HDL Colesterol

C FT
Reactivo precipitante (ácido fosfotúngstico) para la
separación de las Lipoproteínas de Alta Densidad (HDL)
en suero o plasma

SIGNIFICACION CLINICA PRECAUCIONES

Las lipoproteínas plasmáticas son partículas esféricas que El reactivo es para uso diagnóstico "in vitro".
contienen cantidades variables de colesterol, triglicéridos, Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales
fosfolípidos y proteínas. de trabajo en el laboratorio de química clínica.
Los fosfolípidos, el colesterol libre y las proteínas constituyen Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de
la superficie externa de la partícula lipoproteica, mientras que acuerdo a la normativa local vigente.
su core contiene en mayor proporción colesterol esterificado
y triglicéridos. ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE
Estas partículas solubilizan y transportan el colesterol en el ALMACENAMIENTO
torrente sanguíneo. El Reactivo Provisto es estable a temperatura ambiente (< 25oC)
La proporción relativa de proteína y lípido determina la den- hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja.
sidad de estas lipoproteínas y proveen las bases sobre las
cuales establecer una clasificación. Estas clases son: quilo- INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS
micrones, proteínas de muy baja densidad (VLDL), proteínas REACTIVOS
de baja densidad (LDL) y proteínas de alta densidad (HDL). Cualquier indicio de contaminación bacteriana puede ser
Numerosos estudios clínicos han demostrado que las di- signo de deterioro del reactivo.
ferentes clases de lipoproteínas tienen distintos y variados
efectos en el riesgo de enfermedad coronaria. MUESTRA
La función principal de las HDL en el metabolismo lipídico Suero o plasma
es la captación y transporte de colesterol desde los tejidos a) Recolección: obtener la muestra de la manera habitual.
periféricos al hígado en un proceso conocido como trans- b) Aditivos: en caso de utilizar plasma, recogerlo única-
porte reverso de colesterol (mecanismo cardioprotectivo). mente con heparina.
c) Sustancias interferentes conocidas: anticoagulantes
El HDL colesterol bajo, está asociado con un alto riesgo de
distintos de la heparina y bilirrubinemia mayor de 50 mg/l
enfermedad cardíaca. Por este motivo la determinación de
son causas de interferencia.
HDL colesterol es una herramienta útil en la identificación
Referirse a la bibliografía de Young para los efectos de las
de individuos de alto riesgo.
drogas en el presente método.
d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: se-
FUNDAMENTOS DEL METODO
parar el suero dentro de la hora de la extracción. Las Lipid
Las lipoproteínas de alta densidad (HDL) se separan pre-
Research Clinics recomiendan refrigerar la muestra hasta
cipitando selectivamente las lipoproteínas de baja y muy
la realización del ensayo. La conservación de las muestras
baja densidad (LDL y VLDL) mediante el agregado de ácido a temperatura ambiente altera la composición lipoproteica
fosfotúngstico en presencia de iones magnesio. de las muestras aún antes de las 24 horas. Algunos autores
Las HDL quedan en el sobrenadante separado por centrifuga- mencionan estabilidad de 3 días a 4oC que se prolongan
ción, donde se realiza la determinación del colesterol ligado a al congelar, pero existe mucha variabilidad entre muestras
las mismas, empleando el sistema enzimático Colesterol oxi- diferentes, por lo que se recomienda mantener la muestra
dasa/Peroxidasa con colorimetría según Trinder (Fenol/4-AF). refrigerada y procesar dentro de las 24 horas.

REACTIVOS PROVISTOS MATERIAL REQUERIDO (no provisto)

A. Reactivo A (Reactivo Precipitante): solución de ácido - Espectrofotómetro o fotocolorímetro.
fosfotúngstico 0,44 mmol/l y cloruro de magnesio 20 mmol/l. - Micropipetas y pipetas para medir los volúmenes indicados.
- Tubos de Kahn.
REACTIVOS NO PROVISTOS - Cubetas espectrofotométricas de caras paralelas.
Colestat enzimático, Colestat enzimático AA o Colestat - Baño de agua a 37oC.
enzimático AA líquida, de Wiener lab. - Reloj o timer.

INSTRUCCIONES PARA SU USO CONDICIONES DE REACCION

Reactivo A: listo para usar. - Longitud de onda: 505 nm en espectrofotómetro o en

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 fotocolorímetro con filtro verde (490-530 nm). colesterol:
- Temperatura de reacción: 37oC 0,40 - 0,60 g/l
- Tiempo de reacción: 35 minutos Es recomendable que cada laboratorio establezca sus
- Volumen de muestra: 200 ul propios valores de referencia. No obstante, valores mayo-
- Volumen de Reactivo A: 500 ul res de 0,40 g/l se consideran recomendables y los que se
- Volumen de Sobrenadante: 200 ul encuentren por encima de 0,60 g/l se han considerado como
- Volumen de Reactivo de Trabajo de Colestat enzimático o protectivos. Por el contrario, valores de HDL colesterol por
Colestat enzimático AA/líquida: 2 ml debajo de 0,40 g/l se consideran como índice significativo
- Volumen final de reacción: 2,2 ml de riesgo de enfermedad cardíaca coronaria.

LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

PROCEDIMIENTO - Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA.
En un tubo de Kahn medir 200 ul de muestra, y agregar - La exactitud y precisión dependen fundamentalmente de la
500 ul de Reactivo A. Homogeneizar agitando (sin invertir) observación de las condiciones de precipitación.
durante 20 segundos y dejar 10 minutos en reposo a tem- - Muestras con trigliceridemia superior a 10 g/l pueden
peratura ambiente. Centrifugar 15 minutos a 3.000 r.p.m. dificultar la precipitación fraccionada dando lugar a sobre-
o 2 minutos a 12.000 r.p.m. Usar el sobrenadante límpido nadantes turbios o a una capa de lipoproteínas que flotan
como muestra. En tres tubos marcados B, S y D, colocar: sobre la superficie. En tal caso, diluir la muestra al 1/2 con
B S D solución fisiológica y repetir la precipitación. El resultado
obtenido deberá multiplicarse por 2.
Sobrenadante - - 200 ul
Standard - 20 ul - PERFORMANCE
a) Reproducibilidad: procesando replicados de una misma
Reactivo de Trabajo 2 ml 2 ml 2 ml muestra en el día se obtienen los siguientes valores:
Mezclar e incubar 5 minutos a 37 C si se usa el Reactivo
o
Nivel D.S. C.V.
de Trabajo de Colestat enzimático AA/líquida o 15 mi- 0,32 g/l ± 0,011 g/l 3,4 %
nutos a 37oC cuando se usa el de Colestat enzimático. 0,68 g/l ± 0,024 g/l 3,5 %
Retirar del baño y enfriar. Leer a 505 nm en espectrofo-
tómetro o en colorímetro con filtro verde (490-530 nm), b) Linealidad: la reacción es lineal hasta 5 g/l.
llevando a cero con el Blanco. c)  Límite de detección: en espectrofotómetro, para una
variación de absorbancia de 0,001 D.O., el cambio mínimo
de concentración detectable será de 0,0063 g/l de colesterol.
ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCION FINAL
El color de reacción es estable 2 horas por lo que la absor- PRESENTACION
bancia debe ser leída dentro de ese lapso. - 100 ml (Cód. 1220108).

CALCULO DE LOS RESULTADOS BIBLIOGRAFIA

- Castelli, W.; Levitas I. - Current Prescribing 6/77:39 (1977).
0,762
HDL Colesterol (g/l) = D x f f = - Gordon, T. - Am. J. Med. 62:707 (1977).
S - Lopes-Virela, M.F. et al. - Clin. Chem. 23/5:882 (1977).
- Coniglio, R. I.- Acta Bioq. Clin. Latinoam. XXIII/2:201, 1989.
VFE VRE VS - Cooper, C. - National Heart and Lung Institute, NIH (USA),
0,762 = 2 g/l x x x
VM VRS VE 1974.

- Expert Panel of National Cholesterol Education Program -
donde: JAMA 285/19:2486 (2001).
VFE = volumen final de extracto = 0,7 ml - Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",
VM = volumen de muestra procesada = 0,2 ml AACC Press, 4th ed., 2001.
VRE = volumen de reacción con extracto = 2,2 ml
VRS = volumen de reacción con Standard = 2,02 ml
VS = volumen de Standard en la reacción = 0,020 ml
VE = volumen de extracto en la reacción = 0,2 ml
Si se emplean volúmenes de Reactivo diferentes de 2 ml
el factor 0,762 varía y debe ser calculado nuevamente,
reemplazando en la fórmula VRE y VRS.

VALORES DE REFERENCIA
El panel de expertos del National Cholesterol Education
Program (NCEP) provee los siguientes valores de HDL

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 HDL Colesterol
FT
C Reagente precipitante (ácido fosfotúngstico) para a
separação das Lipoproteínas de Alta Densidade (HDL)
em soro ou plasma

SIGNIFICADO CLÍNICO Utilizar os reagentes observando as precauções habituais

As lipoproteínas plasmáticas são partículas arredondas que de trabalho no laboratório de análises clínicas.
contém quantidades variável de colesterol, triglicerídeos, Todos os reagentes e as amostras devem ser descartadas
fosfolipídios e proteínas. Os fosfolipídios, o colesterol livre conforme à regulação local vigente.
e as proteínas constituem a superfície externa da partícula
lipoproteica, sendo que suas cores contém em maior quan- ESTABILIDADE E INSTRUÇÕES DE
tidades colesterol esterificado e triglicerídeos. ARMAZENAMENTO
Estas partículas solubilizam e transportam o colesterol na O Reagente Fornecido é estável sob temperatura ambiente
corrente sanguínea. (< 25oC) até a data de vencimento indicada na embalagem.
A proporção relativa de proteína e lipídios determina a
densidade destas lipoproteínas e provêem as bases sobre INDÍCIOS DE INSTABILIDADE OU DETERIORAÇÃO
as quais pode-se estabelecer uma classificação. A mesma DOS REAGENTES
pode ser: quilomicrons, proteínas de muito baixa densidade Qualquer indício de contaminação bacteriana pode ser sinal
(VLDL), proteínas de baixa densidade (LDL) e proteínas de deterioração dos reagentes.
de alta densidade (HDL). Diferentes estudos clínicos de-
monstraram que as variadas classes de lipoproteínas tem AMOSTRA
diferentes e variados efeitos no risco de doenças coronárias. Soro ou plasma
A função principal das HDL no metabolismo lipídico é a capta- a) Coleta: obter a amostra da maneira habitual.
ção e transporte de colesterol desde os tecidos periféricos ao b) Aditivos: heparina quando for utilizado plasma como amostra.
fígado com um processo conhecido como transporte reverso c) Substâncias interferentes conhecidas: anticoagulantes
do colesterol (mecanismo cardioprotetivo). diferentes da heparina e bilirrubinemia maior que 50 mg/dl
O HDL colesterol baixo, associa-se com um alto risco de doen- são causas de interferência.
ça cardíaca. Porém, a determinação de HDL colesterol é uma Referência bibliográfica de Young para efeitos de drogas
ferramenta útil na identificação de indivíduos com alto risco. neste método.
d) Estabilidade e instruções de armazenamento: separar
FUNDAMENTOS DO MÉTODO o soro dentro de uma hora após a coleta. As Lipid Research
As lipoproteínas de alta densidade (HDL) se separam pre- Clinics, recomendam refrigerar a amostra até a realização do
cipitando seletivamente as lipoproteínas de baixa e muito ensaio. A conservação das amostras a temperatura ambiente
baixa densidade (LDL e VLDL) mediante a adição de ácido altera a composição lipoproteica das amostras antes mesmo
fosfotúngstico em presença de íons de magnésio. das 24 horas. Alguns autores mencionam estabilidade de 3
No sobrenadante separado por centrifugação, ficam as HDL dias a 4oC que aumenta ao congelar, mas existe variação
e é realizada a determinação do colesterol ligado às mesmas, entre amostras diferentes, pelo qual recomenda-se manter
empregando-se o sistema enzimático Colesterol oxidase/ a amostra sob refrigeração e processar dentro das 24 horas.
Peroxidase com colorimetria segundo Trinder (Fenol/4-AF).
MATERIAL NECESSÁRIO ( não fornecido)
REAGENTES FORNECIDOS - Espectrofotômetro ou fotocolorímetro.
A. Reagente A (Reagente Precipitante): solução de ácido - Micropipetas e pipetas para medir os volumes indicados.
fosfotúngstico 0,44 mmol/l e cloreto de magnésio 20 mmol/l. - Tubos de Kahn.
- Cubetas espectrofotométricas de faces paralelas.
REAGENTES NÃO FORNECIDOS - Banho-maria a 37oC.
Colestat enzimático, Colestat enzimático AA ou Colestat - Relógio ou timer.
enzimático AA líquida, da Wiener lab.
CONDIÇÕES DE REAÇÃO
INSTRUÇÕES DE USO - Comprimento de onda: 505 nm em espectrofotômetro ou
Reagente A: pronto para uso. em fotocolorímetro com filtro verde (490-530 nm).
- Temperatura de reação: 37oC
PRECAUÇÕES - Tempo de reação: 35 minutos
O reagente é para uso diagnóstico "in vitro". - Volume da amostra: 200 ul

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- Volume de Reagente A: 500 ul consideram-se recomendáveis, no entanto, em aqueles
- Volume de Sobrenadante: 200 ul casos que os valores se encontrarem acima de 0,60 g/l
- Volume de Reagente de Trabalho de Colestat enzimático consideram-se de proteção. Os valores de HDL colesterol
ou Colestat enzimático AA/líquida: 2 ml por baixo de 0,40 g/l consideram-se como índice de risco
- Volume final de reação: 2,2 ml para doenças cardíacas coronárias.

LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO
PROCEDIMENTO - Vide Substâncias interferências conhecidas em AMOSTRA.
Em um tubo de Kahn medir 200 ul de amostra, e acres- - A exatidão e precisão dependem fundamentalmente da
centar 500 ul de Reagente A. Homogeneizar agitando observação das condições de precipitação.
(sem inverter) durante 20 segundos e deixar 10 minutos - Amostras com triglicerídeos superiores a 10 g/l, podem
em repouso a temperatura ambiente. Centrifugar 15 apresentar dificuldades para a precipitação dividida, pro-
minutos a 3.000 r.p.m. ou 2 minutos a 12.000 r.p.m. duzindo sobrenadantes turvos ou a lipoproteínas flutuando
Usar o sobrenadante limpo como amostra. Em três tubos sobre a superfície. Porém, diluir a amostra em 1/2 com
marcados B, P e D, colocar: solução fisiológica e repetir a precipitação. O resultado
obtido deverá ser multiplicado por 2.
B P D
Sobrenadante - - 200 ul DESEMPENHO
Padrão - 20 ul - a) Reprodutibilidade: processando duplicatas de uma
Reagente de Trabalho 2 ml 2 ml 2 ml mesma amostra em um mesmo dia, obtiveram-se o seguinte:
Nível D.P. C.V.
Misturar e incubar durante 5 minutos a 37oC quando seja
0,32 g/l ± 0,011 g/l 3,4 %
utilizado o Reagente de Trabalho de Colestat enzimático
0,68 g/l ± 0,024 g/l 3,5 %
AA/líquida ou 15 minutos a 37oC quando seja utilizado
o de Colestat enzimático. Retirar do banho e esfriar. b) Linearidade: a reação é linear até 5 g/l.
Ler a 505 nm em espectrofotômetro ou em colorímetro c) Limite de detecção: em espectrofotômetro, para uma
com filtro verde (490-530 nm), zerando com o Branco. variação de absorbância de 0,001 D.O., a mudança mínima
de concentração detectável será de 0,0063 g/l de colesterol.

ESTABILIDADE DA MISTURA DE REAÇÃO FINAL APRESENTAÇÃO

A cor da reação é estável durante 2 horas, portanto a absor- - 100 ml (Cód. 1220108).
bância deve ser lida dentro deste intervalo.
REFERÊNCIA
CÁLCULO DOS RESULTADOS - Castelli, W.; Levitas I. - Current Prescribing 6/77:39 (1977).
0,762 - Gordon, T. - Am. J. Med. 62:707 (1977).
HDL Colesterol (g/l) = D x f f = - Lopes-Virela, M.F. et al. - Clin. Chem. 23/5:882 (1977).
P - Coniglio, R. I.- Acta Bioq. Clin. Latinoam. XXIII/2:201, 1989.
VFE VRE VP - Cooper, C. - National Heart and Lung Institute, NIH (USA),
0,762 = 2 g/l x x x 1974.
VA VRP VE - Expert Panel of National Cholesterol Education Program -
onde JAMA 285/19:2486 (2001).
VFE = volume final de extrato = 0,7 ml - Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",
VA = volume de amostra processada = 0,2 ml AACC Press, 4th ed., 2001.
VRE = volume de reação com extrato = 2,2 ml
VRP = volume de reação com Padrão = 2,02 ml
VP= volume de Padrão na reação = 0,020 ml
VE = volume de extrato na reação = 0,2 ml
Se são utilizados volumes de Reagente diferentes de 2 ml
o fator 0,762 varia e deve ser calculado novamente e subs-
tituído na fórmula VRE e VRP.

VALORES DE REFERÊNCIA
O painel de expertos do National Cholesterol Education
Program (NCEP) fornece os seguintes valores de HDL
colesterol:
0,40-0,60 g/l
É recomendável que cada laboratório estabeleça seus
próprios valores de referência. Valores maiores de 0,40 g/l

870620024 / 00 p. 4/9
 HDL Colesterol
FT
C Precipitating reagent (phosphotungstic acid) for HDL-
cholesterol's separation in serum or plasma

SUMMARY The reagents and samples should be discarded according

Plasma lipoproteins are spherical particles containing vary- to the local regulations in force.
ing amounts of cholesterol, triglycerides, phospholipids and
proteins. STABILITY AND STORAGE INSTRUCTIONS
Phospholipids, free cholesterol and proteins constitute the The Provided Reagent is stable at room temperature (< 25oC)
outer surface of the lipoprotein particle, while the inner core until the expiration date stated on the box.
contains mostly esterified cholesterol and triglycerides.
Lipoproteins solubilize and transport cholesterol into the INSTABILITY OR DETERIORATION OF REAGENTS
bloodstream. Any trace of bacterial contamination may indicate reagent
Lipoproteins classification is based on its density which deterioration.
depends on the proportion of protein and lipid involved.
Classes are: chylomicron, very-low-density lipoproteins SAMPLE
(VLDL), low-density lipoproteins (LDL) and high-density Serum or plasma
lipoproteins (HDL). Numerous clinical studies have shown a) Collection: obtain the sample in the usual way.
that the different lipoprotein classes have diverse effects on b) Additives: if plasma is used, collect only with heparin.
coronary heart disease risk. c) Known interfering substances: anticoagulants other
The main role of HDL in lipid metabolism is the uptake and than heparin and bilirubin over 50 mg/l interfere. See Young,
transport of cholesterol from peripheral tissues to the liver D.S. in References for effect of drugs on the present method.
through a process known as reverse cholesterol transport d) Stability and storage instructions: separate serum
(cardioprotective mechanism). Low HDL-cholesterol is as- within one hour from extraction. The Lipid Research Clinics
sociated with a high risk of coronary heart disease. Therefore, recommend to refrigerate the sample until the test is per-
the determination of HDL-cholesterol is a useful tool for formed. The conservation of the samples at room temperature
identification high-risk patients. alters their lipoprotein composition, even before 24 hours.
Some authors mention that sample stability is maintained
PRINCIPLE for up to 3 days at 4oC and it is extended when they are
High-density lipoproteins (HDL) are selectively separated frozen. However, there is a great variability between differ-
by precipitating the low and very-low-density lipoproteins ent samples, therefore, it is recommended to keep them at
(LDL and VLDL) with phosphotungstic acid in magnesium 2-10oC and performe the test within 24 hours.
ions presence. HDL remain in the supernatant. Cholesterol
associated to HDL is determined by the enzymatic system REQUIRED MATERIAL (non-provided)
cholesterol-oxidase/peroxidase with Trinder colorimetry - Spectrophotometer or photocolorimeter.
(Phenol/4-Amino-phenazone). - Micropipettes and pipettes for measuring the stated volumes
- Kahn tubes.
PROVIDED REAGENTS - Spectrophotometric cuvettes.
A. Reagent A (Precipitating Reagent): 0.44 mmol/l phospho- - Water bath at 37oC.
tungstic acid and 20 mmol/l magnesium chloride solution. - Stopwatch.

NON-PROVIDED REAGENTS ASSAY CONDITIONS

Wiener lab.'s Colestat enzimático, Colestat enzimático - Wavelength: 505 nm in spectrophotometer or 490-530 nm
AA or Colestat enzimático AA líquida. in photocolorimeter with green filter.
- Reaction temperature: 37oC
INSTRUCTIONS FOR USE - Reaction time: 35 minutes
Reagent A: ready to use. - Sample volume: 200 ul
- Reagent A volume: 500 ul
WARNINGS - Supernatant volume: 200 ul
The Reagent is for “in vitro” diagnostic use. - Working Reagent volume of Colestat enzimático, Colestat
Use the reagents according to the working procedures for enzimático AA or Colestat enzimático AA líquida: 2 ml
clinical laboratories. - Final reaction volume: 2.2 ml

870620024 / 00 p. 5/9
 PROCEDURE LIMITATIONS
PROCEDURE - See Known interfering substances under SAMPLE.
In a Kahn tube adds 200 ul sample and 500 ul Reagent A. - The accuracy and precision of the determination mainly
Homogenize by shaking (not by inversion) for 20 seconds depend on following the precipitation conditions.
and let repose for 10 minutes at room temperature. Centri- - Samples with triglycerides above 10 g/l may difficult the
fuge 15 minutes at 3000 rpm or 2 minutes at 12,000 rpm. precipitation yielding turbid supernatants or a lipoprotein
Use clean supernatant as sample. layer floating on the surface. In that case, dilute the sample
In three tubes labeled B (Blank), S (Standard) and U 1:2 with saline solution and repeat the precipitation. The
(Unknown) place: obtained result must be multiplied by 2.
B S U
PERFORMANCE
Supernatant - - 200 ul a) Reproducibility: processing replicates of one sample on
Standard - 20 ul - the same day, the following results were obtained:

Working Reagent 2 ml 2 ml 2 ml Level S.D. C.V.

0.32 g/l ± 0.011 g/l 3.4 %
When Working Reagent of Colesterol enzimático AA 0.68 g/l ± 0.024 g/l 3.5 %
or Colestat enzimático AA líquida is used, mix and
incubate for up to 5 minutes at 37oC or 15 minutes at b) Linearity: the reaction is linear up to 5 g/l.
37oC when Working Reagent of Colestat enzimático is c) Detection limit: depends on the spectrophotometer used.
used. Then, take the tubes out of the bath and bring them For a 0.001 O.D. reading, the minimum visible change of
to room temperature. concentration will be of approximately 0.0063 g/l.
Read absorbance at 505 nm in spectrophotometer or at
490-530 nm in photocolorimeter with green filter, setting WIENER LAB. PROVIDES
the instrument to zero with the Blank. - 100 ml (Cat. 1220108).

REFERENCES
STABILITY OF FINAL REACTION - Castelli, W.P.; Levitas, I.M. - Current Prescribing 6/77:39,
The reaction color is stable for up to 2 hours, thus the absor- 1977.
bance must be measure within that period. - Gordon, T. - Am. J. Med. 62:707 (1977).
- Lopes-Virela, M.F. et al. - Clin. Chem. 23/5:882, 1977.
CALCULATIONS - Coniglio, R.I. - Acta Bioq. Clin. Latinoam. XXIII/2:201, 1989.
0.762 - Cooper, C. et al. - National Heart and Lung Institute, NIH
HDL Cholesterol (g/l) = U x f f= (USA), 1974.
S - Expert Panel of National Cholesterol Education Program -
JAMA 285/19:2486 (2001).
FVE RVE VStd
- Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",
0.762 = 2 (g/l) x x x
VS RVStd VE AACC Press, 4th ed., 2001.

FVE = extract final volume = 0.7 ml
VS = processed sample volume = 0.2 ml
RVE = reaction volume with extract = 2.2 ml
RVStd = reaction volume with Standard = 2.02 ml
VStd = Standard volume in the reaction = 0.020 ml
VE = extract volume in the reaction = 0.2 ml
If Reagent volumes other than 2 ml are used, the 0.762 fac-
tor varies and must be calculated again, replacing VRE and
VRStd in the formula.

REFERENCE VALUES
The National Cholesterol Education Program (NCEP) Expert
Panel provided the following reference values:
0.40 - 0.60 g/l
It is recommended that each laboratory establishes its own
reference values. However, values over 0.40 g/l are recom-
mended and the ones over 0.60 g/l have been regarded as
protective. On the contrary, HDL-cholesterol values below
0.40 g/l is considered as risk indicator of coronary heart
disease.
870620024 / 00 p. 6/9
 HDL Colesterol
FT
C Odczynnik strąceniowy (kwas fosforowolframowy) oddzielania
HDL- cholesterolu w surowicy krwi lub osoczu
Nr kat. 1220108

WSTĘP Stosować odczynniki zgodnie z procedurami dla laboratoriów

Lipoproteiny osocza to kuliste cząsteczki zawierające różne klinicznych.
ilości cholesterolu, trójglicerydów, fosfolipidów i białek. Odczynniki i materiał badany odrzucać zgodnie z lokalnymi
Fosfolipidy, wolny cholesterol i białka tworzą zewnętrzną przepisami.
powierzchnię cząsteczki lipoprotein, natomiast wewnętrzny
rdzeń składa się głównie z estryfikowanego cholesterolu z TRWAŁOŚĆ I WARUNKI PRZECHOWYWANIA
trójglicerydami. Cząsteczki te rozpuszczają i transportują Dostarczane odczynniki są trwałe w temperaturze poko-
cholesterol do strumienia krwi. Odpowiedni stosunek białek jowej (< 25oC) do końca daty ważności umieszczonej na
i tłuszczów odpowiedzialny jest za gęstość lipoprotein i jest opakowaniu.
podstawą do ich klasyfikacji na: chylomikrony, lipoproteiny
o bardzo niskiej gęstości (very-low-density lipoproteins BRAK TRWAŁOŚCI I POGORSZENIE JAKOŚCI
VLDL), o niskiej gęstości (low-density lipoproteins LDL) ODCZYNNIKÓW
oraz o wysokiej gęstości (high-density lipoproteins HDL). Jakikolwiek ślad nadkażenia bakteryjnego może wskazywać
Wiele klinicznych badań wykazało, że różne klasy lipoprotein na pogorszenie odczynnika.
mają znaczący i zróżnicowany wpływ na ryzyko choroby
niedokrwiennej serca. MATERIAŁ BADANY
Główną rolą HDL w metabolizmie tłuszczów jest wychwyt i Surowica krwi lub osocze
transport cholesterolu z tkanek obwodowych do wątroby w a) Pobranie: pobrać materiał badany w klasyczny sposób.
tzw. procesie transportu zwrotnego cholesterolu (mechanizm b) Substancje dodatkowe: jeśli materiałem jest osocze zale-
kardioprotekcyjny). Niski poziom cholesterolu HDL jest ca się zastosowanie wyłącznie heparyny jako antykoagulantu.
związany ze zwiększonym ryzykiem choroby niedokrwiennej c) Znane interakcje: antykoagulant inny niż heparyna i
serca. Dlatego oznaczenie poziomu cholesterolu HDL w bilirubina powyżej 50 mg/l.
surowicy krwi jest użytecznym narzędziem w rozpoznawaniu Zobacz źródło: Young, D.S. w sprawie wpływu leków w tej
grup pacjentów wysokiego ryzyka. metodzie.
d) Trwałość i instrukcja przechowywania: oddzielić
ZASADA DZIAŁANIA surowicę w ciągu godziny od pobrania. Zgodnie z zalece-
Lipoporoteiny o wysokiej gęstości (HDL) są selektywnie niami The Lipid Research Clinics schłodzić próbkę przed
oddzielane przez strącenie lipoprotein o niskiej i bardzo wykonaniem testu. Przechowywanie materiału badanego
niskiej gęstości (LDL i VLDL) w reakcji z kwasem fosforowol- w temperaturze pokojowej prowadzi do zmiany składu lipo-
framowym w obecności jonów magnezu. HDL pozostaje w protein nawet przed upływem 24 godzin.
nadsączu i należy go oddzielić przez odwirowanie. Następnie Niektórzy autorzy sugerują trwałość zamrożonego materiału
oznaczenie dokonuje się metodą enzymatyczną układem do 3 dni w temperaturze 4oC. Jednak ze względu na znaczące
oksydazy cholesterolowej i peroksydazy przy zastosowaniu odmienności pomiędzy różnymi próbkami materiału zaleca
kolorymetrii Trindera (fenol/ 4-aminofenazon). się przechowywanie po schłodzeniu i analizę przed upływem
24 godzin.
DOSTARCZANE ODCZYNNIKI
A. Odczynnik A (Odczynnik strąceniowy): 0,44 mmol/l kwas WYMAGANE MATERIAŁY I SPRZĘT (niedostarczane)
fosforowolframowy i 20 mmol/l roztworu chlorku magnezu. - Spektrofotometr lub fotokolorymetr.
- Mikropipety i pipety do pomiaru określonej objętości.
NIEDOSTARCZANE ODCZYNNIKI - Probówki Kahna.
Colestat enzimático, Colestat enzimático AA lub Colestat - Kuwety spektrofotometryczne.
enzimático AA líquida Wiener lab. - Łaźnia wodna o temp. 37oC.
- Stoper.
INSTRUKCJA UŻYCIA
Odczynnik A: gotowy do użycia. WARUNKI DLA PRZEPROWADZENIA TESTU
- Długość fali: 505 nm dla spektrofotometru lub 490-530 nm
OSTRZEŻENIA w fotokolorymetrze z zielonym filtrem.
Odczynnik diagnostyczny do zastosowania "in vitro". - Temperatura reakcji: 37oC

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- Czas reakcji: 35 minut Jeżeli objętość odczynnika jest inna niż 2 ml, współczynnik
- Objętość materiału badanego: 200 ul 0,762 zmienia się i należy go wyznaczyć powtórnie
- Objętość Odczynnika A: 500 ul zastępując RVE oraz RVStd w równaniu.
- Objętość nadsączu: 200 ul
- Objętość Odczynnik A Roboczego Colestat enzimático, Co- WARTOŚCI REFERENCYJNE
lestat enzimático AA lub Colestat enzimático AA líquida: 2 ml Zespół ekspertów The National Cholesterol Education
- Objętość reakcji końcowej: 2,2 ml Program (NCEP) ustalił następujący zakres referencyjny:
0,40 - 0,60 g/l
Zaleca się dla każdego laboratorium ustalenie własnych
PROCEDURA wartości referencyjnych. Jakkolwiek wartości powyżej 0,40 g/l
Probówką Kahna odmierzyć 200 ul materiału badaneg i są zalecane a powyżej 0,60 g/l są uznawane za kardiopro-
dodać 500 ul Odczynnik A. Homogenizować wstrząsając tekcyjne. Z drugiej strony wartości cholesterolu HDL poniżej
(ale nie przez odwrócenie) przez 20 sekund i odstawić na 0,40 g/l uznaje się za niezależny czynnik ryzyka choroby
10 minut w temperaturze pokojowej. Odwirować przez 15 niedokrwiennej serca.
minut przy 3000 obr./min. lub 2 minuty przy 12 000 obr./min.
Zastosować czysty nadsącz jako materiał badany. OGRANICZENIA PROCEDURY
W trzech probówkach oznaczonych B (Blank - Próba ślepa), - Zobacz znane interakcje w rozdziale MATERIAŁ BADANY.
S (Standard - Próba wzorcowa) oraz U (Unknown - Niez- - Dokładność i precyzja oznaczenia zależy głównie warunków
nany materiał badany) umieścić: reakcji strącania.
- Próbki z trójglicerydemią powyżej 10 g/l mogą utrudniać
B S U
frakcjonowaną precypitację dając mętny nadsącz lub
Nadsącz - - 200 ul pływającą na powierzchni warstwę lipoprotein. W tym pr-
Próba wzorcowa - 20 ul - zypadku rozcieńczyć materiał badany 1:2 solą fizjologiczną
i powtórzyć strącenie. Otrzymane wyniki należy pomnożyć
Odczynnik Roboczy 2 ml 2 ml 2 ml przez 2.
Wymieszać i inkubować przez 5 minut w temp. 37oC jeśli
jako Odczynnik Roboczy zastosowano Colesterol enzimá- CHARAKTERYSTYKA TESTU
tico AA lub Colestat enzimático AA líquida, lub 15 minut a) Powtarzalność: badanie tej samej próbki powtórzono tego
w temp. 37oC jeśli jako Odczynnik roboczy zastosowano samego dnia i otrzymano następujące wyniki:
Colestat enzimático. Wyjąć z łaźni wodnej i ochłodzić. Poziom S.D. C.V.
Odczytać absorbancję w spektrofotometrze przy przy 0,32 g/l ± 0,011 g/l 3,4 %
505 nm lub w fotokolorymetrze z zielonym filtrem przy 0,68 g/l ± 0,024 g/l 3,5 %
490-530 nm, ustawiając aparat na zero na Próbie Ślepej.
b) Linijność: reakcja jest linijna do poziomu 5 g/l.
c) Granica wykrywalności: zależy od użytego spektrofo-
TRWAŁOŚĆ REAKCJI KOŃCOWEJ tometru. Dla odczytu 0.001 O.D. minimalna dostrzegalna
Barwa reakcji jest trwała przez 2 godziny, w tym okresie czasu zmiana stężenia wynosi ok. 0,0063 g/l.
należy odczytać absorbancję.
WIENER LAB. DOSTARCZA
OBLICZENIA - 100 ml (Nr kat. 1220108)
0,762
HDL Cholesterol (g/l) = U x f gdzie f = ŹRÓDŁA
S - Castelli, W.; Levitas I. - Current Prescribing 6/77:39 (1977).
FVE RVE VStd - Gordon, T. - Am. J. Med. 62:707 (1977).
0,762 = 2 (g/l) x x x - Lopes-Virela, M.F. et al. - Clin. Chem. 23/5:882 (1977).
VS RVStd VE - Coniglio, R. I.- Acta Bioq. Clin. Latinoam. XXIII/2:201, 1989.

- Cooper, C. - National Heart and Lung Institute, NIH (USA),
FVE (extract final volume) = końcowa objętość ekstraktu = 0,7 ml 1974.
VS (processed sample volume) = objętość przetwarzanej próbki - Expert Panel of National Cholesterol Education Program -
= 0,2 ml JAMA 285/19:2486 (2001).
RVE (reaction volume with extract) = objętość reakcji z ekstraktem - Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",
= 2,2 ml AACC Press, 4th ed., 2001.
RVStd (reaction volume with Standard) = objętość reakcji z próbą
wzorcową = 2,02 ml
VStd (Standard volume in the reaction) = objętość próby wzorcowej
w reakcji = 0,020 ml
VE (extract volume in the reaction) = objętość ekstraktu w reakcji=
0,2 ml

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SÍMBOLOS // SÍMBOLOS // SYMBOLS // OZNACZENIA
Los siguientes símbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagnóstico de Wiener lab. // Os seguintes símbolos
são utilizados nos kits de reagentes para diagnóstico da Wiener lab. // The following symbols are used in the packaging for
Wiener lab. diagnostic reagents kits. // Następujące symbole są zastosowane na opakowaniach zestawów odczynników
diagnostycznych.
Este producto cumple con los requerimientos previstos por la Directiva Europea 98/79 CE de productos sanitarios para el diagnóstico

C "in vitro"// Este produto preenche os requisitos da Diretiva Europeia 98/79 CE para dispositivos médicos de diagnóstico "in vitro"//
This product fulfills the requirements of the European Directive 98/79 EC for "in vitro" diagnostic medical devices// Ten produkt spełnia
wymagania Dyrektywy Europejskiej 98/79 EC dla wyrobów medycznych używanych do diagnozy "in vitro"
P Representante autorizado en la Comunidad Europea// Representante autorizado na Comunidade Europeia// Authorized representative
in the European Community// Autoryzowany przedstawiciel we Wspólnocie Europejskiej
V Uso diagnóstico "in vitro"// Uso médico-diagnóstico "in vitro"// "In vitro" diagnostic medical device// Wyrób do diagnostyki "in vitro"
Contenido suficiente para <n> ensayos// Conteúdo suficiente para <n> testes// Contains sufficient for <n> tests// Zawartość wystar-
X czająca dla <n> badań

Fecha de caducidad// Data de validade// Use by// Użyć przed

H
Límite de temperatura (conservar a)// Limite de temperatura (conservar a)// Temperature limitation (store at)// Ograniczenie dopusz-
l czalnych temperatur

 No congelar// Não congelar// Do not freeze// Nie zamrażać

Riesgo biológico// Risco biológico// Biological risks// Ryzyko biologiczne

F
Volumen después de la reconstitución// Volume após a reconstituição// Volume after reconstitution// Objętość po rozpuszczeniu

Cont. Contenido// Conteúdo// Contents// Zawartość

g Número de lote// Número de lote// Batch code// numer serii

M Elaborado por:// Elaborado por:// Manufactured by:// Wytwórca

Nocivo// Nocivo// Harmful// Substancja szkodliwa

Corrosivo / Cáustico // Corrosivo / Caústico // Corrosive / Caustic// Substancja żrące

Irritante// Irritante// Irritant// Substancja drażniąca

i Consultar instrucciones de uso// Consultar as instruções de uso// Consult instructions for use// Przed użyciem zapoznać się z instrukcją

Calibr. Calibrador// Calibrador// Calibrator// Kalibrator

b Control// Controle// Control// Próba kontrolna

b Control Positivo// Controle Positivo// Positive Control// Próba kontrolna dodatnia

c Control Negativo// Controle Negativo// Negative Control// Próba kontrolna ujemna

h Número de catálogo// Número de catálogo// Catalog number// Numer katalogowy

M Wiener Laboratorios S.A.I.C.

Wiener lab.
Riobamba 2944
2000 - Rosario - Argentina
http://www.wiener-lab.com.ar
Dir. Téc.: Viviana E. Cétola
Bioquímica
Producto Autorizado A.N.M.A.T.
Cert. Nº: 1344/96 2000 Rosario - Argentina
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