patrón de MGR/ ECO RI RFLP) fue aislado sobre los
materiales de origen tropical. Esto sugeriría una susceptibilidad especifica de esos cultivares al
aislamiento particular que posee ese patrón de MGR, y al mismo tiempo sugeriría que los mismos
cultivares contienen una resistencia a los otros linajes (representados por los otros patrones MGR/
ECO RI RFLP) presentes en esta región.
Comparaciones hechas con los patrones MGR de otros aislamientos de Latinoamérica indicaron
una alta similitud entre el linaje predominante sobre El Paso 144 y un linaje identificado en
Colombia para el cual se conoce la fuente de incompatibilidad (gen de resistencia) en el arroz. Se
propone que la adición de esta fuente de resistencia al cultivar El Paso 144 podría completar el
espectro de resistencia (excluyendo todos los linajes presentes) y proveer una protección más
durable.
CARACTERIZACIÓN E IDENTIFICACIÓN DE GERMOPLASMA MEDIANTE MARCADORES 68
MOLECULARES
1,2 1 1 1 1
M.M. Manifesto , S. Marcucci Poltri , Ornella L , A.R. Schlatter , S.Torales , F. von Haneil-
1 2 1 3
Niethammer , H.E. Hopp , E.Y.Suarez y J. Dubcovsky
1
Instituto de Recursos Biológicos CIRN-INTA.
2
Instituto de Biotecnología CICV-INTA (1712) Castelar, Buenos Aires, Argentina
3
Dept. of Agronomy & Range Science, University of California, Davis, CA, 95616. USA
La caracterización e identificación de germoplasma actualmente está basada en características

morfológicas y fenológicas. Si bien estos descriptores son útiles, son limitados en número y son
afectados por el ambiente. La utilización de marcadores moleculares permite la identificación del
germoplasma en estadíos tempranos del desarrollo de la planta y la estimación de relaciones
genéticas entre los materiales analizados. Asimismo constituye un elemento clave en dicisiones
judiciales sobre propiedad intelectual. Nuestro laboratorio está desarrollando matrices de
identificación en diferentes cultivos mediante la utilización de microsatélites de dominio público.
En Trigo, se analizaron105 cultivares de trigo pan (Triticum aestivum) mediante 30 microsatélites.
Se seleccionó un subgrupo de diez microsatélites, de alto contenido polimórfico y/o claridad en sus
patrones de bandas. Los microsatélites seleccionados permitieron discriminar variedades que
presentan un coeficiente de similitud de 0,90 y establecer patrones diferenciales para cada una de
las variedades estudiadas dando lugar a la construcción de una Matriz de Identificación de los
cultivares inscriptos. El Indice de Contenido Polimórfico (PIC), osciló entre 0,85 y 0,40. En Girasol,
se analizaron 26 líneas endocriadas públicas y 4 híbridos comerciales mediante 13 microsatélites
Los valores de PIC de la población estudiada variaron entre 0.84 y 0.43.
En Maíz se evaluaron 79 líneas, mediante 30 microsatélites distribuidos a intervalos regulares en el
genoma de maíz. Se seleccionó un grupo de 18 microsatélites , con altos valores de PIC para la
identificación de las líneas. Los PIC oscilaron entre 0.89 y 0.41.
En Eucalipto Se evaluaron14 indivi duos de Eucaliptus dunnii por medio de ocho microsatélites,
revelando 91 alelos diferentes, cuyo valor de contenido polimórfico varió entre 0.88 y 0.34.
También se evaluaron 40 individuos de Eucaliptus grandis mediante tres microsatélites, siendo los
PIC 0.90, 089 y 0,87.
69
MAPEO DEL GEN DE RESISTENCIA EXTREMA A PVX, Rxcmm, MEDIANTE MARCADORES
MOLECULARES .
Martínez, María Carolina; Lucca, M. Florencia; Lijavetzky, Diego; Hopp, H. Esteban y Tozzini,
Alejandro C.
Instituto de Biotecnología, INTA-Castelar. CC 77, Morón (1708), Argentina.
El clonado de genes de plantas que confieren resistencia a patógenos es un área de estudio de

suma importancia actual, tanto desde el punto de vista científico como por su posible
aprovechamiento. Más de una docena de genes han sido clonado en los últimos años. Estos
confieren resistencia a distintos fitopatógenos (virus, bacterias, hongos, nematodes, y áfidos) pero
sin embargo presentan molecularmente una estructura similar. Solo dos genes de resistencia a
virus han sido clonado, el gen N de tabaco que confiere resistencia a TMV y el Rxadg de
resistencia a PVX. Hemos identificado en el germoplasma de Solanum commersonii un gen,
denominado Rxcmm, que confiere resistencia extrema a todas las cepas de PVX, incluyendo las
cepas hipervirulentas HB y MS. Nuestros estudios en protoplastos sugieren que el mecanismo de
resistencia es inducible y sus efectos se manifiestan a las 10-15 h post-infección. Con el objetivo
de clonar este gen asistidos por marcadores moleculares, se genero y caracterizó una población
segregante de 300 individuos. En esta se aplicaron marcadores AFLP en combinación con el
análisis de segregantes en masa (bulk segregant analysis ),
obteniéndose marcadores ligados al alelo de resistencia y al de susceptibilidad. El más próximo se
halla a 10% de recombinación del alelo de resistencia.
El presente proyecto propone: a) la creación y caracterización de una nueva población segregante
de más de 1000 individuos, b) la obtención de nuevos marcadores moleculares ligados a menos de
un cM del alelo de resistencia, c) la obtención de una genoteca en vector BAC de S. commersonii,
d) el clonado posicional del gen Rxcmm , f) la caracterización molecular del gen Rxcmm.
70
BUSQUEDA DE MARCADORES MOLECULARES LIGADOS A CARACTERES DE
IMPORTANCIA AGRONÓMICA EN GIRASOL
M.Poverene, A. Carrera, G. Pizarro.
Dpto. Agronomía UNS, San Andrés 800. 8000 Bahía Blanca. E-mail: poverene@criba.edu.ar
R.Rodríguez, T. Salaberry, F. Castaño, M. Echeverría.
Unidad Integrada Balcarce, (UNMdP-INTA) 7620 Balcarce
En este proyecto se buscan marcadores moleculares asociados a variables agronómicas

relevantes para seleccionar genotipos de girasol de mejor comportamiento: fertilidad, ausencia de
ramificaciones, calidad del aceite y resistencia a enfermedades. Estos caracteres cualitativos no se
expresan en el mismo momento y algunos de ellos sólo pueden ser evaluados al final del ciclo de
cultivo (ej: ácido oleico). La detección de genotipos resistentes supone, asimismo, la utilización del
patógeno en cada ciclo de selección y la realización de una serie de manipulaciones, tendientes a
obtener infecciones exitosas. Los marcadores moleculares asociados con el rasgo de interés
pueden convertirse en herramientas útiles de selección por su capacidad de detectar los caracteres
deseados en forma precoz y sin influencias ambientales. Se analizan marcadores moleculares
(isoenzimas, RAPD y AFLP) asociados a los caracteres restauración de la fertilidad genética-
citoplasmática, número de capítulos, porcentaje de oleico y resistencia a mildiu en girasol. Estos
cuatro caracteres son heredados cualitativamente. La detección de ligamiento entre marcadores y
el rasgo de interés comprende las siguientes etapas: 1. Evaluación fenotípica y caracterización de
los materiales. 2. Búsqueda de marcadores polimórficos en la colección de genotipos a utilizar. 3.
Obtención de poblaciones segregantes (F2). 4. Análisis de poblaciones segregantes. Análisis de
cosegregación. Determinación de relaciones de ligamiento. El presente proyecto se encuentra en
la segunda etapa. Se dispone de doce líneas endocriadas caraterizadas previamente para
restauración, nº de capítulos y % de oleico. Se está evaluando la resistencia a mildiu. Los mismos
genotipos han sido analizados para marcadores isoenzimáticos y RAPD y se han observado
numerosos polimorfismos, aún cuando varios de los materiales presentan relaciones cercanas de
parentesco. En base a los resultados obtenidos, se realizarán los cruzamientos entre líneas
contrastantes para obtener F1 y luego F2 por autofecundación. Cinco de los loci isoenzimáticos
han sido asignados a grupos de ligamiento en el mapa RFLP de girasol.
71
POLIMORFISMOS MOLECULARES ASOCIADOS A GENES DE TOLERANCIA AL MAL
DE RIO CUARTO EN MAÍZ (Zea mays L.)
1 1 1 2 2 1
C.G. Robredo , D.I. Puecher , D.G. Díaz , N.C Bonamico , M. A. Di Renzo , J.C. Salerno .
1 Instituto de Genética ¨Ewald. A. Favret¨ CNIA-INTA-Castelar. Argentina.

2 Facultad de Agronomía y Veterinaria - Universidad Nacional de Río Cuarto - 5800 - Río
Cuarto – Argentina.
El Mal de Río Cuarto (MRC) es una enfermedad del maíz endémica de la República
Argentina, causada por un fijivirus de la raza del Maize Rough Dwarf Virus. La tolerancia a
este virus se comporta como un carácter cuantitativo y estaría controlado por pocos genes
con efectos aditivos. En el IGEAF se desarrolla una línea de investigación que tiene por
finalidad estudiar las bases genéticas de la tolerancia frente a esta enfermedad. Para ello
se trata de identificar polimorfismos moleculares de microsatélites asociados a la
tolerancia en maíz. En esta comunicación se presenta el estado actual del desarrollo de
este proyecto.
72
CARACTERIZACION DE POBLACIONES CLONALES DE AJO MEDIANTE MARCADORES
RAPDs
1,2 1,3,*
Maritza Vacca Molina y H.E. Hopp
1
Instituto de Biotecnología, CCVyA-CNIA INTA Castelar, CC 77, 1708 Morón.
2 3
Universidad Nacional de Salta. Dep. Biología FCEyN-UBA, Buenos Aires
El ajo, Allium sativum L., es un cultivo estéril, que se propaga por vía vegetativa, y que muestra
una considerable variabilidad en caracteres de importancia agronómica como el tamaño y color
de los bulbos. Las descripciones de germoplasma son generalmente ambiguas, incompletas o
realizadas con distintos criterios, lo que crea situaciones confusas en la identificación de
poblaciones clonales. En nuestro país es ampliamente utilizada la clasificación efectuada por J.
L. Burba., la cual según criterios de: duración de ciclo del cultivo, dormición, fotoperiodo y
requerimientos de frio para bulbificación, a organizado el germoplasma en cuatro grupos:
Grupo I (Violetas o Asiáticos), Grupo II (Rosados), Grupo III (Blancos) y Grupo IV (Colorados).
El presente trabajo tiene como propósito la caracterización y cuantificación de la variabilidad
genética del germoplasma de ajo, utilizado en el país, mediante el uso de marcadores
moleculares, RAPDs, a fin de establecer la distancia genética entre entradas y cuantificar la
variabilidad. Con 11 "primers" se procedió a amplificar los ADNs genómicos de 42 entradas
("accesiones") de ajo representativas, fundamentalmente, de la Argentina, pero también de
Brasil, Estados Unidos, Francia, Hungría, España, Checoslovaquia y China. Los productos de
amplificación se sembraron en geles desnaturalizantes de poliacrilamida al 6% del tipo de los
utilizados en secuenciación nucleotídica. Este tipo de geles permiten visualizar muchas más
bandas y permiten identificar productos de menor tamaño molecular. Cada sistema de
"primers" genera un promedio de 50 bandas claras y reproducibles de las que aprox. 10
evidencian variabilidad. De esta manera, se evaluaron un total de aprox. 550 loci, de los cuales
114 revelaron variabilidad. Los fenogramas analizados muestran que existen al menos 2
agrupamientos importantes de genotipos, ubicándose en los extremos de los árboles
generados, clones pertenecientes al Grupo III y IV y entre ambos grupos, clones
pertenecientes a los grupos I y II La clasificación en grupos de Burba concuerda, al menos en
las poblaciones analizadas, con las asociaciones obtenidas en los fenogramas. Los resultados
demuestran que los RAPD constituyen una herramienta útil para revelar la variabilidad genética
existente en los cultivares argentinos
72´
USO DE MARCADORES MOLECULARES EN MEJORAMIENTO DE CULTIVOS
Darío Bernacchi - Monsanto - Estacion Camet, Ruta Nacional 226, Km7

Mar del Plata, (7600) Argentina - Tel/Fax:( 54-223)- 4642827
Las técnicas de marcadores moleculares ya se utilizan de manera rutinaria como

herramienta adicional para aumentar la eficiencia de los programas de mejoramiento de distintos
cultivos. Los procedimientos más utilizados en la faz aplicada son: "backcross" asistido por
marcadores, conversión de líneas transgénicas, introgresión de genes específicos, "fingerprinting",
análisis de pureza híbrida, control de pureza transgénica, test de homocigocidad, y selección
recurrente para caracteres cuantitativos asistida por marcadores. En la faz de desarrollo o
descubrimiento, los marcadores se utilizan fundamentalmente para identificación y marcación de
genes simples de interes e identificación de QTLs de caracteres de interés. También los
marcadores moleculares de ADN se utilizan como herramienta para permitir en mapeo fino de
genes de interés para su posterior clonado. Tecnológicamente, la búsqueda de marcadores más
eficientes es constante, apuntandose a marcadores de menor costo por "datapoint" informativo
generado. Algunos pasos para lograr esto pueden ser simplificar protocolos, automatizar, o
simplemente reducir el volumen de reacciones
73
CLONADO Y CARACTERIZACION DE GENES DE RESISTENCIA A PATOGENOS EN
GIRASOL UTILIZANDO UNA GENOTECA DE CROMOSOMAS ARTIFICIALES BACTERIANOS
(BAC)
Diego Lijavetzky, Alejandro Tozzini, Norma Paniego, M. Carolina Martínez, Ruth Heinz, Esteban
Hopp.
Instituto de Biotecnología, CICVyA-INTA Castelar, Buenos Aires, Argentina.

(dlijave@cicv.inta.gov.ar)
El girasol (Helianthus annus L.) es uno de los principales cultivos anuales destinados para aceite
comestible y es uno de los más importantes de la Argentina dado la superficie bajo producción y el
volumen de exportación. Pese a la importancia económica del girasol a escala mundial, son muy
limitados los estudios genéticos y genómicos que se han llevado a cabo. Esta situación se agrava
debido a que no existen, en el ámbito público y de libre acceso, desarrollo de herramientas
genéticas o genómicas (i.e. microsatélites, ESTs, genotecas de BAC). La mayoría de los
marcadores moleculares asociados a caracteres de importancia agronómica, potencialmente
utilizables para mejoramiento o investigación, se encuentran bajo la órbita de empresas semilleras
privadas. Por otro lado, los programas de mejoramiento han sido principalmente focalizados en la
calidad y el contenido de aceite y no tanto en lo que hace a la resistencia a enfermedades.
Recientemente se han publicado varios trabajos en los que, basándose en la conservación a nivel
de secuencia en los motivos estructurales de distintos genes clonados, se diseñaron
oligonucléotidos degenerados para amplificar y clonar por PCR, análogos de genes de resistencia
(RGAs). Muchos de los RGAs clonados en diferentas especies han sido mapeados, habiéndose
demostrado en algunos casos, una cosegregación entre los RGAs y genes de resistencia a
enfermedades. A partir de estos hallazgos se desprende la potencialidad de los RGAs para lograr
el clonado de genes de resistencia a patógenos, lo que en última instancia requiere la identificación
de los correspondientes clones genómicos y de cDNA y pruebas de complementación por
transformación genética.
El objetivo principal del presente proyecto generar la n i formación y las herramientas necesarias
para lograr el clonado de genes, completos y funcionales, de resistencia a patógenos del girasol.
Para ello se proponen los siguientes pasos: i) clonar y caracterizar RGAs de girasol; ii) localizar por
medio de mapeo molecular de los RGAs caracterizados; iii) construir un genoteca de Cromosomas
Artificiales de Bacterias (BAC) de girasol; iv) identificar clones de BAC conteniendo RGAs por
medio de PCR e hibridación; v) identificar clones de cDNA correspondientes a RGAs que se
expresen usando como sondas los clones de BAC seleccionados.
74´
DESCRIPCIÓN DE ACTIVIDADES EN EL LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA
EN LA EEA INTA BALCARCE
Sergio Feingold, Sonia Distel, Silvia Capezio y Marcelo Huarte
El laboratorio de Biotecnología utiliza marcadores moleculares (microsatélites, AFLP y otros) con el

objeto de:
a.- caracterizar e identificar cultivares de papa comercial y silvestre
b.- localizar en mapas genéticos, regiones que codifiquen para caracteres de interés agronómico.
Dentro de este punto, se destina especial importancia a la construcción de poblaciones diploides
segregantes, y ya se cuenta con una población F1 entre genotipos diversos de Solanum
chacoense, con resistencia horizontal a tizón tardío.
c.- evaluar la diversidad presente en patógenos (v.g. Phytophthora infestans) complementando a
los métodos tradicionales.
d.- establecer metodologías (cuali y cuantitativas) para la detección de patógenos en papa semilla
utilizando la reacción en cadena de la polimerasa.
74
GENOMIC ANALYSIS OF SUNFLOWER: DEVELOPMENT OF MOLECULAR MARKERS AND
GENETIC MAPS
Paniego, N. B., Lijavetzky D.C., Echaide M*, Lopez Bilbao, Muñoz M., Fernandez L., Fernandez P,
Nishinakamasu V. and Hopp E.H.
Instituto de Biotecnología, CICVyA-INTA Castelar, Buenos Aires, Argentina. (paniego@inta.gov.ar)
* Lab. de Marcadores Moleculares, Instituto Nacional de Semillas.
Sunflower is the Argentina’s second oilseed crop with an annual production of approximately
6.000.000-ton. A strong seed market that commercializes 12.000 ton per year supports this high
production. Concerning the last one, a reliable system for the protection of plant varieties is
indispensable to ensure return on research investment for public and privately institution.
The identification of plant varieties for purposes of patenting is based on a number morphological
data such as flower colors, plant morphology and disease resistance. Nowadays, the increment of
commercialized varieties of particular species has limited the capacity of the conventional
descriptors for the unambiguously identification of new accessions. In this context, DNA based
markers have begun to provide a promising alternative to supplement and refine the morphological-
based classification. Nevertheless, the potentially utility of molecular markers for varietal description
and judication of plant infringement is still controversial. International debate revolves around the
use of neutral and selectable markers in the field of plant variety identification.
In order to provide public and private sectors the modern technologies that have been developed
and applied at international level, we propose the present project which principal outputs involve
the acquisition of a set molecular tools potentially useful for the complementation of the
conventional system for variety identification. The set referred above comprise Express Sequence
Tags (ESTs) as neutral and selectable markers. ESTs, they can be considered as selectable
markers as regard they are the DNA copies of the mRNAs present in the studied species and
eventually the responsiveness for the morphological characters which are currently used in varieties
identification.
Finally, the other goal of this project that is to build a genetic map for cultivated sunflower
of selected EST coding loci, will be useful for the standpoint of understanding genome organization,
as a platform for map-based cloning, and for quantitative trait locus (QTL) detection.
Sección VII
Tipos de
Estrés
SEÑALIZACIÓN DEL ÁCIDO SALICÍLICO Y COMPORTAMIENTO AGRONÓMICO DE 75
CEBADAS NORMALES Y DEFICIENTES EN CATALASA CRECIDAS BAJO CONDICIONES
ALTAMENTE FOTORRESPIRATORIAS
(1,2) (3) (4) (4) (4)
Acevedo A. , Díaz Paleo A. , Fayos J. , Belles J.M. , Conejero V.
(1)
IRB, CRN-INTA, 1712 Castelar.
(2)
Depto. de Ciencia y Tecnología UNQ, 1876 Bernal.
(3)
IGEAF, CNIA-INTA, 1712 Castelar.
(4)
IBMCP-UPV, Valencia, España.
Durante el desarrollo del proyecto “Biotecnología de la tolerancia a estrés abiótico en cebada (H.
vulgare L.)” se evaluó la función fotorrespiratoria del peróxido de hidrógeno (H2O2) y señalizadora
del ácido salicílico (SA) en plántulas de cebada normales y deficientes en catalasa (CAT) crecidas
bajo régimen hídrico normal y deficitario. Como el peróxido de hidrógeno (H2O2) es sustrato de la
enzima CAT y la mutante de cebada RPr79/4 es deficiente en CAT, se monitorearon los niveles de
H2O2 y ácido salicílico (SA) en ausencia de sequía, mostrando RPr79/4 mayores valores de H2O2 y
SA que su línea madre Maris Mink . Contrariamente, el nivel de H2O2 decreció en ambas cebadas
bajo condiciones de sequía. Los valores de SA libre (600-700 ng/g) determinados en RPr79/4
antes, durante y después de la sequía, serían los encargados de señalizar el estrés por sequía.
Estos datos no son consistentes con la idea de que el rol señalizador del SA se ejerce a través de
la inhibición de CAT, dado que altos valores de SA libre se correlacionan con una disminución de
H2O2.
Dado que a campo, las plantas de RPr79/4 exhiben manchas necróticas en hojas y difícilmente
originan macollos fértiles, se analizó si el efecto de los diferentes niveles de CAT incidía en el
comportamiento agronómico y la viabilidad de cebada. En progenies crecidas a campo, derivadas
de cruzamientos entre RPr79/4 y distintas líneas de cebada, se observó que sólo el 16% de las
familias homocigotas necróticas, que cosegregan con deficiencia de CAT, fue viable. Esto indica
que niveles normales de CAT contribuirían a que plantas de cebada crecidas en condiciones
fotorrespiratorias exigentes exhiban fenotipos viables. También se demostró que todas las familias
homocigotas necróticas exhibían bajo rendimiento.
76
SEÑALES MOLECULARES EN LA ASOCIACIÓN SIMBIÓTICA ENTRE RHIZOBIUM Y
LEGUMINOSAS
O. Mario Aguilar
Instituto de Bioquímica y Biología Molecular, Facultad de Ciencias Exactas, Universidad Nacional de La

Plata, 1900-La Plata, Argentina.
Las bacterias del suelo pertenecientes al género Rhizobium tienen la capacidad de asociarse
simbióticamente con leguminosas formando nódulos radiculares fijadores de nitrógeno, el cual es
convertido en productos asimilables por la planta. El reconocimiento entre los rizobios y las distintas
leguminosas es muy específico, implicando en general la síntesis de moleculas señales que disparan
los procesos de infección, invasión y formación del nódulo. La activación de genes de rizobio
requeridos para la nodulación depende de flavonoides secretados por la planta y el producto del gen
regulatorio nodD. El resultado de la actividad de los genes de nodulación es la síntesis de una molécula
identificada químicamente como quito-lipo-ologosacarídica que induce la división meristemática de la
raíz. El conjunto de productos génicos de la planta cuya expresión aparece o se incrementa en el
proceso de nodulación por rizobio es conocido como nodulinas. Se han identificado varias nodulinas
con funciones asignadas diversas, e inducidas en etapas tempranas o tardías de la nodulación (early
and late nodulins). El interés en aumentar el conocimiento de los mecanismos básicos de la simbiosis
Rhizobium-leguminosas se hallan ampliamente justificados: - la fijación biológica de nitrógeno
representa una alternativa a la fertilización química que depende de recursos renovables, con
potencialidades para contribuir sustancialmente a sostener una agricultura en armonía con el medio
ambiente. - desde el punto de vista del conocimiento de la biología, representa un proceso de
diferenciación celular con la participación de moléculas señales en un diálogo entre ambos simbiontes.
- en el caso particular de nuestro pais, el cultivo de leguminosas tales como soja y poroto, es altamente
significativo para la economía y actividades regionales. La fijación simbiótica de nitrógeno en
leguminosas es sensible a perturbaciones ambientales incluyendo acidez, estrés hídrico, altas
temperaturas, los cuales afectan la persistencia de los rizobios en el suelo y el proceso de infección de
la planta, e inducen la senescencia prematura de los nódulos radiculares.
En nuestro laboratorio estamos interesados en investigar los factores genéticos y bioquímicos del
rizobio determinantes de la tolerancia intrínseca a estreses ambientales en algunas cepas de rizobios.
Usando mutagénesis con el transposon Tnr-luxAB hemos aislado mutantes sensibles, a partir de los
cuales hemos clonado e identificado genes requeridos para la tolerancia. En el curso de esta
presentación se discutirán el significado de la producción endógena de glutatión para la tolerancia a
acidez a través de un mecanismo que implicaría el transporte del ion potasio, y la necesidad de una via
biosintética de guanina funcional para tolerar estrés térmico y lograr una asociación simbiótica exitosa
con poroto. Mutaciones en el gen guaA afectan al rizobio en la etapa de liberación en el interior de las
células del nódulo.
77
USO DE Bacillus thuringiensis EN EL CONTROL DE INSECTOS PLAGA DE CULTIVOS DE
INTERÉS AGRONÓMICO.
1 2 1
Corina Berón ; Jorge Arcas y Graciela Salerno
1
Centro de Investigaciones Biológicas - FIBA - INBIOP (CONICET) - Vieytes 3103. 7600 Mar del
2
Plata - CONICET - Universidad Nacional de Mar del Plata. E-mail: fiba@mdq.com.ar. Centro de
Investigación y Desarrollo en Fermentaciones Industriales. CONICET - UNLP. Facultad de Ciencias
Exactas. 50 y 115. 1900 La Plata - CONICET.
Bacillus thuringiensis, bacteria Gram +, del suelo, posee la capacidad de formar, durante el
proceso de esporulación, una inclusión proteica cristalina, la cual es tóxica contra insectos de
diversos órdenes.
Las líneas de investigación en el Centro de Investigaciones de FIBA comprenden: a)
desarrollo de bioinsectidas a base de B. thuringiensis para el control de plagas de la Provincia de
Buenos Aires, para lo que se realizan aislamiento, selección y caracterización morfológica,
bioquímica, genética y toxicológica de nuevas cepas de dicha bacteria
b) Uso de B. thuringiensis en el control del picudo del algodonero (Anthonomus grandis).
Dicho insecto provoca importantes pérdidas en la producción algodonera de Brasil, y es un riesgo
en Argentina, ya que es una plaga cuarentenaria, que se puede convertir en un problema
importante para las economías regionales en un futuro próximo, dada la gran capacidad expansiva
de este insecto en el campo. Para el desarrollo de este proyecto será empleada una cepa
recientemente aislada en nuestro laboratorio, que posee características propias en cuanto al tipo
de cristal que produce, el patrón proteico de dicho cristal y a su toxicidad contra lepidópteros
(Anticarsia gemmatalis y Spodoptera frugiperda) y coleópteros (Diabrotica speciosa y Tenebrio
molitor) (en colaboración con CENARGEN, EMBRAPA, Brasilia).
La importancia de este tipo de investigaciones radica en la posibilidad de obtener aislados
más potentes que los disponibles y que se emplean comercialmente en la actualidad, así como
aumentar el espectro insecticida contra insectos resistentes o contra insectos no blanco de las
cepas ya descriptas. Asimismo permitirán la implementación de una alternativa nueva de control
dentro del marco de un Manejo Integrado de Plagas en los cultivos de interés comercial. Por otro
lado la obtención y caracterización de nuevos genes de toxinas serán aportes de gran utilidad que
podrían ser utilizadas en una segunda etapa para producir plantas transgénicas, resistentes a los
ataques de insectos plaga.
78
CARACTERIZACIÓN DE GENES DE PAPA INDUCIDOS POR ESTRÉS BIÓTICO
Godoy V, Zanetti ME,Zazzaro A, San Segundo B y Casalongué C.
Solanum tuberosum L. es una planta cultivada a nivel comercial que se ve afectada entre otras
enfermedades por la fusariosis. Esta enfermedad se manifiesta, en general, como la
podredumbre seca de los tubérculos cosechados y/o el marchitamiento de hojas y tallo. Hasta el
momento su control se realiza mediante la combinación de las siguientes medidas: uso de
cultivares tolerantes, tratamiento de simientes con benzoimidazoles, rotación con gramíneas y
leguminosas y utilización de papa conservada a bajas temperaturas, turgentes y sin brotar.
Ninguno de estos métodos solos o en combinación garantizan el control de la enfermedad. Por
otra parte, el conocimiento de los mecanismos de defensa de las plantas frente al ataque de
patógenos ha surgido del estudio de diferentes patosistemas y utilizando diversas
aproximaciones experimentales. La activación transcripcional que ocurre en el huésped durante
una interacción planta-patógeno involucra numerosos genes.
El presente plan de trabajo pretende ahondar en el conocimiento de dichos mecanismos para lo
cual nos hemos planteado la identificación y caracterización de genes de papa relacionados
con la respuesta de defensa frente a Fusarium eumartii.
La estrategia utilizada para el clonado e identificación de genes (″screening” diferencial de una
biblioteca de ADNc construida a partir de tubérculos de papa inoculados con Fusarium eumartii)
permitió aislar trescientos treinta y nueve clones. Hasta el momento hemos identificado 3:
StCyP , StMBF-1 y St 9.3.6.1. los cuales tienen alta homología con ciclofilinas citosólicas,
adaptadores transcripcionales del tipo MBF-1 y un ESTs de Arabidopsis thaliana,
respectivamente.
Cabe destacar que el presente proyecto aportará datos de interés tanto al conocimiento básico
como a proyectos de investigación con aplicaciones agronómicas. Más concretamente, el
disponer de clones que codifiquen para proteínas relacionadas con la respuesta de defensa
permitirá evaluar su potencialidad para ser aplicados en la obtención de plantas transgénicas
resistentes al ataque por patógenos.
79
ESTUDIO FISIOLÓGICO-MOLECULAR DE LA INTERACCIÓN PAPA-Phytophthora infestans
R.O. Cassia, V. Fernández-Maillot, E.A. Madrid, R. Paris, L. Lamattina
Instituto de Investigaciones Biológicas, F.C.E. y N., UNMdP.

CC 1245, 7600 Mar del Plata, Argentina.
Fax: 54 223 475 3150; e-mail: lolama@mdp.edu.ar
En la última década, se ha observado un resurgimiento, con características de epidemia, de la

enfermedad del tizón tardío de la papa (Solanum tuberosum), generada por el oomycete
Phytophthora infestans. Esto se debe al esparcimiento del tipo A2 del hongo en el mundo y su
consecuente cruzamiento con el tipo A1 y, a la aparición de nuevas razas resistentes a los
fungicidas comunmente utilizados. Una pérdida estimada en el 30-40% de la producción de papa
puede deberse al tizón tardío, si no se realiza una intensiva utilización de fungicidas. En los últimos
5 años, nuestro laboratorio ha descripto cambios en el metabolismo primario del hospedador frente
al ataque de P. infestans y caracterizado algunos componentes de la matriz extracelular-membrana
plasmática de la papa, que podrían estar involucrados en la interacción con el hongo.
Actualmente, tres aspectos de la interacción papa-Phytophthora infestans están siendo estudiados
e integrados a partir de un análisis fisiológico-molecular: 1) La composición del sistema proteolítico
extracelular secretado por las estructuras infectivas del hongo y su rol en el reconocimiento
patógeno-hospedador y en la inducción de la respuesta hipersensible (RH). Se ha detectado
actividad de serín proteasas con capacidad inductora de necrosis sobre hojas de papa; 2) El rol del
hierro y la expresión de ferritina en papa, relacionados con la generación de especies reactivas de
oxígeno durante las respuestas de defensa de la planta y además, en el control del crecimiento del
patógeno. Se ha clonado la ferritina de papa y se ha observado un aumento en el contenido de su
transcripto en el transcurso de la infección. Una colaboración con el grupo del Dr. Mentaberri
(INGEBI) buscará obtener plantas de papa que sobreexpresen ferritina con el objeto de contar con
otra herramienta que contribuya a dilucidar el rol del Fe en este pato-sistema; y 3) La expresión y
regulación génica de proteinas mitocondriales y su relación con la inducción de RH y de muerte
celular durante el desarrollo de las respuestas de defensa de la planta.
80
EFECTOS DEL OXIDO NITRICO EN PLANTAS
M.V. Beligni, C. García-Mata, A.M. Laxalt, M. Graziano, L. Lamattina
Instituto de Investigaciones Biológicas, F.C.E. y N., UNMdP.

CC 1245, 7600 Mar del Plata, Argentina.
Fax: 54 223 475 3150, e-mail: lolama@mdp.edu.ar
El óxido nítrico (ON) es una molécula bioactiva con muchas funciones muy bien descriptas en
animales. Ha probado ser tóxico contra microorganismos en células del sistema inmune,
combatiendo así procesos infecciosos. Estas evidencias nos indujeron a probar los efectos del ON
como molécula señal y en la prevención y/o control de las enfermedades en plantas. Trabajando
sobre el pato-sistema papa-Phytophthora infestans, descubrimos que el ON no era capaz de
detener la infección, pero los niveles de clorofila eran fuertemente protegidos en las hojas
infectadas. La hipótesis planteada consideró al ON como una molécula capaz de capturar las
especies reactivas de oxígeno (ROS) que son producidas durante procesos patogénicos y que
poseen efectos tóxicos sobre las plantas, entre ellos la pérdida de clorofila. Para testear dicha
hipótesis, se buscaron otros modelos en que hubiese una superproducción de ROS. Los herbicidas
de la familia de los metilviológenos (Diquat y Paraquat) son generadores de radical superóxido en
cloroplastos y debido a ellos, rapidamente producen una rotura de las membranas cloroplásticas y
una consecuente pérdida de clorofila. También se probó el peróxido de hidrógeno como otra fuente
de ROS. En todos los casos, el ON fue capaz de disminuir los efectos tóxicos generados por las
ROS, preservando los niveles de clorofila. Cuando se realizaron análisis bioquímico-moleculares,
se encontró que el ON fue capaz de prevenir las consecuencias tóxicas generadas por el estrés
oxidativo como degradación del ADN y ARN; peroxidación de lípidos; degradación de la Ribulosa,
1-5 bifosfato carboxilasa; pérdida de iones y muerte celular. En otra serie de experimentos, también
pudimos demostrar que en plantas, el ON puede estimular procesos mediados por luz como
reverdecimiento, elongación de hipocótilo y germinación de semillas en condiciones que son luz-
dependientes. Nuestros proyectos mediatos se dirigen a confirmar la capacidad anti-oxidante del
ON frente a diferentes situaciones de estrés ambiental en plantas.
81
ESTUDIO DE LA EXPRESIÓN DE UNA FAMILIA DE GENES DE TOMATE BAJO
CONDICIONES DE ESTRÉS HÍDRICO.
L. Maskin, F. Carrari, J. Romero y Norberto Iusem.
Laboratorio de Fisiología y Biología Molecular. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales,

U.B.A., Buenos Aires, Argentina.
Frente a la deficiencia de agua las plantas responden de manera muy compleja,

disparando mecanismos metabólicos que le permiten adaptarse a esta situación
ambiental. Estas respuestas se manifiestan en cambios a niveles morfológico, fisiológico y
de desarrollo. Pero antes de que el daño sea evidente, el estrés hídrico causa alteraciones
en la expresión de ciertos genes.
Asr1, Asr2 y Asr3 son genes de tomate que responden a situaciones de estrés
hídrico. Estos genes son miembros de la familia multigénica Asr , están localizados en el
cromosoma 4 y son inducidos además por ácido abscísico y maduración.
Con el objetivo de establecer cómo responden estos genes en cada tejido de la
planta a la falta de agua, se diseñaron oligonucleótidos específicos que permitieran
identificar a cada ARN mensajero por separado mediante la técnica de RT-PCR. De esta
manera se determinó la existencia de una expresión basal de los tres genes en hojas y
raíces de plantas no estresadas. Al analizar su expresión en plantas sometidas a estrés
hídrico durante 24 hs., se observó que los tres genes eran inducidos en las hojas, siendo
la expresión de Asr2 la más afectada, ya que aumentó 7 veces respecto a su expresión
basal. Sin embargo la situación en el caso de las raíces mostró una drástica disminución
en la expresión de los tres Asr, en donde Asr1 decayó en un 90%.
Asimismo estudios preliminares de la expresión de estos genes en fruto, demostró
un incremento de los tres transcriptos durante la maduración del mismo.
Los resultados obtenidos aportan evidencias de una expresión diferencial de cada
gen de la familia en respuesta al estrés y de que esta respuesta es además específica de
tejido.
82
PASADO Y PRESENTE DE LAS INVESTIGACIONES RELACIONADAS CON ROYA DE LA
HOJA DEL TRIGO EN EL INSTITUTO DE GENÉTICA DEL INTA CASTELAR.
Francisco Sacco. Instituto de Genética Ewald A Favret. CNIA. INTA Castelar.
Las primeras investigaciones sobre roya de la hoja del trigo, causada por Puccinia recondita tritici,
estuvieron relacionadas con la determinación de razas fisiológicas del hongo mediante la utilización
de variedades diferenciales, portadoras de genes conocidos de resistencia a este parásito. Este
tipo de investigaciones estaban orientadas a brindar información sobre la variabilidad genética de
las poblaciones
patógenas y su relación con las fuentes de resistencia disponibles. Estos estudios
dieron origen al Ensayo Territorial de Resistencia a Enfermedades (ETRE), que durante 50 años
suministró información a los fitomejoradores de trigo del país sobre el comportamiento de sus
materiales frente a roya de la hoja, entre otros parásitos, y asesoró a la SAGyP con la evaluación
de líneas a ser inscriptas como cultivares. Posteriormente los estudios se fueron diversificando,
abarcando distintas facetas de la enfermedad entre las que pueden destacarse las relacionadas
con la inducción de variabilidad genética, tanto en el hongo como en el hospedante, mediante la
mutagénesis inducida. En esta etapa se avanzó en el conocimiento de las bases genéticas de la
interacción hospedante patógeno, permitiendo redefinir conceptos como dominancia y recesividad
en enfermedades, estimar tasas de mutaciones en roya y elaborar una nueva hipótesis de la teoría
gen por gen para explicar la relación
genética entre hospedante y patógeno. Las mutaciones inducidas en el patógeno permitieron
también aclarar aspectos de la resistencia durable a la roya de la hoja.
Se realizaron estudios citogenéticos que permitieron localizar y mapear genes de resistencia a
roya de la hoja, y establecer la importancia del dosage génico en la interacción trigo-Puccinia
recondita. Se aislaron también líneas de trigo con deleciones espontáneas en el cromosoma 6B de
tamaños variables que han permitido formar un stock de líneas experimentales y se usan
actualmente para localizar y mapear, tanto genética como físicamente, marcadores moleculares
asociados a genes de resistencia a roya de la hoja en ese cromosoma.
Una parte de los estudios actuales están orientados no sólo al > análisis, de la variabilidad
patógenica en Puccinia recondita, sino también al análisis de la variabilidad genómica mediante el
uso de marcadores moleculares. Mediante la técnica de "ARN differential display", se han aislado
y clonado fragmentos de ADN expresados diferencialmente en líneas isogénicas resistentes y
susceptibles a P. recondita. Estos estudios tienen por objetivo el conocimiento de la naturaleza de
los genes de resistencia a roya y de las regiones cromosómicas portadoras de los mismos, tanto
desde un punto de vista genético como molecular.
Sección VIII
PERCEPCIÓN
PÚBLICA
83
PERCEPCIÓN PÚBLICA SOBRE CULTIVOS TRANSGÉNICOS EN MAR DEL PLATA.
1 1 2 2
Graziano, Magdalena, Lanfranconi, Mariana, Fabiana Consolo y Graciela Salerno .
1 2
Universidad Nacional de Mar del Plata. Funes 3350. 7600. Mar del Plata. Centro de
Investigaciones Biológicas-FIBA-INBIOP (CONICET)-Vieytes 3103. 7600. Mar del Plata.
Universidad Nacional de Mar del Plata. Argentina. E-mail: fibamp@mdq.com.ar .
El crecimiento demográfico mundial crea una demanda sostenida de alimentos. Debe tenerse
en cuenta que el 90% de la alimentación mundial es de origen vegetal y que la superficie
cultivable actualmente será limitante para satisfacer la demanda futura. La biotecnología
vegetal permitiría obtener mayores rendimientos de cultivos en igual superficie cultivable.
Mediante la transformación genética de plantas se podrá mejorar alguna de sus características
o añadirles nuevas propiedades comercialmente valiosas.
Países como EEUU, China, Canadá, Australia y Argentina han sustituído algunos cultivos
tradicionales por cultivos transgénicos. Sin embargo la aceptación pública de alimentos
transgénicos es un punto de controversia entre grupos ecologistas, empresas productoras e
instituciones gubernamentales en países consumidores europeos y asiáticos. En la opinión
pública, la percepción del riesgo es sobreestimada por la falta de conocimiento.
La Argentina ocupa el segundo lugar en el mundo con mayor cantidad de tierras destinadas a
cultivos transgénicos y algunos de los productos de éstos cultivos ya están en el mercado. Se
ignora cuál es el conocimiento público respecto a las plantas transgénicas y si existe
aceptación del consumo de productos derivados de éstas.
Nuestro trabajo se basó en la realización de una encuesta dirigida hacia el público en general
teniendo en cuenta parámetros como sexo, edad y estudios realizados, para evaluar la
percepción pública sobre este tema, en Mar del Plata. De acuerdo a los resultados obtenidos
será posible desarrollar actividades de extensión para el próximo año orientadas a dar
información objetiva y actual hacia la comunidad sobre los cultivos transgénicos y los productos
derivados de éstos.
Sección IX
Biorremediación
84
FITORREMEDIACIÓN: ESTUDIO DE LA DEGRADACIÓN DE COMPUESTOS AROMÁTICOS EN
SISTEMAS VEGETALES
Cecilia G. Flocco & Ana María Giulietti.
Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología. Facultad de Farmacia y Bioquímica,

Universidad de Buenos Aires. Junín 956 6 ° (1113) Buenos Aires, Argentina.
e-mail:flocco@ffyb.uba.ar
La remediación de ambientes contaminados con compuestos orgánicos es un problema global. Los

compuestos fenólicos derivados de la actividad industrial y del uso de pesticidas constituyen un
caso de contaminación frecuente. El rol de los vegetales en los procesos de biorremediación es
cada vez más significativo. Entre los diversos mecanismos de detoxificación que poseen los
mismos se encuentran las enzimas con capacidad degradativa. Entre estas se han caracterizado
oxidorreductasas (peroxidasas, lacasas, tirosinasas) que son capaces de polimerizar compuestos
fenólicos ya sea sobre la superficie de la raíz o en la fracción húmica del suelo. Los contaminantes
quedan unidos de manera tal que no se encuentran biodisponibles y no pueden ser extraídos por
procesos convencionales. El objetivo de este proyecto es estudiar los mecanismos físicos y
biológicos de remoción de compuestos fenólicos en sistemas vegetales. Para ello se realizarán
estudios cinéticos de remoción de los mismos, evaluando el rol de oxidorreductasas involucradas
en el proceso. Asimismo se analizará la estructura de los productos formados. En una primera
instancia se realizaron ensayos in vitro de remoción de fenol con raíces transformadas de
Armoracia lapathifolia y con plántulas de alfalfa, caracterizando el rol de peroxidasas. Por otro lado
se ha diseñado y optimizado el cultivo hidropónico de alfalfa. Este sistema permitirá estudiar el rol
del vegetal en los procesos de degradación con una estructura vegetal completa, diferenciándolo a
su vez de la acción degradadora de microorganismos.
Sección X
MISCELÁNEAS
85
BIOTRANSFORMACIÓN DE CÁSCARA DE GIRASOL POR HONGOS LIGNOCELULOLÍTICOS
COMESTIBLES Y MEDICINALES
Integrantes: Figlas, Débora; Delmastro, Silvia; Devalis, Ricardo;Torrea, María; González Matute,
Ramiro

La cáscara de girasol (18-20% de la semilla) es un residuo lignocelulósico abundante de la

industria aceitera nacional y debido a su alto contenido en lignina (ca. 28%) es dificilmente
degradable por microorganismos, excepto por hongos superiores que poseen ligninasas ( lacasas,
peroxidasas, peroxidasas dependientes de Mn) además de celulasas, y otras enzimas hidrolíticas.
La posibilidad de obtener un producto de alto valor agregado tanto por su valor nutricional como
por sus interesantes propiedades farmacológicas, era atractiva para proponer a un sector
prácticamente inexistente de la horticultura argentina. Entonces comenzamos la investigación con
hongos del complejo Pleurotus, Shiitake y Ganoderma spp con aquella finalidad.
Con este sustrato hemos propuesto un método efectivo de bajo costo para la decontaminación en
masa e inoculación homogénea de semilla y demostrado la factibilidad de producir fructificación
con Pleurotus spp, con un método particular de corrida de micelio, así como con Shiitake y
Ganoderma . La optimización de la producción ha involucrado la prueba de corrida de micelio de
distintas cepas de Pleurotus con nitrógeno sólo o combinado con Mn(II) y la búsqueda de cepas
eventualmente más productivas usando cultivos monoesporas de Pleurotus ostreatus en un medio
de selección con deoxiglucosa y subsiguiente apareamiento para producir a la fecha 11 cepas
deoxigluosa resistentes. La metodología de producción de “spawn” G1 en medios de cultivo líquido
agitado también fue encarada como una forma de incrementar su eficiencia, en unión al estudio de
producción de polisacáridos bioactivos de valor farmacológico en el caso de Ganoderma lucidum y
Ganoderma oregonense. Asimismo se encontró que la colonización del sustrato con cepas de
Pleurotus spp mejoró marcadamente la digestibilidad in vitro de la cáscara. Los resultados
emergentes se han volcado en dos cursos de post-grado (UNS y CABBIO) y en un curso para
emprendedores. Tenemos en formación un banco de germoplasma.
86
ACTIVIDAD DE EXOENZIMAS EN EL SUELO Y SU EFECTO SOBRE PLANTAS
DE IMPORTANCIA AGRÍCOLA.
1Gloria Zulpa de Caire*, Rosa M. Palma**, María Cristina Zaccaro*, Mónica M. Storni de
Cano*
*Facultad de Ciencias Exactas y Naturales y **de Agronomía-Universidad de Buenos

Aires. E-mail:cyanob@bg.fcen.uba.ar
La actividad de las exoenzimas β-glucosidasa, ureasa, proteasa, fosfomonosterasa y

arilsulfatasa producido por el agregado de biomasa y exoplisacáridos (EPS) de las
cianobacterias Tolypothrix tenuis y Microchaete tenera, fue determinado en un suelo
Argialboll Típico en experimentos de invernáculo.
La biomasa y EPS de M. tenera aumentaron la actividad de la β-glucosidasa en 4-
40%. El aumento de actividad de ureasa producido por ambas cepas fue muy bajo; el
de proteasa fue de 100-230%; el de fosfatasa fue de 13-27%; el de arilsulfatasa de
hasta un 400% y el de la deshidrogenasa de 16-43%.
Los efectos de la biomasa son menores debido a que ésta debe sufrir lisis celular y
mineralización para poder liberar endoenzimas al medio ya que los resultados
mostraron una muy baja excresión de exoenzimas. La solución de EPS contenía
proteínas con probable actividad exoenzimática, además de otras sustancias que tal
vez se comportaron como moléculas disparadoras que estimulan la producción de
exoenzimas por otros microorganismos del suelo.
En otra experiencia de invernáculo se determinó que la incorporación de EPS de
ambas cepas al suelo produjo un incremento en porcentaje en el peso seco de las
plántulas de maíz (vástago-raíz) a los 30 días. Similares resultados se detectaron en
los contenidos de nitrógeno y fósforo del material vegetal.
87
BIOTECNOLOGIA DE CIANOBACTERIAS
María Cristina Zaccaro; Gloria Zulpa y Mónica Storni.
Laboratorio de Fisiología Vegetal y Laboratorio de Cianobacterias. Depto. de Cs. Biológicas,

FCEN.UBA. Int. Güiraldes 2620. Pab II. 4º P (1428) Argentina. E-mail
cyanob@bg.fcen.uba.ar
Nuestro grupo de investigación se formó en la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

(UBA) en 1969. Con la Dra. Delia R. de Halperin, iniciamos en nuestro país varias líneas de
investigación de importancia en el campo de la biotecnología, utilizando principalmente
cepas que aislamos de distintos hábitats de Argentina. a) Cianobacterias en la alimentación.
En la búsqueda de nuevas fuentes de proteínas, seleccionamos cepas con alto contenido
proteico a fin de incorporarlas a dietas balanceadas. Dada la importancia a nivel mundial de
Spirulina como complemento dietario, hemos determinado que puede reemplazar totalmente
a un producto comercial como alimento proteico de peces. Su agregado a una ración de
alimento comercial produce en la sangre de roedores un descenso en glucosa y en ácido
úrico, así como un aumento del HDL, sin variar el colesterol total. b) Sustancias bioactivas .
Hemos obtenido productos intra y extracelulares que:1- inhiben el crecimiento de bacterias
patógenas (Staphylococcus aureus) y hongos patógenos humanos (Candida albicans),
fitopatógenos productores de damping-off (Sclerotinia sclerotiorum y Rhizoctonia solani) así
como hongos del suelo (Cunninghamella blakesleana), 2- inducen el crecimiento de bacterias
importantes en la industria láctea (Lactococcus lactis), la regeneración de plantas de arroz y
3-producen distintos efectos sobre semillas y/o plántulas de arroz, maíz, mijo, espinaca, soja,
etc. c) Biofertilización. Se estudió la flora diazotrófica de arrozales de Entre Ríos, de
biodermas algales de Chaco y Formosa y de aguas residuales de biodigestores con el objeto
de obtener un fertilizante algal de bajo costo y ecológicamente seguro. Se comparó la
fertilización cianobacterial con la fertilización inorgánica sobre plántulas de arroz. d)
Conservación de suelos. 1- Biodermas algales, su incidencia en la consolidación y el
contenido de N del suelo. A partir de biodermas naturales obtuvimos biodermas en el
laboratorio sobre distintos suelos, a fin de implementar su manejo y aplicación en suelos
deteriorados y 2- La adición de cianobacterias y sus exopolisacáridos a suelos erosionados
aumentó de la estabilidad de los agregados como consecuencia de una mayor actividad
microbiana. e) Tratamiento de aguas. El cultivo de algas en aguas residuales adquirió
importancia por: la producción de biomasa a bajo costo y la purificación de las aguas por
remoción asimilativa de los nutrientes. La capacidad para remover N y P de un medio mineral
completo fue estudiada en cepas aisladas de aguas residuales de un biodigestor, a fin de
usarlas como un paso en la purificación de aguas .
INDICE GENERAL POR EXPOSITORES
Abedini, W. 11-12-13-38 Carrizo de Bellone, S. 24
Acevedo, A. 38-73-75 Carrizo, C. 32
Aguilar, M. 76 Casalongué, C. 76-78
Alvarez, M. L. 52 Caso, O. H. 30-34
Allocati, J. P. 43 Cassia, V. 79
Anderson, C. M. 29 Castagnaro, A. 61-33
Aparicio, J. 22 Castro, P. 10
Apóstolo, N. 14-31 Cataldi, A. 58
Aprea, A. 61 Cervera, M. T. 62
Arana, M. 59 Ciancio, J. R., 2-47
Arcas, J. 77 Coll García, Y. 61
Arena, M. E. 15 Colombo, N. 55
Arias, M. 55-61 Conejero, V. 75
Ardila, F. 47 Consolo, F. 63-83
Asurmendi, S. 49 Conti, V. 6
Avila, S. 67 Corbino, G. 19
Barzola, K. 44 Cordo, C. 63
Basigalup, D. 60 Costa, N. B. 56-57
Beligni, M. V. 81 Cucco, M. F. 9
Belles, J. M. 75 Curvetto, N. 3-4-17-18-37-77-85
Benech-Arnold, R. 53 Daorden, M. E. 19
Bernacchi, D. 72´ De la Canal, L. 54
Berón, C. 75-77 Delhey, R. 3
Bigi, F. 58 Delmastro, S. 4-37-77-79-85
Billard, C. 16 Dengis, A. 49
Bol, J. 48 Dessy, S. 12
Bonafede, M. 47-60 Detarsio, E. 45
Bonamico, N. C. 71 Devalis, R. 77 –79-85
Brandán, E. 61 Dezar, C. 67
Bravo, C. A. 14-31 Di Renzo, M. A. 71
Bravo Almonocid, F. 50 Diamante, A. 5-20-21-22-46
Brutti, C. B. 14- 31 Díaz, D. G. 2-71
Bulacio, E. 61 Díaz, L.. 23-24
Cabezas, J. A. 62 Díaz, M. 39
Cabral, S. 1-50-51 Díaz Paleo, A. 38-75
Calamante, G. 58 Diaz Ricci, J. C. 33-61
Capezio, S. 74´ Diéguez, M. J. 55
Cardone, S. 7 Digonzelli, P. 23-24
Carletti, S. M. 14 Distel, S. 74´
Caro, L. A. 17 Divo de Sesar, M. 0-25-26-27
Carrari, F. 41-53-81 Dubcovsky, J. 68
Carrera, A. 70 Durán-Vila, N. 56
Carrillo N. 46
Echaide, M. 74 Linthorst. H. 48
Echenique, V. 6-7-8-17-39-64 Livore, A. B. 67
Escandón, A. 41-42-46 López Bilbao, M. 74
Espinosa Vidal, E. 54 López, N. 41-42
Espósito, J. 26 López, M. E. 45
Fabiani, A. 29 Lucca, M. F. 69
Farías, R. 33 Luciani, G. 4-18
Fayos, J. 75 Luppi, J. P. 44
Feingold, S. 74´ Lúquez, J.
Fernandez, L. 74 Lustig, S. 45-52
Fernandez, P. 74 Llorente, B. E. 14-31
Fernández-Maillot, E. A. 79 Madrid, E. A. 79
Ferri A.M. 47 Mamani de Marchese, A. 33-61-64
Figlas, D. 77-79-85 Manghers, L. 55
Filippone, M. P. 33-61 Manifesto, M. M.68
Flocco, C. 84 Marano M.R. 46
Franzone, P. 2-43-47-59 Marconi, P. 34
Galliussi, E. 13 Marcucci Poltri, S. 68
Gamboa, S. 61 Marinangeli, P. 3-4-17-18-37
García-Mata, C. 80 Marinucci, L. 11-13
Giarrocco, L. 63-65-66 Marrero, R. 38
Giulietti, A. M. 25-32-34-36-84 Martínez, M. C. 59-69-73
Godoy, V. 78 Martinez Arias, F. 23
Gomez, M. C. 2-47 Martínez Novillo, J. 61
Gonsalvez-Bernal, B. 48 Martínez-Zapater, J. M. 62
González Matute, R.79-85 Maskin, L. 41-81
Graziano, M. 80.83 Mattia, V. 12
Guelman, S. 45-52 Melito, V. 25
Guido, A. 13 Mentaberry, A. 1-44-50-51-58
Halford, N. 52 Miranda, R. 6
Heinz, R. 73 Mockel, G. 4
Hernández , L. F. 17 Molina, N. 20-21
Hopp H.E. 49-68-69-72-73-74 Morris, L. 67
Huarte, M. 00-74´ Mroginski, L. 7-61-64
Humble, A. 6 Muñoz, M. 74
Iusem, N. 53-81 Nishinakamasu, V 74
Kato, A. E. 25-26-27 Noguera, A. 23
Kiehr, M. 3 Olmos, S. 64
Kirschbaum, D. 61 Ontivero, M. 61
Kobayashi, K. 58 Ornella, L. 68
Lallana, V. H. 15 Osorio, R. H. 10
Lamattina, L. 79-80. Ottado, J. 46
Lanfranconi, M. 83 Palma.M. 86
Laxalt, A. M. 80 Paniego, N. 73-4
Lede, S. 11 Paris, R. 79
Lewi, D. 41-43 Parsons, P. 35
Lijavetzky, D. 53-69-73-74 Perez-Flores, L . 53
Permingeat, H. R. 45 Sosa, S. 23
Pitta-Alvarez, S. 32-36 Spollansky, T. 36
Pizarro, G. 70 Stein, J. 52
Plata, M.I. 28-29-56-57-67 Stella, A. M. 0-25-27
Polci, P. 6-7-8-17-39 Storni de Cano, M. 0-86
Portas de Zamudio, A. 23-24 Suarez, E. Y. 68
Poverene, M. 70 Taboga, O. 58
Prina, A. 55-59 Tami, C. 58
Puecher D. 59-71 Tejera, A. 42
Radice, S. 34 Terada, G. 61
Rech, E. 40 Tesón, N 28
Regente, M. 54 Torales, S. F. 68
Reggiardo, M. I. 45-46-52 Torrea, M. 79-85
Rigato, S. 00 Torres, R. 12
Ríos, R. 2-47-55-59-60 Torroba, M. C.
Rivas, C. 13 Tozzini, A. C. 69-73
Rivera, S. 13 Traversaro, M. 12
Robredo, C. G. 2-59-60-71-77 Turica, M. 43
Rodriguez Talou, J. 32-35-45-48 Ulanovsky, S. 10
Romagnoli, M.V. 45 Vacca Molina, M. 72
Romero, J. 81 Valdez, J. G. 10
Romero, M. 12 Vallejos , R. H. 45-52
Romero, V. 49 Vázquez-Rovere, C., 49
Romo, C. L. 45 Vellicce, G. 61
Rossi Jaume, A 9. Vera Bravo, C. 5-20-21-22-46
Ruscitti , M. 11-13 Verpoorte, R. 48
Ryabushkina, N. 52 Verna, F. 58
Sacco, F. 82 Veberne, M. 48
Saione, H. 55 Vilella, F. 25-26-27
Salazar, S. 61 von Haneil-Niethammer, F. 68
Salerno, G. 61-62-63-65-66-77-83 Weilenmann de Tau, M. E. 66
Salerno, J.C. 2-71-43 Zaccaro, A. 0-86
San Segundo, B. 78 Zaltz, P. 1-51
Schlatter, A. R. 68 Zanetti, M. E. 78
Semorile, L. 56 Zappacosta, D. 3-37
Sergeren, M. 4 Zazzaro, A. 78
Sharry, S. 11-12-52 Zembo, J. C. 61
Shewry,P.52 Zubrzycki, H. 5-46
Zulpa de Caire*,G. 0-86

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