Qpr7 .3rd1 Bmpophpf Assay - Español

REPORTE DE VALIDACIÓN DEL MÉTODO HPLC PARA
DETERMINACIÓN DE BIMATOPROST EN Código: QPR7 .3RD1 BMPOPHPF ASSAY

BIMATOPROST 0.1 y 0.3mg/mL
Versión: 1
SOLUCIÓN DE GOTAS PARA LOS OJOS SIN
CONSERVACIÓN Fecha de emisión: 21-04-2015
ALCANCE: El alcance del presente protocolo de calidad es informar los resultados del estudio de
validación de la determinación del ensayo por Método de HPLC para Bimatoprost en Bimatoprost 0.1%
y 0.3% gotas para los ojos-Solución libre de conservantes.
ÁREA DE APLICACIÓN: El presente protocolo de calidad se aplica al Departamento de Investigación y y
cumple con los requisitos IS0-9001.
"REPORTE DE VALIDACIÓN DEL MÉTODO HPLC

PARA EL ENSAYO DE DETERMINACIÓN DE BIMATOPROST
EN BIMATOPROST/ PHARMATHEN 0.1 mg/mL y 0.3mg/mL
GOTAS PARA LOS OJOS
SOLUCIÓN LIBRE DE PRESERVATIVOS"
[SELLO]
07/08/2019
21/04/2015 [FIRMA]
FECHA FIRMA
PREPARADO POR Departamento de Desarrollo e 21/04/2015 [FIRMA]
Investigación
V. Barberis
REVISADO POR Departamento de Desarrollo e 21/4/2015 [FIRMA]
Investigación
D. Papakonstantopoulou
APROBADO POR Departamento de Desarrollo e 21/4/2015 [FIRMA]
Investigación
V. Samara
EMITIDO POR Departamento de 21/04/2015 [FIRMA]
Aseguramiento de Calidad
K. Kotsialou
I&D Bimatoprost 0.1 y 0.3mg/mL solución para gotas oculares sin conservadores Página 1 de 30
Versión: 1
Contenido
1. Introducción .................................................................................................................3
2. Materiales de referencia ..............................................................................................3
3. Validación del procedimiento ......................................................................................5
3.1 Rango ………............................................................................................................5
3.2 Adecuabilidad del sistema ....................................................................................5
3.3 Especificidad ......................................................................................................... 6
3.4 Estabilidad de la solución estándar .......................................................................8
3.5 Estabilidad de la solución de muestra .................................................................12
3.6 Linealidad de respuesta .......................................................................................15
3.7 Exactitud ..............................................................................................................17
3. 8 Intra Precisión .....................................................................................................21
3 .8.1 Precisión del sistema ........................................................................................21
3.8.2 Precisión del método ........................................................................................22
3.9 Precisión intermedia ........................................................................................... 25
3 .1 0 Robustez .......................................................................................................... 26
4. Conclusiones ............................................................................................................... 29
5. HISTORIA DE LA REVISIÓN .......................................................................................... 30
Versión: 1
1. Introducción
El procedimiento analítico de HPLC desarrollado para la identificación y cuantificación de Bimatoprost

en Bimatoprost 0.1 mg/mL y Bimatoprost 0.3mg/mL soluciones para gotas oculares -está validado,
confirmando que es adecuado para su propósito previsto.
El presente estudio de validación se realizó de acuerdo con las directrices de ICH sobre validación del
método analítico para el método interno que se desarrolló.
2. Materiales de referencia
El estándar de referencia de Bimatoprost e impurezas utilizado para este estudio de validación es

proporcionado por Yonsung. La información relevante se proporciona a continuación:
Bimatoprost
(Z) -7 - [(1 R, 2R, 3R, 5S) -3-5-dihidroxi-2 - [(1 E, 3S) -3-hidroxi-5-fenil-1-
pentenil]ciclopenti] -5-N-etilheptenamida
Fórmula molecular: C25H37N04 Peso molecular: 415.57
Lote No: BPWS1301, Reanálisis:7/2015
15R-Bimatoprost
(Z) -7 - ((1 R, 2R, 3R, 5S) -3-5-dihidroxi-2- ((R, E) -3-hidroxi-5-fenilpent-1-
enil) ciclopenti) -N-etilhept-5-enamida
Lote No: BPIM11101, Reanálisis:2/2016
Versión: 1
5.6-trans-Bimatoprost
(E) -7 - ((1 R, 2R, 3R, 5S) -3-5-dihidroxi-2 - ((S, E) -3-hidroxi-5-fenilpent-1-
enil) ciclopenti) -N-etilhept-5-enamida
Lote No: BPIM21001, Reanálisis: 7/2015
Versión: 1
3. Validación del procedimiento.
Según el método de HPLC para la determinación del ensayo, la concentración de prueba

para Bimatoprost ha sido establecida en 0.05mg/mL.
3.1 Rango
El rango para la determinación de Bimatoprost se establece desde el 80% de la concentración de prueba

0.048mg/mL a 120% de la concentración de prueba 0.05mg/mL. Eso es de 0.0384mg/mL- 0.06mg/mL.
3.2 Adecuabilidad del sistema
La Adecuabilidad del sistema se evaluó con cinco inyecciones repetidas de un estándar.

solución de Bimatoprost a 0.05mg/mL.
Se prepararon las siguientes soluciones:

Solución Stock estándar de Bimatoprost 0. 2 mq/mL
Se transfirió una cantidad equivalente a 10 mg de estándar de trabajo de Bimatoprost en un matraz
volumétrico de 50,0 mL con solvente. La solución se sonicó durante 15 minutos. La concentración es de 0.2
mg/mL.
Solución estándar Bimatoprost 0.05 mq/mL (Adecuabilidad del sistema)

Se transfirió un volumen igual a 5,0 mL de la solución anterior en un matraz volumétrico de 20,0 mL con
solvente. La concentración final es 0.05 mg/mL.
Criterios de aceptación:
1. El% de desviación estándar relativa (RSD por sus siglas en inglés) para el área del pico de Bimatoprost debe
ser menor que 2.0.
2. El% de desviación estándar relativa (RSD) para el tiempo de retención de Bimatoprost el pico debe ser
inferior a 1.0.
3. La asimetría para el pico de Bimatoprost no debe ser superior a 2.0.
4. Los platos teóricos para el pico de Bimatoprost no deben ser inferiores a 2000.
Los resultados obtenidos de los estándares de Adecuabilidad del sistema se resumen a continuación.
Bimatoprost Area Tiempo de Asimetría Platos
retención teóricos
Valor promedio 1263702 12.45 1.17 10074
Desv. Std. 1000 0.02 - -
% RSD 0.08 0.14 - -
Conclusión:
El% de desviación estándar relativa (% RSD) para el área de Bimatoprost es calculado a 0.08 y para el tiempo
de retención 0.14, los platos teóricos son calculado aproximadamente a 10000 y la asimetría es 1.17. Todos
estos parámetros muestran que el sistema es adecuado para realizar el análisis.
Versión: 1
3.3 Especificidad
La especificidad del método de ensayo se determinó comparando los resultados de cromatogramas de
solvente, soluciones de placebo, solución estándar, muestra de Bimatoprost 0.05mg/mL (de 0.1 mg/mL de
producto), cada impureza al límite (1%), muestra de Bimatoprost 0,05 mg/mL con impurezas en su límite (de
0,1 mg/mL de producto), muestra de Bimatoprost 0.048mg/mL (de 0.3mg/mL de producto) y Muestra
Bimatoprost 0,048 mg/mL con impurezas en su límite (de 0,3 mg/mL de producto).
Solvente: Buffer pH = 3.0 / metanol, 50/50
Solución Stock estándar de Bimatoprost 0. 2 mg/mL

volumétrico de 50,0 mL con disolvente. La solución se sonicó durante 15 minutos. La concentración es de 0.2
mg/mL.
Solución estándar Bimatoprost 0. 05 mg/mL

Se transfirió un volumen igual a 5,0 mL de la solución anterior en un volumen volumétrico de 20,0 mL.
matraz con solvente. La concentración final es 0.05 mg/mL.
Placebo 0.1 mq/mL

Volumen igual a 10.0 mL de placebo de Bimatoprost 0. 1 mg/mL La solución de gotas oftálmicas fue transferida
a un matraz volumétrico de 20,0 mL y se aforó con solvente.
Placebo 0.3mq/mL
Un volumen igual a 4.0 mL de placebo de Bimatoprost 0.3 mg/mL de a solución de gotas para los ojos fue
Transferida a un matraz volumétrico de 25,0 mL y se diluyó a volumen con solvente.
Impureza 15R-Bimatoprost solución stock (0. 1 mg/mL)

Una cantidad igual a 10.0 mg de impureza 15R-Bimatoprost estándar de trabajo fue pesada y disuelto con
precisión en un matraz volumétrico de 100.0 mL y aforado hasta el volumen con acetonitrilo.
Impureza 15R Bimatoprost en el límite 1.0% (0. 0005mg/mL)
Se diluyó un volumen igual a 0,25 mL de la solución stock de impureza 15R-Bimatoprost en 50,0 mL con
solvente.
Solución stock de Impureza 5.6-Trans-Bimatoprost (0. 1 mg/mL)
La cantidad igual a 10.0 mg de impureza 5.6-Trans-Bimatoprost estándar de trabajo fue pesada y disuelta con
precisión en un matraz volumétrico de 100.0 mL y llenado hasta el volumen con acetonitrilo.
Impureza 5. 6-Trans-Bimatoprost en el límite 1% (0. 0005mg/mL)
Un volumen igual a 0.25 mL de la impureza 5. solución stock de 6-Trans-Bimatoprost fue aforado a 50,0 mL
con solvente.
Bimatoprost 0. 05 mg/mL solución de muestra para 0. 1 mg/mL Solución de gotas para los ojos
Un volumen igual a 10.0 mL de Bimatoprost 0.1 mg/mL solución de gotas para los ojos se transfirió a un matraz
volumétrico de 20.0 mL con solvente. La concentración final es 0.05mg/mL para Bimatoprost.
Versión: 1
Bimatoprost 0. 048 mg/mL solución de muestra para 0. 3 mg/mL Solución de gotas para los ojos
Se transfirió un volumen igual a 4.0 mL de Bimatoprost 0.3 mg/mL Solución de gotas para los ojos a un matraz
volumétrico de 25.0 mL con solvente. La concentración final es 0.048 mg/mL para Bimatoprost.
Soluciones de muestra enriquecidas
Bimatoprost a 0. 05mg/mL + Impurezas 15R-Bimatoprost y 5. 6-Trans-Bimatoprost a 0. 0005mg/mL (en el límite
1%)
Un volumen igual a 10.0 mL de Bimatoprost 0.1mg/mL solución de gotas para los ojos fue transferida a un
matraz volumétrico de 20.0 mL, enriquecido con 100mcg de impureza 15R-Bimatoprost solución stock (0. 1
mg/mL), 100 mcL de Impureza y 5. Solución stock de 6-Trans-Bimatoprost (0. 1 mq / mL) y diluido a volumen
con solvente.
Bimatoprost a 0. 048mg/mL + Impurezas 15R-Bimatoprost y 5. 6-Trans-Bimatoprost a 0. 0005mg/mL (en el
límite 1%)
Un Volumen igual a 4.0 mL de Bimatoprost 0.3mg/mL solución de gotas para los ojos se transfirió a un matraz
aforado de 25.0 mL, enriquecido con 125 mcL de impureza 15R-Bimatoprost solución stock (0. 1 mg/mL), 125
mcL de impureza 5. Solución stock de 6-Trans-Bimatoprost (0. 1 mg/mL) y diluido a volumen con solvente.
Picos aparentes de solvente,placebo o impurezas no interfieren con los picos de Bimatoprost.
Cada componente por separado

Nombre Tiempo de Retención (min)
Bimatoprost 12.4
15R-Bimatoprost 10.6
5.6- trans Bimatoprost 11.2
Solución de muestra enriquecida Bimatoprost 0.1 mg/mL

Nombre Tiempo de Tiempo de retención Resolución
Retención (min) relativa (TRR)
Bimatoprost 12.4 1.00 2.8
15R-Bimatoprost 10.6 0.85 0.0
5.6- trans Bimatoprost 11.2 0.90 1.3
Solución de muestra enriquecida Bimatoprost 0.3 mg/mL
Nombre Tiempo de Tiempo de retención Resolución
Retención (min) relativa (TRR)
Bimatoprost 12.4 1.00 2.8
15R-Bimatoprost 10.6 0.85 0.0
5.6- trans Bimatoprost 11.2 0.90 1.3
Conclusión:
Al comparar los cromatogramas generados a partir de las soluciones de especificidad, concluimos que no
hay picos que interfieran con el pico de Bimatoprost y que ni los picos de solvente ni de placebo eluyen en
el tiempo de retención de Bimatoprost.
Versión: 1
3.4 Estabilidad de la solución estándar
El propósito de este estudio fue determinar la estabilidad de la solución estándar de Bimatoprost en unos
días. Una solución de estándar de trabajo de Bimatoprost a 0.05mg/mL fue preparada y analizada a las 0, 24 y
48 horas. La solución se almacenó a temperatura ambiente y en el refrigerador a 5 ° C.
Solución estándar stock de Bimatoprost 0. 2 mg/mL

volumétrico de 50,0 mL con disolvente. La solución se sonicó durante 15 minutos, la concentración es de 0.2
mg/mL.
Solución estándar Bimatoprost 0. 05 mg/mL (Adecuabilidad del sistema)
Se transfirió un volumen igual a 5,0 mL de la solución anterior en un matraz volumétrico de 20,0 mL y se aforó
con solvente. La concentración final es 0.05 mg/mL.
El % de diferencia del % de recuperación de Bimatoprost en cada intervalo de tiempo calculado con una
solución estándar recién preparada, en comparación con el tiempo de preparación, debe ser menos de 3.0.
El % de diferencia para el % de recuperación del estándar en un intervalo de tiempo especificado en

comparación con el % de recuperación inicial se calcula mediante la siguiente fórmula:
% De diferencia = I% Recuperación (t) -% Recuperación (t0) I* 100

% De recuperación (t0)
Dónde:
% De recuperación (t):% de recuperación de la solución estándar en cada intervalo de tiempo
% De recuperación (t0):% de recuperación de la solución estándar a las 0 horas
Versión: 1
Los resultados del estudio a temperatura ambiente se presentan en la siguiente tabla:
ADECUABILIDAD DEL SISTEMA 0h

BIMATOPROST Area Tiempo de Asimetría Platos teóricos
Retención
Promedio 1411555 11.8 1.20 9311
Desv. Estándar 1273 0.01 - -
% RSD 0.09 0.07 - -
Retención
Promedio 1388448 12.0 1.18 9408
% RSD 0.08 0.27 - -
Retención
Promedio 1377805 12.0 1.16 9318
% RSD 0.11 0.03 - -
Versión: 1
Temperatura ambiente
BIMATOPROST 0 horas 24 horas 48 horas
Promedio 1411555 1409567 1411021
% Recuperación 100.0 101.5 101.2
% Diferencia - 1.5 1.2
% RSD TOTAL 0.79
Los resultados del% de recuperación del pico de solución estándar a las 0, 24 y 48 horas se presentan en el
siguiente gráfico:
Conclusión:
Los valores de % de diferencia para todos los picos están dentro de la especificación. Por lo tanto, la solución
estándar es estable a temperatura ambiente durante al menos 48 horas.
Versión: 1
Los resultados del estudio en refrigerador se presentan en la siguiente tabla:
5 °C
Promedio 1411555 1410887 1411543
% Recuperación 100.0 101.6 101.2
% RSD TOTAL 0.83
Los resultados del% de recuperación del pico de solución estándar a las 0, 24 y 48 horas se presentan en el
siguiente gráfico:
Conclusión:
Los valores de % de diferencia para todos los picos están dentro de la especificación. Por lo tanto, la solución
estándar es estable a 5 °C durante al menos 48 horas.
Versión: 1
3.4 Estabilidad de la solución muestra
El propósito de este estudio fue determinar la estabilidad de la solución de Bimatoprost en unos días. Una
solución Bimatoprost a 0.05 mg/mL de solución ocular para 0.1 mg/mL de solución ocular y una muestra de
solución de Bimatoprost 0.48 mg/mL para 0.3 mg/mL de solución ocular fue preparada y analizada a las 0, 24
y 48 horas. La solución se almacenó a temperatura ambiente y en el refrigerador a 5 ° C.
Bimatoprost a 0.05 mg/mL solución muestra (para 0.1 mg/mL solución en gotas oculares)
Se transfirió un volumen igual a 10 mL de Bimatoprost 0.1 mg/mL de solución ocular a un matraz volumétrico
de 20,0 mL y se aforó con solvente.La concentración final es de 0.05 mg/mL de Bimatoprost.
Bimatoprost a 0.048 mg/mL solución muestra (para 0.3 mg/mL solución en gotas oculares)
Se transfirió un volumen igual a 4.0 mL de la solución anterior en un matraz volumétrico de 25.0 mL y se aforó
con solvente. La concentración final es 0.048 mg/mL.
El % de diferencia del % de recuperación de Bimatoprost en cada intervalo de tiempo calculado con una
solución estándar recién preparada, en comparación con el tiempo de preparación, debe ser menos de 3.0.
El % de diferencia para el % de recuperación del la muestra especificada en un intervalo de tiempo especificado

en comparación con el % de recuperación inicial se calcula mediante la siguiente fórmula:
% De diferencia = I% Recuperación (t) -% Recuperación (t0) I* 100

% De recuperación (t0)
Dónde:
% De recuperación (t):% de recuperación de la solución muestra en cada intervalo de tiempo
% De recuperación (t0):% de recuperación de la solución muestra a las 0 horas
Versión: 1
0.1 mg/mL
Promedio 1406332 1404816 1405662
% Recuperación 99.7 101.5 100.9
% RSD TOTAL 0.80
0.3 mg/mL
Promedio 1361842 1359942 1359580
% Recuperación 100.6 102.1 101.7
% RSD TOTAL 0.77
Los resultados del % de recuperación del pico de solución muestra a las 0, 24 y 48 horas se presentan en los
siguientes gráficos:
Conclusión:
Los valores de % de diferencia para todos los picos están dentro de la especificación. Por lo tanto, las
soluciones muestra son estables a temperatura ambiente durante al menos 48 horas.
Versión: 1
5 °C
0.1 mg/mL
Promedio 1406332 1401426 1406034
% Recuperación 99.7 101.0 100.9
% RSD TOTAL 0.72
5 °C
0.3 mg/mL
Promedio 1361842 1359784 1359132
% Recuperación 100.6 102.1 101.6
% RSD TOTAL 0.76
Los resultados del % de recuperación del pico de solución muestra a las 0, 24 y 48 horas se presentan en los
siguientes gráficos:
Conclusión:
Los valores de % de diferencia para todos los picos están dentro de la especificación. Por lo tanto, las
soluciones muestra son estables a 5 °C durante al menos 48 horas.
Versión: 1
3.6 Linealidad de respuesta
La linealidad de la respuesta se logró probando la respuesta de Bimatoprost en cinco soluciones diferentes que
contienen del 80% de la concentración de prueba 0.048 mg/mL a 120% de la concentración de prueba 0.05
mg/mL.
Las siguientes soluciones presentadas en la tabla a continuación se prepararon por dilución a partir de la
solución stock.
Solución estándar stock de Bimatoprost 0.2 mg/mL

volumétrico de 50,0 mL con disolvente. La solución se sonicó durante 15 minutos. La concentración es de 0.2
mg/mL.
Las concentraciones de Bimatoprost en cada solución se presentan en las tablas a continuación:
Linealidad de la Volumen de Volumen final en Concentración final de
solución-% Porcentaje Bimatoprost 0.2 mg/mL solvente (mL) Bimatoprost (mg/mL)
de la solución de Solución stock (mL)
referencia
80% de 0.48 mg/mL 4.8 25.0 0.0384
90% de 0.05 mg/mL 4.5 20.0 0.045
100% de 0.05mg/mL 5.0 20.0 0.050
110% de 0.05mg/mL 5.5 20.0 0.055
120% de 0.05mg/mL 6.0 20.0 0.060
El coeficiente de determinación (r) de la curva de regresión aplicada en los puntos de datos debe ser mayor
que 0.998.
La regresión lineal se aplica para estimar la relación entre la respuesta del detector (área de pico) y la
concentración de Bimatoprost.
Coeficiente de Intercepto y (1) Pendiente (2)

determinación (r)
BIMATOPROST 0 .9999 34463.4416 27646957.5866
(1) En unidades de área

(2) En Unidades de respuesta de pico/Unidades concentración (mg/mL)
Versión: 1
Conclusión
El coeficiente de correlación (r) obtenido es 09999 mostrando la respuesta lineal del pico de Bimatoprost en
el rango de 80 a 120%.
Versión: 1
3. 7 Exactitud
Se preparan y analizan tres soluciones de muestra en cada nivel 80%, 100% y 120% de la concentración de
prueba de ensayo, para establecer la exactitud del método determinando la recuperación en comparación con
una solución estándar.
Solución estándar stock de Bimatoprost 0.2 mg/mL

volumétrico de 50.0 mL con solvente. La solución se sonicó durante 15 minutos. La concentración es de 0.2
mg/mL.
Solución estándar de exactitud
Solución estándar Bimatoprost 0.05 mg/mL

Un volumen igual a 5.0 mLde la solución anterior se transfirió a un matraz volumétrico de 20.0 mL con solvente.
La concentración final es 0.05 mg / mL.
Muestras de exactitud.
Las siguientes soluciones, presentadas en las tablas a continuación:
• Bimatoprost 0.1mg / mL Solución para gotas oculares
Solución de Volumen del Volumen de Volumen final Concentración

Exactitud -% placebo Bimatoprost stock En solvente final
Porcentaje de la (mL) (0.2 mg/mL) (mL) Bimatoprost
solución de (mg/mL)
referencia
80% 10 4.0 20.0 0.04
100% 10 5.0 20.0 0.05
120% 10 6.0 20.0 0.05
• Bimatoprost 0.3mg/mL Solución para gotas oculares
Solución de Volumen del Volumen de Volumen final Concentración

Exactitud -% placebo Bimatoprost stock En solvente final
Porcentaje de la (mL) (0.2 mg/mL) (mL) Bimatoprost
solución de (mg/mL)
referencia
80% 4 4.8 25.0 0.0384
100% 4 6.0 25.0 0.048
120% 4 7.2 25.0 0.0576
Criterio de aceptación:
El % de recuperación por nivel debe estar dentro del 98.0-102.0%.
Versión: 1
El % de recuperación del activo se calcula mediante la siguiente fórmula:
% De recuperación = [Ai*Cstd ]*100

As*Cmta
Dónde
Ai: área pico de Bimatoprost en la solución
As: área de pico de Bimatoprost en la solución estándar
Cmta: Concentración de la muestra en cada nivel (80, 100 y 120)
Cstd: Concentración del estándar
Los resultados se presentan en las siguientes tablas:
RESULTADOS DE EXACTITUD BIMATOPROST 0.1 mg/mL

Exactitud estándar Concentración teórica del estándar
(mg/mL)
BIMATOPROST 1263254 0.05
Muestra Exactitud 80%
Ai Concentración Concentración Resultado(mg/mL) % de
Objetivo normal (mg/mL) recuperación
Muestra 1 1120024 0.0404 0.0403 99.8
Muestra 2 1119654 0.04 0.0404 0.0403 99.7
Muestra 3 1114416 0.0404 0.0401 99.3
Muestra 1 1402620 0.0505 0.0505 100.0
Muestra 2 1400278 0.05 0.0505 0.0504 99.8
Muestra 3 1401482 0.0505 0.0504 99.9
Muestra Exactitud 120 %
Muestra 1 1677992 0.0606 0.0604 99.6
Muestra 2 1677134 0.06 0.0606 0.0604 99.6
Muestra 3 1675092 0.0606 0.0603 99.5
Versión: 1
RESULTADOS DE EXACTITUD BIMATOPROST 0.3 mg/mL

Exactitud estándar Concentración teórica del estándar
(mg/mL)
BIMATOPROST 1263254 0.05
Muestra 1 1090147 0.0388 0.0392 101.2
Muestra 2 1091313 0.0384 0.0388 0.0393 101.3
Muestra 3 1091718 0.0388 0.0393 101.3
Muestra 1 1351525 0.0485 0.0486 100.3
Muestra 2 1353079 0.048 0.0485 0.0487 100.4
Muestra 3 1349663 0.0485 0.0486 100.2
Muestra Exactitud 120 %
Muestra 1 1614459 0.0582 0.0581 99.9
Muestra 2 1617683 0.0576 0.0582 0.0582 100.1
Muestra 3 1615799 0.0582 0.0581 99.9
Versión: 1
RESULTADOS DE EXACTITUD BIMATOPROST SOBRE TODOS LOS NIVELES

0.1 mg/mL 0.3 mg/mL
Promedio de recuperación 80% 99.6 101.2
Promedio de % de recuperación 99.7 100.5
general
Desviación estándar 0.21 0.58
% RSD 0.21 0.57
Conclusión:
El % de recuperación promedio general para la exactitud se ha calculado en 99.7% para Bimatoprost 0.1
mg/mL y 100.5% para Bimatoprost 0.3 mg/mL, que se encuentra dentro del rango de criterios de aceptación.
Por lo tanto, se concluye que el método muestra una buena precisión para Bimatoprost.
Versión: 1
3.8 Intra Precisión.
Esta prueba fue realizada por dos analistas diferentes en días diferentes, utilizando dos sistemas de HPLC
diferentes, dos lotes diferentes de columna de HPLC y reactivos para la fase móvil y solventes.
3.8.1 Precisión del sistema.
La precisión del sistema se evaluó mediante cinco inyecciones repetidas de una solución estándar de
Bimatoprost a 0.05 mg / mL.
Solución estándar stock de Bimatoprost 0.2 mg / mL

volumétrico de 50.0 mL con solvente. La solución se sonicó durante 15 minutos. La concentración es de 0.2
mg/mL.
Precisión del sistema Solución estándar Bimatoprost 0.05 mq/mL

Se transfirió un volumen igual a 5,0 ml de la solución anterior en un matraz volumétrico de 20,0 ml con
solvente. La concentración final es 0.05 mg / mL.
Criterios de aceptación
1.El % de desviación estándar relativa (RSD) para el área del pico de Bimatoprost debe ser inferior a 2.0.
2.El % de desviación estándar relativa (RSD) para el tiempo de retención del pico de Bimatoprost debe ser
inferior a 1.0.
3. La asimetría del pico de Bimatoprost no debe ser superior a 1. 5
4. Las placas teóricas para el pico de Bimatoprost no deben ser inferiores a 2000
Análisis I
Adecuabilidad del % RSD de área % RSD del tiempo Platos teóricos Asimetría
sistema de retención
BIMATOPROST 0.05 0.45 9475 1.18
Análisis II
Adecuabilidad del % RSD de área % RSD del tiempo Platos teóricos Asimetría
sistema de retención
BIMATOPROST 0.09 0.07 11070 1.17
Conclusión:
Todos los parámetros están dentro de las especificaciones. Por lo tanto, se encontró que el Sistema era
adecuado para realizar ambos análisis
Versión: 1
3.8.2 Precisión del método.
Se utilizaron seis muestras de Bimatoprost a la concentración de prueba para evaluar la precisión del método.
Bimatoprost en solución de muestra de 0.05mqlml (para solución de gotas para los ojos 0.1mg/mL) Volumen
igual a 10.0 mL de solución de gotas de Bimatoprost 0.1mg/mL solución en gotas oculares se transfirió a un
matraz volumétrico de 20.0 mL con solvente. La concentración final es 0.05mg/mL para Bimatoprost. Se
prepararon seis muestras diferentes.
Bimatoprost a 0. 048mqlml de solución de muestra (para 0.3mglmL Solución de gotas para los ojos)
Un volumen igual a 4.0 mL de Bimatoprost 0.3 mg/mL La solución de gotas para los ojos se transfirió a un
matraz volumétrico de 25.0 mL con solvente. La concentración final es 0.048mg/mL para Bimatoprost. Se
El % RSD para el % de recuperación de Bimatoprost entre las 6 muestras debe ser NMT 2.0.
Cálculos:
El % de ensayo de Bimatoprost se calculó como sigue:
% de ensayo=As. X (Wstd/Vd1) X (Vd2 /Vd3) X ostd X100

As.X(VsXLC)/Vd4
Donde:
As es el área de Bimatoprost en la muestra
Astd es el área de Bimatoprost en el estándar
Wstd es el peso del estándar de Bimatoprost
Vd1 es el volumen de dilución del estándar
Vd2 es el volumen de solución patrón estándar tomada para dilución
Vd3 es el volumen de dilución final del estándar
Vs es el volumen de muestra
Vd4 es el volumen de dilución de la muestra
Post es la potencia del Bimatoprost (p. Ej. 0.998)
LC es la declaración de la etiqueta (en mg/mL)
Versión: 1
PRECISIÓN DE EL MÉTODO DE BIMATOPROST 0.1 mg/mL

Análisis I
Área Tiempo de Platos teóricos Asimetría % de
retención recuperación
s1 1498422 12.89 10322 1.18 100.7
s2 1405074 12.89 10252 1.18 101.1
s3 1402200 12.89 10305 1.18 100.9
s4 1395827 12.89 10296 1.18 100.5
s5 1400875 12.89 10285 1.18 100.8
s6 1400081 12.89 10277 1.18 100.8
Promedio 1400413 12.89 10290 1.18 100.8
Desv. Est. 3170 0.01 - - 0.23
% RSD 0.23 0.07 - - 0.23
PRECISIÓN DE EL MÉTODO DE BIMATOPROST 0.1 mg/Ml
Análisis II
s1 1441712 12.79 10322 1.17 100.2
s2 1450560 12.79 10252 1.17 100.8
s3 1447573 12.79 10305 1.18 100.6
s4 1435681 12.79 10296 1.17 99.8
s5 1441726 12.79 11748 1.17 100.2
s6 14444354 12.80 11684 1.17 100.4
Promedio 1443601 11.79 11712 1.17 100.3
Desv. Est. 5188 0.00 - - 0.36
% RSD 0.36 0.03 - - 0.36
Versión: 1
PRECISIÓN DE EL MÉTODO DE BIMATOPROST 0.3 mg/mL

Análisis I
s1 1361187 11.87 9832 1.18 102.1
s2 1362147 11.87 9857 1.18 102.1
s3 1362024 11.87 9827 1.18 102.1
s4 1363646 11.87 9834 1.17 102.2
s5 1362438 11.87 9876 1.18 102.2
s6 1361597 11.87 9838 1.17 102.1
Promedio 1362173 11.87 9844 1.18 102.1
Desv. Est. 845 0.01 - - 0.06
% RSD 0.06 0.07 - - 0.06
PRECISIÓN DE EL MÉTODO DE BIMATOPROST 0.3 mg/Ml
Análisis II
s1 1041118 12.79 11353 1.17 101.6
s2 1405151 12.78 11370 1.17 101.7
s3 1403087 12.78 11355 1.18 101.6
s4 1405837 12.79 11361 1.17 101.8
s5 1404948 12.79 11352 1.17 101.7
s6 1406823 12.78 11319 1.17 101.8
Promedio 1404994 12.79 11352 1.17 101.7
Desv. Est. 1303 0.00 - - 0.09
% RSD 0.09 0.02 - - 0.09
Conclusión:
Para ambos análisis, los valores calculados se encuentran dentro de los requisitos especificados, por lo que
se concluye que el método muestra una buena precisión.
Versión: 1
3.9 Precisión intermedia
La precisión del método se evaluó mediante el % de desviación estándar relativa total (% RSD) del % de
recuperación de las doce muestras preparadas para la precisión intra e inter, respectivamente.
Criterios de aceptación
:
El % RSD para el % de recuperación de Bimatoprost entre las 12 muestras debe ser NMT 3.0.
Un resumen de los resultados se presenta en los gráficos a continuación:
Conclusión:
El valor total calculado de % RSD para el % de recuperación es inferior a 3.0, que se encuentra dentro de los
requisitos. Se concluye que el método muestra una buena precisión cuando se realiza en dos HPLC
diferentes, dos lotes diferentes de columna de HPLC y reactivos para la fase móvil y solventes.
Versión: 1
3.1 0 Robustez
La robustez del método se determinó alterando parámetros críticos como la temperatura de la columna, la
velocidad de flujo y el pH y la Relación de la fase móvil. Se realizaron tres inyecciones de una solución de
muestra Bimatoprost 0,05 mg / Ml para una solución de gotas para los ojos de 0,1 mg / ml y 0,048 mg / mL
para una solución de gotas para los ojos de 0,3 mg / ml por cada cambio de parámetro.
La Adecuabilidad del sistema se evaluó mediante cinco réplicas de la solución estándar mencionada a
continuación para determinar cómo estos cambios afectan los parámetros de Adecuabilidad del sistema.
Los cambios aplicados son:

• Modificación del caudal de ± 0.2 mL/ min.
• Modificación de temperatura ± 5 ° C
• Modificación de la relación de fase orgánica ± 3%
• Modificación de pH móvil ± 0.5
Solución stock estándar de Bimatoprost 0.2 mg / mL

volumétrico de 50.0 mL con disolvente. La solución se sonicó durante 15 minutos. La concentración es de 0.2
mg / mL.
Solución estándar Bimatoprost 0.05 mg / mL
Un volumen igual a 5.0 mL de la solución anterior se transfirieron en un matraz volumétrico de 20.0 mL con
solvente. La concentración final es 0.05 mg / mL.
1. El % de desviación estándar relativa (RSD) para el área del pico de Bimatoprost debe ser menor que 2. 0.
2. El % de desviación estándar relativa (RSD) para el tiempo de retención del pico de Bimatoprost debe ser
inferior a 1.0.
3. La asimetría para el pico de Bimatoprost no debe ser superior a 2.0
4. Los platos teóricoss para el pico de Bimatoprost no deben ser inferiores a 2000.
Bimatoprost a 0.05 mg / mL de solución de muestra (para 0.1 mg / mL de solución para gotas oculares)
Volumen igual a 10.0 mL de Bimatoprost 0.1mg/mL. solución de gotas para ojos se transfirió a un matraz
volumétrico de 20.0 mL con solvente. La concentración final es 0.05mg / mL para Bimatoprost. Se prepararon
seis muestras diferentes.
Bimatoprost a 0. 048 mg/mL de solución de muestra (para 0.3 ml / ml de solución de gotas oculares).
Se transfirió un volumen igual a 4.0 mL de Bimatoprost 0,3 mg/mL de solución de gotas para los ojos a un
matraz volumétrico de 25,0 ml con solvente. La concentración final es 0.048mg / ml para Bimatoprost. Se
Versión: 1
Los resultados se presentan en las tablas siguientes:
Solución Estándar
Modificación % RSD de % RSD de Tiempo de Tiempo de Asimetría Platos
al método área tiempo retención Retención teóricos
VS método
sin modificar
Método sin 0.05 0.45 11.9 1.00 1.18 9475
modificar
Velocidad de 0.03 0.09 14.5 1.22 1.17 9621
flujo 0.8
mL/min
Velocidad de 0.04 0.05 10.0 0.84 1.18 8706
flujo 1.2
mL/min
Columna 0.07 0.05 13.7 1.15 1.22 9082
calentada a
30 °C
Columna 0.05 0.05 10.1 0.85 1.21 9014
calentada a
40 °C
Buffer pH 2.5 0.04 0.05 11.8 0.99 1.17 9318
Buffer pH 3.5 0.06 0.04 12.0 1.01 1.17 9367
Buffer/MeOH 0.04 0.08 17.8 1.50 1.17 10615

53/47
Buffer/MeOH 0.04 0.05 8.0 0.67 1.24 7362
47/53
Conclusión
Los parámetros de Adecuabilidad del sistema se cumplen en todas las condiciones, por lo que el método se
considera robusto bajo los parámetros específicos investigados.
Versión: 1
Solución Muestra 0.1 mg/mL

Modificación al método % RSD de % RSD de Tiempo de Tiempo de Asimetría Platos
área tiempo retención Retención teóricos
VS método
sin modificar
Método sin modificar 0.23 0.07 11.9 1.00 1.18 10290
Velocidad de flujo 0.8 0.03 0.08 14.6 1.22 1.16 10776
mL/min
mL/min
Columna calentada a 30 °C 0.05 0.06 13.7 1.15 1.22 9728
Buffer pH 2.5 0.03 0.07 11.8 0.99 1.17 10114
Buffer pH 3.5 0.05 0.10 12.0 1.01 1.16 10143
Buffer/MeOH 0.07 0.04 17.9 1.50 1.17 11282
53/47
Buffer/MeOH 0.04 0.01 8.0 0.68 1.22 8266
47/53
Solución Muestra 0.3 mg/mL

Modificación al método % RSD de % RSD de Tiempo de Tiempo de Asimetría Platos
área tiempo retención Retención teóricos
VS método
sin modificar
Método sin modificar 0.06 0.03 11.9 1.00 1.18 9844
mL/min
mL/min
Columna calentada a 30 °C 005 0.01 13.7 1.15 1.22 9397
Buffer pH 2.5 0.08 0.05 11.8 0.99 1.17 9704
Buffer pH 3.5 0.04 0.02 12.0 1.01 1.16 9725
Buffer/MeOH 0.03 0.02 17.9 1.50 2.27 10980
53/47
Buffer/MeOH 0.10 0.06 8.0 0.68 1.23 7771
47/53
Conclusión
No se observa un cambio variable en la cromatografía dentro de las modificaciones de método realizadas.
Por lo tanto, el método se considera robusto bajo los parámetros específicos investigados para Bimatoprost
Versión: 1
4. Conclusiones
El método propuesto para la determinación del ensayo de Bimatoprost fue validado. Se demostró que el
método es específico, ya que separa el Bimatoprost de sus impurezas conocidas, es lineal, exacto y preciso en
el rango propuesto. Los resultados de los parámetros analíticos y los criterios de aceptación se resumen en la
siguiente tabla:
Parámetros analíticos Resultados Criterio de aceptación
Adecuabilidad del sistema
Solución estándar de 0.08 %RSD de área NMD 2.0
Bimatoprost a 0.05 0.14 % RSD de tiempo NMD 1.0
mg/mL 1.17 Asimetría NMD 2.0
10074 Platos teóricos NMD 2000
Especificidad
Disolvente, Placebo,
solución estándar,
cada impureza en el
límite
concentración, Conforme Sin interferencia entre picos
Muestras de Bimatoprost
0.048 mg / mL y
0.05 mg / mL,
Y muestra
Bimatoprost
0.05mg/mL recargada
con todas las impurezas:
Estabilidad de la solución
Solución Estándar Bimatoprost Temp amb. 48 hrs.
% Diferencia=1.2
%RSD=0.79
Bimatoprost TemP. Refirg. 48 hrs.
% Diferencia=1.2 % de diferencia % de
%RSD=0.83 recuperación
Bimatoprost Temp amb. 48 hrs. <3
0.1 mg/mL % Diferencia=1.2
%RSD=0.80
Bimatoprost Temp refrig.. 48 hrs.
Solución Muestra % Diferencia=1.2
0.1 mg/mL
%RSD=0.72
Bimatoprost Temp amb. 48 hrs.
%RSD=0.77
Bimatoprost Temp refrig.. 48 hrs.
%RSD=0.76
Linearidad
Bimatoprost 0.999 Coeficiente de determinación r
≥0.998
Versión: 1
Parámetros analíticos Resultados Criterio de aceptación

Exactitud
Bimatoprost 0.1 mg/mL 99.7% Promedio general de % de
Bimatoprost 0.1 mg/mL 100.5% recuperación 98%-102%
Precisión
Precisión del sistema
Intraprecisión Bimatoprost 0.05 % RSD de área NMD 2.0
0.45 % de tiempo NMD 1.0
1.18 Asimetría NMD 2.0
9475 Platos teóricos NMD 2000
Interprecisión Bimatoprost 0.09 % RSD recuperación :no mas de
0.07 2.0
1.17
11070
Precisión del método
Bimatoprost 0.1 mg/mL
Intra precisión % RSD recuperación:0.23 % RSD de % de concentración de
Inter precisión % RSD recuperación:0.23 ensayo <2.0
Precisión Intermedia % RSD recuperación:0.23 % RSD de % de concentración de
ensayo <3.0
Bimatoprost 0.3 mg/mL
Intra precisión % RSD recuperación:0.23 % RSD de % de concentración de
Inter precisión % RSD recuperación:0.23 ensayo <2.0
Precisión Intermedia % RSD recuperación:0.23 % RSD de % de concentración de
ensayo <3.0
Robustez
% RSD recuperación NMD:no
Solución estándar de Parámetros de Adecuabilidad del sistema más de 2.0
Bimatoprost a 0.05 mg/mL son completos en cualquier condición % RSD recuperación NMD de
:1.00
Asimetría NMD 2.0
Platos teóricos No menos de
2000
5. HISTORIA DE REVISIÓN
Versión Fecha de emisión Fecha de revisión Razón de cambio
1 21/04/2015 N/A N/A

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REPORTE DE VALIDACIÓN DEL MÉTODO HPLC PARA

DETERMINACIÓN DE BIMATOPROST EN Código: QPR7 .3RD1 BMPOPHPF ASSAY

"REPORTE DE VALIDACIÓN DEL MÉTODO HPLC

El procedimiento analítico de HPLC desarrollado para la identificación y cuantificación de Bimatoprost

El estándar de referencia de Bimatoprost e impurezas utilizado para este estudio de validación es

3. Validación del procedimiento.

Según el método de HPLC para la determinación del ensayo, la concentración de prueba

El rango para la determinación de Bimatoprost se establece desde el 80% de la concentración de prueba

3.2 Adecuabilidad del sistema

La Adecuabilidad del sistema se evaluó con cinco inyecciones repetidas de un estándar.

Se prepararon las siguientes soluciones:

Solución estándar Bimatoprost 0.05 mq/mL (Adecuabilidad del sistema)

Solvente: Buffer pH = 3.0 / metanol, 50/50

Solución Stock estándar de Bimatoprost 0. 2 mg/mL

Solución estándar Bimatoprost 0. 05 mg/mL

Placebo 0.1 mq/mL

Impureza 15R-Bimatoprost solución stock (0. 1 mg/mL)

Cada componente por separado

Solución de muestra enriquecida Bimatoprost 0.1 mg/mL

3.4 Estabilidad de la solución estándar

Se prepararon las siguientes soluciones:

Solución estándar stock de Bimatoprost 0. 2 mg/mL

El % de diferencia para el % de recuperación del estándar en un intervalo de tiempo especificado en

% De diferencia = I% Recuperación (t) -% Recuperación (t0) I* 100

Los resultados del estudio a temperatura ambiente se presentan en la siguiente tabla:

ADECUABILIDAD DEL SISTEMA 0h

Los resultados del estudio a temperatura ambiente se presentan en la siguiente tabla:

Los resultados del estudio en refrigerador se presentan en la siguiente tabla:

3.4 Estabilidad de la solución muestra

Se prepararon las siguientes soluciones:

El % de diferencia para el % de recuperación del la muestra especificada en un intervalo de tiempo especificado

% De diferencia = I% Recuperación (t) -% Recuperación (t0) I* 100

Los resultados del estudio a temperatura ambiente se presentan en la siguiente tabla:

Los resultados del estudio a temperatura ambiente se presentan en la siguiente tabla:

3.6 Linealidad de respuesta

Solución estándar stock de Bimatoprost 0.2 mg/mL

Coeficiente de Intercepto y (1) Pendiente (2)

(1) En unidades de área

Solución estándar stock de Bimatoprost 0.2 mg/mL

Solución estándar Bimatoprost 0.05 mg/mL

Solución de Volumen del Volumen de Volumen final Concentración

• Bimatoprost 0.3mg/mL Solución para gotas oculares

Solución de Volumen del Volumen de Volumen final Concentración

El % de recuperación del activo se calcula mediante la siguiente fórmula:

% De recuperación = [Ai*Cstd ]*100

Los resultados se presentan en las siguientes tablas:

RESULTADOS DE EXACTITUD BIMATOPROST 0.1 mg/mL

RESULTADOS DE EXACTITUD BIMATOPROST 0.3 mg/mL

RESULTADOS DE EXACTITUD BIMATOPROST SOBRE TODOS LOS NIVELES

3.8 Intra Precisión.

3.8.1 Precisión del sistema.

Se prepararon las siguientes soluciones:

Solución estándar stock de Bimatoprost 0.2 mg / mL

Precisión del sistema Solución estándar Bimatoprost 0.05 mq/mL

3.8.2 Precisión del método.

Se prepararon las siguientes soluciones:

El % de ensayo de Bimatoprost se calculó como sigue:

% de ensayo=As. X (Wstd/Vd1) X (Vd2 /Vd3) X ostd X100

% De recuperación = [AiCstd ]100