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    Tinción Gram y Giemsa

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    Kevin Fernando Salazar Coquinche
    Este documento describe dos prácticas de laboratorio para teñir células mediante tinción diferencial Giemsa y Gram. La tinción Giemsa permite diferenciar las estructuras celulares y es utilizada para detectar el plasmodio de la malaria, mientras que la tinción Gram diferencia bacterias en Gram positivas y Gram negativas dependiendo de su afinidad por el cristal violeta. El documento proporciona los procedimientos detallados para ambas tinciones, así como preguntas complementarias sobre los principios involucrados.

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    Tinción Gram y Giemsa

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    Kevin Fernando Salazar Coquinche
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    Este documento describe dos prácticas de laboratorio para teñir células mediante tinción diferencial Giemsa y Gram. La tinción Giemsa permite diferenciar las estructuras celulares y es utilizada para detectar el plasmodio de la malaria, mientras que la tinción Gram diferencia bacterias en Gram positivas y Gram negativas dependiendo de su afinidad por el cristal violeta. El documento proporciona los procedimientos detallados para ambas tinciones, así como preguntas complementarias sobre los principios involucrados.

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    Este documento describe dos prácticas de laboratorio para teñir células mediante tinción diferencial Giemsa y Gram. La tinción Giemsa permite diferenciar las estructuras celulares y es utilizada para detectar el plasmodio de la malaria, mientras que la tinción Gram diferencia bacterias en Gram positivas y Gram negativas dependiendo de su afinidad por el cristal violeta. El documento proporciona los procedimientos detallados para ambas tinciones, así como preguntas complementarias sobre los principios involucrados.

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    Tinción Gram y Giemsa

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    Este documento describe dos prácticas de laboratorio para teñir células mediante tinción diferencial Giemsa y Gram. La tinción Giemsa permite diferenciar las estructuras celulares y es utilizada para detectar el plasmodio de la malaria, mientras que la tinción Gram diferencia bacterias en Gram positivas y Gram negativas dependiendo de su afinidad por el cristal violeta. El documento proporciona los procedimientos detallados para ambas tinciones, así como preguntas complementarias sobre los principios involucrados.

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    LABORATORIO DE BIOLOGÍA 1

    PRÁCTICA 3

    Tema: Tinción diferencial Giemsa y Gram

    Objetivo: Observar células mediante tinción diferencial GIEMSA y GRAM.

    Introducción

    La tinción GIEMSA permite la diferenciación de las estructuras celulares como la cromatina


    y la membrana nuclear, así como el citoplasma dependiendo del tipo de células, según la
    naturaleza del tinte: ácido (eosina), básico (azur A, B o C) y azul de metileno. Esta técnica
    es utilizada para la detección del plasmodio causante de la malaria. (Barcía, 2007)

    La tinción Gram se emplea para la diferenciación de bacterias en laboratorios de


    microbiología. Así, las bacterias se dividen en Gram positivas si se tiñen violeta y en Gram
    negativas si se tiñen rosa. Esta diferencia radica en la afinidad del cristal violeta por la capa
    de péptido-glicano presente en Gram positivas, el cual se ve impedido de salir de la capa
    por la adición de un mordiente: Lugol. (Jácome, et al., 2014)

    Actividad 1: Tinción
    GIEMSA

    Materiales/reactivos/equipos
    disponibles

    Microscopio, Aceite de inmersión

    Frotis Sanguíneo: - portaobjetos. - cubreobjetos. - torundas con alcohol - Lanceta. - Alcohol


    metílico absoluto (libre de acetona). - Guantes

    Tinción: - Colorante de Giemsa. - Tampón pH 7.2. - Pipeta Pasteur. - Cubeta. - Agua


    destilada -Tubo de ensayo

    Procedimiento:
    1. Desinfectar la punta del dedo con la torunda de alcohol y cuidadosamente
    hacer un
    pinchazo con la lanceta. 2. Sobre una placa portaobjetos limpia, colocar una gota
    de sangre en la sección media
    izquierda. 3. Con otra placa portaobjetos, realizar un frotis inclinando la placa a 45° y
    deslizándola hacia
    la derecha. Dejar secar al aire. 4. Fijar la muestra colocando 10 gotas metanol y
    dejando actuar durante 3 minutos. 5. Mientras pasan los tres minutos, preparar una
    solución 1:9 de GIEMSA y Solución buffer
    PBS pH: 7.2 6. Colocar de 10 a 20 gotas de GIEMSA hasta cubrir la placa y dejar
    actuar por 20 minutos. 7. Enjuagar las placas con agua destilada cuidadosamente
    para no remover la muestra de la
    placa. 8. Dejar secar al aire y observar en el microscopio. Anotar las
    observaciones.

    Actividad 2: Tinción
    Gram Microscopio
    Aceite de inmersión

    Porta objetos
    Goteros Mechero
    Asa de siembra
    Pinza de madera
    Guantes Cristal
    Violeta Gram Yodo
    Gram Alcohol-
    Cetona Safranina
    Gram Tubos de
    ensayo Porta tubos
    de ensayo Alcohol
    Muestras de yogurt

    Procedimien
    to
    1. Diluir la muestra original utilizando el asa de siembra. Tomar una gota de la
    muestra y
    colocarla en un tubo de ensayo que contenga agua destilada o solución
    salina. 2. Utilizando el asa de siembra, tomar una gota de la disolución y
    esparcir sobre el
    portaobjetos. 3. Dejar secar la muestra sobre el portaobjetos y luego fijarla
    utilizando calor: pasar el
    portaobjetos con la muestra 2 o 3 veces a través de la llama del mechero. 4. Una vez
    fijada la muestra, iniciar con la tinción. Primero: colocar el colorante primario
    (Cristal violeta), dejar reposar la muestra con el tinte por 1 minuto y remover el
    exceso de colorante lavándolo gentilmente con agua.
    2
    LABORATORIO DE
    BIOLOGÍA 1

    5. A continuación, añadir el mordiente (Yodo Gram/ lugol) durante 1 minuto.


    Eliminar el
    exceso con agua. 6. El tercer paso de la tinción es la decoloración: añadir una gota de
    alcohol-cetona y dejar
    actuar por 10 segundos. Inmediatamente después, enjuagar el portaobjetos con
    agua. 7. Finalmente añadir la tinción de contraste (Safranina Gram) durante 1
    minuto y eliminar
    cualquier exceso con agua. 8. Una vez terminada la tinción, dejar
    secar y observar al microscopio.

    Preguntas
    complementarias
    1. ¿Qué define que un tinte tenga afinidad por distintas estructuras
    celulares? 2. ¿Qué rol cumple la solución buffer (tampón) en la tinción
    GIEMSA? 3. ¿Cómo fija el metanol la muestra en la tinción GIEMSA? 4.
    ¿Qué diferencia existe entre gram positivos y gram negativos? 5. ¿Qué
    rol cumple el yodo gram en la tinción? 6. ¿Qué rol cumple el alcohol-
    cetona en la tinción Gram?

    Bibliografí
    a:

    • Barcia, J. J. (2007). The Giemsa stain: its history and applications. International
    journal of surgical pathology, 15(3), 292-296.
    • Jácome, L; Hernández, M; Colín, M; Ortega, S; Cerón, G y Franco, R (2014). Las tinciones
    básicas en el laboratorio de microbiología. Investigación en discapacidad. 3(1), 10-18.
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